NEREA LAGUNA SERRANO BIOLOGÍA MOLECULAR Y CITOGENÉTICA EJERCICIOS

Tema 3. Extracción Y Purificación De Ácidos Nucleicos

10. Escribe en tu cuaderno si son verdaderas o falsas las siguientes afirmaciones relativas a la
integridad de los ácidos nucleicos tras la purificación y justifica la respuesta:
a) La electroforesis en gel de agarosa es la técnica de elección para comprobar la integridad de los
ácidos nucleicos. Verdadero.
b) En la electroforesis de una muestra de ARN total no degradado de un organismo eucariote se
observan dos bandas nítidas correspondientes a los ARNr 28S Y 18S, junto con un ligero smear por el
ARNm. Verdadero.
c) La mejor muestra para purificar ADN es el tejido fijado en formal e incluido en parafina, porque la
fijación con formal conserva perfectamente la integridad de los ácidos nucleicos. Falso.
d) Cuando el ADN se degrada, en la electroforesis se observa un smear, cuya amplitud e intensidad
depende del grado de fragmentación y degradación del ADN. Verdadero.
e) En la electroforesis de ADN plasmídico íntegro se observan múltiples bandas por la formación de
dímelos, trímeros, tetrámeros… Falso.
11. Analiza la pureza de las siguientes muestras:
 En las muestras en las que consideres que hay contaminación, explica cuáles pueden ser los
posibles contaminantes y propón soluciones para eliminarlos.
 Muestra 1: ADNds. A230 = 0’182 / A260 = 0’352 / A280 = 0’265 / A320 = 0’025
 A260 / A280 = (0’352 - 0’025) / (0’265 - 0’025) = 1’36
 A260 / A230 = (0’352 - 0’025) / (0’182 - 0’025) = 2’08
 El cociente A260 / A280 es inferior a 1’6, por lo que es razonable pensar que el ADN está
contaminado con proteínas o derivados fenólicos. Si la purificación no se hizo con
solventes orgánicos, lo lógico es que la contaminación sea por proteínas y se pude
solucionar mediante un tratamiento con proteínas a K, seguido de precipitación, lavado
y resuspensión del ADN. Si la purificación se hizo con solventes orgánicos, lo más
probable es que la contaminación sea producida por restos del fenol utilizado. En este
caso conviene tratar con cloroformo / alcohol isoamílico para crear una fase orgánica,
agitar y centrifugar para separar las dos fases (los restos de fenol habrán pasado a la
fase orgánica). A partir de la fase acuosa se vuelve a precipitar, lavar y re suspender el
ADN.
 Muestra 2: ADNds. A230 = 0’235 / A260 = 0’436 / A280 = 0’248 / A320 = 0’020
 A260 / A280 = (0’436 - 0’020) / (0248 - 0’020) = 1’82
 A260 / A230 = (0’436 - 0’020) / (0’235 - 0’020) = 1’93
 Se considera ADN puro sin contaminantes.
 Muestra 3: ARN. A230 = 0’229 / A260 = 0’312 / A280 = 0’166 / A320 = 0’029
 A260 / A280 = (0’312 - 0’029) / (0’166 - 0’029) = 2’07
 A260 / A230 = (0’312 - 0’029) / (0’229 - 0’029) = 1’41
 El cociente A / A es inferior a 1’5 por lo que es razonable pensar que el ARN está
contaminado por polisacáridos o sales. Para solucionarlo se precipita nuevamente el
ARN, se lava y se resuspende.