DEPARTAMENTO CIENCIAS DE LA VIDA Y AGRICULTURA

CARRERA DE INGENIERA AGROPECUARIA

SANTO DOMINGO

Asignatura: Microbiologa

Nivel: Tercero B

Docente: Ing. Gustavo Nez J. M.Sc

Prctica: N 3

Fecha realizacin: Mircoles, 10 de Mayo del 2017

Grupo: Grupo 3

Tema: Aislamiento de microorganismos del ambiente

suelo, agua, aire.

Integrantes Juan Jaramillo, Jorge Palma

Perodo
Abril Agosto 2017
I. INTRODUCCION

Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseado diversos mtodos

que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales, en los que es posible cultivarlos
bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de microorganismo. Una de
las tcnicas ms usadas en el laboratorio de microbiologa consiste en transferir una
muestra microbiolgica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que
permite obtener cultivos microbianos. A l efectuar este procedimiento, es necesario
considerar que en el rea de trabajo, existen muchos otros microorganismos; debido a
esto, es necesario tomar precauciones para impedir que stos penetren y contaminen
los cultivos en estudio. Por otra parte, para considerar no slo el aspecto nutricional,
sino tambin las condiciones ambientales de su hbitat natural, por lo que en el medio
de cultivo se debe ajustar el pH y concentracin de sales y durante la incubacin
condiciones tales como la temperatura, aireacin, la luminosidad. La aplicacin de
estos procedimientos ha permitido propagar a los microorganismos en cultivos mixtos,
as como su aislamiento y la obtencin de cultivos puros, facilitando de este modo, el
estudio, caracterizacin, aplicacin y control de los mismos. La forma de sembrarlos
y cultivarlos depende del tipo de microorganismo y propsito especfico del estudio
(Aguilar, 2017).

La manipulacin de los microorganismos requiere de tcnicas especiales, no slo por

su tamao microscpico, sino porque es necesario evitar la contaminacin de los
cultivos por grmenes indeseables e impedir el traslado de grmenes patgenos desde
los cultivos al medio ambiente. Para una correcta manipulacin de los
microorganismos es necesario trabajar con instrumentos estriles sobre medios de
cultivo estriles. Para estudiar un microorganismo determinado, es necesario destruir
todos los dems que pudieran encontrarse en el medio y en los instrumentos de trabajo.
(Albanesi, Ada et al, 2014)

El cultivo de microorganismos es una actividad que requiere del conocimiento de

tcnicas de siembra o inoculacin y de aislamiento para transferirlos de un medio a
otro, o mantener su crecimiento y actividad. Es indispensable para realizar diversos
estudios morfolgicos, de identificacin, bioqumicos, de patogenicidad y ecolgicos,
entre otros (Aquihuatl, 2012).
 Existen diferentes tcnicas de siembra: por suspensin de la muestra en medios
lquidos; extensin de diluciones de un cultivo en superficie de medios en caja de Petri;
por estra en caja de Petri y tubos con medios solidificados en forma inclinada; por
piquete o picadura en tubos con medios slidos o semislidos. Con la aplicacin de
cada tcnica se obtiene informacin de importancia para el estudio bsico o aplicado
de los microorganismos de inters (Aquihuatl, 2012).

II. OBJETIVOS:

Objetivo General
Adiestrarse en las tcnicas de aislamiento y purificacin de microorganismos
comunes del ambiente suelo, agua, aire.

Objetivos especficos
Aprender a preparar muestras de suelo, plantas en los que se
encuentran microorganismos.
Instruirse en conocer cul es la tcnica y medio de cultivo para
obtencin de microorganismos.
III. REVISION DE LITERATURA

(Aquihuatl, 2012) Afirma que en la naturaleza, los microorganismos generalmente se

encuentran en poblaciones, formando parte de comunidades de gran complejidad, por
lo que uno de los objetivos de estudio ms importantes en microbiologa es aislarlos.
El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayora de
los casos, mediante la tcnica de estra cruzada para producir colonias aisladas en
cultivos slidos y as, obtener un cultivo puro o axnico, tambin conocido como cepa,
que contiene un solo tipo de microorganismo con la misma composicin gentica.

Cultivo

Segn (Aguilar, 2017) un cultivar un microorganismo significa promover

intencionalmente el desarrollo de ste en medios de cultivo y condiciones de
laboratorio controladas. La poblacin de microorganismos desarrollada en un medio
se denomina cultivo. Cuando ste contiene una sola especie de microorganismo, se
denomina cultivo puro o axnicos, cuando contiene ms de una especie de
microorganismos se denomina cultivo mixto.

(Albanesi, Ada et al, 2014) mencionan en trminos microbiolgicos es el proceso

mediante el cual se lleva una porcin de una poblacin de microorganismos (inculo)
a un medio nutritivo adecuado, elegido de acuerdo a las exigencias vitales del
microorganismo, de tal manera que permita su desarrollo y manipulacin, colocndolo
a una temperatura adecuada, y durante un tiempo conveniente.

Aislamiento

(Albanesi, Ada et al, 2014) Sealan que el aislamiento consiste en separar de una
poblacin heterognea (muestra de agua o leche, suspensin de suelo, etc.) al
microorganismo que se desea estudiar para obtenerlo al estado puro .En la naturaleza,
los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas de una gran variedad
de tipos diferentes entre s. Cuando se hacen cultivos de estos materiales (tierra, leche,
aire, materia fecal, alimentos, etc.) pueden desarrollar muchas especies de grmenes.
Este cultivo recibe el nombre de "cultivo mixto" .Cuando el cultivo solamente contiene
Una sola clase de microorganismos, es decir que pertenecen a una misma poblacin,
se obtiene un cultivo puro. Este tipo de cultivo se requiere para el estudio intensivo de
un microorganismo (morfologa, fisiologa, identificacin).Como en la naturaleza no
es corriente encontrar microorganismos de una sola especie si no mezcladas, y como
dos especies distintas que crecen juntas pueden dar reacciones muy diferentes de las
de cada una por separado, es necesario conocer como separarlas.

Segn (Aguilar, 2017) menciona tcnicas de siembra.

Tcnicas de siembra

Mtodo de siembra por estra en placa:

Es el mtodo ms fcil y el ms usado para obtener cultivos axnicos. Para
ello, con un asa de siembra se toma una muestra de la poblacin mixta y a
continuacin se hacen estras sobre la superficie de un medio slido preparado
en una placa Petri (a las placas Petri tambin se les denomina simplemente
placas). Conforme se van haciendo estras en zigzag con el asa, cada vez se
van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A
continuacin, se flamea el asa, se toca en la regin donde se han realizado las
ltimas estras y se contina la siembra con la misma tcnica, en la superficie
de medio sin sembrar an. Repitiendo este proceso varias veces se logra
separar clulas individuales. A continuacin, las placas se incuban en un lugar
adecuado, permitiendo que las clulas aisladas experimenten un nmero
suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia
posiblemente representa un clon derivado de una sola clula, no podemos
asegurarlo. Quizs, dos clulas quedaron depositadas tan juntas que han
originado una nica colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos
obtenido un cultivo axnico, conviene repetir el procedimiento a partir de una
colonia bien aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la
segunda vez, sern, casi con toda seguridad, cultivos axnicos.

Mtodos de vertido en placa y extensin en placa:

En estos mtodos, las suspensiones de clulas microbianas se diluyen antes de
su siembra en placa. Se siguen estas tcnicas cuando la muestra contiene tantos
microorganismos, que la dilucin no se puede realizar en una sola etapa. Por
ejemplo, una suspensin con mil millones de clulas por mililitro debe ser
diluida 10 veces para obtener una suspensin con un centenar de clulas por
mililitro, Por tanto, se realizan diluciones seriadas (en varias etapas),
normalmente de diez en diez, pero a veces de cien en cien.

Para realizar diluciones de diez en diez, se aade 1 ml de la suspensin

bacteriana a 9 ml (de medio estril o solucin salina, igualmente estril. Se
agita vigorosamente para diluir las clulas y el proceso se repite cuantas veces
sea necesario. A continuacin, se puede proceder de dos maneras diferentes.

En el mtodo de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar

fundido y se vierten en placa. Algunas colonias quedarn embebidas en el agar
y otras crecern en la superficie. Las colonias superficiales se extendern y
sern ms grandes.

En el segundo mtodo (extensin en placa), las muestras diluidas se siembran

directamente en la superficie de la placa de agar, extendindolas con ayuda de
un asa de Diralsky de cristal estril. La suspensin se absorbe en el agar,
dejando las clulas microbianas sobre la superficie. En ambas tcnicas las
placas se incuban hasta la aparicin de las colonias. Como en el mtodo de
siembra por estra, no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en
las placas sembradas por extensin o en el agar solidificado sembrado por el
mtodo del vertido en placas sean cultivos axnicos hasta que se repita el
proceso. Las dos tcnicas de siembra por dilucin presentan la ventaja de que
permiten obtener un mayor nmero de colonias aisladas que el mtodo de
siembra por estra, por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a
partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos. Para obtener un
cultivo axnico mediante este mtodo:

(a) Hacer diluciones seriadas de la suspensin bacteriana hasta obtener una

muestra con slo unos pocos cientos de bacterias-

(b) verter la muestra en un tubo con agar a sobrefusin, mezclar y verter el

contenido en una placa Petri.
 (c) Despus de la incubacin, se desarrollan colonias en el agar (ms pequeas)
y en su superficie (ms grandes).

Mtodo de aislamiento por siembra por estra en placa: Para obtener un cultivo
axnico:

(a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero.

(b) introducirla en la suspensin bacteriana para recoger una muestra.

(c) sembrar haciendo estras sobre la superficie de un medio slido en una placa
Petri, y

(d) volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer

un segundo grupo de estras en una regin nueva de la placa. Repetir el proceso
una tercera y una cuarta vez, hasta conseguir que los grupos de clulas se
diluyan y se separen clulas aisladas.

(e) Despus de la incubacin, se desarrollan colonias aisladas. Para estar

seguro de que el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una
colonia aislada y sembrar por estras una segunda placa.

Microorganismos de suelo

Segn el (INTA, 2015) menciona que los microorganismos del suelo contribuyen al
mantenimiento de la fertilidad qumica, fsica y biolgica del suelo. Transforman
nutrientes inorgnicos, que de otra forma no pueden ser absorbidos por la planta; adems
favorecen la descomposicin y mineralizacin de la materia orgnica.

(INTA, 2015) Afirma que en los suelos existen:

Bacterias: constituyen el grupo ms diverso de microorganismos del suelo, hay benficos

y fitopatgenos. Los actinomicetos pertenecen a este grupo.
Hongos: los hay de vida libre y otros como las micorrizas que viven en forma simbitica
en las races de plantas. Muchos hongos son importantes en los procesos de
descomposicin de la materia orgnica. Adems de los hongos benficos, tambin se
pueden aislar del suelo los hongos fitopatgenos. Las levaduras pertenecen a este grupo.

Protozoarios: requieren de oxgeno por lo cual se encuentran cerca de la superficie del

suelo. Se nutren de algas y bacterias del suelo.

Micro algas: se encuentran cerca de la superficie del suelo. Son fuente de nutrientes para
protozoarios, hongos, lombrices de tierra y nematodos.

IV. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos
- Estufa de incubacin
- Estufa de esterilizacin
- Cmara de flujo laminar
- Autoclave
- Cocineta elctrica
- Balanza

Materiales
- Pipetas volumtricas
- Probetas
- Vasos de precipitados
- Erlenmeyer
- Matraces
- Kit de diseccin
- Mechero de alcohol
- Cajas petri
- Tamizador
- Varilla de agitacin
 Reactivos e insumos
- Muestra de Tierra
- Alcohol antisptico
- PDA
- Metanol
- Etanol

V. PROCEDIMIENTO

VI. RESULTADOS

La siembra en cajas petri que nos permiti cultivar microorganismos gracias a que
contiene los nutrientes necesarios para su desarrollo.
Realizamos 2 tcnicas para sembrado de cultivo en el cual obtuvimos dos cajas con
cultivos de tipos de tcnicas de siembra disolucin y granular las cuales en 96 horas se
obtuvo cultivos de hongos.

VII. CONCLUSIONES

VIII. RECOMENDACIONES

Al momento de tomar muestras buscar elementos que contengan los

microorganismos a aislar.

Al realizar el procedimiento de preparacin y siembra el medio de cultivo

dentro de la caja petri hacerlo de la manera delicada y evitar hablar lo
 menos posible, para evitar cualquier tipo de contaminacin caso contrario
las muestras sern afectadas y menos efectivas en su siembra.

IX. BIBLIOGRAFA

Aguilar, G. (26 de 08 de 2017). Recuperado el 15 de 05 de 2017, de

https://conalepfelixtovar.wordpress.com/2012/09/26/tecnicas-y-metodos-de-
aislamiento-y-seleccion-de-microorganismos/
Albanesi, Ada et al. (2014). Recuperado el 15 de 05 de 2017, de
file:///C:/Users/Maria%20Elisa/Downloads/925709628.Serie%20Did%C3%A1ctica%20y
%20Actividades%203_Siembra%20y%20aislamiento%20de%20microorganismos_2014.
pdf
Aquihuatl, M. e. (2012). Recuperado el 15 de 05 de 2017, de
http://www.izt.uam.mx/ceu/publicaciones/MMBG/files/manual_microbiologia_gener
al.pdf

X. ANEXOS