UNIVERSIDAD DE

GUADALAJARA
CENTRO UNIVERSITARIO
DE CIENCIAS EXACTAS E
INGENIERIAS

INTRODUCCIÓN A LA BIOINGENIERÍA
REPORTE DE PRÁCTICA
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
MARTINEZ RODRIGUEZ DANIEL
215771348
PROFESOR: GOMEZ ÁNGULO JORGE
HECTOR
04.10.2022
INTRODUCCIÓN
Un medio de cultivo es una preparación sólida o líquida empleada para cultivar,
transportar y almacenar microorganismos. Para ser efectivo, el medio debe contener
todos los nutrientes que el microorganismo necesita para multiplicarse. (Jawetz F,
Melnick C, Adelberg S)
Son ampliamente utilizado en los laboratorios para el desarrollo y crecimiento de los
microorganismos, ya que a partir de estos medios se crean las condiciones necesarias
para cada tipo de microorganismos, ya que no todos se les puede aplicar el mismo
método, se encuentran microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en
medios de laboratorio normales y otros muy exigentes que necesitan determinadas
sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.
Entre las características más importantes de los medios de cultivo son la temperatura
que dependiendo del tipo de cultivo es la temperatura ideal que se les debe proveer
para que crezcan de forma óptica, el ph como bien sabemos mide la acidez o
alcalinidad, muchos de los cultivos crecen mejor con un pH neutro, aunque hay otros
que requieren medios más ácidos, otra característica importante es que todos los
medios de cultivos deben ser completamente estériles para evitar que se pueda alterar,
cubrir o incluso impedir el crecimiento microbiano normal; la luz ambiental también es
base en los medios de cultivo ya deben estar ubicados donde no estén expuesto a luz
solar, es decir, la luz siempre debe ser controlad, las condiciones de humedad deben
ser las adecuadas tanto para el medio como para el ambiente donde se encuentra,
para muchos microorganismos se requiere un mínimo nivel de humedad.
El aislamiento de microorganismos es fundamental en el cultivo de estos mismos, ya
que en la naturaleza los microorganismos se encuentran usualmente como poblaciones
mixtas, por lo que es necesario tenerlos como cultivos puros por medio de
aislamientos, para así poder identificarlos y caracterizarlos. Por lo tanto, el aislamiento
lo definimos como la separación de un determinado microorganismo del resto de
microorganismos que le acompañan. El método más usual es la siembra por estría
sobre un medio de cultivo sólido adecuado dispuesto en una placa de Petri.
Los medios de cultivo son ampliamente usados en la microbiología clínica e industrial,
la primera se encarga de estudiar microorganismos relacionados con enfermedades,
agentes infecciosos o para controles epidemiológicos y la segunda, la microbiología
industrial, se encarga de estudiar y reproducir microorganismos para el proceso de
creación de diversos productos, como bebidas alcohólicas.
METODOLOGÍA
Medios de cultivos
La preparación de los medios de cultivo microbiológico es el proceso de mezcla de
nutrientes, agentes amortiguadores y agentes destinados al mantenimiento del
equilibrio osmótico, además de inhibidores o indicadores selectivos para crear un agar
o caldo que sustente el crecimiento y la diferenciación de los microorganismos.
La preparación de los medios de cultivo microbiológico es una tarea habitual en el
control regular de los microorganismos descomponedores y patógenos en las muestras
microbiológicas.
Los medios de cultivo microbiológico pueden prepararse según su estado físico, entre
los cuales encontramos el medio líquido, sólido y semisólido que describiremos a
continuación:
1. Medios Líquidos: se utilizan preferentemente para favorecer el desarrollo bacteriano
de células estresadas. En determinadas ocasiones no se pueden sustituir por los
medios sólidos, por ejemplo, en la síntesis de exotoxinas, pigmentos, enzimas, etc. -
Ejemplo: Agua peptonada, Caldo común, Caldo Cerebro Corazón, Caldo Saboureaud,
etc.
2. Medios Sólidos: se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación de
colonias sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfología de
las colonias, lo que no permiten los medios líquidos. Se diferencian porque tienen una
sustancia de sostén, que puede ser agar-agar. - Ejemplo: Agar Común, Agar SS, Agar
Cerebro Corazón, Agar Saboureaud, etc.
3. Medios Semisólidos: se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias. Tienen un
menor porcentaje de agar, por lo que no solidifican totalmente a la temperatura
ambiente. - Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM.

El medio de cultivo que se utiliza para la realización de esta práctica fue el medio
liquido ya que no hubo un tratamiento previo, solo se mezclo el agua con la muestra a
cultivar, que en este caso fue refresco (cocacola), hasta la completa disolución, que a
continuación describiremos los pasos que se llevaron a cabo para el cultivo y
aislamiento de microorganismos.

Características de la muestra de donde se aisló el M.O

Como se mencionó la muestra que se uso para esta práctica fue una bebida azucarada
gaseosa, mejor conocida como coca cola, el interés en aislar microorganismos en este
producto fue que las bebidas por su contenido en azúcares, sales minerales y otros,
pueden representar un sustrato óptimo para la colonización de diversos
microorganismos, que justamente uno de los objetivos de esta práctica fue de preparar
medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los
microorganismos, el manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que
imprescindibles, en el laboratorio de microbiología y hacer un primer acercamiento a la
manipulación de microorganismos.
se define bebida gaseosa a aquellas bebidas con color característico según su sabor,
constituida por agua potable, edulcorantes autorizados, conservantes, acidulantes y
que contiene un mínimo de 6 g/l de anhídrido carbónico.
Las bebidas elaboradas a base de extractos químicos (bebidas gaseosas), debido a
sus características como: ph bajo, alta tasa de CO2, su falta de oxígeno, etc.,
constituyen medios desfavorables para el desarrollo de los microorganismos, pero por
condiciones que proceden de la materia prima, el equipo que se utiliza para su
elaboración que no este en optimas condiciones de higiene y el ambiente pueden
ocasionar ha que al crecimiento de microorganismos en las bebidas.
En el caso de la materia prima para la elaboración de bebidas gaseosas vendría a ser
el agua que debería estar controlada y sometida a tratamientos antimicrobianos
autorizados. La flora del agua es muy variada, encontrándose: microorganismos
habituales del agua, de origen telúrico y de origen humano o animal. Por lo cual es
posible el cultivo y aislamiento de microorganismos en las bebidas gaseosas.
(Según IBNORCA), dentro de los microorganismos que existen en las bebidas
gaseosas se investigan y se realiza los siguientes análisis:
Análisis de bebidas gaseosas
 Recuento de colonias aerobias mesófilas (30+-1).
 Investigación y recuento de mohos y levaduras.

Técnica de aislamiento empleada

En el manejo de muestras contaminadas o cultivos mixtos en los que se encuentran
diversos microorganismos, el primer paso para proceder a su estudio es el aislamiento,
es decir la separación de cada uno de los posibles integrantes microbianos de la
muestra.
Existen diversos métodos para conseguir esta separación, la mayoría de ellos basados
en la inmovilización de las células microbianas en la superficie de los medios de cultivo
sólidos. Al depositar una célula bacteriana o una levadura en un punto del medio de
cultivo, ésta quedará inmovilizada en ese punto y en él se reproducirá por absorción de
los nutrientes del medio. Las nuevas células generadas permanecerán igualmente
inmóviles y tras sucesivas generaciones conformarán lo que denominamos una
«colonia» que no es más que un montón de células derivadas de una sola célula madre
inicial, es decir, un clon de la bacteria o levadura depositada al sembrar.
Técnicas de aislamiento. Se realiza un aislamiento de los microorganismos presentes
en un cultivo mixto en caldo ordinario, sobre agar nutritivo. Se siembran dos placas de
agar nutritivo, una mediante la técnica del agotamiento de asa y otra mediante la de
estrías escocesas y en cuadrante.
Estas técnicas pretenden diluir la carga microbiana que se deposita sobre el medio de
cultivo de forma que, en los últimos trazos de la siembra, haya tan pocas células que
queden suficientemente separadas unas de otras y puedan desarrollar colonias
independientes.
La técnica que utilizamos en esta práctica fue la de estrías escocesas, consiste en
tomar el tubo con el cultivo mixto, agitar para homogeneizar su contenido. Flamear el
asa bacteriológica y tomar una muestra del cultivo. Flamear la boca del tubo tanto al
abrirlo como antes de cerrarlo en donde se divide la caja Petri en tercios y se empieza
se empezó hacer el estriado con las tasas de nicromo, se hizo de forma en zig sag de
izquierda a derecha, parecido en la figura 1, en el primer tercio se hizo muy pegado, en
el segundo tercio se hizo de la misma forma, pero un poco más separado y en el último
se hizo el estriado muy separado, donde solo una vez se tenía que introducir el asa en
la caja para los tres tercios.

Figura 1. Estrías escocesas

Tras 24 horas de incubación observamos que en las primeras descargas realizadas

con el asa de siembra hay un crecimiento mayor con pocas colonias diferenciadas, y
estas van disminuyendo en densidad en las siguientes estrías observándose finalmente
las colonias aisladas y apreciándose la diferencia entre ellas.
PROCEDIMIENTO DE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

1. Los materiales ya estaban esterilizados y solo se procedió a realizar el cultivo y

el aislamiento de la muestra.
2. No había un tratamiento previo ya que el material seleccionado no lo requería,
se aisló la muestra a examinar directamente de su medio natural que en este
caso fue una porción de refresco de azúcar (coca cola).
3. Disolver los componentes del medio en agua destilada y agitar hasta la
disolución en un vaso de precipitado.
4. Se tomaron 3 cajas petri y se marcaron para identificarlas donde se dividió en
tercios cada caja y se marcó con nuestro nombre y el tipo de ambiente en donde
se encontraba la muestra PDA (Hongos), YPD (Levaduras) y LB (BACTERIAS) y
se ordenaron en hileras.
5. En la campana de extracción se procedió a prender la flama del quemador de
alcohol y acercar 15 cm alejados los materiales que fueron las cajas Petri las
casas y el vaso precipitado.
6. Con el asa de nicromo se ponía directamente al fuego hasta que ardiera y
esperar a que enfriara para tomar la muestra.
7. Se procedió a tomar la muestra del vaso con el asa, el aro se le tenia que hacer
una burbuja al sacar de el vaso con la muestra para poder hacer las estrías en la
caja Petri.
8. Se abrió la caja Petri y en cada tercio de la división se empezó hacer el estriado
con las asas de nicromo, se hizo de forma en zig zag de izquierda a derecha, en
el primer tercio se uso muy pegado, en el segundo tercio se hizo de la misma
forma pero un poco mas separado y en el ultimo se hizo el estriado muy
separado, donde solo una vez se tenia que introducir el asa en la caja para los
tres tercios, después de esto se ponía el asa en la flama y se hacía de lo mismo
con la segunda y tercera caja Petri.
9. Al finalizar de hacer los estriados en las 3 cajas se procedió a cerrarlas y
metieron al horno.
10. Una semana después se analizó las cajas Petri en donde pudimos identificar los
microorganismos que se cultivaron en la práctica mediante la coca cola.
RESULTADOS
Pudimos observas con el aislamiento de microorganismos que en las cajas preti se
formaron principalmente en los ambientes de YPD y LB que corresponde a las
levaduras y bacterias respectivamente, podemos en el ambiente YPD un color como
beige y una forma bastante extraña pero fácil de ver, era de esperarse que el medio
que se presentara el cultivo fueran las levaduras ya que los refrescos son ácidos (pH
entre 3 y 4) y tienen un contenido de azúcares de hasta 15° Brix, además de que
algunas levaduras son extraordinariamente resistentes a los conservantes, ya que
toleran una alta presión osmótica y un bajo pH, y suelen crecer a las temperaturas de
refrigeración, en las siguiente figura es claro ver el cultivo.
En el ambiente de bacterias también se puede ver un cultivo de forma blanquecida y un
poco mas espesa, la muestra de coca contenía hormigas, como se menciono
anteriormente se pueden presentar bacterias en el refresco por contaminación del
ambiente o en este caso algunas bacterias que tuvieran las hormigas.

Y por el ultimo en el ambiente de los hongos (PDA), no se ve a simple vista algún

indicio de cultivo de microorganismos, no podemos concluir que no hubo un
crecimiento de hongos en la muestra del refresco ya que si observamos con un
microorganismo de esta forma pudiéramos ver mas claramente el cultivo de los
hongos.

CONCLUSIONES
Concluimos que el aislamiento de microorganismos es importante ya que su objetivo es
obtener colonias bien separadas para conseguir un cultivo puro, esto para el análisis de
sus características fisiológicas y morfológicas, para después poder aplicarla en los
sectores de la industria que hemos visto que tiene muchas aplicaciones, además para
la finalidad de esta práctica pudimos identificar cual es el medio a que pertenece el
cultivo de microorganismos de la muestra que analizamos, es esta caso el refresco los
microrganismos que cultivamos crecen en los ambientes de levadura y bacterias esto
ya descrito en los resultados.
Es fundamental también los métodos de esterilización ya que si no contamos con las
medidas adecuadas nuestra muestra puede ser contaminada y no tener los resultados
esperados.
REFERENCIAS
Yujra, N. N. (2021, 12 marzo). Análisis microbiológico de las bebidas gaseosas en
Bolivia (página 2). Monografias.com. Recuperado 4 de octubre de 2022, de
https://www.monografias.com/trabajos69/analisis-microbiologico-bebidas-gaseosas-
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Universidad Miguel Hernández. (2022b, enero 22). 5. Identificación Bacteriana.
Prácticas Microbiología UMH. Recuperado 4 de octubre de 2022, de
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Carranza K. (2013). Manual electrónico de control de calidad en medios de cultivo y
cepas de referencia (Obtención de grado). Facultad de estudios superiores “Zaragoza”.
Los medios de cultivo para microbiología más usados. (2021, 10 octubre). de
https://mdmcientifica.com/medios-cultivo-microbiologia-mas-usados/