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Muchas veces estas muestras se toman en terreno, en el lugar de la mortalidad, por ejemplo, en algunos casos
puede ocurrir que lleguen los cuerpos al laboratorio y ahí se tomen las muestras. Esto ocurre en humanos por
ejemplo la toma de muestra para identificación de COVID.
Lo importante es mantener la integridad de esta muestra tejido para preservar la calidad de los ácidos nucleicos
para ello lo ideal es mantener una cadena de frio y al mismo tiempo mantener la muestra en soluciones
estabilizadoras, especialmente estabilizadoras de los ácidos nucleicos como puede ser etanol al 70% para el DNA,
en el caso del RNA hay un producto que se llama RNA later que es uno de los productos que se utiliza para poder
estabilizar la muestra y preservar la integridad de los RNA presentes en esa muestra, obviamente durante el
transporte se debe evitar la contaminación de las muestras y también tener todo muy bien rotulado para
mantener la trazabilidad dentro del transporte como también dentro del procesamiento en el laboratorio.
Importante mantener la seguridad del operario.
Una vez que llegan al laboratorio la idea es que todo el mundo tenga guantes, en el laboratorio finalmente esta
muestra es procesada, ya sea de tejido vegetal, sangre, tejido animal o bacterias, etc.
En el laboratorio se usan una serie de kits de extracción de DNA o RNA que permiten hacer una extracción bastante
buena en términos de rendimiento, saca una buena cantidad de ácidos nucleicos donde están presente los ácidos
nucleicos de los patógenos que a veces no están en abundante cantidad por lo tanto la idea es poder extraer una
buena cantidad de RNA o de DNA de manera que esté presente el RNA o DNA del patógeno que se está
identificando.
*primer video * las muestras pueden ser células, sangres, tejido, etc. Lo importante es que podamos sacar de esta
muestra el DNA genómico dejando de lado todo lo que son membranas, matriz extracelular, proteínas y RNA que
también puede interferir en la reacción, la idea es poder obtener un DNA genómico, un DNA total que no
solamente incluya el DNA del hospedero en este caso, sino que también el DNA de las bacterias que estén
presenten, lo mismo ocurre con el DNA en el caso del RNA los kits que se utilizan extraen el RNA dejando de lado
el DNA.
La muestra de tejido debe ser cortada en pequeños trozos, eso actualmente no hace en el laboratorio, porque se
tiene un sistema que coloca dentro de la muestra una serie de esferas de vidrio (silica) y estas esferas al colocarlas
dentro de un homogeneizador de alta velocidad hace que las esferas choquen entre sí y permitan romper más
fácilmente el tejido, no es necesario estarlo cortando con un bisturí o una hoja de afeitar.
Durante el proceso de lisis se van agregando ciertos componentes para mejorar el rendimiento de la extracción
del DNA en este caso, se agrega proteinasa K que rompe lo tejidos y también RNAasa para romper el RNA y mejorar
el proceso de extracción del DNA.
Una vez que se une el DNA a esta resina podemos trabajarla de manera
óptima para el posterior requerimiento que son en este caso, el PCR que se
hará posteriormente, una vez extraído el DNA se guarda casi siempre a -20, -
80 grados si es RNA para que no se degrade, el DNA es un poco más estable,
se puede guardar a -20°C.
Una vez extraído el DNA se hace el mix, que es la mezcla de los reactivos de la reacción de PCR que principalmente
tienen un buffer donde va a producirse la reacción de la DNA polimerasa que es una DNA polimerasa termoestable
que es la que finalmente sintetiza el DNA, en el mix hay que agregar también los partidores o primers que son
específicos para el patógeno que estamos identificando, se agregan lo nucleótidos que en la jerga del laboratorio
se conocen como dNTPs (desoxirribonucleótidos trifosfatados), que son 4, y obviamente se debe agregar el DNA
extraído o templado como también se le llama, que es el DNA donde debería estar el DNA de la bacteria el RNA
del virus, por lo tanto se agrega este DNA que es una mezcla, es un NDA total, del tejido de la lesión de donde se
extrae este DNA.
Una vez mezclado se lleva al
laboratorio, en la imagen se ven los
componentes de la reacción de PCR,
buffer, nucleótidos, los dos
partidores, la DNA polimerasa, el
DNA templado y en este caso el agua
que se agrega.
Siempre en una reacción de PCR se tendrán muestras, en este caso se analizaron 5 muestras de DNA que se extrajo
inicialmente, un control positivo y un control negativo. El control positivo debe tener si o si lo que yo estoy
buscando para que así se pueda comparar, por ejemplo, se puede sacar muestra de un cultivo de la bacteria. El
control negativo debería tener solo agua.
*segundo video* se debe calcular la cantidad de cada uno de los componentes de la reacción para una sola
reacción y posteriormente multiplicar cada uno de esto volúmenes por el número total de muestras incluidos los
controles positivos y negativos, en este caso son 5 muestras más el control negativo y positivo, son 7 y siempre se
agrega una muestra más para no trabajar con volúmenes tan justos, sobre todo cuando trabajamos con volúmenes
tan pequeños como son los microlitros, siempre se le agrega una reacción más en el mix de PCR. El DNA es lo único
que no tiene el mix, ya que se agrega al final y es distinto para cada tubo. Se rotulan los tubos en los cuales se va
a realizar la reacción de PCR, se añaden los reactivos y finalmente se añade el DNA.
El PCR de tiempo real principalmente su mayor ventaja es que no utiliza métodos electroforéticos para analizar el
resultado de la reacción es un equipo muchísimo más robusto en términos de prestaciones para poder evaluar la
reacción positiva o negativa en términos diagnóstico y lo que hace le PCR tiempo real el fundamento es
exactamente el mismo que la reacción de PCR tiempo real con la única diferencia
es que la producción, la generación del producto de PCR se puede monitorear ciclo
a ciclo porque el producto de PCR va emitiendo fluorescencia y eso lo detecta el
equipo desde el ciclo numero 1 hasta el último ciclo. Por lo tanto, mientras más
producto de PCR vaya originándose a medida que pasan los ciclos en una reacción
positiva esa fluorescencia va a ir aumentando y eso es lo que entrega el equipo
que casi siempre esta acoplado a un computador o si bien se puede analizar en la
misma pantalla que tiene el equipo del termociclador de tiempo real.
En cada ciclo para una reacción positiva la reacción va a ir
emitiendo fluorescencia lo que va detectando el equipo y
por lo tanto va generando las curvas de fluorescencia que se
ven en el gráfico y que son indicativos de una reacción
positiva, cuando la reacción es negativa como la que aparece
en el grafico en morado la fluorescencia nunca sobrepasa el
umbral de detección y por lo tanto no hay una curva de
fluorescencia y por lo tanto la reacción es negativa. El análisis
del producto que se va generando es de ciclo a ciclo a través
de la fluorescencia que emite el producto de PCR por lo tanto
no utiliza métodos electroforéticos, se realiza un análisis computacional de la florescencia y eventualmente
después de la incorporación de varios análisis se puede incluso cuantificar la cantidad inicial de templado de DNA
con el cual se partió en la reacción de PCR. Este es el sistema que hoy en día se usa para el diagnóstico y permite
mejorar significativamente no solo la sensibilidad de la reacción, sino que también la especificidad.
La interpretación de resultados, hay que recordar que hay tres muestras en el grafico que las tres son positivas
porque las tres generaron una fluorescencia por el producto de PCR que se iba generando sin embargo el ciclo en
el cual sobrepasan el umbral de detección es distinto en las tres muestras que se están analizando, de hecho, el
CT (ciclo donde se sobrepasa el umbral de detección) de la muestra numero 1 tiene un valor de 20, la muestra 2
tiene un CT de 26 y la muestra 3 tiene un CT de 35. Si bien las tres son positivas el que tengan distinto valor de CT
significa que la muestra 1 tenía mayor carga de DNA inicial y eventualmente significa que tenga una mayor carga
bacteriana para confirmar esto tienen que ser también el mismo tejido, y utilizar la misma cantidad de muestra
para extraer el DNA.
Esta técnica no solo permite aumentar la sensibilidad, la eficiencia de la reacción, la especificidad, sino que
también el número que muestras que se pueden analizar al mismo tiempo. Estos equipos la mayoría traen un set
para poder evaluar 96 muestras a la vez y a hay otro que es un poquito mas caro que permite analizar hasta 384
muestras mas o menos a la vez por lo tanto se gana en tiempo, en eficiencia y en número de muestras que se
pueden analizar en el mismo tiempo, para las 96 muestras se generan 96 curvas graficas
En el video se puede ver el procedimiento de PCR tiempo real para el coronavirus, hay que hacer un hisopado
nasal para tomar la muestra, si hay virus presente se coloca en un solución que mantiene viable el virus. En este
caso para las reacciones de diagnóstico de COVID y para otras también tanto la transcripción reversa como el PCR
propiamente tal se realizan en un solo tuvo son reacciones que se llaman de one step o de un solo paso que
permite en un solo tuvo realizar tanto la trascripción reversa del RNA como posteriormente la reacción de PCR,
son mucho más rápidos esto sistemas y permiten obviamente minimizar los tiempos de obtención de resultados.
Finalmente hacer mención de la sonda taqman que no es otra cosa que es un tercer partidor pero que no participa
directamente en la reacción de PCR sino que se une al producto de PCR y esta cuando se une al producto de PCR
esta sonda se rompe y al romperse se produce
fluorescencia por lo tanto mientras más
producto de PCR se vaya originando mas sonsa
taqman se va a unir, mas sonda taqman se va a
romper y mayor va a ser la fluorescencia, así
función este sistema de taqman para PCR de
tiempo real.
Hay que resaltar también que en el caso de reacción de PCR para COVID tiene tres genes blancos para poder
amplificar en algunos casos se usan solamente dos o en algunos casos los tres juntos por lo tanto es una manera
de poder garantizar que el virus se
está detectando a partir de tres
genes, para cada gen están los
respectivos primer y para cada
gen esta la respectiva sonda.
En la parte que es el
apareamiento de los partidores
que se unen en los extremos de la
región que se va a amplificar
aparece una sonda que es un
partidor pero que tiene un
fluoroforo que emite fluorescencia cuando esta de forma integra a la sonda el fluoroforo emite fluorescencia pero
lo absorbe, se roba el fluoroforo por lo tanto la sonda en términos de emisión de fluorescencia no emite o no se
detecta su fluorescencia pero cuando se degrada el fluoroforo se libera y ahí emite fluorescencia por lo tanto
significa que hay producción producto de PCR y la fluorescencia va a ir aumentando a medida que más producto
de PCR se vaya generando.
El PCR convencional y en tiempo real en termino de etapas son exactamente las mismas, la única diferencia es
que el PCR convencional el producto de PCR se ve en una cámara de electroforesis en un gel de agarosa en cambio
el PCR de tiempo real tiene las tres etapas, pero detecta la fluorescencia que emite el producto de PCR en cada
ciclo entonces no necesita un método electroforético.
En el laboratorio donde se trabaja están las salas donde se realiza la extracción de ácidos nucleicos que tienen que
estar separadas del laboratorio de realización del mix, todos los elementos que están acá solo se utilizan
solamente se utilizan dentro de los dos laboratorios la idea es evitar cualquier tipo de contaminación. Hay
centrifugas, campanas de extracción de ácidos nucleicos, gabinetes para hacer el mix de PCR, micropipetas,
gabinetes donde se realiza la extracción que no es el mismo donde se realiza el mix para evitar contaminaciones
cruzadas.
Practico 2: Diagnóstico Inmunohistoquímico
Método indirecto: tenemos dos anticuerpos, el primero va dirigido a nuestro antígeno, y el segundo va
dirigido hacia la región constante de nuestro anticuerpo primario, es un anti-anticuerpo. Si el anticuerpo
primario fue creado en un ratón, el segundo anticuerpo tiene que se creado en otra especie (una cabra)
para detectar ese segmento constante del ratón.
Método avidina-biotina: es un método indirecto, hace uso de un anticuerpo secundario, el cual está
marcado por una molécula de biotina. La biotina es un vitamina del complejo B, que tiene una afinidad
natural por la molécula de biotina, que es una vitamina con afinidad natural por la molécula de avidina.
La avidina es una glicoproteína que se produce en el oviducto de aves, reptiles y anfibios, es un
componente de la clara del huevo. Se marca un anticuerpo secundario con una molécula de biotina y
luego se agrega un complejo, avidina marcada con una peroxidasa. La ventaja de usar este método es
que al usar una molécula que además está adherida a otra, la señal para detectar un mismo antígeno es
mayor, habrá una mayor coloración. Una vez que se tiene el anticuerpo secundario unido al complejo se
añade el sustrato se tendrá una señal café (es el más común de todos).
Cuando se quieren dos antígenos en un mismo tejido se pueden utilizar diferentes colores.
Diferencias:
✔ El método directo tiene la limitación de que la sensibilidad es baja porque se está dependiendo
de un solo anticuerpo que se puede unir a una sola parte del antígeno.
✔ La ventaja del método avidina biotina es que se tiene una amplificación de la señal.
Metodología
La histología es el uso de las láminas, que se obtienen de tacos de parafina, es tejido que se colectó en
formalina durante la necropsia por ejemplo, después de unos días que penetró la formalina, este tejido
se fija y después de diferentes procesos se sumerge en una solución de parafina, se corta en secciones
muy finas, se tiñen y eso se ve en la histología. La IHQ también utiliza este material porque al ver solo la
histología se puede describir mediante visualización un tumor y si se quiere estar seguro de que es un
tumor en particular podemos usar antígenos específicos que ese tumor expresa, entonces lo que se hace
es volver al taco de parafina, hacer una nueva sección, que tendrá la misma morfología y se hace la IHQ
para el tumor en sospecha.
La imagen, muestra una necrosis hepática en bovino, la línea más teñida demarca la zona necrótica,
conformada por gran cantidad de neutrófilos, infiltrado inflamatorio neutrofílico y una gran cantidad
basófilos asociada a esa lesión, lo que nos hace saber que es una hemoglobinuria bacilar. Esto es algo
que conocemos, hicimos la necropsia, vimos un foco de necrosis en el hígado, la orina estaba con
apariencia de vino tinto, el animal estaba con ictericia generalizada y finalmente se vio la lesión por
histología. Si queremos ser más prolijos y darle más certeza a nuestro diagnóstico, lo que deberíamos
hacer es ir al taco de parafina y sacar una nueva sección y hacer IHQ que vaya dirigida a Clostridium
hemolítico, el cual no tiene anticuerpos comerciales, existen anticuerpos genéricos para Clostridium
novii, al utilizarlos no va a distinguir cuál es (A, B, C o D), sin embargo como se conoce la patogenia,
epidemiología a pesar de que la IHQ tiene esa limitante, podemos tener cierto grado de confianza, y si se
necesita más detalle se podría hacer una PCR para detectar el gen que codificar para la toxina Beta
(principal fator de virulencia de Clostridium hemolítico).
Recuperación antigénica
Recordar que los tejidos se obtienen de un tejido en parafina, que previamente había estado en
formalina. La formalina les cambia la estructura conformacional a las proteínas, por lo que existe la
pequeña posibilidad de que el epítope (parte del antígeno específica que se está buscando) esté
enroscada en la proteína por acción de la formalina.
La recuperación antigénica (se usa de diferentes maneras, el más común es el calor) es un proceso que
permite desenvolver estas proteínas, volverlas a su estado natural para que queden expuestos los
antígenos que se buscan, tiene por objetivo desenmascarar epítopes, hacerlo detectables por el
anticuerpo que se va a utilizar. Este concepto es esencial para cualquier técnica de IHQ.
Otro posible problema que se puede tener en la IHQ es la de una señal inespecífica, lo que se espera es
que el anticuerpo reaccione con el antígeno que estamos buscando y solamente se una a él, para que
posteriormente la enzima peroxidasa reaccione con el sustrato y de una coloración en base a la reacción
antígeno-anticuerpo que nosotros esperamos. Uno de los problemas es que en el mismo tejido haya
peroxidasas (peroxidasas endógenas), las que hacen competencia con las peroxidasas unidas a los
anticuerpo secundarios, entonces si a las peroxidasa endógenas se les da el sustrato igual se va a generar
la reacción con un color café en un lugar donde no hay
antígeno, es una reacción inherente al tejido con nuestro
sustrato. Por lo que, para evitar ese problema, antes de
agregar los anticuerpos, la idea es bloquear las peroxidasas
endógenas, mediante el uso de peróxido de hidrógeno
(𝐻2𝑂2), de esta forma se le da un sustrato a la peroxidasa
para que no esté presente cuando se agregue el anticuerpo
primario y posteriormente el secundario. Esto se realiza
para cualquiera de los tres métodos, ya que la mayoría de
los métodos utilizan peroxidasas.
Otra posible fuente de señal inespecífica, son sitios inespecíficos de unión, puede ser que en el tejido
haya otras moléculas que, si bien no son iguales al antígeno que se busca, nuestros anticuerpos se unan
de manera azarosa tal vez a esas moléculas, generando un posible ruido a la señal que se busca. Para
evitar esto se utiliza un suero de bloqueo antes de agregar el anticuerpo primario y antes del secundario
(en caso de que se esté utilizando ese método). Este suero de bloqueo lo que hace es unirse a todos los
sitios donde no está el antígeno de interés (donde potencialmente se podría unir el anticuerpo primario),
entonces al agregar el anticuerpo primario lo que principalmente estará disponible es el antígeno de
interés. Como suero de bloqueo generalmente se utiliza albumina bovina o el mismo suero donde el
anticuerpo secundario fue generado.
Si se tiene razones para solicitar una IHQ, la idea es volver al taco de parafina y tomar una sección de 3-5
um, y ponerla en un portaobjeto. Un microtomo, es donde va inserto nuestro casete con el tejido
embebido en parafina. Lo que se observa son varios cortes que se van conectando, y poniendo en un
portaobjeto.
El primero paso es remover la parafina, todo lo blanco es parafina que va a interferir con los pasos
posteriores. Para removerla y dejar solo el tejido, se utiliza un compuesto que denominado Xilol (xylene),
la parafina es soluble en xilol por lo que se puede mezclar y eliminar.
Como el tejido está seco (se le removió todo el agua) y nuestro proceso requiere de mucha interacción
con líquidos con diferentes compuestos, se requiere rehidratar a muestra. Se realiza mediante el paso
de la muestra en series sucesivas de etanol, de concentración decreciente hasta llevarlo a agua
(100%-50%→agua).
Una vez hidratada la muestra se lleva al paso de recuperación antigénica, con el fin de desenmascarar
epítopes que pueden estar ocultos producto de la formalina.
Luego se bloquea la peroxidasa endógena para evitar la señal inespecífica. Además de agregar el suero
de bloqueo.
Después de todos estos procesos es cuando se agrega el anticuerpo primario, esperando que se una al
antígeno de interés.
Luego se agrega el anticuerpo secundario marcado con biotina. Después el complejo
avidina-peroxidasa, que es el que se va a unir a la biotina que estará marcando al anticuerpo secundario.
Luego se agrega el sustrato para que la peroxidasa actúe y le dé una coloración rojiza al antígeno de
manera indirecta, el cromógeno DAB. DAB es uno de los sustratos más comunes que se utilizan, por lo
tanto muchas de las fotos de IHQ que uno encuentra siempre tienen una coloración café, pero hay otros
sustratos que le van a dar una coloración rojiza, por lo que si se quieren detectar 2 antígenos en un solo
tejido usar un sustrato y uno café, lo que es muy difícil, pero la gente con mucha experiencia lo puede
hacer.
Como esto va a dar una coloración café solo cuando el antígeno esté presente, necesitamos un método
de contraste en el tejido, es por ello por lo que la muestra se sumerge en hematoxilina (que tiñe los
núcleos), es super útil para nuestra interpretación porque todas las células tienen núcleo, se tiñen de
color azul.
Posteriormente se realiza una deshidratación de la muestra, se sumerge en concentraciones crecientes
de etanol hasta volver al xilol, se coloca el cubreobjeto, y se observa.
Esto tiene una serie de modificaciones si uno lo quiere, por lo que lo mencionado es lo más estándar.
Ejemplo diagnostico
Corte histológico
Inmunohistoquímica
→ Existen a nivel de membrana plasmática de los monocitos y los macrófagos unas moléculas
llamadas integrinas. Estas están compuestas por una cadena beta que también se llama CD18 y
una cadena alfa que tiene subunidades por lo que también se le llama CD11a, b, c y d.
→ Estas integrinas que se expresan en la superficie de monocitos y macrófagos son muy útiles para
el paso desde la sangre hacia el tejido. Aquí los monocitos se pegan al endotelio.
→ CD18 es un marcador muy sugerente
Práctico imágenes de discusión de lesiones.
Dr. Mauricio Navarro.
En este practico solo se abordarán lesiones macroscópicas, lesiones que son posibles de encontrar durante una
necropsia, la idea de una necropsia es una construir una historia a partir de las lesiones que se observan y gracias
a eso descubrir cual fue la causa de muerte del animal.
- Reconocer, describir (después de una necropsia, se debe crear un reporte de necropsia, el cual se le debe
hacer llegar a la persona que solicitó la necropsia), interpretar.
- Diagnostico presuntivo (en base a experiencia previas, conocimientos previos podemos crear una historia
en la cabeza).
- Toma de decisiones diagnosticas.
- Archivo (tomar fotos, ya que la necropsia se realiza una única vez y así se puede guardar archivos, por
ejemplo, si tiene repercusión legal).
- Es esencial reconocer: órgano, proceso (inflamatorio, neoplásico, nutricional, etc.), extensión (que tanto
del tejido está dañado).
*A partir de esto, podemos luego refinar el mensaje que queremos transmitir, a esto se le puede agregar si la
enfermedad era aguda, crónica, si es moderada, severa, a esto se refiere con refinar el mensaje*
Caso 1: Bisonte americano de 2 años (un bisonte se debe tratar como un bovino, ya que perfectamente es un
cuadro que se puede dar en uno).
¿Cómo llegamos al diagnóstico?, uno de los métodos es testear por toxinas y eso se hace con un método llamado
espectrofotometría, que es capaz de detectar toxinas de plantas, inmunohistoquímica podría ser sin embargo no
existe la inmunohistoquímica para las toxinas de esta planta. La respuesta mas sencilla es que esta respuesta en
los animales es super aguda, los animales mueren muy rápido, entonces vamos a encontrar fragmentos de hojas
o de flores en e contenido ruminal, por ejemplo, esto es super importante para tenerlo en consideración con otras
intoxicaciones por plantas.
Entonces nuestro diagnostico para el intestino delgado, seria Enteritis (necro) hemorrágica difusa. Es difusa
porque toda la mucosa intestinal que se puede ver esta afectada, el necro esta entre paréntesis, pero esto tiene
que ver con la experiencia, si se pudiera ver el tejido bajo el microscopio no solamente se verá hemorragia sino
también muerte celular, eso ya de por si es necrotizante, pero para conceptos macroscópicos solo se ve la
hemorragia, se pone entre paréntesis porque es subjetivo y
puede llevar a la confusión. Se puso difusa en este caso
porque el trozo de intestino que se ve esta todo dañado
pero que pasa si se tiene esto…
Caso 2: Elefante asiático de 48 años, esta es una enfermedad que se puede ver en animales domésticos, asique
hay que tratarlo como a una vaca.
Diagnóstico: Mineralizacion (y fibrosis de la sub- intima), difusa de la aorta. El corazón como musculo esta
relativamente bien, el principal cambio esta asociado a la mineralización de la parte subintima de las arterias, solo
se puede decir subintima cuando ya se tiene experiencia y se sabe que la histopatología se va a ver así, si solo se
dice mineralización difusa de la aorta esta perfecto. Esto es clásico de paratuberculosis (ya que además tiene
pliegues cerebroideos en ID).
Caso 7: Ternero.
Caso 8: Novillo.
➢ La anamnesis es la historia que se va a dividir en una historia reciente y una historia remota.
- La historia reciente, son las preguntas que se van recabando sobre un cadáver vale decir, cuando
murió, a qué hora aproximadamente murió, que signos se presentaron antes de morir (si es que se
vio) y desde cuándo, cuáles eran las características fisiológicas como el apetito (que se le ofrecía de
comida), la sed (si se le daba o no agua de bebida de libre disposición), las características de las heces
(consistencia, color, etc.), de la orina (características de la micción), que si el animal está en celo, el
parto (porque hay enfermedades relacionadas con esto), que si hay lactancia, nacimiento, crecimiento
(en esta etapa hay necesidades de nutrientes mucho mayor), donde se mantenía los animales y las
condiciones de esa construcción si es que es el caso, si habían tratamientos realizados y si es así con
que productos, en que dosis, si hay otros animales afectados, que es lo que se recibe de alimentación
y con qué frecuencia, si se han utilizado tóxicos (raticidas, mosquicidas a los que los animales puedan
tener accesos), presencia de plantas toxicas, suplementaciones, manejos previos (cambios de
potreros, movimientos, viajes) y siempre es importante preguntar si es que hay alguna sospecha por
parte del dueño.
- La historia remota, considera cuadros similares anteriores, vacunaciones que se han hecho en el
pasado (que vacunas), desparasitaciones (que producto se usó, fechas y quien lo administro),
tratamientos de cuadros anteriores, análisis realizados en el pasado y cuáles fueron sus resultados.
➢ Idealmente para el médico veterinario más importante que hablar con el dueño es hablar con el encargado
de los animales o la persona quien se preocupa de ellos e indudablemente visitar el lugar donde se produjo
el problema puede entregar muchísima información porque el solo hecho de llegar al lugar del problema se
pueden encontrar diferentes cosas como una planta o un toxico, se pueden examinar los lugares donde se
almacenan los alimentos, se pueden ver los comederos siendo increíble la información que se puede obtener
y que puede ser muy importante al momento de visitar el lugar donde murió el animal.
➢ Dentro de la anamnesis, hablar con el encargado, preguntar cuáles son las rutinas, hacerle ver a las personas
que no se está haciendo una investigación para buscar culpables sino que se está buscando una causa que
también puede ser un error humano involuntario en la mayoría de los casos. No tiene que ser un interrogatorio
de tipo policial, sino que una conversación donde se cuenten las rutinas, como se actúa pero en ningún caso
presionar a las personas porque pueden pensar que se les quiere culpar por lo que pueden esconder
información.
➢ Visitar el lugar donde se mantienen o donde se mantenían los animales puede entregar mucha información,
por ejemplo ver las plantas, los comederos que es frecuente que tengan restos de alimento pudiendo traer un
sinnúmero de problemas (proliferación de hongos, atraer roedores, contaminación)
➢ El lugar de parto en el caso de los animales de granja es muy importante, se podría decir que muchas de las
muertes por ejemplo en el caso de terneros tienen su origen en infecciones que adquieren los terneros al
momento del nacimientos. También hay situaciones puntales por ejemplo, cama caliente es un sistema de ir
almacenando la cama de los terneros y siempre ir poniendo paja limpia sobre la paja sucia produciendo toda
una fermentación que va produciendo calor que es una práctica muy común en el campo pero que no es
buena porque se van eliminando los gases de la orina fundamentalmente y ese amoniaco es irritante para las
vías aéreas y es uno de los factores que predispone a la presentación e neumonía, así como las corrientes de
aire, la humedad, la gran densidad animal porque muchas veces se trata de mantener un número elevado de
animales por unidad de superficie pensado que es un buen negocio pero eso mientras más densidad de
animales se tenga mayor es el riesgo de presentación de cualquier enfermedad.
➢ En la imagen se tiene un ejemplo de una lechería que tenía un problema
de abortos, al dar una vuelta por el campo se encontró como se ve en la
foto que justo en el límite estaban las flores amarillas de senecio que es
una planta toxica que es hepatotóxico por acumulación entonces lo
animales comen pequeñas cantidades de la planta toxica junto con el pasto
y el compuesto toxico se va acumulando el hígado y va actuando, no va a
matar a las vacas porque no consumen una gran cantidad pero si van a
disminuir su producción y van a tener un hígado más sensible.
➢ Aquí se puede ver un tejo que es un árbol ornamental de origen europeo que es sumamente toxico, muchos
predios de inmigrantes tienen en sus jardines este árbol y cuando la podan se tiran las ramas al potrero del
lado del jardín y si los animales las comen, lo único que no es toxico es el fruto del arbusto.
➢ También se pueden ver dos plantas ornamentales, el laurel de flor y el rododendro, la intoxicación con laurel
de flor es una intoxicación aguda muy grave los animales mueren súbitamente y en la necropsia solo se
encuentra una hemorragia y el rododendro que también es toxico produce la muerte pero no es tan súbito y
se caracteriza por producir vómitos muy violentos en que sale el bolo ruminal disparado por el hocico del
animal como un vomito en proyectil. Hay otro árbol que es toxico que es el encino, los árboles del género
Quercus y otros arboles son ricos en taninos y los taninos que están presentes en las hojas, bellotas verdes,
cortezas producen daño renal el cual no es inmediato que se va produciendo por acumulación de las toxinas
y lo animales tendrán manifestaciones que no se van a lograr interpretar desde el punto de vista clínico
empezando a morir, uno de los signos clínicos producto de la insuficiencia renal es una enteritis hemorrágica
la cual se va a interpretar probablemente por un cuadro por coccidias, salmonelosis o cualquier otra
enfermedad probablemente sin ocurrirse que puede ser a causa de estos árboles.
Tejo Encino
➢ La eutanasia se define como la muerte consentida sin sufrimiento, cuando se hace debe ser bajo ciertas
consideraciones por lo que se debe tener un enfrentamiento muy responsable y ético como:
- La eutanasia se hace cuando hay un animal que tiene una enfermedad incurable o cuando tiene
lesiones muy graves, también cuando un animal tiene una enfermedad que puede ser curable pero
los propietarios no tienen los recursos para poder curar al animal.
- Con fines diagnostico se puede hacer para proteger al resto de los animales, en este sentido esto se
hace muchísimo por ejemplo si se tiene un grupo de animales en el cual se están muriendo algunos o
están enfermos un gran lote de animales y no se logra establecer cuál es la enfermedad entonces se
decide practicar la eutanasia en un animal que sea representativo en los signos clínicos de los animales
y se hace una necropsia para poder llegar a un diagnóstico preciso y en función de esto tomar las
medidas correctivas para que el resto de los animales se mejore.
➢ En las mascotas es frecuente que haya mascotas viejitas que puedes estar ciegas, tener una serie de problemas
de salud, problemas de movilidad con lo que están sufriendo por lo que los propietarios toman como
posibilidad la eutanasia.
➢ La eutanasia tiene que ser rápida, limpia, confiable, un método que a los médicos veterinarios nos de
confianza de que va a funcionar entonces debe confiable y muy segura porque no se pueden corres riesgos
de que vaya a causar lesiones a otros o a uno mismo y debe ser indolora. Por ende se debe evitar en una
eutanasia provocar dolor o sufrimiento innecesario que también es lo que espera el dueño del animal que es
una decisión muy difícil.
➢ No se puede herir la susceptibilidad del dueño, hay que actuar profesionalmente por todos los medios y de
todas las formas posibles, otra condición más es que no se debe diseminar material potencialmente
infeccioso por ejemplo material viral en el entorno, ensuciar con sangre las instalaciones o el suelo. Tampoco
se deben producir alteraciones en el cuerpo que puedan confundirse con lesiones o que impidan un adecuado
examen o toma de muestras de un tejidos.
Métodos de eutanasia:
➢ Hay distintos métodos de eutanasia de acuerdo a las circunstancias, el ideal es poder sedar previamente al
animal, darle un tranquilizante y después usar idealmente una solución para eutanasia que
internacionalmente se conoce como T61 que es un producto comercial que fue desarrollado especialmente
para esto es una mezcla de un relajante muscular con un potente anestésico general y que produce que el
animal se duerme, pero concomitantemente hay una parálisis del centro respiratorio, el animal deja de
respirar. Se puede aplicar idealmente por vía endovenosa pero también se puede aplicar intrapulmonar,
intramuscular, subcutáneo, intracardiaco (en animales pequeños hay una pequeña reacción por lo que hay
que tenerlos firmes) en el caso de inyectárselo una persona puede causar la muerte por lo que este producto
tiene un control muy estricto para su venta (recetas retenidas, antecedentes).
➢ También se puede usar la anestesia general en sobredosis, pero aquí siempre hay que tener la precaución de
que el animal se murió y no de que se quedo en un estado tan profundo que se cree que está muerto.
➢ En los animales grandes se usa mucho la inyección intratecal, vale decir en la articulación atlantooccipital, de
lidocaína que es un anestésico local pero que inyectado en la articulación atlantooccipital bajo la duramadre
produce una parálisis del centro respiratorio y el animal muere rápidamente, se una mucho en equinos y en
rumiantes.
➢ También esta el sistema proyectil retenido penetrante que es el sistema que se usa en los mataderos, que se
podría asimilar a un revolver pero en vez de que salga una bala producto de un disparo sale un embolo
metálico con mucha violencia y ese embolo penetra y perfora la frente produciendo un traumatismo
encefalocraneano que es mortal. Las armas de fuego también se ocupan y todo depende de las circunstancias
es el método en el que hay que tener más cuidado porque si no se actúa con precaución la bala puede rebotar
en el cráneo pudiendo irse a otro lugar produciendo heridas o ser mortal con otros animales o personas.
➢ En la foto se ve el T61 o solución para eutanasia que está en el mercado en todo el mundo y que funciona
muy bien, se usa mucho en equinos (se usan dos frascos), en bovinos, en perros, gatos y aves se ocupa
también, el frasco tiene un valor de alrededor de $30.000. También esta la Xilazina que es un tranquilizante
mayor que muchas veces se pone en conjunto con otro tranquilizante previamente y la lidocaína que es el
anestésico local que se inyecta en la articulación atlantooccipital, se puede ver donde es el lugar de la
inyección intratecal donde hay que flectar la cabeza, se debe usar una aguja larga (no la común) para poder
atravesar y llegar hasta el espacio bajo la duramadre. Se puede ver como se le inyecta la lidocaína a una oveja,
se le flecto la cabeza para poder dejar bien extendida la zona de la articulación atlantooccipital y después
inyectar la lidocaína (en este caso 8ml) y el animal en un par de minutos ya deja de respirar y muere.
➢ Estos son los sistemas de proyectil retenido que se apoyan en la cabeza, también hay sistemas neumáticos
en los mataderos hoy en día, en estas imágenes se ve en donde se usan por encima de la línea transversal de
los ojos donde el proyectil penetra/perfora la frente produciendo un traumatismo encéfalo craneano y una
destrucción local del encéfalo.
➢ El tiempo entre muerte y necropsia el idea el realizar la necropsia inmediatamente después de la muerte
porque así se evita la presencia de los cambios post mortem que enmascara e inducen a error, pero muchas
veces no es posible hacer la necropsia inmediatamente después de la muerte por lo que se sabe que a medida
que pasa el tiempo disminuye la posibilidad de encontrar lesiones porque pueden ser enmascaradas por los
cambios post mortem y aumenta la posibilidad de que se confunda y se asuma un cambio post mortem como
que fuese una lesión. Sin embargo hay lesiones que van a permanecer como una neumonía que no va a
desaparecer, un clavo en el corazón tampoco no va a desaparecer como muchos otros hallazgos o lesiones
que se van a mantener a pesar de los cambios post mortem.
Riesgos, protección y uso desinfectantes:
➢ Los riesgos son para el prosector, quien hace la necropsia, así como el personal que le apoya. Esta el riesgo
en primera instancia de enfermedades zoonóticas de infecciones que tenga el animal pero también no
siempre los animales murieron de una enfermedad zoonótica, los animales pueden ser portadores de
microorganismos que son potencialmente patógenos para las personas.
➢ También está la posibilidad de diseminar por lo que hay que se cuidados del lugar donde se hace la necropsia,
hay que tener cuidado porque las infecciones pueden pasarse a otros animales por lo que hay que tomar
precauciones.
➢ La persona que hace la necropsia y el personal que pueda ayudar tienen que protegerse con guantes,
mascarillas, con buzo, etc.
➢ Hay que desinfectar las botas, todo el instrumental que se usó, el área en el cual se hizo la necropsia para
evitar la diseminación de una infección.
➢ Hay que partir de la base y regla que todo cadáver es potencialmente infeccioso mientras no se demuestre
lo contrario y siempre esta la posibilidad de que un animal sea portador dentro de su flora bacteriana saprofita
de bacterias potencialmente patógenas para las personas, por eso es bueno hacer la necropsia en el mismo
lugar donde murió el animal pero en muchas oportunidades no se puede y hay que hacerla en otro lugar y el
transportar el cadáver de un lugar a otro también es una forma de diseminación. De una u otra forma hay que
evitar diseminar el material potencialmente infeccioso, usar idealmente paja debajo del animal para que
esta absorba la sangre y después pueda ser eliminada o un plástico.
➢ Para hacer la necropsia tiene que ser un lugar que sea cómodo para la personas que hace la necropsia, que
tenga buena iluminación, que disponga de agua, que tenga un techo de protección y evitar de todas formas
posibles la infección de otros animales.
➢ Los restos que eliminarlos, puede ser por medio de fuego que elimina todo como la cremación que es una
excelente forma de eliminar un cadáver que es sospechoso de algo infeccioso, pero el problema es que para
quemar un cadáver grande se necesita bastante leña (por lo menos para una vaca unos 2 metros cúbicos de
leña) se necesitan acelerantes, personal. También están las fosas para cadáveres, la inhumación que es hacer
un hoyo para enterrar el cadáver que debe ser lo suficientemente profundo para que por sobre el borde
superior del cadáver quede un por lo menos un metro y medio de tierra para que los perros no logren sacar
restos del cadáver y para que en el futuro se pase un arado por ese lugar el arado no saque restos de cadáver,
por otro lado una excelente forma de impedir que las bacterias y esporas que se puedan generar puedan
pasar a las capas mas profundas del suelo y al nivel del agua es poner cal en el fondo y tirar cal por encima
del cadáver.
➢ El instrumental tiene que ser mínimo pero destinado solamente para hacer necropsia, no se debe usar el
instrumental que se tiene para cirugía para hacer necropsia porque se va a contaminar y posteriormente
cuando se haga la cirugía se puedan introducir microrganismos en la cirugía.
➢ Bolsas plásticas estériles (todas vienen estriles), jeringas estériles para tomar muestras de exudado, frascos
herméticos con formalina al 10% idealmente de plástico porque es irrompible pero también puede ser de
vidrio aunque puede romperse.
Técnicas de necropsia:
➢ Tiene que ser una técnica sistemática, organizada. Hay que tomar fotos de cadáver, en que posición estaba,
como se encontró, fotos par identificarlo, del pelaje, de las aberturas corporales, de secreciones, del entornos,
de los órganos, su ubicación, de las lesiones, de los hallazgos.
➢ La técnica debe ser ordenada y completa porque la causa más importante puede estar en diferentes lados.
➢ Las necropsias pueden tener a futuro implicancias legales, por lo que si se toman fotos se tienen registro de
lo que era y lo que se encontró.
Tomo y envío de muestras:
➢ Un médico veterinario que trabaja con animales siempre debería tener a su disposición un frasco con
formalina al 10% de forma que si se hace una necropsia se tome muestra de todos los órganos, porque un
error muy común es que solo se tomen muestras de los tejidos que se consideran alterados pero muchas veces
las lesiones son microscópicas y a simple vista no se ven.
➢ El grosor de las muestras debe ser de 0,5 centímetros porque la formalina penetra 2 a 3 milímetros entonces
si un tejido tiene un grosor de 5 milímetros la formalina va a penetrar de un lado 2-3 milímetros y del otro
lado igual fijándose en la profundidad y de superficie mas o menos 2 centímetros cuadrados, idealmente que
incluya parte de tejido afectado y sano.
➢ Los cortes deben ser cortes rectos hechos con un cuchillo bien afilado y sin pinzas porque si se toman el tejido
con las pinzas y se aprieta la pinza a apretar el tejido va a destruir y al microscopio se va a ser como un ataque
nuclear.
➢ Los frascos tienen que ser herméticos, idealmente plásticos y de boca ancha porque los tejidos cuando se
meten a la formalina el tejido están blando pero después la formalina lo transforma en un tejido rígido y si es
de boca angosta no sale y la única forma de sacar las muestras de tejido es romper el frasco lo que es todo un
acto que puede ser un riesgo pudiendo provocar accidentes.
➢ Para preparar la solución de formalina al 10%, hay que tomar la formalina o formol, que si es la comercial
viene en solución acuosa al 37%, no puede venir las concentrada porque si se concentra más se solidifica
entonces esa solución de formalina comercial se asume que es al 100%, entonces lo que se hace es tomar una
parte de formalina comercial y se le agrega 9 partes de agua lo que es al 10% (en estricto rigor no lo es pero
se asume que es al 10%) y se le agrega un trozo de tiza (la que se utiliza para escribir en el pizarrón) porque
es carbonato de calcio lo que inhibe un pigmento que sale de la sangre y que produce problemas porque
enmascara cosas. La mínima relación fijador: muestra es 5:1, vale decir, se debe tener 5 volúmenes de la
solución de formalina por 1 volumen de tejido.
➢ Aquí se tiene un riñón que tiene un área más pálida que se asume que es una lesión
entonces la muestra para histopatología tiene que incluir una parte del tejido afectado y
otro parte del tejido sano como del cuadro que se ve en la imagen.
➢ En esta imagen se está tomando una muestra de humor acuoso que es un liquido que esta en la cámara
anterior del ojo en el cual se puede medir una serie de metabolitos
que también obviamente se pueden medir en la sangre pero cuando
se trata de un cadáver ya no se puede medir ningún metabolito en la
sangre pero si se puede medir en el humor acuoso, entonces se
perfora la cornea se aspira mas o menos 1ml de humor acuoso lo que
se manda dentro de la jeringa a un laboratorio clínico para que se
mida puede ser magnesio, urea que es lo más común de medir.
➢ En bacteriología hay que evitar la contaminación externa porque eso va a hacer que en la muestra haya
bacterias que venían de afuera, hay que tener material estéril, en el caso del intestino tiene que ser ligado
porque lo que interesa es el contenido del intestino y hay que guardarlo en bolsas plásticas que vienen estriles
o en jeringas nuevas y siempre que se envié una muestra a un laboratorio tiene que ir con la solicitud en que
se solicite un examen en específico.
➢ En la imagen se puede ve como se hace esterilización de instrumental por calor, con un algodón embebido
en alcohol que se prende y se esteriliza el instrumental. También se ve como se toma el tejido se corta y se
mete en una bolsa con el nudo mas abajo posible de formal tal que se pueda escribir en la misma bolsa los
datos de la muestra.
➢ En el caso de intestino con enteritis se busca el íleon porque es la parte que interesa, cortando y ligando el
íleon con su contenido para cultivo bacteriano. Adicionalmente si se sospecha o se sabe que el animal ha
recibido un antibiótico oral para tratar el problema se incluye para el cultivo un nódulo linfático mesentérico.
➢ Para toxicología, si es una intoxicación aguda se necesita del contenido gástrico o ruminal y si es una
intoxicación subaguda se necesita medio kilo de hígado, un riñón, orina, tejido adiposo especialmente
cuando son intoxicaciones crónicas.
➢ Se deben anotar los hallazgos, registrarlos porque la mente de olvida. Llamar idealmente al medico
veterinario o al propietario darle una breve descripción, que se encontró, cual es la sospecha, que es lo que
se debería hacer previamente hasta la encuentren los resultados.
➢ Siempre que se pida un cultivo bacteriano, hay que pedir también un antibiograma porque no va a servir
mucho que se aislé un Staphylococcus aureus por ejemplo en un animal si no se sabe a qué antibiótico es
sensible y a que antibiótico es resistente.
➢ Se pueden hacer cultivos, exámenes serológicos, PCR, ELISA, inmunohistoquímica, cultivo viral, patología
clínica en el caso por ejemplo del humor acuoso, examen parasitológico, examen histopatológico.
➢ Finalmente hay que hacer un informe para ello se necesita identificar quien solicito la necropsia, hay que
cobrar y toda la información. Como diagnostico al final como diagnóstico y conclusión con la fecha y la firma
del documento (nombre y firma)
➢ El examen post mortem cuando es hecho por ejemplo en un problema que afecta a un grupo de animales se
necesita un animal que está iniciando el cuadro, que no tenga tratamiento para que no enmascare por
ejemplo un cultivo bacteriano porque hay un tratamiento de antibióticos y que lleve pocas horas de muerte.
CAMBIOS POST MORTEM
Muerte general🡪 Es cuando cesa completamente el funcionamiento del SNC, pulmones y corazón. Después de esto se
empiezan a presentar los cambios post mortem.
Los cambios post mortem son un problema para los médicos veterinarios porque enmascaran lesiones o hallazgos
importantes e inducen a errores en el diagnóstico. Por esta razón este examen debe ser realizado lo más pronto posible
después de la muerte de un animal, aunque no siempre es posible.
Hay una regla que en la mayoría de las ocasiones funciona que dice que cuando hay un cuadro infeccioso no van a morir
más de 2 animales en un mismo momento y cuando es un cuadro tóxico mueren varios animales en un mismo momento.
1. Autolisis: Digestión de los tejidos por acción de las propias enzimas celulares. Una vez que
sobreviene la muerte estas enzimas celulares se van liberando y van produciendo la auto
digestión de los tejidos. Esto hace que un tejido pierda su color, consistencia, y se transforme
de apoco en una “pasta”. El órgano mantiene su forma y su cápsula pero si se toca se va a
desarmar. La autolisis donde es más rápida es en el epitelio digestivo, hígado y páncreas.
Esto tiene que ver con la temperatura del organismo al momento de la muerte, por ej. en un animal que muera con
un cuadro febril la autolisis se va a presentar muy rápido.
La autolisis también se presenta en los fetos momificados. Los tejidos blandos sufren de autolisis, absorbiéndose todo
su líquido y quedando solo los huesos rodeados por piel.
En la foto vemos al encéfalo en putrefacción con el típico aspecto lleno de cavidades (o también
llamado aspecto de queso suizo). Estas cavidades se crean por la formación de burbujas de gas
que se liberan por la fermentación bacteriana de bacterias saprófitas.
Bacterias saprofitas ≠ Bacterias patógenas. Las primeras actúan después de la muerte y las segundas actúan en vida.
En la putrefacción no solo actúan microorganismos sino que también insectos. La entomología forense es una área
específica de la patología en la cual según el tipo de insecto que hay un cadáver pueden determinar el lugar en que
ese cadáver permaneció después de la muerte, en qué tipo de hábitat permaneció el cadáver, y en función de la edad
del insecto se puede determinar la data de muerte de ese cadáver.
Pocas horas después de la muerte de un bovino se empieza a desprender la mucosa del rumen. Eso es un cambio PM.
3. Rigidez cadavérica: También conocida como rigor mortis. Es el encogimiento y contracción muscular después de la
muerte. Comienza en la porción anterior del cadáver y progresa en dirección posterior. Generalmente aparece dentro
de las 6 horas después de la muerte y desaparece a las 36-72 horas. A veces no se presenta, por ej. en un animal que
murió con caquexia. Pero en general todos los cadáveres presentan rigor mortis y hay una contracción de la
musculatura esquelética, del miocardio, y de los intestinos. Esta característica del rigor mortis hay que conocerla
porque permite hacer un cálculo de la data de muerte de un animal, y también de forma práctica es importante porque
si se faena a un animal y la carne se come altiro, esa estará dura porque la musculatura estará contraída, por eso hay
que faenar a un animal para comerlo 2 días antes del momento en que se vaya a cocinar para que el rigor mortis
desaparezca.
4. Frialdad cadavérica: Después de la muerte empieza a bajar la temperatura corporal, hasta adquirir la temperatura
ambiental. La temperatura post mortem puede mantenerse alta e incluso subir en animales de gran tamaño, debido
a la fermentación y descomposición del contenido gastrointestinal.
5. Coagulación de la sangre: Tras la muerte, las células endoteliales, trombocitos y leucocitos se degeneran y mueren
por anoxia, las células degeneradas liberan tromboquinasa, enzima que inicia la coagulación. Se van a encontrar
coágulos en el corazón (dentro de las cavidades), arterias y venas. No se va a coagular la sangre en los capilares y en
las pequeñas vénulas.
Puede ser que la sangre no coagule cuando el animal tiene un problema hepático, cuando haya ingerido un veneno
anticoagulante, o cuando murió por causa de un cuadro infeccioso septicémico.
En la foto vemos la pared de un ventrículo cardiaco de un caballo con un coagulo mixto, que
tiene una parte roja y otra blanca (en este caso se ve amarillo). Los caballos tienen mucho
fibrinógeno en la sangre, lo que hace que ésta se coagule y forme estos coágulos
amarillentos, los que envuelven a las vainas tendinosas de las válvulas del corazón. Cuando
se traccionan estos coágulos pareciera que estuvieran adheridos y aparentan ser trombos.
Se puede encontrar solo un coágulo rojo, parte de un coágulo blanco, o un coágulo mixto.
Los glóbulos rojos están dentro de los vasos sanguíneos, y una vez que el animal muere
los glóbulos rojos se destruyen y se libera la hemoglobina, la que es de color rojo y va a
teñir la parte interna de los vasos, luego va a empezar a difundir y va a teñir la parte
exterior de los vasos sanguíneos y los tejidos. En la foto vemos las serosas de un perro
que deberían ser de un color gris, pero se ven rojas.
Es importante recordar y entender este cambio post mortem porque se puede confundir con hemorragia.
Este cambio se ve después de 24-48 horas, depende de las condiciones en que se ha permanecido el cadáver.
7. Congestión hipostática: También conocida como lividez hipostática o cadavérica. Es una coloración violácea (lividez
significa color morado) de las porciones ventrales de órganos internos y del cadáver, debido al descenso gravitacional
de la sangre. Después de que un animal muere se detiene la circulación y la sangre por gravedad se deposita en las
partes más ventrales de los tejidos.
Aquí vemos los dos cambios post mortem que involucran color rojo y rojo-violáceo
que llevan a errores en el diagnóstico frecuentemente.
8. Imbibición biliar: Coloración amarillo-verdosa de órganos y tejidos vecinos a la vesícula biliar, por difusión de
colebilirrubina (bilirrubina directa o conjugada) a través de la pared de la vesícula. Después de que muere el animal
este pierde la capacidad de tener una pared impermeable y produce una difusión de la colebilirrubina, la que atraviesa
la pared de la vesícula y tiñe los tejidos vecinos.
Si se encuentra un órgano con una coloración amarillenta focal que no está relacionado
con la vesícula, por ej. un pulmón, se debería pensar en una hemorragia antigua.
9. Palidez cadavérica: Es la palidez de piel y mucosas que se presentan en las partes superiores del cuerpo en
contraposición a la congestión hipostática.
10. Pseudomelanosis: Presencia post mortem de pigmentos de color verde, gris o negro
en tejidos. Bacterias de putrefacción producen H2S que se combina con Fe de la
hemoglobina para producir sulfometahemoglobina de color verde o sulfuro de fierro,
un pigmento de color gris a negro. Es un cambio post mortem más tardío.
En las ovejas los cambios post mortem se presentan muy rápido porque tienen
aislantes que impiden que el calor interno se disipe, lo que hace que la fermentación
en el aparato digestivo sea muy rápida y se genere mucho gas.
El rumen que se dilata con gas se empieza a comprimir hacia el diafragma y tórax y
empieza a comprimir hacia atrás. En la foto vemos que se está asomando por el ano.
Está muy hinchada la zona del ano y se ve que está saliendo espuma desde la vulva.
También puede salir espuma por las fosas nasales que es producto de un edema
alveolar.
Sale contenido ruminal porque el gas lo empuja y empieza a avanzar por el esófago
y finalmente sale.
14. Artefactos:
Este cerdo después de la muerte estuvo sobre una superficie reticulada, y al darlo
vuelta se vio que quedó marcado.
1. Temperatura ambiente y corporal. Si un animal muere en el verano y queda a la intemperie, la temperatura ambiente
elevada hará que los cambios post mortem se aceleren. Si un animal muere con un cuadro febril la alta temperatura
corporal ayudará que los cambios post mortem se presenten más rápido.
2. Tamaño del individuo. Mientras más grande es un animal, más difícil es que el calor interno se pueda disipar.
3. Aislamiento externo. De la misma forma el aislamiento (lana o tejido adiposo en el caso de los animales gordos) hará
que el calor interno se disipe con más dificultad.
4. Estado nutricional.
5. Especie. Esto es por las características de cada especie. En los ovinos los cambios post mortem son más rápidos al
igual que en los cerdos.
Practico examen post mortem
“La clave para el control de una enfermedad es el correcto diagnostico”
Lo importante es seguir una pauta metódica, es importante examinar TODO, un error común es que
no se examina todo, es necesario poner atención en los pequeños detalles y cuando se decida hacer
una necropsia se debe disponer de tiempo, estamos hablando de 2 horas hasta 5 horas, depende
de la especie.
Secuencia de examen:
Examen externo:
Especie, sexo, raza, edad, marcas, color, peso aproximado y tamaño. Es importante la especie
ya que hay enfermedades propias de especies animales, la raza incluso.
Se deben consignar los cambios post mortem, nos pueden a ayudar a determinar a data de
muerte y también si están presentes los cambios post mortem nosotros vamos a decir lleva 1
día o 2 días de muerto, eso no esta indicando la posibilidad de encontrar o de poder observar
lesiones.
Tenemos que revisar la cobertura corporal, las uñas, los espacios interdigitales que pueden ser
de mucha importancia sobre todo en infecciones bacterianas y virales.
Hay que revisar aperturas naturales, fosas nasales, boca, orificios auriculares, ojos, parpados,
secreciones, orificio prepucial pene, vulva, ano, zona perianal (diarrea) y en animales recién
nacidos se debe revisar el ombligo.
Examen interno:
La necropsia se va a iniciar con una incisión desde el mentón al ano, pero esto no siempre es
posible, especialmente en animales grandes que están en el campo, entonces hay que
adecuarse a la situación.
Pero este líquido puede estar aumentado, cuando hay un edema, ascitis, podría haber sangre,
podría haber contenido gástrico, podría haber pus, fibrina, metástasis.
Tomamos un trozo de intestino con una pinza y cortamos un bordecito y lo vamos a introducir en
un frasco con formalina y lo introducimos y lo sacamos y lo introducimos y lo sacamos, lo que
queremos es que el lumen intestinal se dilate y la formalina penetre al lumen, porque eso es lo que
queremos que se fije rápidamente la mucosa intestinal.
En el ciego se deben observar las características de la pared, del contenido y después de la mucosa,
en realidad esto debe hacerse en todos los órganos huecos.
Luego se da vuelta el intestino y el colon se abre en varios
segmentos (Img. 21) para examinar el contenido, pero mas
que nada la mucosa, porque en la coccidiosis las principales
lesiones están en ciego y colon que muchas veces no se
examinan.
En el examen de abomaso se debe examinar el olor, el contenido, dentro del contenido se pueden
encontrar piedras, arena, sangre y se debe examinar la mucosa, en la mucosa se pueden encontrar
ulceras, a veces muy hemorrágicas, se pueden encontrar parásitos, lesiones parasitarias.
En hígado, si se sospecha que un bovino pudo haber muerto por el sindroma de la vena cava, hay
que revisar por donde corre la vena cava, una vez que se saca el hígado hay que fijarse en los nódulos
linfáticos, porque puede ser que el hígado tenga un proceso inflamatorio y no se nota, pero si va a
estar la inflamación en los nódulos linfáticos. Se puede tomar un trozo de hígado para
histopatología, para histopatología en le hígado y en órganos grandes como hígado, pulmones, se
deberia tomar dos o tres ubicaciones.
Las adrenales se examinan siempre, en el 99% de las adrenales que el profe ha examinado no ha
encontrado nada y en un 1% ha encontrado tumores, hemorragias y nada más.
Los riñones se abren, y aquí interés examinar, corteza y médula, la capsula se debe desprender y se
toma un trozo de riñón de cada uno, que contenga corteza y medula para examen histopatológico.
Para extraer los órganos de boca y cuello se hace un corte
entra la rama de la mandíbula y la lengua, se hace por
ambos lado y luego se corta la musculatura de la parte
ventral, se tracciona lengua con esófago, con laringe y
traquea hacia posterior hasta el final de la cavidad bucal
(Img. 26), luego se deben cortar los hiodes. Una vez que
se han cortado las articulaciones del hiodes podemos
terminar de cortar la faringe, traccionando la lengua con
esofago laringe y traquea hacia posterior.
Se cortan los pares craneanos, el quiasma óptico y finalmente los lóbulos olfatorios y se desprende
el encéfalo y cae en la palma de la mano, en el cerebro se hacen cortes transversales, el cerebelo se
corta longitudinal. Las muestras para histopatología son un trozo longitudinal de cerebelo, una
lamina transversal de cerebro que incluye ambos cerebros y tenemos la parte de base cerebral y
tallo encefálico, todo esto para examen histopatológico. Eso se hace de rutina, pero si el animal
tenía signos nerviosos es preferible dejar el encéfalo completo en un envase con formalina y
después una vez fijado se examina.
Debajo de la aorta esta el nódulo linfático bronquial y los nódulos linfáticos mediastínicos, se
desplaza la aorta hacia un lado y asoma el NL bronquial, se van a cortar transversalmente los NL
para tener una idea de como esta, por ejemplo en los casos que se sospecha de tuberculosis bovina
a todos los bovinos que se faenan se les examina estos NL porque aquí vamos a encontrar las
lesiones tuberculosas, el complejo primario incompleto, porque muchas veces no hay lesiones que
son la puerta de entrada que son en pulmón, desaparece, tienen una curación, pero la lesión
permanece en los NL.
*NO OLVIDAR*
Anotar y describir los hallazgos, enviar muestras al laboratorio cuando corresponda, avisar al
propietario de las sospechas que se tengan y proponer medidas de manejo mientras se tiene el
resultado final, el resultado final se va a tener una vez que lleguen los resultados de los exámenes
del laboratorio que se tienen que analizarse y resolver, en base a eso se hace el informe final con
las recomendaciones finales, el informe final se verá con el doctor Moroni.
CONFECCION DE INFORME DE NECROPSIA O ANATOPATOLOGICO
Es un informe completo que incluye la parte necropsia, histopatología y exámenes especiales con el fin de
obtener los diagnósticos patológicos, morfológicos y etiológicos dando un poco el contexto de concluir algún
caso en particular dependiendo de la situación que se trate.
Discusión de imágenes:
➢ En la imagen se puede ver un caso
de un bovino joven de alrededor de
3-4 meses de edad, macho, peso
aproximado de 100 kg, Holstein
friesian muy sucio con barro y bajo
peso. Se debe anotar en un informe
patológico lo que se ve acá como
protuberancias de las tuberosidades
coxal, una baja condición corporal.
Se vera una serie de imágenes de lesiones que se pueden encontrar a nivel de las plantas faenadoras de carne en que se
faenan los animales de abasto que son bovinos, ovinos, caprinos, cerdos, equinos y animales producto de la caza.
En la primera imagen se puede ver un inspector del servicio agrícola y ganadero que
esta examinando la musculatura del musculo masetero y los nódulos linfático de
la cabeza, básicamente aquí lo que interesa dentro del examen es en primera
instancia aquellas enfermedades que pueden ser zoonóticas como tuberculosis
bovina, cisticercosis, triquinosis pero obviamente en este proceso de inspección
cualquier alteración que pueda ser de origen infeccioso o simplemente un cambio
de color que pueda significar algún rechazo por parte del consumidor va a ser que
ese órgano o tejido sea descartado y no vaya para el consumo. Esta labor la
ejecutan en nuestro país los inspectores del servicio agrícola y ganadero, en algunos
pequeños mataderos todavía personal del servicio de salud que son
completamente independientes del matadero algo que muchas veces los dueños de los animales no entienden y cuando
hay un decomiso ellos se enojan pensando que es un negocio del matadero lo cual no es así.
En la siguiente imagen se ve un inspector que esta con la mascarilla mal puesta lo cual es
una falta a la normativa de las plantas faenadoras la cual se usa por una parte para que las
personas que están haciendo la inspección no inhalen microorganismos patógenos pero
al trabajar con alimentos mucho mas importante es la salud del consumidor, en
consecuencia un inspector tiene que taparse la nariz al manipular alimentos a pesar de
que esta ocasión se esté inspeccionando un pulmón lo cual no va a consumo humano. Los
inspectores a nivel de las plantas faenadoras hay de dos tipos, unos son los médicos
veterinarios inspectores oficiales y otros son los técnicos inspectores oficiales del SAG
ambos, trabajando todos en conjunto.
Aquí se pueden ver dos colegas que ejercen el control de la canal y los técnicos que
pueden estar en cabeza o viseras reportan aquellos hallazgos que sean de importancia en
este caso a las colegas que examinan en este caso un nódulo linfático pre escapular.
En la foto se puede ver un nódulo linfático bronquial con una lesión bastante
circunscrita de color blanquecino que corresponde a un área necrótica que esta
delimitada por un área de color rojo que corresponde a un proceso de inflamación
que esta circunscribiendo y limitando el proceso y evitando de alguna forma que
esto se pueda diseminar, este es el aspecto que tiene la lesión producida por la
tuberculosis. Si se encuentra una lesión como esta se considera compatible con
tuberculosis y se procede bajo esa mirada el SAG que tiene todo un protocolo para
enviar la muestra a sus laboratorios y poder determinar si corresponde realmente
a una lesión tuberculosa pero mientras tanto esta canal será procesada como si se
tratara de una lesión por tuberculosis.
En las siguientes imágenes se puede ver lo que se encuentra muchas veces en los mataderos en vacas, se abre la pared
abdominal y se encuentra lleno de nódulos los cuales están rodeados en algunos casos por un área negra que en el fondo
es de congestión y los nódulos son producto de una generalización de la tuberculosis, también se puede notar con mayor
aumento la zona hiperémica que esta alrededor lo cual se asume que es tuberculosis muy parecida es una neoplasia que
se llama mesotelioma que también se debe decomisar entonces muchas veces se tiene que decomisar de todas maneras
aunque no fuese tuberculosis.
Aquí hay otra imagen donde también hay lesiones más o menos todas del
mismo tamaño porque en un determinado momento el mycobacterium
desde una lesión que estaba por ejemplo en un nódulo linfático mediastínico
o mesentérico llega a un vaso sanguíneo diseminándose a través de la
sangre hacia todo el cuerpo.
Una glándula mamaria donde una lesión tuberculosa compatible con tuberculosis, las tuberculosis mamarias pueden ser
que mycobacterium ascienda por un pezón produciendo una lesión tuberculosa en una glándula pero más frecuente es
que esa tuberculosis mamaria sea por generalización desde algún foco primario.
Se van a ver a continuación una serie de lesiones en hígado que en su mayoría en bovinos cuando se tienen lesiones se
hace que se decomise el órgano, una buena parte de los riñones tiene lesiones que hacen que se decomisen, poco
corazones tienen lesiones, pocos bazos también pero hay dos órganos que siempre se van a eliminar nunca van a consumo
que son los pulmones y los bazos que igual se deben examinar pero nunca van a consumo bajo nuestra legislación. Esto
porque primero las probabilidades de encontrar tuberculosis en un pulmón es elevado y la tuberculosis bovina es
zoonótica entonces el riesgo de que haya una pequeña lesión que se esta iniciando y que no se pesquiso que no se logro
ver y que pueda llevar a la infección de una persona, y el otro órgano es una bazo que no se consume porque el bazo es
un filtro en el cual al haber un cuadro septicémico estará con bacterias entonces pudiendo estar frente a un cuadro
septicémico muy inicial que todavía no presente luces de que es un cuadro septicémico y sin embargo ya habrían bacteria
en el bazo entonces por ley esos dos órganos en todos los animales de abasto se eliminan y no van a consumo. Los sesos
antes iban a consumo hasta los inicios de los años 90 donde se determinó que la enfermedad de la vaca loca se transmitía
a través del sistema nerviosos central y el consumo de este dónde las personas que consumían encéfalo podían adquirir
el prion causante de la enfermedad entonces internacionalmente se determinó que los encéfalos no deben ir a consumo
humano sean de las especie que sean.
En la imagen del hígado se pueden notar zonas que están un poco deprimidas de un color violáceo que son telangiectasias
que son muy comunes en la superficie y también en el parénquima en la superficie de corte entonces la telangiectasias
no son otra cosa que las dilataciones de capilares sanguíneos los que no se saben porque se dilatan, alguno piensan que
sucede porque los hepatocitos laterales a los capilares se han necrosado entonces los capilares se pueden dilatar por la
falta de hepatocitos a los lados. De todos modos sea como sea por una causa infecciosa o toxica que no se sabe se
descartan los hígados por el simple expediente de que el hígado tiene un feo aspecto, pero en este caso se descarta
porque lo que se denomina una característica organoléptica vale decir una característica que puede ser visual que
simplemente hace que al consumidor le produzca ciertos rechazos aun cuando podría se por algo no patológico siendo
solo un cambio de color pero ya esto escapa de los tradicionalmente que se considera normal.
También se pueden ver fotos de hígados en matadero con una gran cantidad de telangiectasias en la superficie en el
parénquima que siempre son deprimidas porque estos eran capilares que estaban dilatados con sangre y en el momento
de la muerte se pierde la presión sanguínea y entonces se colapsan además se debe pensar que en los mataderos a los
animales se les dan golpes de electricidad al
cadáver para contraer la musculatura y de esa
forma lograr una mayor eliminación de sangre
porque un órgano que no tenga sangre en su
interior es más difícil que en ese tejido puedan
proliferar bacterias saprofitas porque la sangre es
un excelente medio de cultivo.
Aquí se puede ver un hígado de bovino de un color muy pálido rosado pálido
que corresponde a una degeneración grasa que puede ser por distintas causas
como metabólicas, toxicas pero aun cuando no sea algo grave y que no va a
significar un problema para el consumidor también se va a descartar porque no
corresponde al modelo que se tiene como normal del color de un hígado.
En esta foto hay una adherencia de la superficie de hígado que llevaba a diafragma donde se tiene un área de color más
pálido amarillenta que se veía en la superficie pero que se proyecta en el parénquima que corresponde a una
degeneración grasa focal no como la imagen anterior donde había un problema difuso, esta se llama periligamentosa
porque esta en la periferia de una adherencia que viene a hacer los efectos de un ligamento y esto podría ser por una
absceso drenal como cualquier proceso inflamatorio que se haga crónico llevara a adherencias, entonces las adherencias
entre hígados y diafragmas son muy comunes.
Aquí se puede ver otro caso aunque la zona de la adherencia no está en la foto se tiene una zona irregular de una color
anaranjado. Para ejemplificar mejor se puede ver un hígado de una vaca que tiene una amplia adherencia al diafragma
que desde la zona de la adherencia se tiene una zona delimitada de un color más pálido lo que es una degeneración grasa
periligamentosa. Es importante tener claridad sobre el tipo de lesión la cual es muy circunscrita, que es un cambio de
color, y que a va estar en la superficie pero también en la profundidad pero el solo hecho de que haya una adherencia
entre hígado y diafragma aun cuando no hubiese una alteración del parénquima también va a ser motivo de la eliminación
el hígado porque se parte de la base de que si hay adherencia entre hígado y diafragma esta obedeció a un proceso
infamatorio y dentro de las causas inflamatorias están agente bacterianos entre otros por lo cual se descarta.
Junto con las adherencias se pueden encontrar por ejemplo este enorme aumento de volumen amarillento en el hígado
con adherencias hacia el diafragma lo que quiere decir que hubo un absceso que dreno hacia el diafragma con
adherencias y los abscesos en la mayoría de los casos son múltiples como se en la imagen. Las causas mas comunes de
abscesos hepáticos en bovinos pueden ser acidosis ruminal subclínica, esto es muy importante porque mas o menos el
40% de los hígados de bovinos adultos tiene abscesos hepáticos originados en una acidosis ruminal subclínica, otra causa
podría ser un problema umbilical lo que es muy frecuente por falta de higiene en los partos.
Se puede ver otra imagen de hígado que tiene adherencia a diafragma con también adherencias hacia el rumen con el
lóbulo accesorio, la vesícula donde también se pueden ver abscesos. En la siguiente imagen se pueden ver abscesos con
restos de adherencias o con adherencias propiamente tal. A nivel de matadero se trata de no abrir ningún posible absceso
ya que como se trabaja con alimentos para humanos al abrir un absceso el exudado purulento como se ve en la foto puede
ser fuente de infección para esto cada inspector tiene a su lado dos receptáculos, uno para lavar el instrumental entre
cada animal y otro receptáculo con agua a 85°C en la cual una vez lavado el instrumental debe meterse ahí para eliminar
los microrganismos, esta reglamentación es muy regulada y exigente.
Acá se ven unas estructuras quísticas, que cuando se cortan dejan cavidad y
fluye un liquido acuoso transparente, son quistes hidatídicos.
Como los perros son los que botan el huevo, hay que tener cuidado con que
los perros no entren a las huertas, ya que los humanos podrían consumir el
huevo y desarrollar quistes, hay que lavar bien las
verduras.
Después que el quiste muere y esa cavidad que tenia liquido se llena de células que se
necrosan y es necrosis de caseificación, uno se podría confundir, podría pensar que es
una tuberculosis, por ejemplo.
Este es un hígado de una llama de la universidad que hasta hace unos años estaban en un sector
donde había mucha fasciola hepática y había que administrarle productos contra este parasito.
F. hepática es mucho más patógena cuando migra a través del parénquima, por ejemplo, en la
imagen cada una de esas como hilachas blancas es un trayecto que hizo la larva migrando por
el parénquima. Esto es mas patógeno en ovejas, las ovejas son muy sensibles.
Este es un estado ya mas avanzado, al abrir los conductos biliares salen las fasciolas
hepáticos, habitualmente se hace un corte y se examinan los conductos biliares.
Esas cosas blancas que se ven son conductos biliares que están
muy engrosados y muchas veces también calcificados.
- Hidronefrosis
aquí tenemos trae riñones de bovinos con similar edad y tamaño, a la derecha vemos el
tamaño normal, el del medio esta mas grande y esta mas pálido, entonces probablemente
esta así porque esta sufriendo un proceso degenerativo, una nefrosis, el riñón de la
izquierda es un riñón enorme, 6 veces mas grande de lo normal, si lo pudiésemos papar
veríamos que es un riñón fluctuante, que es como una bolsa con agua y es en el fondo una
hidronefrosis y esta hidronefrosis se produjo por una obstrucción a la salida de la orina, la
mayoría de las veces es una obstrucción a nivel de uréter, puede ser también a nivel de los
calices mayores y entonces la orina se filtra, pero no puede avanzar y se empieza a acumular y el riñón sigue filtrando,
acumulando orina, la orina comprime el tejido y finalmente el tejido esta tan atrofiado por la compresión que se
transforma en una capa muy delgada de tejido renal y envuelvo litros de orina. La hidronefrosis la vamos a encontrar
en cualquier especie animal.
- Quistes renales
Un quiste siempre va a ser una estructura que tiene una cavidad, tiene una pared delgada que en el fondo es
parénquima renal atrófico.
Estos son quistes congénitos, no se ven mucho, tienen un aspecto de panal de abeja, en
algunos libros se describe como quiste renal con forma de panal de abeja
- nefritis
Riñón con múltiples focos de color blanquecino, estos focos son focos de inflamación, si se
encuentra solo un riñón ya el riñón se debe descartar, especialmente si se sospecha que ese
foco es una inflamación, porque esa inflamación podría ser de origen bacteriano y si esa
inflamación fuese leptospira, la leptospirosis es zoonóticas. En este caso si se encuentra
inflamación en un solo riñón se deben decomisar los dos.
- Nefritis embolica
esto significa que cada uno de estos puntos blanquecinos es un pequeño absceso y esto e
producto de un embolo bacteriano, si llegaron a través de la sangre a los riñones, también
llegaron a través de la sangre a otros tejidos, incluida la musculatura, por lo que se debe
decomisar todo el animal.
- Infarto agudo
infarto se puede definir como, proceso isquemico que provoca necrosis en el órgano. Se ve
rojo el infarto agudo.
- Infarto crónico
Para saber que parasito es se puede sacar el parasito del pulmón y llevarlo al laboratorio de
parasitología para hacer un examen molecular.
Este es un corazón, el cual fue abierto y por eso se ve así. Se le ve poco
tejido adiposo, lo que además llama la atención es el color violáceo- rojo
oscuro, podría corresponder a una hemorragia, no podría ser
congestión, porque la congestión se presenta dentro del vaso sanguíneo
y en este caso está en el parénquima, entre las células musculares, en
este caso esto se produce por la deficiencia de un mineral, selenio.
Podría ser una peritonitis, y las hebras que se ven podrían ser de fibrina,
o sea es una peritonitis fibrinosa crónica, los patrones fibrinosos son por cuadros crónicos.
EL INFORME PATOLOGICO
Se hace un registro donde se van grabando los numero de los casos (Revisar guía de necropsia),
la fecha y quien realizo la necropsia, datos de anamnesis del propietario, especie, raza, edad,
identificación individual como aretes, maracas de fuego, tatuajes, chips subcutáneos.
La anamnesis es muy relevante, muy importante, cuantos animales hay en el rebaño, cuantos
animales están afectados, cuantos animales parecen afectados de un día para otro, que signos
tienen, que alimentación tienen, donde están guardados, que tratamientos han recibido, si han
resultado esos tratamientos, etc.
- Descripción:
▪ hay un examen externo, donde se ve piel y pelaje o plumaje, normalmente aquí se
incluye el estado nutricional (caquéctico- obeso), en el pelaje se ve si es corto, largo,
si esta sucio, distribuciones de la suciedad, manchas, perdida de pelaje. El estado
nutricional puede varias, no necesariamente siendo patológico, puede estar en
lactancia, por ejemplo.
Dentro del examen externo normalmente va asociado las aberturas corporales,
nariz, boca, ojos, oídos, abertura umbilical, prepucial, vulvar y ano.
▪ Tejido subcutáneo, se debe describir el tejido subcutáneo en particular, pueden ser
fluidos, sangre, nódulos linfáticos
▪ Cavidad abdominal.
▪ Aparto digestivo.
▪ Aparato circulatorio, se debe describir el corazón y además arterias umbilicales.
▪ Sistema hematopoyético, bazo y nódulos linfáticos.
▪ Sistema nervioso, encéfalo.
- Exámenes especiales:
▪ Bacteriología.
▪ Histopatológico.
▪ Antibiograma.
- Conclusión:
Se debe concluir que es lo que padece el animal con los hallazgos encontrados, además se
podrían hacer recomendaciones.
*verlo en el documento subido a siveduc ya que ahí está más completo*
PRACTICO DE TOMA DE MUESTRAS
Consideraciones generales:
➢ No hay que darse demasiadas expectativas respecto a la necropsia, esta por si sola en muchas oportunidades no
entrega el diagnóstico preciso.
➢ Para poder tener la seguridad de un diagnostico acertado se tiene que recurrir a exámenes de laboratorio de
distinto tipo, por otra parte muchas veces es necesario corroborar en caso de dudas que pueda tener el
propietario.
➢ Hay que diferencias entre los exámenes histopatológicos de los exámenes etiológicos, vale decir los exámenes
histopatológicos persiguen ver lesiones microscópicas de aquellos exámenes en que se busca diferenciar un
agente.
➢ El manual de necropsia es muy completo y ayuda muchísimo para actuar frente a problemas de salud en grupos
de animales.
➢ El objetivo del examen histopatológico es identificar lesiones microscópicas y asociarlas con una enfermedad o
agente, o establecer el diagnóstico y en función de este el pronóstico.
➢ La muestras siempre deben tomarse en un frasco de boca ancha idealmente plástico con formalina al 10%.
➢ Se tiene que tomar muestras de todos los órganos porque la mayoría de las lesiones son microscópicas y pueden
ser muy importantes pero no se ven a simple vista, no importa que no haya lesiones macroscópicas.
➢ Los trozos deben tener medio centímetros de grosor (5 milímetros) es importante este grosor porque la formalina
penetra los tejidos entre 2 a 3 milímetros entonces si un tejido es muy grueso el centro de ese tejido la formalina
no va a fijar el centro de la muestra la que sufrirá cambios post mortem, con 2 cm cuadraros está bien. El ideal es
que cuando haya una lesión en una muestra se incluya en el trozo parte de tejido afectado y parte de tejido sano,
a veces importa más que la lesión la zona de transición entre le tejido afectado y el tejido sano.
➢ Los cortes deben ser rectos con un cuchillo afilado, un solo corte, no cortar como serrucho, tiene que ser tomado
sin pinzas (con o sin dientes) porque daña la muestra destruyéndola.
➢ En el caso de intestinos lo ideal es tomar trozos de intestino delgado (lo más importante es íleon, pero se pueden
tomar más como de yeyuno) y grueso, los cuales se cortan tomando un trocito dejando el lumen sin tocar porque
lo que interesa es la mucosa para examinar microscópicamente. Cuando se trata de intestino delgado
principalmente el ideal es en que el trozo de intestino se incorpora también el nódulo linfático que lo drena para
poder identificarlo.
➢ Es importante que el frasco plástico hermético sea de boca ancha porque los tejidos son muy blandos cuando
están frescos pero cuando se fijan con formalina se ponen rígidos pudiendo ser un problema sacarlo del frasco.
➢ Los trozos de tejido no se tienen que aplastar ni doblar por lo que los trozos no tienen que ser muy largos porque
sino al meterlos en la formalina se pueden doblar plegándose en si mismo y no se fijan.
➢ Como recomendación siempre primero poner la formalina en el frasco y después los tejidos y el ideal es que haya
un volumen 5 veces superior de formalina con respecto a las muestras.
➢ La formalina al 10% tamponada se prepara tomando la formalina comercial que viene como formalina o formol
en una concentración al 37% entonces se asume que esa concentración al 37% en realidad es 100%, entonces se
toma una parte de la formalina comercial, 9 partes de agua más un trozo de tiza la cual evita la formación de un
pigmento que es la hematina acida que interfiere en la evaluación microscópica. Resumiendo es 1 parte de
formalina comercial + 9 partes de agua + 1 trozo de tiza = formalina al 10%.
➢ La formalina es un fijador que fija los procesos de descomposición de los tejidos lo que es autolisis y también
putrefacción porque la formalina es un potente bactericida,
➢ La formalina conserva los tejidos por largos periodos incluso años, lo que si se altera son las características de los
antígenos de los tejidos por lo que si en el futuro se hiciera una inmunohistoquímica no funcionaria bien pero para
efectos de histopatología no hay ningún problema.
➢ Como la formalina es un fijador y fija los procesos o anula los procesos de descomposición no se necesita
refrigerar.
➢ Hay que tener en cuanta que la formalina es un potente irritante de la piel, de las vías aéreas superiores, ocular y
es un cancerígeno por lo que hay que tomar todas las precauciones necesarias en su manipulación para evitar
entrar en contacto directo con la formalina.
➢ En caso de toma de muestras de riñones si es un gato por ejemplo para irse a la segura se toma de muestra la
mitad de cada riñón.
➢ En caso de órganos grandes como hígado o pulmones por ejemplo es conveniente tomar unas 2 o 3 ubicaciones
para tener las probabilidades de encontrar lesiones microscópica.
➢ En la imagen se puede ver una muestra de íleon que se corto de unos 2 a 3 centímetros de largo, no importa que
tenga contenido incluso si tiene es bueno también examinarlo se ve una parte del mesenterio y su nódulo linfático
cortado transversalmente. Para meterlo en la formalina se tiene que tomar con una pinza desde el borde como
se ve en la foto, para fijarlo en formalina se mete y se saca en un frasco de formalina reiteradas veces con la idea
de que el lumen se dilate un poco y penetre el lumen intestinal para poder analizar mejor la mucosa, no se debe
abrir el intestino longitudinalmente porque por la manipulación partes del epitelio podrían desaparecer.
➢ Aquí se puede apreciar una foto de un riñón con una lesión indicando la parte que debe
corresponder a la muestra integrando parte afectada y parte sana, es importante
cortarlo a la profundidad para que la muestra tenga corteza y medula.
➢ A continuación se pueden ver diferentes muestras de hígado, riñón y baso siendo
comparadas con el tamaño de un encendedor o cuchillo.
➢ El objetivo de tomar muestras de humor acuso es que este es un liquido que tiene componentes que son muy
similares a los del suero sanguíneo y que se mantiene inalterados o varían poco en las primeras horas después
de la muerte, por una cosa convencional se usa el humor acuoso aunque también se puede usar el humor vitreo
que es una sustancia gelatinosa que esta por detrás del cristalino. Si la extracción del humor es compleja se debe
sacar el ojo entero y se envía a ser procesado.
➢ La obtención de la muestra es muy sencilla, se debe puncionar la cornea y sale mas o menos 1ml de un liquido
acuoso y transparente, hay que tener precaución de que el ojo de donde se extrae no debe haber estado sometido
a traumatismos.
➢ Se puede medir glucosa, nitrógeno ureico, ácido ureico, creatinina que junto con nitrógeno ureico es una
excelente forma de evaluar la funcionalidad renal del animal antes de morir, se puede medir magnesio, sodio,
cloro entre otros minerales, el magnesio es de mucha utilidad y permite hacer diagnósticos muy buenos de
animales que han muerto por déficit de magnesio hay una gran correlación entre el nivel de este en el humor
vitreo o acuso y su nivel en la sangre, también se pueden medir enzimas de funcionalidad hepática, la bilirrubina
y tóxicos como nitritos.
➢ En las imágenes se puede ver el procedimiento de la extracción del humor acuoso, lo primero es abrir bien los
parpados y apretar un poco el globo ocular para que no se mueva, luego se acerca la aguja con el bisel hacia
arriba puncionando la cornea para perforarla introduciéndose en ella, alrededor de un cm en el caso de un
bovino, se aspira saliendo mas o menos 1 ml de un líquido acuoso transparente colapsando un poco el globo
ocular. El líquido extraído se puede enviar al laboratorio en la misma jeringa tapada o trasladarlo a un tubo sin
anticoagulante para ser enviado a laboratorio.
➢ El objetivo es obtener una muestra que no debe tener contaminación externa para poder identificar bacterias
patógenas presentes en ese tejido.
➢ Como requisito es que el animal no debe haber recibido antibióticos previamente, si se toma una muestra para
cultivo bacteriano y esa muestra esta con antibióticos probablemente no va a crecer nada.
➢ Idealmente el animal debería estar en la fase aguda de la enfermedad, vale decir empezando la enfermedad, no
un animal crónico porque puede tener secuelas o estar afectado por diferentes infecciones secundarias.
➢ Como recomendación cuando se solicite un cultivo bacteriano siempre solicitar un antibiograma porque una
cosa es saber que microorganismo esta presente en un tejido pero otra cosa muy distinta es saber a qué
antibiótico es sensible. Porque por ejemplo en una colectividad de animales donde han muerto animales o hay
otros enfermos lo que interesa saber es que microorganismo está actuando y también con que antibiótico se
pueden tratar los animales que están empezando el cuadro y que por su puesto la infección tenga una respuesta
al antibiótico. Hay muchos problemas de resistencia a los antibióticos que también puede ser provocado por el no
usar un antibiótico adecuado, hay que hacer los tratamientos por un periodo mínimo de una semana o de 10 días
de forma que se eliminen toda las bacterias patógenas y que no queden las cepas que son resistentes al
antibiótico.
➢ Como precauciones de deben tener en la toma de muestras esta evitar la contaminación externa que es lo mas
importante porque si se toma una muestra para cultivo de un pulmón con neumonía y se toma con guantes o
instrumental sucios con heces por ejemplo lo mas probable es que haya como contaminación e. coli que no es la
causante de la neumonía, por lo mismo también el instrumental debe ser estéril.
➢ En caso de intestino en cuadros de diarrea lo que interesa es íleon al menos que se trate de alguna infección
como el caso de cerdos por ejemplo que pueden afectar a intestino grueso donde hay que considerarlo también,
sino se toma íleon que es un trozo ligado que se guarda en una bolsa plástica.
➢ Se pueden usar jeringas nuevas y estériles para exudados, exudados purulentos.
➢ Siempre cuando se mande una muestra a laboratorio debe ir con la solicitud, con los antecedentes del caso y la
sospecha que se tenga ya que en el laboratorio se ocuparan medio especiales para lo que se pueda sospechar,
importante mantener la muestra refrigerada, no congelada, mientras no se envía a laboratorio. La mayoría de
las bacterias no soportan la congelación a excepción de mycobacterium pero en su mayoría se recomienda
solamente refrigerar.
➢ Se utilizan bolas de algodón embebidas en alcohol que se mantiene tapado para que no se evapore el alcohol, un
encendedor, pinzas y tijeras. El procedimiento de esterilización del instrumental es prender la bola de algodón,
se calienta el instrumental esterilizándolo por calor siendo una forma muy practica y sencilla.
➢ Para la toma de muestras se toma con una pinza el tejido, se corta con una tijera, aquí no interesa la estructura
del tejido aquí lo que interesa es aislar las bacterias que están en la lesión, la muestra de guarda en una bolsa
plástica donde se pueden anotar los datos de la muestra.
➢ Aquí se puede ver la toma de muestras de un intestino pensando en una diarrea
de origen bacteriano, se separa con una tijera, no se necesitan precauciones de
utilizar un material estéril porque lo que interesa es lo que esta dentro del lumen
intestinal, se separa del mesenterio, se hace una vuelta del intestino, se liga, se
corta y se mete en una bolsa plástica. Adicionalmente de que no se tenga la certeza
de que hay o no antibióticos circulando por el intestino se toma también un nódulo
linfático mesentérico uno que se note reactivo se extrae sin cortarlo propiamente
tal y se guarda en una bolsa plástica enviándolo junto con el intestino.
➢ En la imagen se puede ver un cerebelo donde hay un absceso de exudado
purulento cremoso de un color verdoso donde se puede tomar una muestra con
un torula que es un palillo estéril con algodón en la punta y meterlo en un tubo
estéril o si no se tiene torula se puede tomar una jeringa estéril sacarle la aguja
aspirando un poquito de exudado purulento no se necesita mayor contenido para
que se realice un cultivo en laboratorio. Entonces para exudados y líquidos las
muestras se pueden tomar con una jeringa sin problemas.
➢ Si se quieren tomar muestras de varios tipos lo primero que se hace es tomar muestras para bacteriología para
evitar que la manipulación pueda continuar con bacterias del exterior y posteriormente se toman muestras de
histopatología.
➢ El objetivo es obtener una muestra para lograr identificar la presencia de un virus patógeno en un tejido.
➢ Para virología no se toman muchas veces las muestras porque se debe tener a disposición laboratorios que estén
acondicionados para hacer exámenes virológicos.
➢ Si se sospecha de alguna enfermedad exótica como la peste porcina en un cerdo se recurre al SAG quienes dan
las instrucciones al caso.
➢ Idealmente en las enfermedades virales al igual que las bacteriana la toma de muestras para aislar un agente viral
tiene que hacerse en la fase aguda de la enfermedad porque suele suceder corrientemente que en una
enfermedad viral como en neumonías virales que desaparezca el virus que inicio el proceso y que queden
actuando bacterias.
➢ Si se sospecha de alguna enfermedad se debe dar aviso al SAG, puede ser que la denuncia desencadene algún
estado de cuarentena en algún predio lo que puede ser molesto para el propietario pero se debe pensar no bajo
la perspectiva del propietario o su economía se debe pensar siempre bajo al perspectiva de un medio veterinario
con su ética lo que dice que cuando se sospeche de una enfermedad exótica se debe avisar al organismo
correspondiente, es mejor prevenir que lamentar.
Toma de muestras para parasitología:
➢ El objetivo es obtener muestras para identificar la presencia de parásitos en diferentes tejidos como cutáneo,
respiratorio, digestivo, muscular, nervioso.
➢ Cuando se encuentran parasito se recogen con cuidado sin dañarlos y se guardan en
un frasco con alcohol al 70% idealmente o formalina al 10% en el caso de no tener
alcohol (no es lo ideal puede afectar a la conformación de los parásitos)
➢ También está la identificación de huevos de parásitos donde se deben obtener heces
del recto.
➢ En la imagen se ve el ciego de una oveja donde hay múltiples nematodos de trichuris
que son comunes en el ciego.
➢ En intestino delgado yeyuno de un perro tiene una serie de gusanitos
poco perfectibles que son del genero uncinaria que es bastante patógeno
para el perro también se tiene un ejemplar segmentado que son
Dipylidium caninum.
➢ El objetivo es obtener muestras sin contaminación externa (es muy importante) para lograr identificar un toxico
que esta presente en el cadáver.
➢ Hay que tener precaución de que las muestras estén exentas de contaminación, para ciertas intoxicaciones
incluso no se deberían usar cuchillos metálicos para medir algunos metales, los tejidos no deben ser lavados
tomando las muestras tal cual como se encontraron.
➢ Las muestras se deben congelar.
➢ Es importante tomar las muestras por separados, en envases distintos indicando cual es la sospecha porque
generalmente los laboratorios buscan los tóxicos de los cuales se sospechan.
➢ Con respecto a las muestras que se deben tomar, del contenido gástrico o ruminal se debe tomar una cantidad
abundante porque probablemente se tengan que hacer distintas pruebas donde se va consumiendo el material
en caso de rumiantes es importante revisar el contenido del rumen donde puede haber hojas o frutos que se
pueden identificar como tóxicos.
➢ Hígado se debe tomar siempre porque es uno de los órganos que en las intoxicaciones casi siempre esta alterado,
se debe tomar por lo menos medio kilo de muestra. Riñón tomar al menos 1 de muestra aunque idealmente los
dos.
➢ Orina, humor acuoso que puede ser de mucha utilidad, tejido adiposo pensando en intoxicaciones más crónicas,
el pulmón en algunas intoxicaciones también es importante.
➢ En la imagen se puede ver un canino que tenia sospecha de envenenamiento encontrando en la necropsia el
estomago lleno de trozos de mortadela que tenia presente un toxico de uso agrícola.