Informe espectrofotometría

RESUMEN:

Introducción: La espectrofotometría es un método de medición de la cantidad de luz absorbida

por una sustancia química que utiliza la ley de Beer-Lambert para medir la intensidad de la luz
emitida cuando un haz de luz atraviesa una solución. La espectrofotometría también puede
utilizarse para determinar la concentración de un compuesto en solución. La espectrofotometría se
caracteriza por una gran sensibilidad y precisión. Esta técnica se basa en la absorción de radiación
electromagnética por las moléculas y requiere el uso de un "espectrofotómetro" para seleccionar
la longitud de onda de la luz que atraviesa la solución. Objetivo: Comprender los principales
conceptos y características de la espectrofotometría y sus aplicaciones en bioquímica, y ser capaz
de realizar las mediciones necesarias y evaluar la exactitud de los métodos espectrofotométricos
mediante los cálculos adecuados. Materiales y métodos: Tubos de ensayo, pipeta aforada de 10
ml, balón aforado de 10 ml, pipetas graduadas de 1, 2, 5 y 10 ml, pipeteadores, gradilla, celdas, un
espectrofotómetro, colorantes anaranjados de metilo en 10 ppm y agua destilada. Conclusión: El
espectrofotómetro es una herramienta muy importante en el laboratorio, ya que se utiliza para
determinar la absorción de un haz de luz por una sustancia en una cubeta. Con ayuda de cálculos,
es posible demostrar la ley de Beer-Lambert, ya que existe una relación positiva entre la cantidad
de luz absorbida por una sustancia y su concentración. Palabras clave: Espectrofotómetro,
pipetas, aforo, calculo, ondas de luz, medición. Abstract: Introduction: Spectrophotometry is a
method of measuring the amount of light absorbed by a chemical substance that uses the Beer-
Lambert law to measure the intensity of light emitted when a beam of light passes through a
solution. Spectrophotometry can also be used to determine the concentration of a compound in
solution. Spectrophotometry is characterized by high sensitivity and precision. This technique is
based on the absorption of electromagnetic radiation by molecules and requires the use of a
"spectrophotometer" to select the wavelength of light passing through the solution. Objective: To
understand the main concepts and characteristics of spectrophotometry and its applications in
biochemistry, and to be able to perform the necessary measurements and evaluate the accuracy of
spectrophotometric methods by appropriate calculations. Materials and methods: Test tubes, 10
ml volumetric pipette, 10 ml volumetric balloon, 1, 2, 5 and 10 ml graduated pipettes, pipettors,
pipette rack, cells, a spectrophotometer, methyl orange dyes at 10 ppm and distilled wáter

INTRODUCCION:

La absorción es la cantidad de luz absorbida por una solución y se denota con la letra A. Existe una
relación proporcional entre la absorción, es decir, cuanta más luz se absorbe, más absorbe el
cuerpo. También existe una relación inversa, es decir, cuanto menor es la cantidad de luz
transmitida por el cuerpo en las condiciones anteriores.
Metodología:

Estando en el laboratorio se realizó la práctica de “Espectrofotometría” teniendo en cuenta los

siguientes pasos:

Primer Paso.

Se tomó un tubo de ensayo y se llenó de anaranjado de metilo, luego se extrajo del mismo tubo 1
ml del colorante y se introdujo en un balón aforado de 10 ml.

Posteriormente se tomó otro tubo de ensayo y se llenó de agua destilada.

Seguidamente, se marcaron cinco tubos con cinta de enmascarar con la serie (1,2,3,4,5)
respectivamente.

Luego, haciendo uso de un pipeteador, se extrajo 1 ml de tubo que contenía el anaranjado de

metilo se envaso al balón aforado y con el agua destilada tomada con anterioridad se llenó ese
mismo balón hasta el aforo; terminada la mezcla de (Anaranjado de metilo y el agua destilada), se
introdujo esta mezcla al tubo de ensayo número uno.

Segundo Paso.

Posteriormente, haciendo uso de un pipeteador, se extrajo 2 ml de tubo que contenía el

anaranjado de metilo, se envaso al balón aforado y con el agua destilada tomada con anterioridad,
se llenó ese mismo balón hasta el aforo; terminada la mezcla de (Anaranjado de metilo y el agua
destilada), se introdujo esta mezcla al tubo de ensayo número 2.

Tercer Paso.

Después, haciendo uso de un pipeteador, se extrajo 3 ml de tubo que contenía el anaranjado de

metilo, se envaso al balón aforado y con el agua destilada tomada con anterioridad, se llenó ese
mismo balón hasta el aforo; terminada la mezcla de (Anaranjado de metilo y el agua destilada), se
introdujo esta mezcla al tubo de ensayo número 3.

Cuarto Paso.

A continuación, haciendo uso de un pipeteador, se extrajo 4 ml de tubo que contenía el anaranjado

de metilo, se envaso al balón aforado y con el agua destilada tomada con anterioridad, se llenó ese
mismo balón hasta el aforo; terminada la mezcla de (Anaranjado de metilo y el agua destilada), se
introdujo esta mezcla al tubo de ensayo número 4.

Quinto Paso.

Seguidamente, haciendo uso de un pipeteador, se extrajo 5 ml de tubo que contenía el anaranjado

de metilo, se envaso al balón aforado y con el agua destilada tomada con anterioridad, se llenó ese
mismo balón hasta el aforo; terminada la mezcla de (Anaranjado de metilo y el agua destilada), se
introdujo esta mezcla al tubo de ensayo número 5.

Terminado estos pasos, se procedió a encender el espectrómetro; luego se tomó dos celdas, una
de ellas fue llenada de agua destilada hasta la ventana de lectura y posteriormente se llenó la
segunda celda de anaranjado de metilo hasta la ventana de lectura y se introdujo la celda al
espectrómetro como se hizo con el agua destilada.