Estructura y función de proteínas

Las proteínas son biopolímeros de

elevado peso molecular que se
encuentran en todas las células vivas.

Están constituidas básicamente por

carbono, hidrogeno, oxigeno, nitrógeno
y nitrógeno, aunque pueden contener
otros elementos como fosforo y azufre
 Estructura y función de proteínas
Una célula bacteriana puede tener cerca de 1000 proteínas diferentes, mientras
que en una célula humana pueden haber 10.000 clases de proteínas distintas.

Químicamente, las proteínas están formadas por la unión de muchas moléculas

denominadas aminoácidos. Los aminoácidos se unen entre si originando
péptidos. Según su tamaño molecular, pueden ser oligopéptidos, formados por
no mas de 10 aminoácidos, y polipéptidos, constituidos por mas de 10
aminoácidos.

Cuando el numero de aminoácidos supero los 50 y el polipéptido tiene una

estructura tridimensional especifica, entonces se habla propiamente de
proteínas.
 Estructura y función de proteínas
Los aminoácidos son compuestos de bajo
peso molecular. Se caracterizan por
presentar un grupo carboxilo (-COOH) y
un grupo amino (-NH2) que se unen al
mismo carbono (Cα).

Unido al carbono tenemos unido un

grupo variable denominado radical R el
cual determina las propiedades de cada
aminoácido. Según este radical se
distinguen 20 tipos de aminoácidos.
 Estructura y función de proteínas
La organización de una de una proteína viene definida por cuatro
niveles estructurales (o cuatro niveles de organización)
denominados:

• Estructura primaria
• Estructura secundaria
• Estructura terciaria
• Estructura cuaternaria

Cada una de estas estructuras informa de la disposición de la

anterior en el espacio.
Estructura y función de proteínas
 Estructura y función de proteínas
Estructura primaria
Viene determinada por la secuencia de
aminoácidos en la cadena proteica, es decir, el
número de aminoácidos presentes y el orden
en que están enlazados.

Las posibilidades de estructuración a nivel

primario son prácticamente ilimitadas. Como
en casi todas las proteínas existen 20
aminoácidos diferentes, el número de
estructuras posibles viene dado por las
variaciones con repetición de estos
aminoácidos.
 Estructura y función de proteínas
Estructura secundaria
Es el plegamiento que la cadena polipeptídica adopta gracias a la
formación de puentes de hidrógeno entre los átomos que forman
el enlace peptídico.

Los puentes de hidrógeno se establecen entre los grupos -CO- y -

NH- del enlace peptídico. De esta forma, la cadena polipeptídica
es capaz de adoptar conformaciones de menor energía libre, y por
tanto, más estables.
 Estructura y función de proteínas
Estructura secundaria
Hélice alfa
En esta estructura la cadena.
Esta estructura se mantiene
gracias a los enlaces de
hidrógeno intracatenarios
formados entre el grupo -NH de
un enlace peptídico y el grupo -
C=O del cuarto aminoácido que
le sigue.
 Estructura y función de proteínas
Estructura secundaria
Hoja beta
Cuando la cadena principal de un polipéptido se estira al máximo que
permiten sus enlaces covalentes se adopta una configuración espacial
denominada estructura β, que suele representarse como una flecha. En esta
estructura las cadenas laterales de los aminoácidos se sitúan de forma
alternante a la derecha y a la izquierda del esqueleto de la cadena
polipeptídica. Las estructuras β de distintas cadenas polipeptídicas o bien
las estructuras β de distintas zonas de una misma cadena polipeptídica
pueden interaccionar entre sí mediante puentes de hidrógeno, dando lugar
a estructuras laminares llamadas por su forma hojas plegadas u hojas β.
Estructura y función de proteínas
 Estructura y función de proteínas
Estructura terciaria

Se llama estructura terciaria a la disposición tridimensional de todos los

átomos que componen la proteína. La estructura terciaria de una proteína
es la responsable directa de sus propiedades biológicas, ya que la
disposición espacial de los distintos grupos funcionales determina su
interacción con los diversos ligandos.

Para las proteínas que constan de una sola cadena polipeptídica (carecen
de estructura cuaternaria), la estructura terciaria es la máxima información
estructural que se puede obtener
Estructura y función de proteínas
 Estructura y función de proteínas
Estructura cuaternaria

Cuando una proteína consta de más de una cadena polipeptídica, es decir,

cuando se trata de una proteína oligomérica, decimos que tiene estructura
cuaternaria. La estructura cuaternaria debe considerar:

• El número y la naturaleza de las distintas subunidades o monómeros que

integran el oligómero y
• La forma en que se asocian en el espacio para dar lugar al oligómero.
Estructura y función de proteínas
Estructura y función de proteínas
Transporte Estructura

Proteínas

Regulación y
Catálisis
señalización
Movimiento
 Contenidos
Unidad I
Técnicas de manipulación del ADN
• Estructura del DNA
• Replicación del DNA
• Transcripción
• Estructura del RNA
• Traducción
• Proteínas
• Técnicas para el análisis de la expresión génica
 ¿Qué es la expresión génica?
La expresión génica es el proceso por el cual la información codificada por
un gen se usa para producir moléculas de RNA que codifican para proteínas
o para producir moléculas de RNA no codificantes que cumplen otras
funciones.

La expresión génica actúa como un “interruptor” que controla cuándo y

dónde se producen moléculas de RNA y proteínas y como un “control de
volumen” para determinar qué cantidad de esos materiales se produce.

El proceso de expresión génica está cuidadosamente regulado, y cambia

considerablemente en diferentes condiciones. Los productos de RNA y
proteínas de muchos genes sirven para regular la expresión de otros genes.
Expresión génica
 Regulación de la expresión génica
Es el proceso que se usa para
controlar el momento, la ubicación
y el nivel de expresión de los
genes.

El proceso puede ser complicado y

se lleva a cabo por diversos
mecanismos, que incluyen
proteínas reguladoras y
modificación química del DNA.

La regulación génica es clave para

la capacidad de un organismo de
responder a cambios ambientales.
Regulación de la expresión génica
Diferenciación celular
Regulación de la expresión génica
Regulación de la expresión génica
Regulación de la expresión génica
Control pre- • Accesibilidad del DNA a la transcripción:
• Condensación de la cromatina
transcripcional • Metilación del DNA

• Frecuencia y velocidad de inicio de la transcripción

Control transcripción • Velocidad de elongación del RNA
• Eficacia de terminación de la transcripción

Control de • Velocidad de procesamiento

• Maduración alternativa
procesamiento de RNA
Control de transporte • Selección de qué RNA son transportados
• Transporte activo a través de os poros
del RNA
Regulación de la expresión génica
• Estabilidad del ARNm maduro
Control de degradación
del RNA
• Frecuencia y velocidad de inicio de la traducción
Control traducción • Velocidad de elongación del polipéptido
• Eficiencia de terminación de la traducción

• Eficacia de modificaciones post-traduccionales

Control de procesamiento
de proteínas
• Proteína funcional - proteína inactiva
Control de actividad de
proteínas
Técnicas de análisis de la expresión génica
Medir y analizar la expresión génica
es importante, ya que el nivel de
expresión de un gen en particular
dentro de una célula puede
proporcionar una gran cantidad de
información.

Para estudios de niveles de

expresión génica se evaluará RNA,
mientras que para la búsqueda de
modificaciones o alteraciones
génicas se estudia el DNA
Técnicas de análisis de la expresión génica

En términos generales, hay tres tipos de pruebas

genéticas disponibles: citogenéticas, bioquímicas
y moleculares utilizadas para detectar anomalías
en la estructura de los cromosomas, en el
funcionamiento de las proteínas o en la secuencia
del ADN, respectivamente.
Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas citogenéticas.

La citogenética estudia los

cromosomas para identificar las
anomalías estructurales. Los
cromosomas de una célula humana
en división pueden analizarse
fácilmente en glóbulos blancos,
especialmente los linfocitos T, que
se obtienen fácilmente de la Cariograma de un hombre
sangre, pero también se pueden
utilizar otros tejidos como medula
ósea o liquido amniótico.
Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas citogenéticas.

Cariotipo:
Es el estudio de la estructura y
numero de cromosoma.
Cariograma de una mujer con Síndrome de Turner
(monosomía del cromosoma X)
Se utiliza para buscar anomalías en
el numero o la estructura de los
cromosomas, permitiendo detectar
diferentes enfermedades o
trastornos.
Cariograma de un hombre con Síndrome Cri du Chat (deleción
parcial o total del brazo corto del cromosoma 5).
Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas citogenéticas.

Cariotipo:
El primer paso para realizar el análisis del
cariotipo de un individuo es tomar muestras de
alguno de sus tejidos.

Una vez obtenida la muestra, realizaremos

un cultivo celular en el medio adecuado. A
partir de estos cultivos celulares, se
obtienen células en división. Esto es muy
importante, porque los cromosomas sólo son
visibles durante la división celular, también
conocida como mitosis.
 Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas citogenéticas.

Cariotipo:

Si se tomasen muestras de células que se

encuentran fuera de la mitosis, su ADN estaría
en forma de cromatina y no se podría ver
ninguna anomalía numérica o estructural. Para
evitar esto, las células son tratadas
con colchicina, un compuesto que detiene la
mitosis en cierto punto de la metafase, lo que
hace que las células queden en una especie de
división paralizada para siempre.
 Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas citogenéticas.

Cariotipo:

Una vez obtenidas las muestras de los cultivos celulares, se tiñen con tintes específicos
para ácidos nucleicos, que tiñen de diferente forma cada región de los cromosomas,
dependiendo de su composición en cuanto a bases nitrogenadas. Esto hace posible que los
cromosomas se puedan ver correctamente en el microscopio, a la vez que permite
distinguir diferentes bandas en el ADN.

Una vez teñidas, las muestras son fotografiadas bajo el microscopio y los cromosomas son
ordenados por tamaño y colocados junto a sus homólogos.
Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas citogenéticas.

Hibridación fluorescente in situ

(FISH)

Es un proceso que tiñe con colores

vivos los cromosomas o partes de
los cromosomas con moléculas
fluorescentes para identificar
anomalías cromosómicas. (p. ej.,
inserciones, eliminaciones,
translocaciones y amplificaciones).
 Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas citogenéticas.

Hibridación fluorescente in situ (FISH)

El primer paso de la técnica consiste en la desnaturalización del DNA para separar la doble
hélice. A la muestra desnaturalizada se le añade entonces la sonda de interés (fragmento
de DNA marcado fluorescentemente).

Primero, las sondas hibridan a las regiones específicas para las que han sido diseñadas.
Después, se tiñen los núcleos con un color de contraste inespecífico (generalmente DAPI).
Las sondas de DNA pueden marcarse con moléculas fluorescentes
denominados fluoróforos (método directo) o no fluorescentes que se detectan con
anticuerpos fluorescentes (método indirecto). Por último, se visualiza la muestra
preparada bajo un microscopio de fluorescencia.
Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas bioquímicas

Las pruebas clínicas para detectar una enfermedad bioquímica usan técnicas que
analizan las proteínas, pero no los genes.

Muchas enfermedades genéticas bioquímicas se conocen como "anomalías

congénitas del metabolismo" porque están presentes al nacer y afectan un proceso
metabólico clave. Según la enfermedad, las pruebas pueden realizarse para medir
directamente la actividad de las proteínas (medición directa de la actividad
enzimática), el nivel de metabolitos (medición indirecta de la actividad enzimática)
y el tamaño o la cantidad de proteínas (estructura de las proteínas). Para estas
pruebas se necesita una muestra de tejido que contenga la proteína, por lo general,
la sangre, la orina, el líquido amniótico o el líquido cerebroespinal.
Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas bioquímicas

Hay una variedad de tecnologías como la cromatografía líquida

de alto rendimiento (HPLC, por sus siglas en inglés), la
cromatografía líquida/espectrometría de masa (GC/MS, por sus
siglas en inglés) y la espectrometría de masas en tándem
(MS/MS, por sus siglas en inglés) que permiten tanto la
determinación cualitativa como cuantitativa de los metabolitos.
Además, los bioanálisis pueden usar otros métodos como la
fluorometría, la radioisotopía o la cromatografía en capa fina.
Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas moleculares

El análisis directo de DNA se realiza cuando se conoce la secuencia del gen de

interés. Para las pequeñas mutaciones de DNA, las pruebas directas de DNA
suelen ser el método más eficaz, en particular, si se desconoce el
funcionamiento de la proteína y no se puede desarrollar una prueba bioquímica.

Se puede realizar una prueba de ADN en cualquier muestra de tejido, incluso

con muestras muy pequeñas. Para realizar las pruebas, se pueden usar
diferentes tecnologías moleculares, como la secuenciación directa, los ensayos
de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y la hibridación.
Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas moleculares

La hibridación genómica comparativa (CGH) o análisis de

micromatrices cromosómicas (CMA)

Es un método citogenético molecular para analizar las ganancias

o pérdidas del ADN y que no son detectables con los análisis
cromosómicos de rutina. Este método se basa en la proporción
entre el DNA del paciente etiquetado con moléculas
fluorescentes y el DNA normal de referencia.
Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas moleculares El análisis de micromatrices es una
herramienta que se usa para determinar la
expresión genética. Moléculas de RNAm se
La técnica CGH puede detectar unen, o hibridan, específicamente a una
pequeñas eliminaciones o plantilla de DNA, por lo general, un gen
duplicaciones, pero no las entero o parte del cual se originó.
modificaciones cromosómicas Cuando una micromatriz contiene muchas
como las inversiones o las plantillas de DNA, el nivel de expresión de
translocaciones recíprocas los cientos de miles de genes en una sola
equilibradas o las alteraciones en muestra del paciente se puede medir
usando una computadora para detectar la
el número de copias de cantidad de RNAm unida a cada sitio en la
cromosomas micromatriz.
Técnicas de análisis de la expresión génica
• Pruebas moleculares

Son procedimientos usados para amplificar los segmentos deseados de

DNA, posteriormente se pueden realizar muchas otras pruebas sobre el
producto amplificado.

En el caso de algunas enfermedades genéticas, se pueden dar muchas

mutaciones diferentes en el mismo gen y causar una enfermedad, lo que
puede dificultar las pruebas moleculares.
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica

Desnaturalización
Hibridación
Elongación
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
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Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Nucleid Acid Sequence-Based Amplification
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Nucleid Acid Sequence-Based Amplification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Nucleid Acid Sequence-Based Amplification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Nucleid Acid Sequence-Based Amplification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Transcription Mediated Amplification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Transcription Mediated Amplification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Transcription Mediated Amplification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Transcription Mediated Amplification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Técnicas de análisis de la expresión génica
Loop-mediated isothermal
AMPlification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Loop-mediated isothermal AMPlification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Loop-mediated isothermal AMPlification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Loop-mediated isothermal AMPlification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Loop-mediated isothermal AMPlification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Loop-mediated isothermal AMPlification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Loop-mediated isothermal AMPlification
Técnicas de análisis de la expresión génica
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Técnicas de análisis de la expresión génica
Branched DNA signal amplification
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Branched DNA signal amplification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Branched DNA signal amplification
Técnicas de análisis de la expresión génica
Branched DNA signal amplification
Técnicas de análisis de la expresión génica
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Ligase Chain Reaction
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Ligase Chain Reaction