PRÁCTICA: RECUENTO POR FILTRACIÓN CON MEMBRANA FILTRANTE

FUNDAMENTO TEÓRICO:

El análisis microbiológico de líquidos muy poco contaminados se realiza filtrando un

volumen grande de la muestra por una membrana filtrante, que retiene a los
microorganismos que pudiera haber. Luego dicha membrana se pone en contacto con el
medio de cultivo adecuado, y se incuba.

En esta práctica vamos a analizar bebidas refrescantes. El criterio microbiológico para las
mismas es el siguiente:

En general, las bebidas refrescantes no deben contener gérmenes patógenos ni sus

toxinas. La flora banal no será elevada, puesto que puede ser causa de la alteración del
producto. Como orientación general, y dado el escaso riesgo sanitario que presentan las
bebidas refrescantes, se sugieren las siguientes especificaciones:

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Recuento de colonias aerobias (31 ± 1ºC) Máximo 1x10/ml

Escherichia coli Ausencia/ml

Salmonella-Shigella Ausencia/25 ml

Clostridium sulfito-reductores Ausencia/ml

Mohos y levaduras Ausencia

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2. OBJETIVO/S:

3. MUESTRA:

4. TRATAMIENTO DE LA MUESTRA:

En el caso de bebidas gaseosas, el análisis se efectuará después de la

desgasificación, para lo cual se vierten algo más de 50 ml de la muestra en un matraz
erlenmeyer estéril con perlas de vidrio. Se disuelve y elimina el gas agitando el matraz
durante algunos minutos a temperatura ambiente. A partir de la muestra, se prepararán las
diluciones decimales, usando como diluyente agua de triptona. En los productos muy
ácidos, se neutralizará la muestra con fosfato tripotásico al 20 %.

5. PROCEDIMIENTO:
1. Realizar el montaje de la bomba de vacío, rampa de filtración y monitores
microbiológicos (ver imágenes finales).

2. Quitar la tapa del monitor, añadir 50 ml de muestra y volver a tapar. Aplicar el vacío.

3. Cuando la filtración se ha completado, apagar el vacío, y lavar las paredes del monitor
con 20 o 30 ml de una solución estéril. Aplicar otra vez el vacío para que pasen los
líquidos de lavado a través de la membrana. Apagar el vacío.

4. Quitar la tapa del monitor y añadir el medio de cultivo hasta cubrir la membrana.
Realizar esta operación con mucho cuidado. Volver a poner la tapa, aplicar vacío unos
instantes.

5. Quitar la parte intermedia del monitor, formando una placa de petri. Quitar el
adaptador de dicha placa, y colocar el tapón azul correspondiente.

6. Invertir la placa e incubar a la temperatura adecuada. Tras la incubación, examinar y

contar las colonias con ayuda de la lupa de la tapa.