Guzman Cuenca Evelyn Yulissa Ip5..

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD LAB E201- BLOQUE E

CARRERA DE MEDICINA
GUÍA DE PRACTICA DE BIOQUÍMICA I
I. DATOS GENERALES
GUIA DE PRACTICA Nº 4
PERIODO ACADÉMICO 2023 - 2S
HORARIO DE LA PRÁCTICA: PRIMERO B
miércoles 10H00 a 12H00
FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 24 de noviembre del 2023
GRUPOS 1-2-3 PRESENCIAL
GRUPOS 4-5-6 AULA VIRTUAL
01 de diciembre del 2023

GRUPOS 4-5-6 PRESENCIAL
GRUPOS 1-2-3 AULA VIRTUAL
CRONOGRAMA DE INFORME DE LA PRÁCTICA Y TEMAS- SUBTEMAS CRONOGRAMA
OTRAS ACTIVIDADES: TEORIA UNIDAD 1
Análisis guía de práctica – Semanas de trabajo
fundamento teórico – diseño
experimental- análisis
videos relacionados con el
tema: aplicación práctica
Construcción y entrega del Entrega de informe hasta
informe de práctica No. 5: el 08 de diciembre del
GRUPOS 1-2-3-4-5-6 2023
Participación en el Foro
Modalidad Virtual -
Académico:
Trabajo autónomo
(obligatorio) en la semana
de trabajo
Construcción wiki
Modalidad Virtual -
académica:
Trabajo Autónomo-
elaboración permanente
semestre (opcional)
NOMBRE DE LA DOCENTE Dra. María Angélica Barba Maggi, Mgs
APELLIDOS Y NOMBRES DE LOS

ESTUDIANTES PARTICIPANTES DEL GRUPO: APELLIDOS Y CÉDULA FIRMA
NÚMERO DEL GRUPO:
NOMBRES
COMPLETOS
Clavijo Valdez 2300318876

Katherine Paulina
Fierro Tapia 0250150232

Mariuxi Fernanda
CARRERA DE MEDICINA
Garcés Alvarado 1207502632

Mey Ashley
Guato Gallegos 0850194895

Katherine Nayeli
Guzmán Cuenca 0605364843

Evelyn Yulissa
Jiménez Morejón 0202486528

Kerlly Fernanda
Lapo Feijoo Heidy 2300653215

Janelly
LUGAR DE LA PRÁCTICA LAB E201- BLOQUE E Facultad de Ciencias de la Salud

Soporte en el Aula Virtual Bioquímica
https://moodle.unach.edu.ec/course/view.php?id=39208
UNIDAD SÍLABO No. 3 AMINOÁCIDOS, PÉPTIDOS Y PROTEINAS
RESULTADO DE APRENDIZAJE Relaciona las funciones de aminoácidos, péptidos y proteínas, de
manera específica, para su participación en los varios procesos
metabólicos, con base científica y sustento axiológico.
II. DESARROLLO
1. TÍTULO DE LA PRÁCTICA Reacciones cualitativas y cuantitativas de aminoácidos, péptidos y
proteínas: Métodos de Cuantificación de Proteínas séricas o
plasmáticas, Albúmina, Hemoglobina y Mioglobina
2. OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GENERAL Aplica reacciones cualitativas para identificar aminoácidos, péptidos
y proteínas y métodos de Cuantificación de Proteínas séricas o
plasmáticas, Albúmina, Hemoglobina y Mioglobina, obtener datos e
interpretar resultados.
2.2 OBJETIVOS EPECÍFICOS: 2.2.1 Aplicar las pruebas cualitativas de millón, acetato de plomo,
xantoproteica y biuret para la identificación de aminoácidos,
péptidos y proteínas, obtener datos e interpretar resultados.
2.2.2 Describir y aplicar el método colorimétrico de Verde de Bromo
Cresol para la Cuantificación de Albúmina, obtener datos e
interpretar el resultado clínicamente.
2.2.3 Describir y aplicar el método colorimétrico de Biuret para la
Cuantificación de Proteína séricas, obtener datos e interpretar el
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resultado clínicamente.
2.2.4 Describir y aplicar el método colorimétrico de Drabkin para la
Cuantificación de Hemoglobina, obtener datos e interpretar el
2.2.5 Describir y aplicar el método colorimétrico Turbilatex para la
Cuantificación de Mioglobina, obtener datos e interpretar el
OBSERVACIONES
 Se logró observar un notorio cambio en cuanto al color de cada
muestra al colocar el reactivo y así diferenciar cada una, es
importante poner la medida exacta del reactivo para que los
resultados sean efectivos. Además se pudo identificar el valor
de la absorbancia que nos proporcionó el espectrofotómetro al
aplicar las técnicas brindadas por la docente. Por último, es
necesario tomar en cuenta el tiempo, ya que depende de la
técnica posee un tiempo limitado.
 Es esencial considerar cuidadosamente el factor tiempo, ya que
puede influir en el logro del resultado deseado.
3. MATERIALES – REACTIVOS – EQUIPOS:

 5 gradillas
 25 tubos de ensayo grandes (trae el grupo)
 15 tubos de ensayo pequeños (trae el grupo)
 1 pipeta semiautomática de 100 -1000 ul
 1 pipeta semiautomática de 10 -100 ul
 2 vasos de precipitación de 150 ml
 4 pipetas graduadas de 5 ó 10 ml
 1 pera de succión
 1 vaso grande
 1 malla metálica
 1 pinza para tubos de ensayo
 1 Piseta con agua destilada
 1 gotero (trae el grupo)
 Parafilm
 1 cronómetro
 1 reverbero
 Reactivo de Biuret
 Centrífuga
 Vórtex
 Espectrofotómetro
 Baño termostático
 Reverbero
 Reactivo de Millon
 Ácido Nítrico concentrado
 Acetato de plomo al 5%
 Hidróxido de sodio al 5%
 Kit de reactivos para cuantificar albúmina
 Kit de reactivos para cuantificar hemoglobina
 Kit para cuantificar mioglobina
 Kit de reactivos para cuantificar proteínas totales
GRUPALES:
 2 Franelas de 40 cm cada una
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 1 frasco de cloro
 1 frasco de agua destilada de 500 ml
 1 frasco estéril (para torundas de algodón, pueden ser recipientes plásticos de boca ancha)
 Torundas de algodón
 1 frasco de alcohol
 10 gasas estériles
 1 frasco de jabón líquido
 1 dermográfico (o marcador de material de vidrio)
 2 cepillos para lavar tubos de ensayo (pequeños de 5 ml y grandes de 10 ml)
 1 par de guantes de uso doméstico
 1 frasco con detergente (para lavado de materiales)
 1 recipiente de plástico para cortopunzantes con etiqueta de desechos cortopunzantes y que indique el curso, paralelo y
grupo (recipiente vacío de los desinfectantes que utilice en casa con tapa, grande de plástico grueso). Este recipiente lo
entregan en el laboratorio si aún no lo hizo el grupo)
 20 puntas azules
 10 puntas amarillas
 Tiras multipeg
 1 lavacara pequeña
 1 paquetes de toallas desechables
 10 jeringuillas de 5 ml
 Clara de un huevo (libre de la yema)
 1 porción de leche entera (50 ml)
 1 tubo al vacío con anticoagulante EDTA de 5 ml
 1 aguja vacuntainer tapa verde
 25 tubos de ensayo grandes (traer el grupo)
 15 tubos de ensayo pequeños (traer el grupo)
INDIVIDUALES:
 2 venditas o curitas
 1 Torniquete
 1 Cápsula
 1 mascarilla
 1 par de guantes de manejo de látex
 1 cobertor de cabello (gorra para laboratorio)
 1 mascarilla
 1 par de gafas para laboratorio
 1 Mandil con el nombre del estudiante y sello de la universidad - Carrera de Medicina
 1 toalla de mano para uso personal
 20 tubos de ensayo grandes (traer el grupo)
 15 tubos de ensayo pequeños (traer el grupo)
Los materiales individuales y grupales no se quedan en el laboratorio, son de uso permanente en cada jornada de práctica
que los estudiantes deberán traer.
4. HERRAMIENTAS DIDÁCTICAS:
Aula virtual, recursos multimedia imágenes, videos, texto en guía de práctica, registros de datos de
práctica, formato de informe.
5. FUNDAMENTO TEÓRICO:
Las pruebas de laboratorio destinadas a analizar proteínas, péptidos y aminoácidos juegan un papel esencial
en la evaluación de la salud y el diagnóstico médico. Al medir la concentración total de proteínas en sangre,
como en las pruebas de proteína total y electroforesis de proteínas, se obtiene información valiosa sobre el
estado nutricional y la función hepática. La electroforesis de proteínas, al separar las proteínas en función de
su carga eléctrica, puede revelar cambios en la concentración relativa de proteínas, siendo útil en la
detección de condiciones como el mieloma múltiple (Barba Maggi , 2023).
Las pruebas de péptidos circulantes, utilizando métodos como inmunoensayos, permiten investigar la
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presencia de péptidos específicos en la sangre, como hormonas o neuropéptidos relacionados con

condiciones médicas particulares. Además, las pruebas de aminoácidos, empleando técnicas de
cromatografía, son cruciales para diagnosticar trastornos metabólicos y evaluar deficiencias nutricionales.
Las técnicas modernas, como la espectrometría de masas, han mejorado la identificación y cuantificación de
estas moléculas de manera precisa (Murray, et al,. 2013). Además, pruebas específicas de enzimas
relacionadas con proteínas y péptidos, utilizando métodos enzimáticos o inmunológicos, ofrecen
información sobre la función de órganos y tejidos específicos.
Es esencial considerar los valores de referencia específicos del laboratorio y la población al interpretar los
resultados. La correlación clínica y la integración de los hallazgos con el cuadro clínico completo del
paciente son fundamentales para obtener una evaluación precisa y brindar un diagnóstico efectivo.
 PRUEBA DE RECONOCIMIENTO DE AMINOÁCIDOS
La prueba de reconocimiento de aminoácidos mediante el método de reacción de millón es una técnica
bioquímica utilizada para identificar la presencia de grupos fenólicos en la cadena lateral de algunos
aminoácidos. Esta prueba se basa en la capacidad de los grupos fenólicos para reaccionar con el reactivo
de millón, formando un complejo coloreado. (Passen, 2021)
El reactivo de millón se agrega a la muestra y se observa la formación de un precipitado rojo
característico. El cambio de coloración es específico para la tirosina debido a la reacción de su grupo
hidroxilo fenólico con el reactivo de millon. (LaboratoriosFCNI, 2020)
 REACCIÓN XANTOPROTEICA
La reacción xantoproteica es una reacción química que se utiliza para identificar la presencia de proteínas
que contienen tirosina. La reacción se basa en la capacidad de la tirosina para reaccionar con ácido nítrico
concentrado para formar un compuesto amarillo o naranja.
La reacción se realiza calentando una muestra de proteína con una solución de ácido nítrico concentrado. La
reacción se produce en dos etapas:
-En la primera etapa, el ácido nítrico oxida la tirosina a difenilhidantoína.
-En la segunda etapa, la difenilhidantoína se oxida a difenilcarbazida.
La difenilcarbazida es un compuesto amarillo o naranja que se puede detectar fácilmente.
La reacción xantoproteica es una reacción cualitativa, lo que significa que solo se puede utilizar para
determinar si una muestra contiene proteínas que contienen tirosina. No se puede utilizar para cuantificar la
cantidad de proteínas que contienen tirosina.
Se utiliza en una variedad de aplicaciones, incluyendo:
Diagnóstico médico: la reacción se puede utilizar para diagnosticar enfermedades que afectan a las
proteínas, como la cirrosis hepática.
Análisis de alimentos: la reacción se puede utilizar para identificar las proteínas en los alimentos.
Investigación científica: la reacción se puede utilizar para estudiar la estructura y función de las proteínas.
La reacción xantoproteica es una reacción sencilla y fácil de realizar. Es una herramienta útil para
identificar la presencia de proteínas que contienen tirosina. (Stryer et al, 2007)
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 PRUEBA DE BIURET
La prueba de Biuret se basa en la formación de un coloreado entre el Cobre (+2) y los grupos NH de los
enlaces peptídicos en medio básico, la intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad
de proteínas (enlaces peptídicos), por lo tanto, su reacción es demasiado especifica, de manera que pocas
sustancias interfiere. Además, la sensibilidad del método es muy baja y solo es recomendado para la
cuantificación de proteínas en preparados con concentración alta, por ejemplo, el suero.
EXAMEN DE PROTEINAS TOTALES

Este examen determina la cantidad de proteínas en fluidos biológicos como la sangre, orina o líquido
cefalorraquídeo, siendo un recurso importante en el diagnóstico médico. Esta medición puede incluir todas
las proteínas, como en los casos de proteinemia, proteinuria y proteinorraquia, o puede centrarse en
proteínas específicas como albúmina, Bence Jones, α-antitripsina, ceruloplasmina, entre otras. Los reactivos
utilizados en este método son el Reactivo Biuret y el Estándar de 4,0 g/dL. El Reactivo Biuret contiene
hidróxido de sodio, sulfato de cobre, estabilizador y antioxidante, mientras que el Estándar contiene
albúmina bovina y azida sódica. Además, Los valores normales de proteínas en el cuerpo pueden variar
dependiendo de la fuente y el método de medición. Sin embargo, en el caso de las Proteínas Totales en
suero, los valores de referencia típicos para adultos oscilan entre 6,0 y 8,0 g/dL (Pérez & López, 2022)
5.1 REACCIONES CUALITATIVAS DE IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS, PÉPTIDOS Y
PROTEÍNAS
A. REACCIÓN DE MILLÓN
Los anillos fenólicos reaccionan con las sales de mercurio en medio ácido mediante la formación de
precipitados blancos en frio y en caliente la formación de color rojo – ladrillo. De esta manera se puede
identificar tirosina por el grupo fenólico, ácido salicílico, timol, fenol, tirosina y las proteínas que
contienen a la tirosina.
B. REACCIÓN CON ACETATO DE PLOMO EN MEDIO ALCALINO
Los aminoácidos azufrados como la metionina, cisteína y cistina, reacción con acetato de plomo en
medio alcalino hidróxido de sodio, por la formación de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris
oscuro o negro.
C. REACCIÓN XANTOPROTEICA
Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos reaccionan con ácido nítrico concentrado
formando nitroderivados de color amarillo o anaranjado, esta reacción permite reconocer la presencia
de Tirosina, Fenilalanina y Triptófano.
D. REACCIÓN DE BIURET
Las proteínas reaccionan con el reactivo de Biuret (sulfato de cobre en medio alcalino), mediante un
cambio de color de violeta – lila por la unión a los enlaces peptídicos.
5.2 TÉCNICAS ESPECTROFOTOMÉTRICAS Y MÉTODOS COLORIMÉTRICOS PARA

CUANTIFICACIÓN DE ALBÚMINA, HEMOGLOBINA, MIOGLOBINA Y PROTEÍNAS
TOTALES.
Son métodos que utilizan el paso de la radicación visible para la lectura de la Absorbancia de los
CARRERA DE MEDICINA
complejos de color formados en cada método, utilizando el control volumétrico, mediante la técnica
espectrofotométrica.
A. CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOMÉTRICA DE ALBÚMINA: MÉTODO DEL VERDE DE
BROMO CRESOL
El método está basado en la unión específica de la proteína con el verde de bromo cresol (VBC), un
colorante aniónico. La reacción se da en un pH ácido (4,2 a 4,3). Para producir una reacción
colorimétrica, (formación de un complejo coloreado denominado complejo de verde de bromo cresol -
albúmina) cuya Absorbancia leída en la técnica espectrofotométrica será proporcional a la
concentración de albúmina a 630 nm.
B. CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOMÉTRICA DE HEMOGLOBINA: MÉTODO DE LA
CIANOMETAHEMOGLOBINA
El hierro Fe (II) de todas las formas de hemoglobina, con excepción de la sulfohemoglobina, es
oxidado por el ferrocianuro a hierro Fe (III), convirtiéndolas en cianometahemoglobina que, a su vez,
reacciona con cianuro ionizado (CN-), formándose cianometahemoglinas, es un complejo de color
derivado muy estable que absorbe a 540 nm. La intensidad del color formado es proporcional a la
concentración de hemoglobina total en la muestra. El pH de la reacción es en medio alcalino (7,2)
C. CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOMÉTRICA DE PROTEÍNAS TOTALES: MÉTODO DE
BIURET
En la reacción de Biuret se forma un quelato entre el ión Cobre Cu 2+ y los enlaces peptídicos de las
proteínas en medio alcalino (pH 12,0), se forma un complejo coloreado violeta (cobre proteína), cuya
absorbancia de mide fotométricamente a 540 nm y es proporcional a la concentración de la muestra
D. CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOMÉTRICA DE MIOGLOBINA: MÉTODO TURBILATEX
Las partículas de látex recubiertas con IgG de cabra anti-Mb humana son aglutinadas por la Mb
presente en la muestra del paciente. El proceso de aglutinación provoca un cambio de absorbancia
proporcional a la concentración de Mb de la muestra, y por comparación con un calibrador de Mb de
concentración conocida se puede determinar el contenido de Mb en la muestra ensayada.
6. MÉTODO: Mixto
7. PROCEDIMIENTO – FUNDAMENTO:
Para el registro de datos de la práctica existe información que se pueden registrar previo a la práctica
PROTEÍNAS
Cada equipo previamente, deberá preparar el material (marcar tubos de ensayo grandes de 10 ml, según las
pruebas a realizar, para adelantar el trabajo práctico. Se recomienda el marcador fijo en la parte alta del
tubo para marcar.
De casa previamente el grupo de trabajo deberá traer la clara de un huevo separada en un recipiente
completamente limpio (libre de yema) y 50 ml de leche entera
Se podrá pipetear utilizando jeringuillas para muestras y reactivos, excepto el plasma sanguíneo con pipeta
semiautomática.
En el laboratorio, recolectar un tubo de sangre de 10 ml se deja coagula y se centrifuga, inmediatamente se
transfiere todo el suero a un tubo de ensayo.
CARRERA DE MEDICINA
Fundamentar el video recuperado de https://youtu.be/n9wvDyqaCak (reacción de millón), para obtener datos y
analizar resultados
a) Prepare y rotule los tubos de ensayo grandes y proceda como se indica en cada experiencia.
NOTA: utilizar jeringuillas para depositar las muestras.
TUBOS MUESTRA
A1 1 ml de agua destilada
A2 1 ml de leche
A3 1 ml de solución de gelatina
A4 1 ml de clara de huevo
A5 1 ml de solución de proteína comercial
A6 50 ul de plasma sanguíneo
b) Añadir a cada tubo 500 ul del reactivo de Millon (sales de mercurio en ácido nítrico)
c) d) Someter a calentamiento en baño María por 2 minutos, registrar observaciones, interpretar
resultados y establecer conclusiones.
NOTA: en el tubo que contiene el plasma sanguíneo se añade 50 ul de reactivo
B. REACCIÓN CON ACETATO DE PLOMO ALCALINO EN MEDIO ALCALINO
Fundamentar el video recuperado de https://youtu.be/sQ6jn0lR5EM (prueba de acetato de plomo),

https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo para obtener datos y analizar resultados
TUBOS MUESTRA
B1 1 ml de agua destilada
B2 1 ml de leche
B3 1 ml de solución de gelatina
B4 1 ml de clara de huevo
B5 1 ml de solución de proteína comercial
B6 50 ul de plasma sanguíneo
b) Añadir a cada tubo 250 ul de acetato de plomo al 10%
c) Añadir 250 ul de NaOH al 40%
d) Someter a calentamiento en baño María por lo menos 2 minutos, registrar observaciones,
interpretar resultados y establecer conclusiones.
NOTA: en el tubo que contiene el plasma sanguíneo se añade 50 ul de cada reactivo
Fundamentar el video recuperado de https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo (reacción xantoproteíca), para obtener
datos y analizar resultados.
TUBOS MUESTRA
C1 1 ml de agua destilada
C2 1 ml de leche
CARRERA DE MEDICINA
C3 1 ml de solución de gelatina
C4 1 ml de clara de huevo
C5 1 ml de solución de proteína comercial
C6 50 ul de plasma sanguíneo
b) Añadir con cuidado a cada tubo 500 ul de ácido nítrico concentrado
c) Someter a calentamiento en baño María 2 minutos a 70 °C
d) Observar el cambio de color, registrar observaciones
e) Enfriar el tubo por la parte externa con agua fría
f) Agregar gota a gota con cuidado y lentamente hidróxido de sodio al 5% (10 gotas totales) sin
agitación, registrar observaciones, interpretar resultados y establecer conclusiones.
Fundamentar el video recuperado de https://youtu.be/1p0xrmyKGxs (reacción de biuret), para obtener datos y
analizar resultados
TUBOS MUESTRA
D1 1 ml de agua destilada
D2 1 ml de leche
D3 1 ml de solución de gelatina
D4 1 ml de clara de huevo
D5 1 ml de solución de proteína comercial
D6 50 ul de plasma sanguíneo
b) Añadir a cada tubo 500 ul de reactivo de biuret, (sulfato de cobre en medio alcalino), mezclar
c) Dejar en reposo a temperatura ambiente 2 minutos, registrar observaciones, interpretar resultados y
establecer conclusiones.
CUANTIFICACIÓN DE ALBÚMINA, HEMOGLOBINA, PROTEÍNAS TOTALES.
Preparar los materiales, reactivos y muestras requeridas. (para adelantar el trabajo práctico, se pueden
venir rotulando los tubos de ensayo pequeños de 5 ml que se utilizarán en la aplicación de los métodos de
Drankin para hemoglobina total, Biuret para proteínas totales y Verde Bromo Cresol para albúmina), así
como leer los métodos y sacar los datos desde los mismos en el Registro de datos de la práctica.
.
8. REGISTRO DE DATOS DE LA PRÁCTICA (ANEXO)
CARRERA DE MEDICINA
9. CÁLCULOS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

PROTEÍNAS
Preparar los materiales, reactivos y muestras requeridas. Separar la clara del huevo en un vaso de
precipitación, evitar la presencia de yema y aplicar las siguientes experiencias prácticas:
TUBOS MUESTRA OBSERVACIONES INTERPRETACIÓN
DE RESULTADOS
A1 agua destilada COLOR:
 Trasparente
ASPECTO:
 Ligero
A2 leche
 Palo de rosa
COLOR:
ASPECTO:  Turbio
A3 solución de gelatina COLOR:
 Rosado claro
ASPECTO:
 Turbio
A4 clara de huevo COLOR:
 Morado claro con
CARRERA DE MEDICINA
ASPECTO: blanco
 Turbio
A5 proteína comercial COLOR:
 Rosado
ASPECTO:
 Ligeramente turbio
A6 plasma sanguíneo COLOR:
 Transparente
ASPECTO:
 Ligeramente turbio
B. REACCIÓN CON ACETATO DE PLOMO ALCALINO EN MEDIO ALCALINO

DE RESULTADOS
B1 agua destilada COLOR:  Blanquecino

ASPECTO:  Turbio
B2 leche COLOR:  Amarillo verdoso

ASPECTO:  Turbio
B3 solución de gelatina COLOR:  Blanquecino

ASPECTO:  Ligeramente
turbio
B4 clara de huevo COLOR:  Negro con blanco

ASPECTO:  Turbio
B5 proteína comercial COLOR:  Naranja medio

ASPECTO: escuro
 Ligeramente
turbio
B6 plasma sanguíneo COLOR:  Gris

ASPECTO:  Turbio
CARRERA DE MEDICINA
DE RESULTADOS
C1 agua destilada COLOR:
 Transparente
ASPECTO:
 Ligero
C2 leche
 Amarillo claro
COLOR:
ASPECTO:  Turbio
C3 solución de gelatina COLOR:
 Amarillo
ASPECTO:
transparentoso
 Ligero
C4 clara de huevo COLOR:
 Amarillo
ASPECTO:
 Turbio
C5 proteína comercial COLOR:
 Amarillo
ASPECTO:
 Ligeramente
turbio
C6 plasma sanguíneo COLOR:
 Ligeramente
ASPECTO:
amarillo
 Turbio
DE RESULTADOS
D1 agua destilada COLOR: Transparente
ASPECTO:
Ligero
D2 leche Turquesa claro
COLOR:
ASPECTO: Turbio
D3 solución de gelatina COLOR: Turquesa claro
ASPECTO:
Ligero
D4 clara de huevo COLOR: Turquesa y amarillo
ASPECTO: transparente
Ligeramente turbio
D5 proteína comercial COLOR: Amarillo verdoso
ASPECTO:
Ligeramente turbio
D6 plasma sanguíneo COLOR: Turquesa transparente
ASPECTO:
Ligeramente turbio
CARRERA DE MEDICINA

CUANTIFICACIÓN DE ALBÚMINA, HEMOGLOBINA Y PROTEÍNAS TOTALES.
A. CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOMÉTRICA DE ALBÚMINA: MÉTODO DEL VERDE DE
BROMO CRESOL
Se fundamenta en el análisis del video constante en https://youtu.be/jKntsTQPejw (albúmina – método
verde de bromo cresol)
DETALLE REGISTRO DE DATOS
Longitud de onda de la 630 nm

prueba
Concentración del Estándar 3,8g/Dl
A (Absorbancia Blanco) 0,001
As (Absorbancia Estándar) 0,299
Am (Absorbancia Muestra) 0,307
Valor Normal de Albúmina Suero, Plasma: 3,81-4,65 g/dL (38,1-46,5 g/L)
Cálculo de la Concentración Formula
de Albúmina AMuestra
——— x CPatrón = g/dL albúmina
APatrón
Amuestra− A blanco 12 g
C Albumina= x =¿
A patron− A blanco L
0,307−0,001 3 , 81 g
C= x =1 , 02 x 3 , 81=3 , 88 g/ L
0,299−0,001 L
Interpretación Clínica del

Resultado La concentración de albumina de 3,88 g/L se encuentra
dentro del rango normal de referencia, que generalmente
varía entre 3,5 y 5,0 g/L. Desde un punto de vista
numérico, este valor no indica una anormalidad
significativa en términos de la concentración de
albumina en el suero sanguíneo.
B. CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOMÉTRICA DE HEMOGLOBINA: MÉTODO DE LA

CIANOMETAHEMOGLOBINA
Se fundamenta en el análisis del video constante en https://youtu.be/hOau9k2oyI8 (cuantificación de
hemoglobina método drabkin – espectrofotometría)
CARRERA DE MEDICINA
Longitud de onda de la 540 ± 20 nm.

prueba
Concentración del Estándar 12 g/dl
A (Absorbancia Blanco) -0,001
Am (Absorbancia Muestra) 0,729
Valor Normal de Hombres: 14-18 g/dL
Hemoglobina Mujeres: 12-16 g/Dl
Cálculo de la Concentración
de Hemoglobina A Muestra
———— x C patrón = g/dL hemoglobina total
A Patrón
Amuestra− A blanco 12 g
C= x =¿
A patron− A blanco L
0,729−0,001 12 g
x =¿
0,739−0,001 L
0,98x12g/l = 11,76 g/L
Interpretación Clínica del En vista de que la paciente era una mujer de 18 años, la
Resultado concentración de hemoglobina de 11,76 g/L indica una
cantidad baja de hemoglobina en comparación con los
rangos normales típicos.
Por lo que puede presentar cuadros: Anémicos,
deficiencia de vitamina B12 o ácido fólico, entre otros
C. CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOMÉTRICA DE PROTEÍNAS TOTALES: MÉTODO DE
BIURET
Se fundamenta en el análisis del video constante en https://youtu.be/hcXe7nTz3jY (proteínas)
Longitud de onda de la prueba 560nm

Concentración del Estándar 1 g/L de proteína
A (Absorbancia Blanco) -0,001
Am (Absorbancia Muestra) -0,466
Valor Normal de Proteínas Adultos: 6,4 - 8,3 g/dL
Totales
Cálculo de la Concentración de
Proteínas Totales A Muestra
———— x C Patrón = g/dL proteínas totales
A Patrón
CARRERA DE MEDICINA
0,466−0,001 6 , 47 g
C proteinas : x 7 , 35=0 , 88 x 7 , 35=
0,527−0,001 l
Interpretación Clínica del La concentración de proteínas totales en sangre está
Resultado dentro de los límites normales y no indica
anormalidades significativas en este aspecto
D. CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOMÉTRICA DE MIOGLOBINA: TURBILATEX

Longitud de onda de la 630 +/- 20 nm

prueba
Concentración del Estándar 50 g/l
Tipo de Muestra Lipémicas
A (Absorbancia Blanco) 0,001
As (Absorbancia Estándar) A1: 0,526 Diferencia: -0,11
A2:0,416
Am (Absorbancia Muestra) A1: 0,522 Diferencia: -0,133
A2:0,419
Valor Normal de 70 ng/mL.
Mioglobina
Cálculo de la Concentración
de Proteínas Totales • Calcular la diferencia de cada absorbancia
Absorbancia del blanco Absorbancia del blanco
del Blanco: de la Muestra
A1:0,526 -0.001: A1: 0,522 – 0,001

A2: 0,416 – 0,001 A2: 0,419 - 0,001
( A 2− A 1 ) Muestra 70 g
C= x =¿
( A 2− A 1 ) Estandar L
( 0,522−0,418 ) Muestra 70 ng
= x =¿
0,525−0,415 Estandar ml
70 g
= 0 , 94 x =65 , 8 g/ L.
L
Interpretación Clínica del El valor de mioglobina es bajo: 65,8ng/l por lo que esto
Resultado puede indicar que hubo daño muscular, o un nivel de
ejercicio intenso, teniendo como respuesta este dato.
10. CUESTIONARIO/TAREAS/PREGUNTAS:
Tomando como referencia los recursos indicados en la Fundamentación teórica y práctica de la presente guía
desarrolle el cuestionario.
CARRERA DE MEDICINA
1. Sustente mediante un mapa conceptual, el fundamento de las pruebas de millón, acetato de plomo,
xantoproteica y biuret para aminoácidos, péptidos y proteínas
2. Gr
áfi
ca
me
nte
demuestre la formación del enlace peptídico de las proteínas
3. Indique de la albúmina: concepto, importancia Biomédica de la cuantificación.
La albúmina es una proteína producida por el hígado que ayuda a mantener el cuerpo en funcionamiento,
brindado mantenimiento del equilibrio de líquidos en el cuerpo, transportando hormonas, nutrientes,
medicamentos y reparando tejidos dañados. La importancia biomédica de su cuantificación radica en que
puede indicar una enfermedad hepática, renal o gastrointestinal.
4. Indique de la Hemoglobina, concepto, estructura, importancia Biomédica de la cuantificación.

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Concepto:
La hemoglobina es una molécula compleja que consta de cuatro subunidades, cada una de las cuales
contiene un grupo hemo y una cadena de aminoácidos. El hemo contiene hierro, que se une al oxígeno en
los pulmones y lo libera a los tejidos donde es necesario para la respiración celular.
Estructura:
Cada molécula de hemoglobina está formada por dos pares de subunidades: dos cadenas de alfa-globina
y dos cadenas de beta-globina (o en algunos casos cadenas de otros tipos como delta o gamma), que
juntas forman la estructura completa de la hemoglobina. Hemoglobina. Cada una de estas subunidades
está vinculada a un grupo hemo que contiene un átomo de hierro que puede unirse de manera reversible
al oxígeno.
Importancia biomédica de la cuantificación:
La cuantificación de la hemoglobina en sangre es un análisis crucial en el campo biomédico por varios
motivos:
Diagnóstico de anemias: La hemoglobina se utiliza para diagnosticar y controlar enfermedades como la
anemia, que se caracteriza por niveles bajos de hemoglobina en la sangre. Ayuda a determinar la
gravedad y el tipo de anemia, lo que sirve como guía para el tratamiento adecuado.
Evaluación de la salud general: los niveles de hemoglobina en sangre pueden proporcionar información
sobre la salud general de una persona. Los valores anormales pueden ser signos de problemas
subyacentes como: Por ejemplo, desnutrición, problemas de médula ósea o enfermedades crónicas.
Monitoreo del tratamiento: La cuantificación de hemoglobina es útil para monitorear la efectividad de
los tratamientos para afecciones como anemia, insuficiencia renal, quimioterapia y otras, y para permitir
ajustes en el tratamiento si es necesario.
Evaluación preoperatoria: antes de la cirugía, se verifican los niveles de hemoglobina para garantizar
que el paciente tenga una capacidad de transporte de oxígeno adecuada durante y después del
procedimiento quirúrgico.
5. Explique de los diferentes tipos de hemoglobina

 Hemoglobina A (HbA): es la forma más común y representa aproximadamente el 95-98% de la
hemoglobina en adultos sanos. Consta de dos cadenas de alfa globina y dos cadenas de beta globina. La
hemoglobina A es responsable de transportar eficientemente el oxígeno desde los pulmones a los tejidos
del cuerpo.
 Hemoglobina A2 (HbA2): constituye alrededor del 2-3% de la hemoglobina en adultos. Consta de dos
cadenas de alfa globina y dos cadenas de delta globina. Su función principal es similar a la HbA, pero se
utiliza en pruebas específicas para detectar determinadas enfermedades como la talasemia.
 Hemoglobina F (HbF o hemoglobina fetal): Es la hemoglobina predominante en los fetos y disminuye
gradualmente después del nacimiento. Consta de dos cadenas de alfa globina y dos cadenas de gamma
globina. La hemoglobina fetal tiene una mayor afinidad por el oxígeno que la hemoglobina A, lo que
permite una transferencia eficiente de oxígeno de la madre al feto a través de la placenta.
 Variantes de hemoglobina: Además de los tipos principales, existen variantes genéticas de
hemoglobina que pueden tener estructuras anormales debido a mutaciones en los genes que codifican las
cadenas de globina. Por ejemplo, la hemoglobina S (HbS) se asocia con la anemia falciforme, mientras
que la hemoglobina C (HbC) se asocia con la enfermedad de la hemoglobina C. Estas variantes pueden
causar problemas de salud cuando están presentes en cantidades significativas.
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6. Mediante un mapa conceptual fundamente la cuantificación espectrofotométrica de albúmina,

hemoglobina, proteínas totales y mioglobina.
7. Indique cuales son las causas de interferencias en la cuantificación espectrofotométrica de albúmina,

hemoglobina, proteínas totales y mioglobina.
Albúmina:
 Triglicéridos: Pueden causar interferencias y resultados falsamente elevados en la cuantificación de

albúmina. Valores de triglicéridos > 250 mg/dL generan interferencias significativas.
 Bilirrubina: Puede interferir, resultando en mediciones falsamente bajas de albúmina. Valores de
bilirrubina > 1,5 mg/dL pueden causar interferencias.
Hemoglobina:
 Interferencias por impurezas: Restos de anticoagulantes en muestras de sangre pueden influir en la

cuantificación de hemoglobina, generando resultados falsamente elevados.
Proteínas Totales:
 Interferencias por impurezas: Restos de anticoagulantes, fibrinógeno o pigmentos biliares en muestras de

sangre pueden interferir, llevando a mediciones falsamente elevadas de proteínas totales.
Mioglobina:
 Interferencias por impurezas: Restos de anticoagulantes, fibrinógeno o pigmentos biliares en muestras de

sangre pueden afectar la cuantificación de mioglobina, resultando en mediciones falsamente elevadas.
Recomendaciones para Minimizar Interferencias:
 Utilizar métodos de cuantificación específicos para la proteína deseada.

 Emplear reactivos de cuantificación libres de interferencias.
 Realizar controles de calidad periódicos de métodos y reactivos.
 En casos particulares, realizar correcciones utilizando blancos de muestra para contrarrestar
interferencias causadas por impurezas.
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11. GRÁFICOS
Imagen 1. Indicaciones generales Imagen 2. Materiales
Autor: (Jiménez, F. 2023) Autor: (Fierro, F. 2023)
Imagen 3. Espectrofotómetro Imagen 4. Agitador de tubos de ensayo
Autor: (Jiménez,
F. 2023)
Autor: (Jiménez,
F. 2023)
Imagen 5. Baño
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María Imagen 6. Reactivos
Autor: (Jiménez, F. 2023) Autor: (Jiménez, F. 2023)
Imagen 7. Estándares Imagen 8. Reactivos químicos
Autor: (Jiménez,
F. 2023)
Autor: (Jiménez,
F. 2023)
Imagen 9.
Extracción
sanguínea Imagen 10. Extracción sanguínea
Autor: (Fierro, F. 2023) Autor: (Fierro, F. 2023)
Imagen 11. Muestra de sangre Imagen 12. Sangre centrifugada

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Autor: (Fierro, F. 2023) Autor: (Fierro, F. 2023)
Imagen 13. Tubos rotulados con muestras de la prueba Imagen 14. Reacción de la prueba de millon
De millón (A), Acetato de plomo (B), xentoproteica (C) Bioret (D)
Autor: (Fierro, F. 2023) Autor: (Jiménez, F. 2023)
Imagen 15. Reacción del acetato de plomo Imagen 16. Reacción xentoproteica
Autor: (Jiménez, F. 2023) Autor: (Jiménez, F. 2023)
Imagen 17. Reacción Bioret

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Autor: (Jiménez, F. 2023)
Resultados de la espectrofotometría
12. OBSERVACIONES:
• Los métodos fueron precisos y sensibles para detectar cambios en la concentración de las proteínas.
• EL método de Biuret requiere un espectrofotómetro para medir la intensidad del color.
• Los resultados de las pruebas se pueden utilizar para diagnosticar o tratar condiciones médicas.
• Las pruebas variaban de un grupo a otro.
• Se logró observar un notorio cambio en cuanto al color de cada muestra al colocar el reactivo y así
diferenciar cada una, es importante poner la medida exacta del reactivo para que los resultados sean
efectivos. Además, se pudo identificar el valor de la absorbancia que nos proporcionó el espectrofotómetro
al aplicar las técnicas brindadas por la docente. Por último, es necesario tomar en cuenta el tiempo, ya que
depende de la técnica posee un tiempo limitado.
• Se observó que, al agregar diversos reactivos a las diferentes muestras, se generan colores sumamente
atractivos. Es esencial considerar cuidadosamente el factor tiempo, ya que puede influir en el logro del
resultado deseado.
13. CONCLUSIONES:
En conclusión, las pruebas cualitativas representan herramientas fundamentales para la identificación y
caracterización de biomoléculas, aprovechando las propiedades químicas únicas de aminoácidos y proteínas.
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Entre los métodos de cuantificación evaluados, el verde de Bromo Cresol se destaca como una opción precisa
y sensible para medir la concentración de albumina, siendo su intensidad de color directamente proporcional a
la cantidad presente. Asimismo, el método de Biuret ofrece una alternativa simple y económica para
cuantificar proteínas séricas, generando un complejo de color púrpura. En el caso de la hemoglobina, el
método de Drabkin se revela como una opción precisa y sensible, formando un complejo de color azul cuya
intensidad refleja la concentración hemoglobínica. Por último, el método Turbilatex emerge como una
solución rápida y sencilla para la cuantificación de mioglobina. Estas opciones metodológicas ofrecen diversas
ventajas según las necesidades analíticas, brindando un abanico de posibilidades para la determinación
cuantitativa de biomoléculas clave.
14. SUGERENCIAS:
1. Estandarización de Métodos de Cuantificación:

Implementar procedimientos de estandarización para la cuantificación de proteínas que se adapten a las
especificidades de las muestras de suero o plasma. Esto garantizará resultados más precisos y comparables
entre distintas muestras.
2. Optimización de Condiciones de Ensayo:
Realizar estudios de optimización de condiciones experimentales, como temperatura, tiempo de incubación y
concentraciones de reactivos, para mejorar la sensibilidad y especificidad de los métodos de cuantificación
utilizados.
3. Documentación y Registro Detallado:
Fortalecer la documentación y registro detallado de cada etapa del proceso experimental, desde la preparación
de muestras hasta la interpretación de resultados. Esto facilitará la reproducibilidad y permitirá identificar
cualquier desviación en los protocolos.
15. TERMINOLOGÍA:
1. Aminoácidos Esenciales: Aminoácidos que el cuerpo no puede sintetizar por sí mismo y deben obtenerse
a través de la dieta.
2. Cromatografía de Aminoácidos: Técnica que separa y cuantifica aminoácidos basándose en sus
propiedades de interacción con una fase estacionaria.
3. Turbidimetría: Método de cuantificación de mioglobina que utiliza la formación de complejos insolubles
para medir la turbidez.
4. Electroforesis: Método de separación de moléculas en función de su carga eléctrica y tamaño en un
campo eléctrico.
5. Control de Calidad Interno y Externo: Procedimientos para monitorear y garantizar la precisión y
precisión de los resultados analíticos, utilizando muestras de control interno y externo.
6. Isoformas: Variantes estructurales de una proteína que comparten la misma función, pero difieren en su
estructura primaria o secundaria.
7. Punto Isoeléctrico (pI): pH al cual una molécula, como una proteína, tiene una carga neta igual a cero.
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16. BIBLIOGRAFÍA:
Arslan, E., Arslan, M., & Arslan, S. (2015). Interference of bilirubin in serum albumin estimation by biuret
method. Journal of Clinical Biochemistry and Nutrition, 54(1), 82-84.
Bioquímica". L. Stryer, J. L. Berg, J. M. Tymoczko. 6ª edición. W. H. Freeman, 2007.
Costa, J. (2019). TOTAL PROTEINA. Cromatest, 2(18).
en ensayos immulite 2500: un enfoque práctic. Anales de bioquímica clínica 2011;48(2): 170-1
Meneses, Angulo, Ivonne. Análisis estructural de la hemoglobina (HB), El Cid Editor | apuntes, 2009. ProQuest
Ebook Central,http://ebookcentral.proquest.com/lib/unachlibsp/detail.action?docID=3181184.
Created from unachlibsp on 2019-03-11 06:46:09.
Molina-Gómez, A., García-Martín, J., & García-Rodríguez, J. A. (2006). Interference of plasma triglycerides on
serum albumin measurement by biuret method. Clinical Biochemistry, 39(10), 909-912.
Pérez, J., & López, A. (2022). Proteínas específicas en el diagnóstico de enfermedades. Medicine.
Robert, M, 2012 Bioquímica Ilustrada de Harper’s, . Murray Robert K., McGraw-Hill Companies,
Steen G, Klerk A, Laan K van der, Eppens EF. Evaluación de la interferencia debida a hemoglobina, bilirrubina y
lípidos
Dra. María Angélica Barba Maggi. Mgs Lic. Franklin Ramos Lic. Franklin Ramos
DOCENTE DE LA CÁTEDRA TÉCNICO DOCENTE LABORATORIOTÉCNICO DOCENTE LABOR
CARRERA DE MEDICINA
Dr. Patricio Vásconez

DIRECTOR DE CARRERA MEDICINA
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8. ANEXO/ DATOS OBTENIDOS EN LA APLICACIÓN EXPERIMENTAL

8.1 REACCIONES CUALITATIVAS DE IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS, PÉPTIDOS Y PROTEÍNAS
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8.2 TÉCNICAS ESPECTROFOTOMÉTRICAS Y MÉTODOS COLORIMÉTRICOS PARA CUANTIFICACIÓN DE ALBÚMINA, HEMOGLOBINA,

PROTEÍNAS TOTALES

Guzman Cuenca Evelyn Yulissa Ip5..

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD LAB E201- BLOQUE E

01 de diciembre del 2023

APELLIDOS Y NOMBRES DE LOS

Clavijo Valdez 2300318876

Fierro Tapia 0250150232

Garcés Alvarado 1207502632

Guato Gallegos 0850194895

Guzmán Cuenca 0605364843

Jiménez Morejón 0202486528

Lapo Feijoo Heidy 2300653215

LUGAR DE LA PRÁCTICA LAB E201- BLOQUE E Facultad de Ciencias de la Salud

3. MATERIALES – REACTIVOS – EQUIPOS:

presencia de péptidos específicos en la sangre, como hormonas o neuropéptidos relacionados con

EXAMEN DE PROTEINAS TOTALES

5.2 TÉCNICAS ESPECTROFOTOMÉTRICAS Y MÉTODOS COLORIMÉTRICOS PARA

Fundamentar el video recuperado de https://youtu.be/sQ6jn0lR5EM (prueba de acetato de plomo),

9. CÁLCULOS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

B. REACCIÓN CON ACETATO DE PLOMO ALCALINO EN MEDIO ALCALINO

TUBOS MUESTRA OBSERVACIONES INTERPRETACIÓN

B1 agua destilada COLOR:  Blanquecino

B2 leche COLOR:  Amarillo verdoso

B3 solución de gelatina COLOR:  Blanquecino

B4 clara de huevo COLOR:  Negro con blanco

B5 proteína comercial COLOR:  Naranja medio

B6 plasma sanguíneo COLOR:  Gris

9.2 TÉCNICAS ESPECTROFOTOMÉTRICAS Y MÉTODOS COLORIMÉTRICOS PARA

DETALLE REGISTRO DE DATOS

Longitud de onda de la 630 nm

Interpretación Clínica del

B. CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOMÉTRICA DE HEMOGLOBINA: MÉTODO DE LA

Longitud de onda de la 540 ± 20 nm.

0,98x12g/l = 11,76 g/L

Longitud de onda de la prueba 560nm

D. CUANTIFICACIÓN ESPECTROFOMÉTRICA DE MIOGLOBINA: TURBILATEX

Longitud de onda de la 630 +/- 20 nm

A1:0,526 -0.001: A1: 0,522 – 0,001

demuestre la formación del enlace peptídico de las proteínas

3. Indique de la albúmina: concepto, importancia Biomédica de la cuantificación.

4. Indique de la Hemoglobina, concepto, estructura, importancia Biomédica de la cuantificación.

5. Explique de los diferentes tipos de hemoglobina

6. Mediante un mapa conceptual fundamente la cuantificación espectrofotométrica de albúmina,

7. Indique cuales son las causas de interferencias en la cuantificación espectrofotométrica de albúmina,

 Triglicéridos: Pueden causar interferencias y resultados falsamente elevados en la cuantificación de

 Interferencias por impurezas: Restos de anticoagulantes en muestras de sangre pueden influir en la

 Interferencias por impurezas: Restos de anticoagulantes, fibrinógeno o pigmentos biliares en muestras de

 Interferencias por impurezas: Restos de anticoagulantes, fibrinógeno o pigmentos biliares en muestras de

 Utilizar métodos de cuantificación específicos para la proteína deseada.

Imagen 1. Indicaciones generales Imagen 2. Materiales

Autor: (Jiménez, F. 2023) Autor: (Fierro, F. 2023)

Imagen 3. Espectrofotómetro Imagen 4. Agitador de tubos de ensayo

María Imagen 6. Reactivos

Autor: (Jiménez, F. 2023) Autor: (Jiménez, F. 2023)

Imagen 7. Estándares Imagen 8. Reactivos químicos

Autor: (Fierro, F. 2023) ￼ Autor: (Fierro, F. 2023)

Imagen 11. Muestra de sangre Imagen 12. Sangre centrifugada

Autor: (Fierro, F. 2023) Autor: (Fierro, F. 2023)

De millón (A), Acetato de plomo (B), xentoproteica (C) Bioret (D)

Autor: (Fierro, F. 2023) ￼ Autor: (Jiménez, F. 2023)

Autor: (Jiménez, F. 2023) Autor: (Jiménez, F. 2023)

Imagen 17. Reacción Bioret

Autor: (Jiménez, F. 2023)

Autor: (Fierro, F. 2023) Autor: (Fierro, F. 2023)

Autor: (Fierro, F. 2023) Autor: (Jiménez, F. 2023)