AÑO 2022

TRABAJO PRÁCTICO Nº 6
FISIOLOGÍA DEL MEDIO INTERNO: CONCENTRACIÓN Y DILUCIÓN DE LA
ORINA Y PH
1. Objetivos

-Comprender los fundamentos de una prueba de sobrecarga funcional renal y describir el

esquema experimental.
-Interpretar las modificaciones observadas (densidad, volumen y pH) en la orinadespuésde
realizadas las distintas pruebas de sobrecarga.
- Comprender el concepto de osmolaridad.
- Conocer los mecanismos homeostáticos que regulan la osmolaridad y volumen del medio
interno.
-Reconocer la importancia clínica de los cambios de volumen (expansión o contracción) y/
u osmolaridad (hipo, hiper o isosmótico) del medio interno y los mecanismos involucrados
en su regulación.
-Reconocer las diferencias de las capacidades amortiguadoras de sistemas buffers abiertos
y cerrados.

Conocimientos necesarios
- Concepto de osmolaridad.
- Descripción anatómica del nefrón.
- Mecanismos de concentración y dilución de la orina. Hormonas involucradas en su
regulación: hormona antidiurética y péptido natriurético auricular (PNA).
- Concepto de pH. Ácidos y bases fuertes o débiles.
- Sistemas amortiguadores o buffers. Ecuación de Henderson Hasselbach.
- Buffers abiertos y cerrados.

Bibliografía recomendada
Boron y Boulpaep, Fisiología Médica, 3ra edición.
Cingolani, Houssay y colaboradores, Fisiología Humana de Houssay, 7ma edición.
Constanzo. Fisiología Humana, 4ta edición.

A. Pruebas de sobrecarga
Se estudiarán los mecanismos implicados en la regulación de la osmolaridad y el volumen de los
líquidos corporales evaluando la respuesta renal a distintas sobrecargas. Los cambios de
volumen y de osmolaridad son sensados por mecanorreceptores y osmorreceptores,
respectivamente, los cuales a través de una respuesta neurohumoral modifican la funciónrenal
y la orina producida (Figura 1).

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Figura 1. Los cambios de volumen y de osmolaridad del LEC son sensados por mecanor receptores y
osmorreceptores, respectivamente, los cuales a través de una respuesta neurohumoral modifican la
función renal y la orina producida.

Además, el riñón, junto con el sistema respiratorio y los sistemas amortiguadores (buffers)
abiertos y cerrados, desempeñan un papel muy importante en la regulación del pH plasmático
para que éste se mantenga en un rango estrecho (7,35 - 7,45) de valores fisiológicos.

Parte práctica:
Material necesario
3 envases aforados.
3 vasos de precipitado de 250 ml.
3 vasos para beber
1 probeta de 50 ml.
1 probeta de 500 ml.
1 densímetro de orina.
Solución de cloruro de sodio (NaCl) 150 g/L (15%).
Solución de bicarbonato de sodio (NaHCO 3) 50 g/L (5%).

Desarrollo práctico
Para el desarrollo de la parte práctica intervendrán 3 estudiantes voluntarios quienes deberán
vaciar completamente su vejiga (recolectando la orina) antes de la ingesta de cada solución. La
orina recogida será denominada: orina de tiempo cero.
Luego deberán beber la totalidad de las diferentes soluciones en el menor tiempo posible (10
min) como se detalla a continuación:
-Estudiante nº1: 750 ml de agua.
-Estudiante nº2: 750 ml de una solución de NaCI (PM: 58) al 0,9% (para prepararla colocar 45 ml
de la solución de NaCl 15% y agregar H2O hasta 750 ml).
-Estudiante nº3: 300 ml de una solución de NaHCO 3 (PM: 86) al 2,5% (colocar 150 ml de la
solución de NaHCO3 5% y agregar H2O hasta 300 ml).
Después de la ingesta se recogerán muestras de orina, cada 30 minutos hasta obtener un total
de 5 muestras, además de la del tiempo “0”.

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No debe olvidarse de comenzar a registrar el tiempo luego de finalizar con la ingesta de cada
solución y entre cada una de las tomas de muestras. En la Figura 2 se resume el procedimiento
del trabajo práctico.

Figura 2. Procedimiento experimental

durante el trabajo práctico.

Calcular las osmolaridades de las soluciones ingeridas.

- Osmolaridad del agua
……………………………………………………………………………………………………………………..
- Osmolaridad de la solución de NaCl al 0,9%
…………… …………………………………………………………………………………………………………
- Osmolaridad de la solución de NaHCO 3 al 2,5%
…………… ………………………………………………………………………………………………………..
Comparando con la osmolaridad plasmática, las soluciones ingeridas fueron:
Estudiante nº1: ………………………………………….......................................................
Estudiante nº2: ……………………………………………....................................................
Estudiante nº3: ….…………………………………………………............................................

Determinaciones. En cada muestra de orina se determinarán:

Volumen
Se vuelca cada muestra de orina en una probeta graduada y se realiza la lectura.
Densidad
Se realiza con un densímetro calibrado entre densidades de 1.000 y 1.060.
La determinación de densidades de los líquidos mediante densímetros, se basa en la medición
del volumen sumergido cuando el cuerpo flota libremente, en cuyo caso se ha equilibrado el
peso del cuerpo con el empuje que sufre. El densímetro consta de un bulbo y una varilla en la
cual se encuentra la escala y puede leerse directamente la densidad del líquido. El valormínimo
de la escala se encuentra en el extremo superior de la varilla.
Técnica:
Llenar una probeta de 50 ml hasta 2 ó 3 ml por debajo del borde superior y colocar el densímetro
lentamente haciéndolo girar. (Al colocar la orina en la probeta, cuidar que la misma escurra por
las paredes para evitar la formación de espuma). El densímetro no debe tocar ni el fondo ni las
paredes de la probeta. La densidad de la orina corresponde a la división de la escala que coincide

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con la superficie libre del líquido. Después de cada medición, lavar la probeta con cuidado y el
densímetro. Si en alguna de las muestras el volumen de orina no alcanzara para medir la
densidad, se realizará la siguiente operación:
Medir el volumen de orina, separar 2 o 3 ml de orina para el resto de las determinacionesyluego
agregar agua destilada hasta alcanzar el volumen adecuado para poder utilizar el densímetro.
Determinar la densidad de la muestra y averiguar la densidad original de la orina mediante la
siguiente relación:
Do: Densidad de orina
Vm: Volumen de mezcla
Dm: Densidad de mezcla
Va: Volumen de agua agregado
Da: Densidad de agua=1000 gr/L
Vo: Volumen de orina
pH de orina
El valor de pH se medirá utilizando un pH-metro por el método potenciométrico. Se trata de un
instrumento que mide la diferencia de potencial eléctrico generado entre dos electrodos. En
uno de los electrodos hay una membrana de vidrio que separa una solución interna de KCl de la
solución del vaso. El potencial eléctrico generado en la membrana depende de la diferencia
entre el pH de la solución interna y la del vaso. El electrodo se conecta a un puente de alta
impedancia y éste a un equipo de adquisición de datos (Powerlab) asociado a una computadora.
Antes de medir el pH de la orina, el instrumento debe calibrarse con soluciones de pH conocido,
esto permitirá transformar la señal eléctrica registrada en unidades de pH.

Resultados:
En las siguientes tablas anote los resultados obtenidos en las determinaciones realizadas enlas
muestras de orina de cada alumno.

Estudiante nº 1 que ingirió el H2O.

Volumen
Muestra N° Volumen Total Densidad pH
Minuto
(vol/min)
tiempo “0”

1 (30 min)

2 (60 min)

3 (90 min)

4 (120 min)

Estudiante nº 2 que ingirió solución de NaCl

Muestra N° Volumen Total Volumen Densidad pH
Minuto
(vol/min)
tiempo “0”

1 (30 min)

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2 (60 min)

3 (90 min)

4 (120 min)

Estudiante nº 3: ingirió solución de NaHCO3

Muestra N° Volumen Total Volumen Densidad pH
Minuto
(vol/min)
tiempo “0”

1 (30 min)

2 (60 min)

3 (90 min)

4 (120 min)

Grafique la diuresis (volumen minuto) obtenida en cada una de las pruebas de sobrecarga en
función del tiempo y discuta lo observado.

Grafique la densidad de las muestras de orina obtenidas en las distintas pruebas en función del
tiempo y discuta lo observado.

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Explique las lecturas observadas en el pH de cada una de las muestras de orina luego de la
ingesta de cada solución.
¿Cuáles son los mecanismos neurohumorales implicados en cada situación?

Complete el cuadro.
En el cuadro se describen alteraciones clínicas frecuentes que pueden ocurrir en los fluidos
corporales debido a cambios en el volumen del compartimiento extracelular y/o en la
osmolaridad del mismo. Complete el cuadro indicando que ocurrirá con la osmolaridad (OsM) y
el volumen de los fluidos extra (LEC) e intracelular (LIC) en cada una de las condiciones
ejemplificadas. Utilice: ↓ indicando disminución, ↑ indicando aumento y ↔ i ndicandoque no
existe variación.

Condición Ejemplo LEC LIC

Vol OsM Vol OsM
Expansión Ingesta excesiva de agua
hiposmótica
Expansión Ingesta de comida muy
hiperosmótica salada
Expansión Hidratación parenteral con
isósmótica solución fisiológica
Contracción Hemorragia
isosmótica Diarrea isosmótica
Contracción Sudoración excesiva
hiperosmótica
Contracción Pérdida de sales por el riñón
hiposmótica (por ej. Insuf. suprarrenal)

B. Sistemas amortiguadores

Cargue los tubos de ensayo con las siguientes soluciones según la Figura 3:
1) 10 ml de agua de la canilla + dos gotas de azul de bromotimol (A y B).
2) 10 ml de NaHCO3 12,5 mM + dos gotas de azul de bromotimol (C y D).
3) 10 ml de NaHCO3 12,5 mM + 0,5 ml de HCl 0,1 M + dos gotas de azul de bromotimol (E y F).
Con una pipeta Pasteur burbujee aire alveolar en los tubos B, D y F.

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Complete los pH de la Figura 3 teniendo en cuenta la escala colorimétrica.

- ¿A qué se debe el cambio de pH en los tubos sin burbujeo (A, C y E)?
- Compare las diferencias observadas por el burbujeo entre cada par de tubos (A y B, C y D, E
y F).
- ¿Qué reacción química ocurrirá en cada tubo?

Figura 3. Diseño experimental para evaluar el a mortiguador abierto: CO 2 /HCO 3 -