PRACTICA No.

Estudio farmacocinético del rojo de fenol mediante la

utilizació n de un modelo físico representativo de una
administració n extravasal

Objetivo:

El objetivo de esta prá ctica, igual que en las anteriores, es obtener un tabulado
experimental que relacione concentraciones de rojo de fenol frente al tiempo a
partir de un modelo físico que represente el lugar de absorció n por una parte, y
el organismo por otra. Este modelo permite estimar el valor de la constante
aparente de velocidad de absorció n mediante métodos directos e indirectos; es
decir, a partir del lugar donde se produce el proceso de absorció n y tomando
como base el uso racional de las curvas de niveles plasmá ticos.

2. Bases teóricas

A) Modelo farmacocinético:

En la presente prá ctica se estudia el trá nsito del fá rmaco a través del organismo
de acuerdo con el modelo farmacocinético siguiente (Figura 1):

A Ka C k

Figura 1

Se trata de un modelo monocompartimental que considera la administració n del

fá rmaco por vía extravasal. Este modelo contempla dos compartimientos, uno
representativo de la zona anató mica en la que se produce de absorció n (A) y
otro, un comportamiento abierto que representa el organismo (C) en el cual,
como en los modelos anteriormente estudiados, se asume que la distribució n del
fá rmaco es instantá nea y su eliminació n se realiza de acuerdo con un proceso de
primer orden. En este modelo, también se asume que el proceso de absorció n es
de primer orden, regido por una constante, ka (constante aparente de velocidad
de absorció n), y que el valor de esta constante es superior a la constaste
aparente de eliminació n k; es decir; ka > k.

La velocidad de eliminació n del fá rmaco a partir del organismo, en este caso,

viene determinada por la siguiente expresió n:
 dC
=k a A−kC( Ec .1)
dt

Es decir, a una entrada de fá rmaco a partir en organismo (k aA) menos a una

salida de fá rmaco del mismo (kC).

La ecuació n que permite estimar la concentració n de fá rmaco en organismo a

cualquier tiempo, se obtiene, aplicando transformadas de Laplace a la ecuació n 1,
siendo la expresió n final la siguiente:

FD k a −kt FD k a −k
C= e − e aT
(Ec. 2)
Vd k a −k Vd k a−k

Que expresada de forma simplificada de transforma en la siguiente ecuació n:

C=C0e-kt –A0-kat (Ec. 3)

Con el tratamiento farmacocinético de los datos experimentales, tabulado

concentració n/tiempo, mediante este modelo, se puede determinar la constante
aparente de velocidad de eliminació n del fá rmaco (k) y su constante aparente de
velocidad de absorció n (ka).

Cálculo de la velocidad aparente de eliminación.

A partir de los puntos experimentales representativos de la fase de eliminació n,

puede estimarse la constate aparente de eliminació n mediante la siguiente
ecuació n:

lnC=−kt+ ln C0 (Ec . 4)

en la que k, en valor absoluto, es la constante aparente de eliminació n.

Cálculo de la constante aparente de absorción

Para el cá lculo de la constante aparente de velocidad de absorció n pueden

utilizarse dos métodos: directo e indirecto.

A) Método directo:

Este método se basa en estimar la constante aparente de velocidad de absorció n

directamente a partir de la zona donde se realiza el proceso.

Asumiendo que el proceso de absorció n es de primer orden, la desaparició n de

fá rmaco del lugar de absorció n (incorporació n al organismo), puede expresarse
de acuerdo con la siguiente ecuació n:
−k t
A=A 0 e a
(Ec.5)

Tomando logaritmos neperianos en la ecuació n anterior, se obtiene:

ln A= -Kat + ln Ao (Ec. 6)

En la que ka, en valor absoluto, es la constante aparente de velocidad de

absorció n.

B) Método indirecto

Para el cá lculo de la constante aparente de la velocidad de absorció n mediante

métodos indirectos, en esta prá ctica, se utiliza el método de los residuales.

El desarrollo del método de los residuales se basa en los siguientes pasos:

1. A partir de la recta de regresió n semilogarítmica obtenida con los puntos

experimentales situados en la fase monoexponencial terminal de la curva de
niveles plasmá ticos (In C = -kt + In C 0), calcular las concentraciones teó ricas
extrapoladas.

2. Restar los puntos experimentales de los extrapolados a cada tiempo de toma

de muestras y considerar el valor absoluto de la diferencia (residuales).

3. Situar los valores absolutos de las diferencias en la grá fica. Estimar la recta de
regresió n semilogarítmica entre los valores residuales y los tiempos
correspondientes (In A=Kat + In A0). La pendiente, en valor absoluto, de esta
recta corresponde al valor de la constante aparente de velocidad de absorció n.

A nivel grá fico, el desarrollo del método se expone en la Figura 2.

Figura 2 . Representació n grá fica de las concentraciones plasmá ticas de fá rmaco
para el cá lculo de su constante de velocidad de absorció n por el método de los
residuales.

Desde un punto de vista farmacocinético, mediante el método de los residuales,

si no se conoce el valor de la constante de velocidad de eliminació n tras la
administració n del fá rmaco por vía intravenosa, no es posible asignar a los
valores obtenidos de la pendientes si los mismos corresponden a la constante de
velocidad de absorció n o de eliminació n.

Sin embargo, en esta prá ctica, debido a que puede estimarse el valor de la
constante aparente de absorció n por un método directo, si este valor es superior
al obtenido para la pendiente de la fase monoexponencial de eliminació n, puede
concretarse que ésta ú ltima es representativa del proceso de eliminació n y la
estimada a partir de la recta obtenida por residuales representativa del proceso
de absorció n.

B) Modelo físico

El modelo física que se utiliza en la presente prá ctica puede representarse de

acuerdo con el siguiente esquema (Figura 3):

El recipiente 1 representa el organismo en el cual se distribuye de forma

instantá nea el fá rmaco y se elimina de acuerdo con un proceso de primer orden.
El recipiente 2 representa la zona de absorció n de la cual desaparece el fá rmaco,
o lo que es lo mismo, se incorpora al recipiente 1, mediante un proceso de primer
orden. El recipiente 4, inicialmente vacío, se utiliza para recoger el volumen de
líquido que fluye del recipiente 1 y, representa los emuntorios. El recipiente 3 es
de funcionamiento y se utiliza para que el sistema represente al modelo
monocompartimental tras una administració n extravasal.

Fundamento matemático
Considérese el recipiente 2 que contiene una solució n de fá rmaco de
concentració n conocida. Se hace penetrar en el recipiente 2 (lugar de absorció n),
un disolvente procedente del recipiente 3 mediante una bomba de infusió n de
acuerdo con un flujo constante, θ, con lo que se diluye continuamente la solució n
de fá rmaco contenida en el recipiente 2. Obviamente, la solució n de fá rmaco
contenida en el recipiente 2 saldrá del mismo, es decir, se incorporará al
recipiente 1 (organismo) a la misma velocidad constante, equivalente al flujo θ,
debido a que el recipiente 1 (organismo) contiene un volumen fijo.

La cantidad de medicamento que sale del recipiente 2, que equivale a la que

entra al recipiente 1 (organismo), viene dada por el producto de volumen de
líquido que sale por unidad de tiempo por la concentració n de fá rmaco en dicho
líquido a cada tiempo considerado, es decir:

d Q2
=−C 2 θ (Ec .7)
dt

Esta misma consideració n puede hacerse para calcular la cantidad de fá rmaco

que sale del comportamiento 1 (organismo), es decir, la eliminació n del fá rmaco:

d Q1
=−C 1 θ (Ec . 8)
dt

De acuerdo con el razonamiento expuesto en el fundamento matemá tico descrito

en la prá ctica numero 5, a partir de la ecuació n 7 y 8, se obtienen las siguientes
expresiones:
d C2
=−k a C 2 (Ec . 9)
dt

d C1
=−k C 1(Ec .10)
dt
En el modelo físico estudiado, la variació n de concentració n de fá rmaco en
funció n del tiempo en el recipiente 1 (organismo), vendrá representada por una
entrada de fá rmaco del recipiente 2 (lugar de absorció n) y una salida de fá rmaco
del recipiente 1 (eliminació n).

Al ser los dos procesos de primer orden, las velocidades de los mismos vienen
regidas por las ecuaciones 9 y 10, y el proceso global, por la siguiente expresió n:

d C1
=k a C 2−k C1 (Ec .11)
dt
que equivale a la ecuació n 1.

Tomando como base la ecuació n 11, representativa del modelo farmacocinético

que se estudia en esta practica, puede desarrollarse el mismo razonamiento
farmacocinético expuesto anteriormente y, a partir de los resultados
experimentales (concentració n/tiempo), calcular las constantes y parámetros
del fá rmaco.
3. Material y método

Material
Jeringa de 5 ml.
2 vasos de precipitados de 1 l.
Kitasato de 250 ml.
Kitasato de 1 L.
Bomba peristá ltica de flujo continú o Dinko.
3 agitadores magnéticos
3 barras agitadoras.
Tubos de silicona apropiados para conexiones.
2 Soportes de porespan para nivelar el sistema hidrodiná mico.
Espectrofotó metro/colorímetro.
Cubetas para lectura ó ptica.
Gradillas con tubos de plá stico.
Cronó metro.
Frasco lavador de agua destilada.
Pipetas de 2 y 5 ml.
Vaso de precipitados de 50 ml.
Rotulador de vidrio.
Frasco detergente
Escobilló n.
Pipetas Pasteur.
Vó rtex.
Ordenador para el tratamiento de datos.

Soluciones
A: solució n alcalina de rojo fenol para la administració n del fá rmaco (2 mg/ml).
B: solució n alcalina de rojo fenol (patró n de 20 μg/ml) para preparar la curva de
calibrado.
C: solució n de hidró xido só dico 0.1 N.

Metodología
Comprobar que el espectofotó metro/fotocolorímetro se halla en
funcionamiento, ajustando el blanco con solució n NaOH 0.1 N.
Ajustar el espectofotó metro/colorímetro a cero con NaOH 0.1 N.
Llenar el recipiente 3 con 2 litros de NaOH 0.1 N.
Llenar el recipiente 2 con 250 ml de NaOH 0.1N y añ adir un nú cleo
magnético.
Llenar el recipiente 1 con 1000 ml de NaOH 0.1 N y añ adir un nú cleo
magnético.
Cebar la bomba hasta que gotee líquido en el recipiente 4 y pararla.
Retirar 1.5 ml de NaOH del recipiente 2.
Añ adir 1.5 ml de solució n de rojo fenol de 2 mg/ml.
Poner en marcha la bomba y el cronó metro.
 Tomar muestras del recipiente 1 (organismo) a los tiempos consignados
en la Tabla 3.
Tomar muestras del recipiente 2 (lugar de absorció n) a los tiempos
indicados en la Tabla 2.
Transcurridos 75 minutos, parar la bomba y limpiar cuidadosamente los
tubos de conexió n.
Apagar el sistema y limpiar escrupulosamente todo el material utilizado.

Preparación de la recta de calibrado:

Rotular los tubos de acuerdo con las concentraciones indicadas en la tabla 1.

Solución de 20 μg/ml. Tomar, mediante pipeta, 4 ml de la solució n patron
(solució n B, de 20 μg/ml) e introducirlos el tubo correspondiente (tubo 1).
Añ adir a cada uno de los tubos restantes 2 ml de la solució n C.
Solución de 10 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 1 e introducirlos en el
tubo 2. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 5 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 2 e introducirlos en el
tubo 3. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 2.5 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 3 e introducirlos en el
tubo 4. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 1.25 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 4 e introducirlos en el
tubo 5. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 0.63 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 5 e introducirlos en el
tubo 6. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 0.31 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 6 e introducirlos en el
tubo 7. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Solución de 0.16 μg/ml. Tomar 2 ml de la solució n del tubo 7 e introducirlos en el
tubo 8. Agitar cuidadosamente en vó rtex.
Determinar la absorbancia correspondiente de las soluciones contenidas en cada
uno de los tubos preparados y anotar los valores en la libreta (Tabla 1).

ATENCIÓN: Dejar todo el material escrupulosamente limpio.

4. Resultados:

4.1. Curva de calibrado:

Representar grá ficamente los valores de las absorbancias (variable dependiente)

frente a las concentraciones teó ricas (variable independiente).

Despreciados los valores de absorbancias mayores que 2 y menores que 0.1,

calcular la ecuació n de la recta de calibració n y calcular el error relativo (Er%)
de la técnica analítica asociado a cada concentració n. En el caso de obtener
errores porcentuales mayores del 10%, despreciar ese nivel de concentració n y
volver a recalcular la recta.

Complementar la Tabla 1.
 Tabla 1. Curva de calibrado

Concentración
Tub Absorbancia Concentración % error
teórica (μg/ml)
o no. (Y) estimada (μg/ml) relativo
(X)
1 20
2 10
3 5
4 2.5
5 1.25
6 0.63
7 0.31
8 0.16
Ecuació n representativa:
Abs=

4.2 Cálculo de parámetros farmacocinéticos a partir de concentraciones

plasmáticas.

Tabla 3. Aplicació n del método de los residuales.

Concentració Residuales
Tiempo Concentración
Absorbancia n extrapolada Cexp –Cextr Ecuaciones
(min) (µg/mL)
(µg/mL) (µg/mL)
1 A=A0e-kat
lnA=
3
-kat+lnA0
5
7
9
11
15
19
23
25 C=C0e-kt
30 lnC=
35 -kt+lnC0
40
50
60
75
Estimación de parámetros
Ordenador
Gráfica Calculadora
(Valor +- E.E.)
k (min-1)
t1/2 ap (min)
C0 (µg/mL)
Ka (min-1)
t1/2 abs (min)
A0 (µg/mL)
AUC (µg/mL min)

∞ C0 A0
AU C 0 = −
k ka
4.2 Cálculo a partir de las concentraciones en el “lugar de absorción”

A) Estimació n de la constante de absorció n por métodos directos

Tabla 2. Concentració n de fá rmaco en el lugar de absorció n

Tiempo (min) Absorbancia Concentración
(µg/mL)
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
34
36
38
Estimación de parámetros
Gráfica Calculadora
ka (min-1)
t1/2 (min)

- Gráfica de recta de calibrado

- Gráfica de absorción

- Gráfica de concentraciones plasmáticas

Conclusiones: