PCR EN

TIEMPO
REAL
qPCR o PCR cuantitativa

Amplificación enzimática de un
fragmento de interés (DNA)
localizado entre dos
oligonucleótidos (cebadores)

La PCR en tiempo real es una

técnica que combina la
amplificación y la detección en un
mismo paso, al correlacionar el
producto de la PCR de cada uno de
los ciclos con una señal de
intensidad de fluorescencia.
PCR y qPCR
 PCR: Replicación in vitro
1. DNA o RNA Molde
2. dNTPs (ATP, GTP, TTP, CTP) Bloques de construcción
3. Primers - Cebadores Inciadores 3'-OH
4. pH Condiciones óptimas
5. MgCl2 Cofactor
6. Enzimas Copiador de DNA

PCR + Post PCR

qPCR: Replicación
qPCR: PCR en Tiempo Real
TaqMan Probes
ANÁLISIS
Diagnóstico por RT PCR para COVID 19
SARS – CoV -2
ETAPAS DE PROCESO ANALÍTICO DEL DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE SARS-CoV-2

TOMA DE MUESTRA
• CONDICIONES DE TRANSPORTE
• CARACTERÍSTICAS DE LA MUESTRA

EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEÍCOS

• EXTRACCIÓN MANUAL
• EXTRACCIÓN CON EQUIPOS AUTOMATIZADOS
• SHOCK TÉRMICO

AMPLIFICACIÓN
• RT-PCR EN TIEMPO REAL

ANÁLISIS DE RESULTADOS
 MÉTODOS PARA LA EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEÍCOS

EXTRACCIÓN MANUAL

SHOCK TÉRMICO
Proteinasa K
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA
PCR EN TIEMPO REAL
UN MISMO CANALDE FLURESCENCIA.
03 MARCADORES O TARGETS: N1 N2 Y RP
TARGETRP: CONTROLENDÓGENO
03 CANALESDE FLUORESCENCIA: FAM, ROX Y VIC.
03 MARCADORES O TARGETS: N, ORF, CONTROL
INTERNO
CI: CONTROL EXÓGENO
DISEÑO Y ASIGNACION DE
MUESTRAS Y TARGET
ANÁLISIS DATOS CRUDOS
ANÁLISIS DATOS PROCESADOS
 ANÁLISIS – VALOR DE CORTE

Treshold: umbral, punto de

detección
Ct: ciclo en el que cruza la
muestra
ANÁLISIS – MUESTRAS NEGATIVAS
POSITIVO 17 ORF 27.524107
RESULTADO CT N1 CT N2 CT RP POSITIVO 17 N 29.621231
RQ N1 RQ N2 POSITIVO 17 CI 38.576332
POSITIVO 15.763745 15.623778 24.073036 303.85257 342.78015 POSITIVO 18 ORF 28.605228
POSITIVO 23.105396 22.656336 23.783358 1.53251 2.14192 POSITIVO 18 N 31.830164
POSITIVO 25.738333 25.7674 25.004473 0.57597 0.57792 POSITIVO 18 CI 40.14934
POSITIVO 29.209314 30.15561 23.036858 0.01328 0.00706 POSITIVO 19 ORF 31.63858
POSITIVO 19 N 33.893147
POSITIVO 16.209707 15.98487 23.29741 130.29506 155.89394
POSITIVO 19 CI 35.18669
POSITIVO 33.167297 33.08003 24.07297 0.00175 0.00191
NEGATIVO 1 ORF Undetermined
NEGATIVO Undetermined Undetermined 24.576046 NEGATIVO 1 N Undetermined
NEGATIVO Undetermined Undetermined 28.158514 NEGATIVO 1 CI 34.2064
NEGATIVO Undetermined Undetermined 25.592258 NEGATIVO 10 ORF Undetermined
NEGATIVO Undetermined Undetermined 23.67485 NEGATIVO 10 N Undetermined
NEGATIVO 10 CI 34.718483

ANÁLISIS – MUESTRA POSITIVA

ANÁLISIS – MUESTRA INDETERMINADA

POSITIVO 27 ORF 34.077026

NEGATIVO 27 N Undetermined
POSITIVO 27 CI 37.06139
ANÁLISIS – REPROCESO

POSITIVO 27 ORF 32.165283

POSITIVO 27 N 33.14658
POSITIVO 27 CI 33.8462