CURSO: DISEÑO, SEGURIDAD Y

A U T O M AT I Z A C I O N E N E Q U I P O S D E
L A B O R AT O R I O C L Í N I C O

CÓDIGO: T0608

SEMESTRE ACADÉMICO 2021-I

UNIDAD N° 2

Automatización en el Laboratorio de
Hemostasia

TM David Siqueros david.Siqueros.h@upch.pe

 HEMOSTASIA
La hemostasia es un mecanismo de defensa del organismo que
se activa tras haber sufrido un traumatismo o lesión que
previene la pérdida de sangre del interior de los vasos
sanguíneos.

Se divide en dos fases:

•Hemostasia primaria: las plaquetas se adhieren a la superficie
lesionada y se agregan para constituir el “tapón hemostático
plaquetar”.

•Hemostasia secundaria o coagulación de la sangre: en esta

fase, la activación de múltiples proteínas de plasma produce la
formación de un coágulo de fibrina que impide la salida de
sangre al exterior.
 FASES DE LA
HEMOSTASIA

• Hemostasia primaria
formación de un trombo plaquetario
• Coagulación o hemostasia secundaria
formación de un trombo de fibrina
• Fibrinólisis
rotura del coagulo de fibrina
 PRUEBAS DE ESCRUTINIO HEMOSTÁTICO BASICO

Recuento Plaquetario
 150 000 y 450 000/μl
 Frotis de sangre periférica

Tiempo de Hemorragia o Tiempo de Sangrado (TS)

 Tiempo que transcurre entre la producción de una pequeña herida en la piel hasta
el momento en que la hemorragia cesa.

 3-9 minutos, media 5 mins

 Evalúa las etapas iniciales de la hemostasia

plaquetas-vaso-coágulo

Dos tipos de pruebas

Duke Ivy
 PRUEBAS DE ESCRUTINIO HEMOSTÁTICO PRINCIPAL

 Tiempo de Tromboplastina parcial activada

◦Vía intrínseca
(TTPa)
◦Se le adiciona una sustancia negativa al
plasma antes de adicionar la tromboplastina
◦25-35 segs
parcial

 Tiempo de Protrombina (TP)

◦Mide la formación del coágulo dependiente dela
vía extrínseca
◦Utiliza tromboplastina “completa” que se
adiciona a una muestra de plasma
anticoagulado con citrato de sodio. Inicia al
◦10-12 segs
adicionar el Ca.

 Tiempo de Trombina (TT)

◦Adición una solución de trombina a un plasma
anticoagulado con citrato
 .-LABORATORIO:
Recuento de Plaquetas = (Púrpuras)

Tiempo de sangrado = Defecto en el tapón plaquetario

Tiempo de Protrombina (T.P.)= Deficiencia de Fibrinógeno

y/o Factores II, V y X. (Vía Extrínseca)

Tiempo parcial de Tromboplastina. (TPT)= Anormalidades de factores VIII,

IX, o XII (Vía Intrínseca)
Tiempo de Trombina (TT)= Fibrinogeno y anticoagulantes circulantes e
inhibidores de la coagulación
Pruebas de Fibrinólisis. (PDF)= Productos de Degradación
de la Fibrina ( Dímero D ).
 OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

Plasma con anticoagulante citrato trisódico (3.2%)

 Sangre venosa recolectada en un tubo

con citrato de sodio a una proporción de 1:10 ( 1 parte
de citrato y 9 partes de sangre).

 Tiempo de compresión no mayor a 60 seg. Un tiempo

mayor puede elevar los valores de fibrinógeno.
 ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS
 Las muestras deben mantenerse a temperatura
ambiente (18 – 25°C). El almacenamiento en hielo
o en la nevera puede provocar la activación de los
factores VII y XII.

 Estabilidad de las muestras (18 – 25°C) :

TP : 8 hora

APTT : 4 horas (terapia con

heparina 2 horas)

Factores : 4 a 8 horas
Coagulacion
 CONGELAMIENTO DE LAS MUESTRAS

 Los plasmas libres de plaquetas se pueden

alicuotar y congelar.

 El congelamiento se debe realizar tan pronto

como sea posible, de preferencia a –80°C;
es suficiente a –20°C si es por un período
corto ( 6 meses PT y APTT; 3 meses TT y
Factores).

 Las muestras se deben descongelar a 37° C

por 15 minutos y sólo una vez.
MÉTODOS DE DETECCIÓN DE COAGULACION
 MÉTODO MANUAL

Detección por aparición del coágulo

MÉTODO MECÁNICO

Método del garfio de Koller

EL LABORATORIO DE HEMOSTASIA HOY
• Diagnostico de
coagulopatías
• Estudios basales de
coagulación
• Estudios de
trombofilia
• Control de
anticoagulación

Control de
anticoagulación con
dicumarínicos

Sangrado crítico
 SEMIAUTOMATICOS

 Estandariza el punto AUTOMATICOS

final
 Pocas det día  Mayor bioseguridad
 No aumenta la  Mayor productividad
bioseguridad  Test coagulométricos
 Punto final  Test inmunológicos
coagulable y algunas
 Test colorimétricos
determinaciones
cromogénicas e  < variabilidad
inmunológicas interlaboratorio
 Código de barra para
pacientes y reactivos
 Costo Menor
 Perforadores de tapa
 Conexión al LIS

 Altos costos
COAGULÓMETROS
MÉTODOS DE DETECCIÓN DEL COAGULO
 Deteccción fotoóptica

 Detección nefelometríca

 Detección basada en la viscocidad

 Detección electromagnetica
Detección mecánica reacción
Basado en el empleo de una cubeta de
especial con una bola de acero
incorporada.

La bola se mantiene fija en una posición en

la cubeta, gracias a la acción de un imán
magnético.

Con la adición del reactivo, la cubeta

empieza a rotar alrededor de su eje
longitudinal, manteniéndose la bola en su
sitio gracias al campo magnético.

La formación de fibrina, desplaza la bola de

su posición original y este cambio de
posición es registrado por un sensor que
automáticamente registra el tiempo de
formación del coágulo.

Estos equipos también hacen una

detección óptica del coagulo .
 •Detección basada en la viscocidad
Viscocidad :es la resistencia del material a cambiar de forma

Se monitorea la formación del

coagulo a través del cambio de
amplitud del movimiento de una
bolilla

Al formarse el coagulo la
viscocidad aumenta y la amplitud
decrece

La ventaja de este sistema es que puede utilizarse cualquier

tipo de muestras ictéricas , lipémicas etc.
Desventaja: dificil detección de los coagulos friables
 La detección está basada en el incremento de la viscosidad del
plasma analizado.
El incremento de la viscosidad es medido a través del movimiento
de la billa de metal
 Cuando se añade el reactivo,
inmediatamente se inicia la detección.
 El cronómetro inicia la medición cuando la
billa inicia la oscilación de derecha a izquierda.
Cuando el coágulo aparece, la viscosidad se
incrementa y la amplitud disminuye.
DETECCCIÓN FOTOÓPTICA
LUZ

FBG Fibrina

Variación de la luz

Dispersión Absorción Reflexión

Medida de la señal

Transformación de la señal en un
dato hemostático
 MÉTODO
Coagulométrico: formación de fibrina

Fibrinógeno ----------------> Fibrina

TROMBINA

Tiempo de Coagulación : Tiempo empleado

para detectar la formación de fibrina.

turbidimetría
Detección nefelométrica
 El haz de luz de abajo pasa
directamente a través de la
muestra hacia al detector.
Cuando se forma la malla de
fibrina el haz de luz es desviado
y puede ser detectado en un
ángulo determinado de la
posición original del haz.
 El cronometro se detiene cuando
la cantidad de luz transmitida o
dispersada llega a un nivel
predeterminado.
 La diferencia entre la luz
dispersada o transmitida antes y
después de la formación del
coagulo por lo general es
proporcional a la cantidad de
fibrina.
 MÉTODO
• Cromogénico: incremento de color

EN ZIM A
Peptido-pNa ---- - -- -- -- ---->Peptido + pNa
(Sust. Cromogénico)
Color
 Sustratos Cromogénicos

Luz transmitida

180º Detector
Fuente de luz Cubeta de reacción
405 nm
 Curva de Reacción Cromogénica
Curva de Reacción Inmunoturbidimétrica Utilizan filtros a 405 nm.
ENZIMA
Utilizan filtros a 405 nm ,620 nm ,671nm Peptido-pNA pNa

Turbidez
(mAbs)
Color (mAbs)

Delta

Inicial
Tiempo
0
Medida de la turbidez inicial y Desarrollo de color
de la turbidez final producida despues de anadir el
por la aglutinación de las sustrato cromogénico de
partículas de latex modo lineal
ventajas y desventajas de los distintos
sistemas de detección

 Numerosos estudios han sugerido que los métodos ópticos y
mecánicos son equivalentes en términos de correlación,
precisión y reproducibilidad.

 Los defensores de los métodos ópticos remarcan la utilidad de

poder ver la curva de reacción durante todo el proceso de
formación de fibrina.

 Trabajos recientes han demostrado que en los coagulómetros de

última generación existe una buena correlación entre el método
óptico y mecánico aun en presencia de hemólisis y lipemia.

 Es importante aclarar que existen errores en la detección del

coagulo con ambos tipos de detección dependiendo de las
características intrínsecas de la muestra.

 Si no se detecta el punto final con un método, se debe chequear

la muestra con otro método de detección del coagulo o en forma
manual.
 ¿CÓMO ELEGIR UN COAGULÓMETRO?

 Cantidad de test /hs

 ¿Que tipo de muestras puede procesar?
 ¿Qué volumen de muestra utiliza?
 ¿qué volúmenes muertos utiliza?
 Si es abierto (permite incorporar reactivos de otros marcas o made in house)
 Capaz de procesar varios tipos de ensayos
criogénico , inmunológicos y coagulables en una
sola corrida
 Códigos de barra
 Sofware de control de calidad
 EL costo del equipo y de los elementos
descartables que utiliza, calidad del servicio
técnico, tamaño
 ¿El equipo se puede conectar al sistema
informático del laboratorio?
 ACL 7000

ACL TOP
ELITE PRO
Destiny MAx

BCS XP Siemens

Desteny plus
Sysmex CA 1500
STA-Evolution

STA compact