PRACTICA No.

Estudio farmacocinético del rojo fenol mediante la

utilizació n de un modelo físico representativo de una
administració n por infusió n intravenosa

Objetivo:

El objetivo de esta prá ctica es obtener un tabulado experimental que relacione

concentraciones de rojo fenol frente al tiempo a partir de un modelo físico que
pretende representar al organismo. Inicialmente, las concentraciones de fá rmaco
que configuran el tabulado se obtienen a los tiempos de toma de muestra
durante el período de infusió n. Una vez finalizada la infusió n, se completa el
tabulado experimental con las muestras que se toman en la fase de post-infusió n.

2. Bases teóricas

A) Modelo farmacocinético:

El modelo farmacocinético que se estudia en la presente prá ctica, se representa

de acuerdo con el siguiente esquema (Figura 1):

Se trata del modelo monocompartimental abierto, con incorporació n del fá rmaco

mediante un proceso de orden cero y eliminació n del mismo de acuerdo con un
proceso de primer orden. En este modelo, el fá rmaco sufre en el organismo dos
procesos contrapuestos: una incorporació n de principio activo de acuerdo con
un proceso de orden cero y, simultá neamente, la eliminació n del fá rmaco segú n
un proceso de primer orden.
En este caso, el trá nsito del fá rmaco a través del organismo, se expresa
matemá ticamente de acuerdo con la siguiente ecuació n:

En la que:

dQ/dt = variació n de la cantidad de fá rmaco en organismo por unidad de tiempo.

k0 = constante de velocidad de incorporació n de orden cero, expresada en
cantidad/tiempo (por ejemplo, μg/min)
k = constante de velocidad de eliminació n de primer orden, expresada en tiempo
recíproco (por ejemplo min-1).
Q= cantidad de fá rmaco remanente en organismo a cada tiempo considerado.

Integrando la ecuació n 1, se obtiene la siguiente expresió n matemá tica:

Si se tiene en cuenta el volumen de distribució n del fá rmaco en el organismo

(Vd), y se dividen los dos miembros de la ecuació n 2 por este pará metro, se
obtiene:

La ecuació n 3 es representativa del trá nsito del fá rmaco a través del organismo
durante el período de infusió n. En el caso de alcanzarse el estado de equilibrio
estacionario (t=∞), la ecuació n 3 se transforma en :

Cuando cesa la infusión, en el organismo, el ú nico proceso que sufre el fá rmaco es

el de eliminació n, proceso de primer orden, cuya ecuació n representativa, en
este caso, expresada en forma semilogarítmica, es la siguiente:

En la que es la concentració n de fá rmaco en organismo en el

tiempo que cesa la infusió n (CT).

T= tiempo que dura la infusió n.

Si se alcanza, durante la infusión, el estado de equilibrio estacionario, la ecuació n

representativa del proceso de eliminació n expresada en forma semilogarítmica
es la siguiente:

en la que:
 = concentració n de fá rmaco en el organismo cuando cesa la infusió n (CT).

La dosis administrada equivale a: D=k0·T

B) Modelo físico

El modelo físico que se utiliza en la presente prá ctica, puede representarse de

acuerdo con el siguiente esquema (Figura 2):

FIGURA 2

El recipiente 1, representa el organismo y, mediante agitació n continua se

pretende simular la circulació n sistémica, dado que en el modelo
monocompartimental se considera instantá nea la distribució n del fá rmaco que
se incorpora al organismo.
El recipiente 3, en la primera parte de la prá ctica, contiene la solució n de fá rmaco
que se incorpora al recipiente 1 mediante la bomba peristá ltica a un flujo
constante y conocido. En la segunda parte de la prá ctica, el recipiente 3, contiene
solució n acuosa, que también por medio de la bomba peristá ltica accederá al
recipiente 1 a velocidad constante.
El recipiente 2 representa los emuntorios.
Fundamento matemático

Considérese el recipiente 1 con una solució n de NaOH 0.1 N que representa el

organismo (modelo monocompartimental).
El recipiente 3 contiene una solució n de fá rmaco de concentració n conocida y
volumen conocido, por lo que también se conoce la cantidad de fá rmaco que
contiene el recipiente (Dosis) a tiempo cero. El recipiente 3, representa la
solució n que contiene el fá rmaco para su administració n al organismo mediante
una infusió n intravenosa. Por medio de una bomba peristá ltica, se hace penetrar
el fá rmaco del recipiente 3 al recipiente 1 (organismo) a un flujo constante Φ
(ml/min).

El flujo Φ por la concentració n de fá rmaco en el recipiente 3 (C3, constante en el

transcurso de la experiencia) equivale a la constante de incorporació n de
fá rmaco al recipiente 1 (organismo) de acuerdo con un proceso de orden cero
(k0):

La salida de fá rmaco del recipiente 1 (organismo) viene dada por el producto del
volumen de líquido que sale por unidad de tiempo(flujo), por la concentració n de
fá rmaco (C1) en dicho liquido en cada instante considerado (C 1 variable en
funció n del tiempo).

Multiplicando numerador y denominador por el volumen del recipiente, y

considerando que Φ/V equivale a la constante
de velocidad de eliminació n de primer orden, se obtiene:

Que equivale a:

Desde un punto de vista farmacocinético, en el modelo monocompartimental, la

administració n de los fá rmacos por infusió n intravenosa, equivale a considerar
que en el organismo, mientras dura la infusió n, se produce simultá neamente un
proceso de incorporació n de orden cero y otro de eliminació n de primer orden.
Para cumplientar esta situació n, en el modelo simulado, la incorporació n del
fá rmaco viene representada por la ecuació n 7 y la eliminació n por la ecuació n 9,
por lo que la variació n instantá nea de cantidad de fá rmaco en funció n del tiempo
en el recipiente 1, globalmente, puede expresarse de acuerdo con la siguiente
expresió n:

Por consiguiente, la ecuació n 10, es idéntica a la ecuació n 1 y a partir de la misma

pueden realizarse las mismas consideraciones expuestas en las bases teó ricas
correspondientes al modelo farmacocinético teó rico.

3. Material y método

Material
Jeringa de 10 ml.
2 vasos de precipitados de 1 l.
1 vaso de precipitados de 2 l.
Kitasato de 250 ml.
Bomba peristá ltica de flujo continú o Dinko.
3 agitadores magnéticos
3 barras agitadoras.
Tubos de silicona apropiados para conexiones.
Soportes de porespan para nivelar el sistema hidrodiná mico.
Espectrofotó metro/colorímetro.
Cubetas para lectura ó ptica.
Gradillas con tubos de plá stico.
Cronó metro.
Frasco lavador de agua destilada.
Pipetas de 2 y 5 ml.
Vaso de precipitados de 50 ml.
Rotulador de vidrio.
Frasco detergente
Escobilló n.
Pipetas Pasteur.
Vó rtex.
Ordenador para el tratamiento de datos.

Soluciones
A: solució n alcalina de rojo fenol para la administració n del fá rmaco (2 mg/ml).
B: solució n alcalina de rojo fenol (patró n de 20 μg/ml) para preparar la curva de
calibrado.
C: solució n de hidró xido só dico 0.1 N.

Metodología
Comprobar que el espectofotó metro/fotocolorímetro se halla en
funcionamiento, ajustando el blanco con solució n NaOH 0.1 N.
Depositar en el recipiente 3, 1 litro de NaOH 0.1 N y un nú cleo magnético
Situar en el recipiente 1, 250 ml de NaOH 0.1 N y un nú cleo magnético.
Iniciar la agitació n en los dos recipientes.
Proceder a las conexiones del recipiente 3 al recipiente 1.
Cebar el sistema poniendo en marcha la bomba peristá ltica. Parar la
bomba.
Tomar del recipiente 3, mediante jeringuilla, 4 ml de solució n de NaOH
0.1 N y desecharla.
Adicionar al recipiente 3, 4 ml de solució n de rojo de fenol de una solució n
de 2 mg/ml (Solució n A) (Dosis).
Poner en marcha el cronó metro e iniciar la incorporació n de fá rmaco al
recipiente 1 mediante la puesta en marcha de la bomba peristá ltica al
flujo correspondiente.
Tomar muestras del recipiente 1 a los tiempos consignados en la Tabla 2.
Transcurridos 40 minutos, parar la bomba, descebarla y limpiar
cuidadosamente los tubos de conexió n.
Sustituir el recipiente 3 por otro que contiene 1l de solució n de NaOH 0.1
N.
Cebar el sistema con solució n de NaOH 0.1 N y poner en marcha la bomba
y el crono previa unió n del recipiente 3 con el recipiente 1.
Tomar muestras del recipiente 1 a los tiempos consignados en la Tabla 2.
Apagar el sistema y limpiar escrupulosamente todo el material utilizado.

Preparación de la recta de calibrado:

Rotular los tubos de acuerdo con las concentraciones indicadas en la tabla 1.

Solución de 20 μg/ml. Tomar, mediante pipeta, 4 ml de la solució n patron
(solució n B, de 20 μg/ml) e introducirlos el tubo correspondiente (tubo 1).
Añ adir a cada uno de los tubos restantes 2 ml de la solució n C.
Solución de 10 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 1 e introducirlos en el
tubo 2. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 5 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 2 e introducirlos en el
tubo 3. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 2.5 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 3 e introducirlos en el
tubo 4. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 1.25 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 4 e introducirlos en el
tubo 5. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 0.63 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 5 e introducirlos en el
tubo 6. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 0.31 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 6 e introducirlos en el
tubo 7. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 0.16 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 7 e introducirlos en el
tubo 8. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Determinar la absorbancia correspondiente de las soluciones contenidas en cada
uno de los tubos preparados y anotar los valores en la libreta (Tabla 1).

ATENCIÓN: Dejar todo el material escrupulosamente limpio.

4. Resultados:

4.1. Curva de calibrado:

Representar grá ficamente los valores de las absorbancias (variable dependiente)

frente a las concentraciones teó ricas (variable independiente).
Despreciados los valores de absorbancias mayores que 2 y menores que 0.1,
calcular la ecuació n de la recta de calibració n y calcular el error relativo (Er%)
de la técnica analítica asociado a cada concentració n. En el caso de obtener
errores porcentuales mayores del 10%, despreciar ese nivel de concentració n y
volver a recalcular la recta.

Complementar la Tabla 1.

Tabla 1. Curva de calibrado

Concentración
Tub Absorbancia Concentración % error
teórica (μg/ml)
o no. (Y) estimada (μg/ml) relativo
(X)
1 20
2 10
3 5
4 2.5
5 1.25
6 0.63
7 0.31
8 0.16
Ecuació n representativa:
Abs=
4.2 Cálculo de la concentración en estado de equilibrio estacionario (Cee),
semivida (t1/2), volumen de distribución (Vd) y aclaramiento (Cl), tomando
como base las concentraciones de rojo fenol en el recipiente 1.

Los resultados experimentales deben tratarse desde dos puntos de vista: durante
la fase de infusió n y en la fase de postinfusió n.

a. Fase de infusión:

1. Las absorbancias obtenidas en las muestras de trabajo, desde el inicio de la

infusió n hasta que finaliza, interpolarlas
en la recta de calibrado y estimar las concentraciones de fá rmaco
correspondientes a cada tiempo de toma de muestra
(Tabla 2).

2. Representar grá ficamente el proceso y estimar la constante de infusió n k0, la

dosis administrada (D) y el valor de la concentració n en estado de equilibrio
estacionario (Cee) (Tabla 3).

Tabla 2. Concentraciones plasmá ticas durante y postinfusió n.

Tiempo (min) Abs C (μg/ml) t-T(min)

Infusió n
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
34
36
38
40

Postinfusió n
 42
44
46
48
50
52
54
56
58
60
62
64
66
Ordenador
Parámetro Unidad Gráfica
(Valor +- E.E)
K0 mg/min
D Mg
Cee (μg/ml)
t1/2 min
Vd ml
Cl ml/min
K min-1

ln C = -k*t + ln Cee

k0
C ee =
k∗Vd
- Gráfica de recta de calibrado

- Concentraciones plasmáticas

Conclusiones: