TALLER CAPITULO No.

11: EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS

Laura Carolina Artunduaga Diaz
Universidad de La Amazonia, Facultad de Ciencias Básicas, Pregrado de Biología, Curso de
Biología Molecular.

1. Calcular la concentración de ARN en μg/μl obtenida de una muestra diluida 1:25 que
arrojó una absorbancia de 0.185 leída a 260 nm.
Rta:
μg/μl de RNA = 40 μg/μl x 25 x 40 = 40 μg/μl de RNA
1000
2. Valorar la pureza de la preparación de ácidos nucleicos obtenida de una muestra cuya
absorbancia a 260 nm fuede 0.57; mientras que a 280 nm fue de 0.31. Según el índice
260÷280, ¿qué pureza tiene la muestra? Explique la interpretación del resultado.
Rta: Los resultados obtenidos de los datos suministrados es 1,83 es decir muy cercano 1.8 y 2.0,
el cual se considera óptimo, ya que valores cercanos a 1.8 indican que la muestra contiene casi
exclusivamente ADN sin contaminantes
3. Calcule la cantidad de ADN por gramo de tejido si la concentración de ADN fue de 350 ng/μl,
partiendo de 100 mg de muestra.
4. Dibuje el espectro de luz infrarrojo, visible y ultravioleta e indique en su esquema en qué
longitud absorben los ácidos nucleicos y las proteínas; además, explique por qué estas moléculas,
a esos nanómetros, presentan un máximo de absorción.
Rta:
 La luz UV es emitida por una lámpara que a través de un condensador dirige los rayos hacia la
muestra, ubicada dentro de una celda de cuarzo (material que no interfi ere con la absorción de la
muestra). La luz será absorbida de manera proporcional de acuerdo a la concentración de la
muestra. La luz que no es absorbida por la muestra se mide por el detector, restándola a la luz
inicial emitida y generando así una lectura en unidades de absorbancia que oscila entre 0.001 a
1.000.
5. ¿Qué función tiene el detergente SDS frente a las membranas y las proteínas de la célula en la
técnica de extracción de ácidos nucleicos?
Rta: El detergentes (Triton o docedil sulfato sódico, SDS) tiene la función de romper las
membranas celular y nuclear, y liberar el ácido nucleico de las células de donde se extraerá el
ADN.
6. Investigue y explique cuáles propiedades tiene el fenol que favorecen que los ácidos nucleicos
se queden en la fase acuosa y no en la fenólica
Rta: El ADN es poco soluble en fenol, por lo que previamente suele estabilizarse con una
solución amortiguadora de Tris que lo mantiene en un pH de 8.0 a 8.5, lo que hace que el ADN
permanezca en la fase acuosa. La modifi cación del pH de 8.5 a 5.2 en esta solución puede
favorecer la extracción de ARN frente a la de ADN.
El ADN disuelto en la solución acuosa se precipita añadiendo alcohol absoluto (isopropanol o
etílico), ya que los ácidos nucleicos son insolubles en soluciones alcohólicas.