Instituto Tecnológico

De Tepic.

Materia: Bioquímica I.

Reporte de practica No. 1.- Curva de calibración de la glucosa.

Docente: Dra. Sonia Guadalupe Ayerdi Sayago.

Integrantes

 Caro López Sergio Alberto.

 Gómez Álvarez Christian Jair.
 López Jaramillo Salvador.
 Zambrano Badillo José Rafael.

Grupo: 6A.
Carrera: Ingeniería Bioquímica.

Fecha de entrega:
Jueves 20 de febrero de 2020.

ANTECEDENTES.
La glucosa es la principal fuente de energía necesaria para asegurar el buen
funcionamiento de las células del organismo. Estas necesitan energía para estar en
activo y mantener las funciones vitales.

La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en

la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su
concentración. Cuando se hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de
onda) sobre un medio homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el
medio y otra transmitida. Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el
cual es una curva que muestra la cantidad de energía radiante absorbida.

Una curva de calibración es la representación gráfica que relaciona una señal

instrumental en función de la concentración de un analito y define un intervalo de
trabajo en el cual, los resultados a informar tienen una precisión y exactitud conocida
que ha sido documentada en la validación de cada método.

En el procedimiento se compara una propiedad del analito con la de estándares de

concentración conocida del mismo analito (o de algún otro con propiedades muy
similares a este).

La etapa de calibración analítica se realiza mediante un modelo de línea recta que

consiste en encontrar la recta de calibrado que mejor ajuste a una serie de «n»
puntos experimentales, donde cada punto se encuentra definido por una variable «x»
y una variable y. La recta de calibrado se encuentra definida por una ordenada al
origen y una pendiente, mediante la ecuación y = mx +b.

OBJETIVO.

 Realizar una curva de calibración para determinar la cantidad de sustancia

(analito) en una muestra desconocida que en este caso es la glucosa.

METODOLOGIA.
 1. Preparación de solución madre: Se utilizó como muestra problema (Glucosa
C6H12O6) agua de Naranja. Se preparó la solución madre de 1000 ppm, para
ello se tomó 1 micro-litro de agua de Naranja y se diluyo en un matraz aforado
de 100 ml.
2. Reacción: Se agregaron 2.25 ml, 1.5 ml, 0.75 ml y 0.25 ml de solución madre
respectivamente en cada matraz aforado de 25 ml según su concentración
(90, 60, 30 y 10), después se aforaron los matraces. Posteriormente se adhirió
1 ml de solución por cada concentración a cada tubo de ensayo, además se
dejaron dos tubos de ensayo para el blanco y la muestra
Enseguida a cada tubo se le adiciono 0.5 ml de Fenol (C 6H5OH) F1925-05 se
agito bien, después se añadieron 2.5 ml de Ácido Sulfúrico (H 2SO4), se agito
hasta que presento coloración.
3. Lectura en el Espectrómetro (Jenway Mod 6700): Después de la adición del
ácido sulfúrico (H2SO4) en los tubos de ensayo se enfriaron en baño maría
para trasvasar la solución a las celdas y posteriormente obtener las lecturas
de absorbancia de las concentraciones, la muestra y el blanco, para esto las
celdas se deben de poner de manera que la parte no rugosa se encuentre
enfrente del foco de Espectrofotómetro (Jenway Mod. 6700).
4. Obtención de la curva de concentración: Después de obtener las lecturas de la
absorbancia del espectrofotómetro se realizó la curva de concentración de las
soluciones en Excel y el análisis de regresión lineal con los datos que se
obtuvieron para encontrar la ecuación de la recta y el coeficiente de regresión.

RESULTADOS.

Glucosa

Se efectúa una reacción entre la muestra problema y dos reactivos los cuales
permiten la identificación de la glucosa mediante un cambio de color.

Reacción: C 6 H 12 O 6 +C 6 H 5 OH + H 2 SO 4 →C 5 H 4 O 2 ; Derivadosde furfural

 Se
Curva de calibracion
lleva a
1.4
f(x) = − 0.36 x + 1.91 cabo la
R² = 1
1.2 lectura

1
de la
Absorbancia (480 nm)

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5

Concentracion

absorbancia mediante el espectrofotómetro.

Curva de calibración: Absorbancia a 480 nm en función de la concentración de

glucosa.

Concentración Absorbancia 480 nm

Tubo (ppm) Prueba 1 Prueba 2 Promedio
1 90 1.125 1.26 1.1925
2 60 0.853 0.855 0.854
3 30 0.455 0.455 0.455
4 10 0.131 0.132 0.1315
DISCUSIÓN.

La adición de ácidos minerales a las soluciones preparadas de carbohidratos, como

el ácido sulfúrico, provocó la deshidratación de los carbohidratos, con esta reacción
se formaron derivados del furfural, la presencia del fenol facilita la formación de
complejos que permitieron la coloración de la solución y en consecuencia facilitaron
la cuantificación de los carbohidratos a través de la espectrofotometría.

En referencia a los ensayos realizados sobre la grafica de la curva de calibración de

la concentración de la glucosa frente la absorbancia obtenida cumplió con la
linealidad del método, ya que el coeficiente de correlación obtenido de las distintas
concentraciones (90, 60, 30,10) se encuentran en un buen nivel de confianza en su
linealidad y exactitud del método o bien decir los valores de la absorbancia no se
encuentran muy dispersos al tener valores de varianza pequeños.

CONCLUSION.

Se elaboró una curva de calibración relacionando la concentración de la glucosa con

la absorbancia de cada uno y se pudo concluir la existencia de linealidad y exactitud
en el método empleado, al observar los coeficientes de correlación que se
encuentran en un nivel muy cercano uno del otro con una varianza mínima.

BIBLIOGRAFÍA.

 Química Analítica. Skoog, West, Holler y Crouch 7ª Ed. Mc Graw Hill, 2001.

 Técnicas Instrumentales de Análisis en Bioquímica. J.M. García-Segura
Editorial Síntesis, 1996.
 Principios de Análisis Instrumental. Skoog, Holler y Nieman 5ª Ed. Mc Graw
Hill, 2001.