Biología Molecular Laboratorio

Docente: Christian Cadena

González Alfaro Diego

Navarro Salazar Laura

UNIVERSIDAD LIBRE SECCIONAL BARRANQUILLA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA DE MEDICINA- III SEMESTRE
GRUPO DE LABORATORIO JUEVES 1-3 P.M
2023-2
 1. ¿Por qué durante la reacción en cadena de polimerasa no se
requieren fragmentos de Okazaki?
Durante la reacción en cadena de polimerasa (PCR), no se requieren
fragmentos de Okazaki porque la PCR es un proceso in vitro que
utiliza una enzima termoestable (ADN polimerasa) para amplificar
específicamente una región de ADN, no para replicar todo un
genoma como ocurre en la replicación del ADN en las células.
2. ¿Cuáles son los diferentes reporteros fluorescentes
empleados en la PCR en tiempo real?
En la PCR en tiempo real, se utilizan diferentes reporteros
fluorescentes para detectar y cuantificar la amplificación del ADN
en tiempo real.
Algunos de los reporteros más comunes son:
 SYBR Green: es un tinte fluorescente que se une de manera
específica al ADN de doble cadena durante la amplificación.
Cuando se produce la duplicación del ADN, la cantidad de
SYBR Green aumenta y se emite una señal fluorescente
proporcional a la cantidad de ADN amplificado. Es versátil y
económico, pero puede dar lugar a falsos positivos debido a la
unión inespecífica.
 Probes TaqMan: estos son oligonucleótidos marcados con un
fluoroforo en el extremo 5´ y un quencher en el extremo 3´.
Durante la amplificación, el fragmento de sonda se hidroliza
por la actividad exonucleasa de la ADN polimerasa, separando
el fluoroforo del quencher y generando una señal fluorescente
detectable. La cantidad de señal fluorescente está relacionada
con la cantidad de ADN amplificado.
 Probes Beacon: son sondas que tienen un fluoroforo en un
extremo y un quencher en el otro extremo, pero están en una
conformación cerrada cuando no están unidas al ADN
 objetivo. Cuando se produce la amplificación del ADN
objetivo, la sonda se une específicamente a la secuencia
complementaria y se abre, separando el fluoroforo del
quencher y generando una señal fluorescente.
 Probes Scorpion: son sondas que contienen una secuencia
complementaria al ADN objetivo y un segmento de extensión
que contiene un fluoroforo y un quencher. Durante la
amplificación, la sonda hibrida con el ADN objetivo y se
extiende mediante la actividad de la ADN polimerasa,
generando una señal fluorescente cuando el fluoroforo y el
quencher se separan.
Estos son solo algunos ejemplos de los reporteros fluorescentes
utilizados en PCR en tiempo real. Cada uno tiene sus ventajas y
limitaciones, y su elección depende del tipo de analisis que se va
a realizar y los recursos disponibles.
3. Mencione y explique 3 usos de la PCR asociada a
Polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción.

- La PCR-RLFP es una tecnica que permite identificar

variaciones en la secuencia de ADN de un individuo. Se utiliza
para estudios de diversidad genética, diagnóstico de
enfermedades genéticas y analisis de paternidad. En esta
tecnica, se amplifica una región específica de ADN mediante
PCR y luego se corta con una enzima de restricción para
generar fragmentos de diferentes tamaños, que se separan por
electroforesis en gel. Los patrones de bandas resultantes
permiten identificar los alelos presentes en el ADN del
individuo.
Los RFLPs tienen un papel sumamente importante en el
análisis de genes específicos en afecciones cromosómicas,
tipificación genética y análisis de paternidad.
También contribuyen a comprender aspectos genéticos en
patrones de reproducción de algunos animales. Aunque
recientemente se han realizado pruebas y utilizado como
herramienta para ver la diversidad genética de patógenos en
alimentos sin necesidad de utilizar la secuenciación.

4. ¿Por qué es importante el magnesio para la polimerasa?

El magnesio es un cofactor bastante importante en la

polimerasa, ya que, dependiendo de su concentración, la
eficacia de la reacción será mayor o menor.

5. ¿Qué característica debe tener un primer para una PCR?

Para que un primer sea especifico en una PCR, debe tener

ciertas características fundamentales como lo son la:

Complementariedad con la secuencia del objetivo, esto

significa que los nucleótidos deben aparearse con precisión
con los nucleótidos de la secuencia diana.

Longitud adecuada: La longitud del primer debe ser

generalmente de 18 a 22 nucleótidos. Un primer corto puede
no ser específico, mientras que uno demasiado largo puede
tener problemas de eficiencia de amplificación.

Temperatura de fusión (Tm) apropiada: La Tm es la

temperatura a la que se separan las cadenas de ADN. Los
primers deben tener una Tm similar para que se unan
específicamente a la secuencia objetivo durante la etapa de
hibridación.
Bibliografía.
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Genome.gov. Recuperado el 13 de septiembre de 2023,
de https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Fragmentos-de-restriccion-
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https://www.biogenetixlab.com/blog/rflp-primer-marcador-molecular-para-
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