ACTIVIDADES 7, 8, 9 Y 10

7.- Escribe en tu cuaderno si son verdaderas o falsas las siguientes afirmaciones

relativas alaintegridaddelosácidosnucleicostraslapurificaciónyjustificalarespuesta:

a) La electroforesis en gel de agarosa es la técnica de elección para comprobar

la integridad de los ácidos nucleicos. Verdadero

b) En la electroforesis de una muestra de ARN total no degradado de un

organismo eucarionte se observan dos bandas nítidas correspondientes a los
Nr28 18S, junto con un ligero smear por el ARNm. Verdadera

c) La mejor muestra para purificar ADN es el tejido fijado en formol e incluido en

parafina, porque la fijación con formol conserva perfectamente la integridad de
los ácidos nucleicos. Falso, la fijación e inclusión en parafina provoca la
fragmentación del ADN, por lo tanto, en este tipo de muestras no tiene sentido
valorar la integridad

d) Cuando el ADN se degrada, en la electroforesis se observa un smear, cuya

amplitud e intensidad dependen del grado de fragmentación y degradación del
ADN. Verdadero

e) En la electroforesis de ADN plasmídico íntegro se observan múltiples bandas

por la formación de dímeros,trímeros,tetrámeros, etc. Falso, lo ideal es obtener
una única banda correspondiente al plásmido con su estructura nativa. En
algunas ocasiones puede aparecer una banda débil o incluso una tercera
banda correspondiente a dímeros.

8.- Analiza la pureza de las siguientes muestras: En las muestras en las que
consideres que hay contaminación, explica cuáles pueden ser los posibles
contaminantes y propón soluciones para eliminarlos.

Muestra 1:
● A260/A280 = (0,352 – 0,025) / (0,265 – 0,025) = 1,36
 ● A260/A230 = (0,352 – 0,025) / (0,182 – 0,025) = 2,08
● Esta muestra de ADN está libre de contaminantes menores, pero está
contaminado con proteínas y fenoles. Una solución sería aplicar proteinasa K,
seguido de precipitación, lavado y resuspensión del ADN.

Muestra 2:
● A260/A280 = (0,436 – 0,020) / (0,248 – 0,020) = 1,82
● A260/A230 = (0,436 – 0,020) / (0,235 – 0,020) = 1,93
● Esta muestra se puede considerar como ADN puro sin contaminantes.

Muestra 3:
● A260/A280 = (0,312 – 0,029) / (0,166 – 0,029) = 2,07
● A260/A230 = (0,312 – 0,029) / (0,229 – 0,029) = 1,41
● Esta muestra de ARN está contaminado por polisacáridos o sales. Para
solucionarlo se precipita nuevamente el ARN, se lava y se resuspenden.

9.- En un tubo eppendorf tenemos 50 µl de una solución de ADN genómico humano.

Para calcular su concentración se diluyen 5 µl de la solución con 195 µl de tampón TE
y se mide la absorbancia de la dilución a 260 nm, 280nm y 320 nm. Los valores
obtenidos son los siguientes: A260 = 0,469. A280 = 0,265. A320 = 0,019.
Calcula:
a) La concentración de la solución original en ng/µl.
b) La pureza del ADN.
c) La cantidad total de ADN en µg en la solución original.

a) La concentración de la solución original en ng/µl. 1 A -------------------50 ng/µl

0.469--------------X X = 23,45 ng/µl en la solución diluida Hemos hecho una
dilución 5/200, es decir, 1/40, luego: Concentración = 23,45. 40 = 938 ng/μl en la
solución original (concentrada)
b) La pureza del ADN. A260/A280 = 0,469/0,265= 1,83 (ADN puro) La cantidad total
de ADN en µg en la solución original. 938 ng-----------------------1 μl X
---------------------50 μl
c) Cantidad de ADN en la solución: 938. 50 = 46.900 ng = 46. 9 μg

10.- Para realizar una técnica de biología molecular necesitamos añadir a una mezcla
de reacción 600 ng de ARN. En un tubo tenemos 100 µl de una solución de ARN cuya
concentración no es conocida. Se diluyen 4 µl de la solución con 196 µl de agua
destilada y se mide su absorbancia a 260 nm, dando un valor de 0,125. ¿Qué volumen
de la solución original de ARN habrá que añadir a la mezcla de reacción

● [ A.N ] = ( A260 – A230 ) X factor de dilución X factor de conversión = 0,125 x 50

x 40 = 250 ng/µl
● 250 ng → 1µl
● 600 ng → X
● X = 600ng x 1 µl / 250ng = 2,4 μl de solución original de ARN que habrá que
añadir a la mezcla de reacción