UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE: CIENCIAS AGROPECUARIAS

CARRERA DE: Agronomía

NIVEL SEPTIMO

BIOTECNOLOGIA

DOCENTE: ING. JORGE DOBRONSKI Mg.

ESTUDIANTES: ROCIO CHISAG.

CESAR GUANGATAL

Aux. Lab.: Egda. Irina Ron

FECHA DE ENTREGA: 21 de diciembre de 2021

TEMA: Regeneración in vitro de órganos a partir de segmentos nodales de

arándanos en medio de cultivo & Conservación in vitro de germoplasma de arándano.

OCTUBRE 2021 – FEBRERO 2022

 I. INTRODUCCIÓN

El cultivo in vitro de plantas, significa cultivar plantas dentro de un frasco de vidrio en un

ambiente artificial,esta forma de cultivar las plantas tiene dos características fundamentales: la
asepsia que es ausencia de gérmenes y el control de los factores que afectan el crecimiento. El
avance alcanzado por las ciencias biológicas ha permitido en los últimos años el estudio detallado
de las plantas tanto a nivel celular como molecular, y en condiciones de laboratorio es posible
actualmente reproducir todos los factores que puedan incidir en el crecimiento y desarrollo de las
plantas. Haberlandt, un científico alemán, postuló a principios del siglo pasado que las plantas
eran capaces de reproducir su crecimiento a partir de células aisladas, originando la hipótesis de la
totipotencia celular en plantas. Sin embargo, este investigador no pudo demostrar en forma
práctica su hipótesis, debido a que la mayoría de los componentes complejos que integran los
medios de cultivo actuales todavía no habían sido descubiertos., en la década del 50 cuando se
determina la importancia del balance hormonal en las plantas, con el descubrimiento de las
hormonas vegetales más usadas en la actualidad (Chávez,2012).

Según Valdenegro (2007) refiere que la micro propagación o propagación clonal, es una de las
aplicaciones más generalizadas del cultivo in vitro, a través de la micropropagación, a partir de un
fragmento de una planta madre, se obtiene una descendencia uniforme, con plantas genéticamente
idénticas, denominadas clones. El explante más usado para los procesos de propagación in vitro
son las yemas vegetativas de las plantas. Los frascos que contienen las plantas se ubican en
estanterías con luz artificial dentro de la cámara de crecimiento, donde se fija la temperatura en
valores que oscilan entre los 21 y 23°C, además de controlar la cantidad de horas de luz. Por su
parte, el medio de cultivo se compone de una mezcla de sales minerales, vitaminas reguladoras de
crecimiento, azúcar, agua y agar. La composición del medio depende de la especie vegetal y de la
etapa del proceso de micro propagación

Según Álvarez (2012) manifiesta existen informes sobre propagación in vitro de arándano en
donde con 2 mgL-1 de 2- isopentil adenina. ,cabe destacar, que los genotipos reproducidos no son
aptos para el cultivo en las condiciones climáticas y no existen estudios para la micro propagación
de la variedad Biloxi considerada una de las mejores variedades, por la calidad de sus frutos y
porque sólo requiere de 400 horas frio, lo que le permite el desarrollo y producción en una amplia
variedad de climas y terrenos. El cultivo in vitro puede optimizar la obtención de clones de
arándano resistentes a factores bióticos y abióticos, y de elevada producción, en grandes
cantidades y en un tiempo menor.
 II. OBJETIVOS
 Comprender los conceptos teóricos básicos del cultivo de tejidos vegetal.
 Desarrollar competencias en el manejo de laboratorio para la aplicación de
protocolos de desinfección, preparación de medios de cultivo y siembra.
 Establecer y aplicar protocolos de propagación in vitro en especies vegetales de
interés agrícola y ambiental.

III. EQUIPOS Y MATERIALES

1. Frascos
2. Papel aluminio
3. Ligas
4. Vasos de precipitación
5. Solución liquida para el medio de cultivo
6. Cajas Petri
7. Mechero
8. Cámara de flujo laminar
9. Alcohol
10. segmentos nodales y hojas de arándano
11. Navaja
12. Pinzas
13. Hipoclorito de sodio al 3%

IV. METODOLOGÍA
1. Desinfectarse antes de ingresar a la cámara de flujo laminar.
2. Dosificar la solución del medio de cultivo en cajas Petri y en frascos ya
esterilizados.
3. Esperar su gelificación.
4. Cortar en cuadrados pequeños las hojas más jóvenes de la planta de arándano.
 5. Sumergir en agua destilada con 2 gotas de tuin.
6. Y luego pasar las hojas en hipoclorito al 3% por 5 min.
7. Insertar los nódulos y las partes de las hojas en los frascos y en cajas Petri
respectivamente.
8. Llevar al área de incubación.
V. RESULTADOS

 Lo primero que debemos hacer es realizar un lavado de

la muestra vegetal a ser sembrado in vitro

 Lo primero para realizar la práctica de siembra in

vitro es tener todos los materiales esterilizados como
el agua, pinzas etc.

 Luego de eso con un bisturí procedemos a corta las

hojas para luego pasar por un triple lavado
 Se realiza un triple lavado y se sumerge en hipoclorito de sodio por 5 minutos

 Luego del triple lavado y el reposo en hipoclorito de sodio con el

bisturí se procede a cortar las hojas en diferentes partes
dependiendo del tamaño de la hoja

 Se procede a sembrar dentro del agar nutritivo cuatro

partes de la hoja de arándano, después de esto de pasa
una y otra vez por el mechero con el fin de no
contaminar con ningún microrganismo.

 Luego se procede pasar por el mechero para sellar

con la cinta para que no entre microorganismos o
cualquier agente que pueda contaminar.
  Se procede de igual manera a sembrar el tallo dentro de la botella con el agar
nutritivo, después de esto de pasa una y otra vez por el mechero con el fin de no
contaminar.

 Luego de ser sellado con el papel aluminio en la botella

se procede a llevar al área de crecimiento.

VI. DISCUSIÓN

El cultivo de tejidos, como técnica, consiste esencialmente en aislar una porción de la

planta (explante) y proporcionar artificialmente las condiciones físicas y químicas
apropiadas para que las células expresen su potencial intrínseco o inducido. Es necesario
además adoptar procedimientos de asepsia para, mantener los cultivos libres de
contaminación microbiana.

El cultivo in vitro de nos ayuda a la regeneración de órganos a partir de segmentos

nodales de arándanos en medio de cultivo y además de la conservación in vitro de
germoplasma de arándano.

 El laboratorio de cultivo de tejidos debe disponer de un área destinada al

establecimiento, crecimiento y multiplicación de las plantas producidas; esta área
es especialmente necesaria en los laboratorios de investigación y desarrollo y en
los de producción comercial. Aquellos laboratorios que se dedican a la producción
y distribución de materiales de sanidad certificada, por ejemplo, deben incluir
además facilidades para la cuarentena y para la evaluación fitosanitaria.
  Ciertamente en el laboratorio de biotecnología de la Universidad Técnica de
Ambato equipos y materiales de tecnología media para la realización de
investigación y practicas estudiantiles

VII. CONCLUSIONES

. se pudo entender que el cultivo de tejidos vegetales se define como un conjunto

muy heterogéneo de técnicas que presentan en común el hecho de que una parte
separada del vegetal, tales como protoplastos, células, tejidos u órganos se cultiva
asépticamente en un medio artificial de composición química definida y se
incuba en condiciones ambientales controladas. Cada fragmento origina una
planta idéntica a la que se le tomó el fragmento, aunque puede ser modificada
genéticamente para tener variedades artificiales.

. Las técnicas pueden ser utilizadas en vegetales como herramientas para

micropropagación, propagación rápida de clones, eliminación de virus y
enfermedades, producción de haploides, aislamiento y utilización de
protoplastos, cultivo de embriones, producción de fitoquímicos, etc. Siempre y
cuando la propagación se de en condiciones de desinfección adecuada.

Mediante la practica en el laboratorio se pudo realizar la eegeneración in vitro

de órganos a partir de segmentos nodales de arándanos en medio de cultivo y
también se ha hecho la conservación in vitro de germoplasma del mismo.

VIII. RECOMENDACIONES
. Antes de ingresar a la camara de flujo laminar es muy importante
desinfectarse para así evitar la contaminación del trabajo a realizar.
. En lo posible tratar de que solo una persona manipule la propagación.
Todos los instrumentos a utilizar deben estar correctamente esterilizados.
IX. CUESTIONARIO

¿A qué se conoce cómo cultivo in vitro?

Un cultivo in vitro de plantas, significa cultivar plantas dentro de un frasco de vidrio en un
ambiente artificial. Esta forma de cultivar las plantas tiene dos características fundamentales: la
asepsia (ausencia de gérmenes, etc), y el control de los factores que afectan el
crecimiento(Chávez,2012).

¿Qué son segmentos nodales?

La propagación clonal o vegetativa de segmentos nodales es una producción a partir de

partes vegetativas. Se utilizan tejidos vegetales que conserven la potencialidad de
multiplicación y diferenciación celular para generar nuevos tallos y raíces a partir de
cúmulos celulares presentes en diversos órganos (Basail, 2001).

¿En qué consiste la conservación in vitro?

La conservación in vitro constituye parte esencial de la estrategia general para

la conservación y el intercambio de recursos fitogenéticos a nivel mundial. La misma
ofrece la posibilidad de almacenar un elevado número y variedad de muestras en un
área reducida y facilita el acceso a ellas para su evaluación (Buerhing,2003).

¿Qué es un germoplasma?

El germoplasma es el conjunto de genes que se transmite por la reproducción a la descendencia

por medio de gametos o células reproductoras. El concepto de germoplasma se utiliza
comúnmente para designar a la diversidad genética de las especies vegetales, silvestres y
cultivadas, de interés para la agricultura y, en ese caso, se asimila al concepto de recurso genético
(Engels,2003). 
 X. BIBLIOGRAFÍA

BIBLIOGRAFIA

Valdenegro, E. (2007). Plan de negocios para empresa productora y comercialización de

arándano. Universidad de Chile.

Chávez, M, de Feria M (2012)  Aspectos básicos de la propagación in vitro por

organogénesis del género Pinus. Biotecnología vegetal 12(3): 131 _ 142

Álvarez, A (2012) La biotecnología vegetal: ¿Una alternativa para el

enfrentamiento a los impactos del cambio climático en Cuba? Biotecnología
vegetal 12(4): 195 _ 201

Basail, M. 2001. Propagación de la yuca (Manihot esculenta, Crantz), en sistema de

inmersión temporal. Tesis para optar por el grado de Ingeniero Agrónomo. Instituto
de Investigaciones de Viandas Tropicales.
Buerhing, G (2003) Cryopreservation studies in Carica papaya. Effect of some cryoprotectants on
regrowth and somatic embryogenesis in sunrise sola papaya. In Vitro Cellular and Developmental
Biology 39:54-A.Recuperado de https://revista.ibp.co.cu/index.php/BV/article/view/359/727
Engels, J.M.M. and L. Visser, editors. (2003). A Guide to Effective Management of
Germplasm Collections. CABI, IFPRI, IPGRI, SGRP. Archivado desde el original el 25 de
mayo de 2007. Consultado el 21 de diciembre del 2021. 174 p.