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1. OBJETIVO
Este procedimiento tiene por objeto explicar los pasos a seguir para realizar el ensayo: Esporas
Clostridium sulfito reductoras, empleando la técnica recuento de esporas.
2. ALCANCE
3. DEFINICIONES
ALIMENTO: Todo producto natural o artificial, elaborado o no, que ingerido aporta al organismo
humano los nutrientes y la energía necesarios para el desarrollo de los procesos biológicos. Están
incluidas las bebidas no alcohólicas, y aquellas sustancias con que se sazonan algunos comestibles
y que se conocen con el nombre genérico de especia.
ALIMENTO CONTAMINADO: Alimento que contiene agentes y/o sustancias extrañas de cualquier
naturaleza en cantidades superiores a las permitidas en las normas nacionales, o en su defecto en
normas reconocidas internacionalmente.
MATERIA PRIMA: Son sustancias naturales o artificiales, elaboradas o no, empleadas por la
industria de alimentos para su utilización directa, fraccionamiento o conversión en alimentos para
consumo humano.
4. DESARROLLO DE ACTIVIDADES
4.1. FUNDAMENTO
Esta técnica se basa en analizar volúmenes decimales de muestra en un medio de cultivo realizando
la siembra en profundidad. Se asume que cada una de las células presentes en el inóculo dará lugar
a una unidad formadora de colonia (UFC) lo que permite realizar el recuento de microorganismos
presentes en la muestra.
Este ensayo es considerado como el indicador más importante de las bacterias anaerobias
formadoras de esporas; varias especies del género Clostridium tienen la propiedad de reducir el ion
sulfito a sulfuro, que en presencia de citrato férrico u otra sal de metales pesados producen colonias
negras.
4.2. INTERFERENCIAS
Recolectar las muestras de alimentos con la ayuda de utensilios estériles (Cucharas, tenedores,
cuchillos, pinzas, etc.), e introducir en bolsas estériles. Conservar a temperatura entre 2 y 6 °C y
transportar de inmediato al laboratorio para realizar los respectivos análisis.
4.4.1. Equipos.
Balanza.
Baño serológico.
Cabina de flujo laminar.
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Incubadoras 35 °C.
Microscopio.
Nevera 2 – 6 °C.
Vortex.
4.4.2. Materiales.
Bandejas de transporte.
Dispensador de pipetas.
Frascos y recipientes para descarte.
Gradillas.
Marcadores.
Micropipetas de 100 y 1000 µL.
Pipetas graduadas estériles de 1, 5 y 10 mL.
Portaobjetos y cubreobjetos.
Tips para micropipetas, azules y amarillas.
Toallas de papel absorbente.
Tubos de ensayos tapa rosca 16 cm x 16 mm.
4.4.4. Soluciones.
4.6. PROCEDIMIENTO
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Colocar los tubos durante 10 minutos en el baño serológico a 80 C y luego someter a shock
térmico, llevándolos rápidamente al chorro de agua fría.
Adicionar a cada tubo 10 mL de Agar SPS, inclinar el tubo levemente para evitar la formación
de burbujas de aire y dejar solidificar.
Adicionar una segunda capa de medio (5 mL) y dejar solidificar.
Incubar a 35 ± 2 C durante 72 horas.
Observar los tubos diariamente, debido a la generación de un color negro por la formación de
H2S (Sulfuro de Hidrógeno) se puede difundir en el medio, dificultando su lectura.
Realizar los controles de calidad.
4.7. CÁLCULOS
Realizar la lectura en los tubos que presenten entre 5 y 50 unidades formadoras de colonia
UFC (de color negro).
Contar las colonias y multiplicar por el factor de dilución.
Ejemplo 1:
Ejemplo 2:
Reportar como Esporas Clostridium sulfito reductoras UFC/g o ml. Si no se observan colonias en la
dilución 101, informar el resultado como <10 UFC/g o ml.
5.8. BIBLIOGRAFÍA
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