TEMA 6

Duplicación del material genético.

Síntesis de proteínas
Replicación
Transcripción
Traducción
Regulación de la expresión
génica
Ejemplos de usos de las
técnicas de Biología
Molecular
REPLICACIÓN DEL ADN
Proceso por el que se duplica el ADN
Ocurre durante la fase S del ciclo celular
Ocurre en el núcleo, en las mitocondrias
y los cloroplastos

misma secuencia de nucleótidos que la cadena ADN original

CARACTERÍSTICAS DE LA REPLICACIÓN
Es semiconservativa (1 cadena original, 1 cadena de nueva síntesis)
Es bidireccional (ocurre en ambas cadenas de ADN a la vez)
Es semidiscontinua (la síntesis de la cadena 3'->5' no ocurre de manera
continua)
INICIACIÓN ELONGACIÓN TERMINACIÓN
Separación doble Síntesis nuevas
hélice del ADN
Formación de dos
cadenas de ADN
Comienza en el moléculas de ADN
complementarias
origen de replicación idénticas
(oriC), rica en A y T a la original
HELICASAS
Reconocen A y T del origen de
replicación
Rompe puentes de hidrógeno,
separando las dos cadenas del
ADN ---> Horquillas o burbujas
de replicación
PROTEÍNAS SSB

Son proteínas estabilizadoras

Se unen a las cadenas de ADN
separadas para que no vuelvan
a unirse
TOPOISOMERASAS
Hacen pequeños cortes en cada una
de las cadenas de ADN para evitar
la formación de tensión de
superenrollamiento
ARN POLIMERASA (PRIMASA)
Sintetiza un fragmento de 10
nucleótidos de ARN (primer o
cebador) que será reconocido por la
ADN polimerasa en la elongación
ADN POLIMERASA Inicia la síntesis de las cadenas hijas complementarias

CADENA CONDUCTORA CADENA RETARDADA

Cadena complementaria a la
Cadena complementaria a la
cadena 5'->3'
cadena 3'->5'
La ADNpol. debería añadir
La ADNpol. sintetiza la nueva
nucleótidos en sentido 3'->5', pero
cadena en sentido 5'->3'
es imposible -> Fragmentos de
Cadena de crecimiento continuo
Okazaki
Cadena de crecimiento discontinuo
1. El ADN se desenrolla y las helicasas rompen los puentes de H2 entre
las 2 cadenas
HELICASA
2. Las proteínas SSBs se unen a ambas cadenas de ADN para impedir
que se vuelvan a unir
proteínas SSBs

Burbuja de replicación

3. Se forma la burbuja u horquilla de replicación

Las burbujas de replicación se forman en múltiples lugares a lo largo
de la molécula de ADN, lo que aumenta la velocidad de replicación
4. Una vez que las dos cadenas de ADN han sido separadas y
desenrolladas, la ADN polimerasa (ADNpol.) debería comenzar a
sintetizar las nuevas cadenas de ADN. Sin embargo, solo puede
prolongar cadenas preexistentes.
5. La RNA primasa coloca una
secuencia de 10 ribonucleótidos
(aprox.) de la nueva cadena
(cebador o primer) que
proporciona el extremo 3' libre
al que se unirá la ADN pol.
6. La ADNpol. se une al extremo 3' libre del cebador y coloca los
nucleótidos complementarios a medida que se desplaza a lo largo de
la cadena de ADN molde

La ADNpol. lee la cadena molde en dirección 3'->5', y construye la

nueva cadena en dirección opuesta (5'->3')
7. La hélice sigue desenrollándose
y abriéndose permitiendo que la
cadena conductora o líder crezca
de modo continuo en la dirección
de la horquilla de replicación
8.Otra DNApol. distinta
remplaza el cebador de ARN
por ADN
La cadena retardada o retrasada se
sintetiza en sentido opuesto al avance de
la horquilla de replicación

1. ARN primasa añade el cebador o

primer
2. La ADNpol. se une al extremo 3' libre del cebador y empieza a
sintetizar la nueva cadena de ADN

3. Antes de que la ADNpol pueda continuar la síntesis de la cadena

retardada, la hélice debe seguir desenrrollándose
4. La helicasa desenrolla la hélice
5. La RNA primasa añade un nuevo cebador o primer
6. La DNApol. se une al extremo 3' libre del cebador y sintetiza otro
fragmento de la nueva cadena de ADN (Fragmentos de Okazaki)
7.Otra DNApol. distinta remplaza
el cebador de ARN por ADN

8. Una ADN ligasa une el hueco

que queda entre los fragmentos
de ADN

La cadena conductora y rezagada se replican en direcciones opuestas

REPLICACIÓN DEL ADN: CORRECCIÓN DE ERRORES

Endonucleasas

Endonucleasas (cortan) y
exonucleasas (eliminan
nucleótidos)

ADN polimerasa

ADN ligasa

Si los errores no se corrigen se producen mutaciones

TRANSCRIPCIÓN
Ocurre en el núcleo
La secuencia de nucleótidos del ADN se copia en una molécula de ARNm.
Es un proceso asimétrico (solo una de las hebras de ADN se usa como
molde)
Llevado a cabo por la ARN polimerasa (ARNpol.)
1. ARN pol. se une al ADN del gen en una región llamada promotor.

En el promotor se sitúan las secuencias consenso (antes del punto de inicio)

que índican dónde debe comenzar la síntesis de ARN y qué cadena de ADN
tiene que ser transcrita
TATAAAA
CAJA TATA 30 pb antes punto inicio

CGCAATCT
CAJA CAAT
1oo pb antes punto inicio
2. Gracias a la ARNpol. la hélice de ADN se desenrolla cerca del gen que se va
a transcribir originando la burbuja u horquilla de transcripción

Sitio en el que transcribe el primer nucleótido-> sitio +1 o sitio de iniciación

Nucleótidos situados antes del sitio de iniciación -> situados aguas arriba
Nucleótidos situados después del sitio de iniciación-> situados aguas abajo
3. La ARNpol. se desplaza por la cadena molde de ADN en sentido 3'->5',
añadiendo los ribonucleótidos complementarios a la nueva cadena de ARNm
en sentido 5'->3'.
4. La ARNpol. añade ribonucleótidos hasta que
llega a la señal de terminación (secuencia
palindrómica rica en G y C, seguida de varios
U)

5. ARNpol. se separa y se vuelve a formar la

doble hélice de ADN
OTROS ELEMENTOS IMPLICADOS EN LA TRANSCRIPCIÓN
Enhancer o potenciador:
Corta región del ADN que puede unirse con factores de transcripción
para aumentar los niveles de transcripción de los genes
No tiene porqué estar cerca del gen. Puede estar en otro cromosoma
OTROS ELEMENTOS IMPLICADOS EN LA TRANSCRIPCIÓN
Silenciadores:
Corta región del ADN que puede unirse con factores de transcripción
represores para disminuir los niveles de transcripción de los genes
No tiene porqué estar cerca del gen. Puede estar en otro cromosoma
OTROS ELEMENTOS IMPLICADOS EN LA TRANSCRIPCIÓN
Factores de transcripción:
Proteína que se une a secuencias específicas de ADN
Controlan la transcripción de ADN a ARNm
Promueven (activadores) o silencian (represor) el reclutamiento de
RNApol.
MADURACIÓN DEL ARN MENSAJERO
El ARNm obtenido tras la transcripción: ARN transcrito primario o pre-
ARN
Para ejercer su función debe ser modificado -> maduración del ARNm
Ocurre en el núcleo

Exón: región de un gen que contiene la información necesaria para

producir parte de una proteína de ese gen.
Intrón: secuencia no codificante que separa a dos exones.
MADURACIÓN DEL ARN MENSAJERO
1) Adición en el extremo 5' de la caperuza (cap) de 7-metilguanosina
Da estabilidad al ARNm
Ayuda al ribosoma a unirse al ARNm y a comenzar a leerlo en la
traducción
2) Adición en el extremo 3' de la cola poliA (200 nucleótidos de A)
Da estabilidad al ARNm
Protege de la acción de exonucleasas
Ayuda a ser exportado del núcleo hacia el citosol.
 MADURACIÓN DEL ARN MENSAJERO
3) Eliminación de los intrones y empalme de los exones

Gracias al splicing alternativo puede formarse más de un ARNm a partir

del mismo gen
MADURACIÓN DEL ARN MENSAJERO
Gracias al splicing alternativo puede formarse más de un ARNm a partir
del mismo gen
TRADUCCIÓN
Transformación de la
información aportada por la
secuencia nucleótidos (ARNm)
en una secuencia de
aminoácidos (proteínas)
Ocurre en el citosol o en el RER
Ribosomas y ARNt
TRADUCCIÓN: INICIACIÓN
1) ARNm se une, por su extremo 5´, a la subunidad
menor de los ribosomas gracias a una secuencia de
10 nucleótidos complementarios con el ARN
ribosómico (región líder), que no se traduce.
2) ARNm se desplaza hasta que llegar al codón AUG
(metionina) que actúa como señal de iniciación
3) Se une el anticodón del ARNt que transporta
Met al codón AUG del ARNm
4) Se une la subunidad mayor del ribosoma para
formar el ribosoma completo.
TRADUCCIÓN: INICIACIÓN
Sitio de salida del ARNt Sitio peptidil
cuando libera el
aminoácido

Sitio aminoacil: sitio libre y

preparado para recibir al
segundo ARNt con otro
aminoácido.
 adición de aminoácidos al
TRADUCCIÓN: ELONGACIÓN extremo 3' de la cadena.

1) ARNt- Met comienza en el

espacio del centro del ribosoma,
(sitio P).
2) En el sitio A está expuesto un
nuevo codón. Aquí llegará el
ARNt, cuyo anticondón es
complementario al codón del
ARNm
3) Cuando ARNt se ha colocado
en el sitio A se forma el enlace
petídico que conecta un
aminoácido con otro.
 adición de aminoácidos al
TRADUCCIÓN: ELONGACIÓN extremo 3' de la cadena.

4) El ARNm avanza a través del

ribosoma exactamente un codón.
Este avance permite que el
primer ARNt, ahora vacío, salga
a través del sitio E y también
expone un nuevo codón en el sitio
A, de forma que todo el ciclo se
pueda repetir.
TRADUCCIÓN: TERMINACIÓN
1) La terminación ocurre cuando un codón de terminación del ARNm (UAA, UAG,
UGA) entra al sitio A del ribosoma
2) Los factores de liberación reconocen estos codones y se colocan en el sitio P.
3) Los factores de liberación interfieren con la enzima que forma los enlaces
peptídicos.
4) Se libera la proteína recién formada
CÓDIGO GENÉTICO
Conjunto de reglas que permite la
traducción de una secuencia de
nucleótidos (ARNm) a una secuencia
de aminoácidos (proteína)
Es universal (igual en todos los seres
vivos)
Está degenerado (un aa es codificado
por varios codones)
No es ambiguo (cada codón solo
codifica un aminoácido)
No es solapado
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA
Proceso que controla qué genes en el
ADN de una célula se expresan
Permite la diferenciación celular
Puede ocurrir por:
Modificaciones de histonas
Modificación de la cadena de
ADN (metilación, acetilación,
fosforilación)
Factores de transcripción, etc.
ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN

Enzimas que cortan ADN secuencias de

entre 4 y 8 pb palindrómicas
Usos:
Tecnología del ADN recombinante
Terapia génica
Diagnóstico de mutaciones
RETROTRANSCRIPTASA INVERSA

Enzimas que sintetizan una

cadena de ADN (ADNc) a
partir de ARN
Se usa en la RT-PCR
USOS DE TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR
Diagnóstico de enfermedades
Producción industrial de fármacos
Análisis de perfiles de expresión génica
Identificación de organismos patógenos
Detección de genes asociados a enfermedades genéticas y cáncer
Pruebas de paternidad
Medicina forense
TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR
TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

Producción industrial de insulina, GH, vacunas, terapia génica y creación de organismos transgénicos