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4500-NO3-
NITRÓGENO (NITRATO)
Métodos A-F, H, I: Aprobado por el Comité de Métodos Estándar, 2016. Actualización editorial, 2019. Grupo de trabajo conjunto: Thomas R. Holm (presidente), Jack
Bennett, Roger Blakesley, Gayle K. Gleichauf, Patrick K. Jagessar, William C. Lipps, Nadejda Vilissova, Melissa A. Woodall. Método J: Aprobado por el Comité de
Métodos Estándar, 2018. Grupo de trabajo conjunto: Charles J. Patton, Ellen R. Campbell, Wilbur H. Campbell, William Lipps.
-
4500-NO3 A. INTRODUCCIÓN
1. Selección del método con ácido sulfúrico o clorhídrico (según el método) y conservar
de 0 a 6 °C sin congelar (o de 2 a 6 °C para muestras conformes
La determinación
3
del nitrato (NO− ) puede resultar difícil a la Ley de Agua Potable Segura [SDWA]) durante un máximo
debido a la alta probabilidad de que haya constituyentes que de 28 d. Las muestras cloradas son estables durante al menos 14 d
interfieran en diversas matrices. Esta sección incluye numerosos sin conservación ácida.
métodos que3
pueden utilizarse para detectar NO− . Considere las
ventajas y limitaciones de cada método al seleccionar una estrategia 3. Control de calidad
de prueba revisando la matriz de la muestra, el rango de
concentración y las necesidades de datos para una aplicación en Las prácticas de control de calidad ( CC) y los criterios de
particular. aceptación se describen en las Secciones 1020 y 4020. La sección
La técnica de luz ultravioleta (UV) (4500-NO− B), que siguiente
3 3
medidas NO −3 absorbancia a 220 nm, es adecuado para el se aplica a todos los métodos NO− -N; sin embargo, algunos
cribado métodos tienen
agua no contaminada (pobre en materia orgánica). medidas adicionales de CC. Complete las tareas iniciales de CC,
Examine una muestra si es necesario, luego seleccione un incluida la demostración inicial de la capacidad de cada analista,
método adecuado para su rango de concentración e la estimación del límite de detección del método (LMD) y la
interferencias probables. El nitrato puede determinarse por determinación del rango dinámico, antes de analizar cualquier
cromatografía iónica (Sección 4110), electroforesis iónica muestra y, a partir de entonces, al menos una vez al año.
capilar (Sección 4140) o los métodos que se muestran aquí. Los Aplique el resto de estas medidas siempre que se analicen
rangos aplicables para los métodos de esta sección son: muestras. Si no se cumplen los criterios de aceptación,
• 0,2 a 11 mg de nitrógeno nítrico (NO3 -N)/L; Método deténgase y corrija el problema. Los organismos reguladores
espec- trofotométrico ultravioleta (4500-NO
3
−
B) pueden especificar criterios de aceptación diferentes de los aquí
• 0,5 a 2,5 mg NO3 -N/L; Segundo método de detección indicados.
ultravioleta derivado (4500-NO 3
−
C) Calibre o verifique diariamente la calibración de cada
instrumento. Utilizando una calculadora, una hoja de cálculo
coeficiente
− electrónica
la o el
dependiente, el software dely instrumento,
intercepto el coeficientecalcule
de correlación (r) o
• 1 a 50 mg NO3 -N/L; Método del electrodo de nitrato (4500-NO3 D)
• 0,05 a 1,0 mg de nitrato + nitrito-nitrógeno + NO2 -N)/L; determinación (r2 ) de la curva de calibración. El valor r debe ser
(NO3 Método de reducción del cadmio (4500-
3
al menos 0,995 (r2 ≥ 0,99). Calcular a la inversa las concentraciones
NO E)
−
aparentes de
• 0,05 a 10 mg de nitrato + nitrito-nitrógeno (NO3 + NO2 - los estándares. Para los estándares más de 10 veces el MDL, el mea-
N)/L; Método automatizado de reducción del cadmio 3
Los valores calibrados deben ser entre el 90% y el 110% de los
(4500-NO− F) valores reales. Los requisitos de calibración son diferentes para el
• 0,05 a 10 mg de nitrógeno nítrico + nitrito (NO3 + NO2 - método descrito en 4500-NO− D; 3
N)/L; véanse las instrucciones en 4500-NO− D.4b o 4500-NO− D.4c.

Método automatizado de reducción de hidracina (4500-NO−
H) 3 3 3
• 0,01 a 2,0 mg o 0,05 a 5,0 mg de nitrato + nitrito (NO3 + intervalo del método seleccionado. Véanse las Secciones 4110 B
NO2 -N)/L; Método de inyección en flujo con reducción de y 4110 C para el intervalo de trabajo de los métodos de
cadmio (4500-NO
3
−
I) cromatografía iónica.
3
• 0,05 a 10 mg de nitrato + nitrito-nitrógeno
3 (NO3 + NO2 - Filtrar muestras turbias. Comprobar si los filtros están
N)/L; Método manual de reducción enzimática 3(4500-NO− contaminados con NO− .
J)
Otros rangos pueden ser posibles para cualquiera de los 2. Recogida y almacenamiento de muestras
métodos arriba referenciados. Consulte las instrucciones del
fabricante. Recoja las muestras en recipientes de polietileno,
Para concentraciones más elevadas de NO −
-N, diluir hasta el fluoropolímero o vidrio. Si es posible, inicie las determinaciones
3 3
de NO− inmediatamente después de la toma de muestras. Las
https://doi.org/10.2105/SMWW.2882.089 1
muestras pueden almacenarse sin acidificar hasta 48 h por Prepare un estándar de calibración-verificación (CVS) a partir
debajo de 6 °C sin congelación. La acidificación convierte de una solución madre distinta de la utilizada para preparar los
cualquier nitrito (NO− ) en estándares de calibración. La concentración de NO− -N del CVS
debe ser del 30% al 70% del estándar de calibración más alto; sin
embargo, algunos programas de GC/CC pueden requerir
concentraciones diferentes. Ejecute el CVS inmediatamente
después de la calibración; el resultado debe ser del 90% al 110%
del valor esperado.
Realice un blanco de calibración inicial (ICB)
inmediatamente después del CVS para comprobar si hay
contaminación. La lectura del ICB debe ser inferior a la mitad
del nivel mínimo de referencia (LMR).
Ejecute un estándar de calibración de punto medio como
verificación de calibración continua (CCV) y un blanco de
calibración continua (CCB) después de cada 10 muestras 3
y
después de la última muestra. Si la concentración medida de NO−
-N en la CCV no es del 90% al 110% del valor esperado,
recalibre y vuelva a realizar todas las muestras leídas desde la
última lectura buena de la CCV. La CCB debe ser inferior a la
mitad del LMR.
- - -
-2 Bibliografía
NO3 . Por consiguiente, los valores de NO3 son la suma de los Pfaff JD, Hautman DF, Munch DJ. Determinación de aniones inorgánicos
niveles de NO3 y NO2. Si las muestras deben almacenarse durante en agua potable por cromatografía iónica; Método 300.1. Cincinnati
más de 48 h, acidificar hasta pH <2
B. Método de cribado espectrofotométrico ultravioleta (4500-NO3 ¯ )
(OH): National Exposure Research Laboratory, Office of Research & Normativa nacional sobre agua potable primaria; Normativa
Development, U.S. Environmental Protection Agency, 1997. nacional sobre agua potable secundaria; y Procedimientos de
Agencia de Protección del Medio Ambiente de los Estados Unidos. análisis y muestreo. 40 C.F.R. Secciones 122, 136, 141, 143, 430,
Guidelines establishing test procedures for the analysis of 455 y 465 (2007).
pollutants under the Clean Water Act;
-
4500-NO3 B. MÉTODO DE CRIBADO ESPECTROFOTOMÉTRICO ULTRAVIOLETA
1. Debate general frasco de polietileno de alta densidad (HDPE). La solución es

estable durante 1 año si se mantiene cerrada.
a. Principio: Utilice esta técnica únicamente para analizar
muestras con bajo contenido en materia orgánica (es decir, aguas 4. Procedimiento
naturales no contaminadas y suministros de agua potable). La
curva de calibración de NO3
−
sigue la curva de Beer-
-
Ley de Lambert hasta 11 mg NO3 -N por litro. a. Tratamiento de la muestra: A 50 mL de muestra clara
La medición de la absorción UV a 220 nm permite a los (filtrada si es necesario), añadir 1 mL de solución de HCl 1 M y
analistas determinar
3
rápidamente el NO− . Tenga en cuenta que la mezclar bien.
materia orgánica disuelta también b. Estándares: Preparar estándares de calibración NO− en el
- rango - 3
puede absorber a 220 nm pero el NO3 no absorbe a 275 nm, por 0 a 7 mg NO3 -N/L diluyendo a 50 mL los volúmenes siguientes
lo que a
puede realizarse una segunda medición a 275 nm y utilizarse de solución intermedia NO− : 0, 1,00, 2,00, 4,00, 7,00 mL. Otros
para corregir− 3
el valor NO , si es necesario. El alcance de esta corrección empírica -
3 También pueden utilizarse concentraciones estándar. Tratar los

está relacionada con la naturaleza y la concentración de la patrones NO3 -N de la misma manera que las muestras.
materia orgánica c. Medición espectrofotométrica: Leer la absorbancia o la
y puede variar de un agua a otra, por lo que este método no se transmitancia frente al agua reactiva ajustada a cero de
recomienda si se requiere una corrección significativa. No absorbancia o 100% de transmitancia. Utilice una longitud3 de
obstante, la medición de la absorción UV puede ser útil3 para onda de 220 nm para obtener la lectura de NO− -N y una
controlar los niveles de NO− en una masa de agua con un tipo longitud de onda de 275 nm para determinar cualquier
constante de materia orgánica. interferencia debida a materia orgánica disuelta.
b. Interferencias: Las interferencias potenciales incluyen materia
orgánica disuelta, tensioactivos,
2
NO− , cromo hexavalente 5. Cálculo
[Cr(VI)] y varios iones inorgánicos que no se encuentran
normalmente en el agua natural, como el clorito y el clorato. Los Para muestras y patrones, reste dos veces la lectura de
factores de corrección de la absorbancia de la materia orgánica absorbancia a 275 nm de la lectura a 220 nm para obtener la
pueden establecerse por el método de adiciones
3
combinado con absorbancia debida al NO− -N. Si el valor de corrección es
el análisis del contenido original de NO− mediante otro método. superior al 10% del
La filtración de la muestra elimina las interferencias causadas
por sus- en suspensión. Acidificación con ácido clorhídrico (HCl) 1 M
partículas 3 -
±0,0005 g en agua y diluir hasta 1000 mL; 1,00 mL = 100 µg
a pH <2 evita la interferencia de concentraciones de hidróxido o NO− -N. Conservar con 2 mL de cloroformo (CHCl3 )/L. La
carbonato de hasta 1000 mg de carbonato cálcico (CaCO3 ) por solución es estable durante al menos 6 meses. Alternativamente,
litro. El cloruro no afecta a la determinación. utilizar una solución madre comercial de NO− -N.
Compensar las sustancias inorgánicas analizando
independientemente sus concentraciones y preparando curvas de
corrección individuales. Filtrar las muestras turbias.
3
Comprobar
si los filtros están contaminados con NO− .
2. Aparatos
Espectrofotómetro, para uso a 220 y 275 nm con cubetas de

sílice emparejadas de 1 cm o más de paso de luz.
3. Reactivos
a. Agua reactiva: Utilizar agua reactiva tal como se define en

la Sección 1080 para preparar todas las soluciones y diluciones.
b. Solución madre de nitrato: Secar nitrato potásico (KNO3 )
en estufa a 103 a 105 °C durante 24 h. Disolver 0,7218 g
https://doi.org/10.2105/SMWW.2882.089 3 3
a 220 nm para una muestra concreta, la concentración de NO3 -N donde:
se considera una estimación aproximada. Utilice una hoja de
C = concentración,
cálculo electrónica, una calculadora o el software del
A = absorbancia,
instrumento para hallar la pendiente y la intersección de la curva I = intercepto de la línea de regresión, y
de calibración mediante regresión lineal por mínimos cuadrados. S = pendiente de la línea de regresión.
Calcule la concentración de NO− -N a partir de la siguiente
ecuación:
Bibliografía 3
A-I Hoather RC, Rackman RF. Oxidized nitrogen and sewage effluents
C=
S observed by ultraviolet spectrophotometry. Analyst.
1959;84(1002):549–551.
c. Solución intermedia de nitrato: 3 - Goldman
ción. E, Jacobs
J Amer R. Determination
Water Works Assoc.of1961;53(2):187-191.
nitrates by ultraviolet absorp-
Diluir 100 mL de caldo NO3 -
N Armstrong FAJ. Determination of nitrate in water by ultraviolet spectro-
a 1000 mL con agua; 1.00 mL = 10.0 µg NO− -N. Conservar3 con photometry. Anal. Chem. 1963;35(9):1292–1294.
Navone R. Método propuesto para nitratos en aguas potables. J Amer
2 mL de CHCl3 /L. La solución es estable durante 6 meses.
Water Works Assoc. 1964;56(6):781-783.
d. Solución de ácido clorhídrico, (~1 M): Diluir 83 mL de
HCl concentrado en 1 L con agua reactiva. Almacenar en un
recipiente de vidrio o
C. Método espectrofotométrico ultravioleta de segunda derivada (4500-NO3 ¯ )
-
4500-NO3 C. MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO ULTRAVIOLETA DE SEGUNDA
DERIVADA
1. Debate general de un com-
preparar como se indica en 4500-NO B.3b −
utilizando KNO
3 3
fuente comercial distinta de la utilizada para preparar las
a. Principio: Aunque NO− absorbe fuertemente la luz UV, existencias de nitrato
- solución A.
3
determinación de midiendo la absorbancia a una onda c. Agua reactiva (véase 4500-NO− B.3a): Utilizar para preparar
NO3 stan- 3
puede no ser factible porque la materia orgánica natural (NOM) y y diluir las muestras si es necesario.
otros solutos también absorben la luz UV. Los espectros de la
NOM de diversas fuentes de agua suelen ser diferentes, por lo 4. Procedimiento
que si la NOM estuviera presente el procedimiento de cribado
UV NO− (4500-NO−3 .B) sería -3
no arrojan resultados fiables. El espectro UV del NO3 es bastante a. Tratamiento de las muestras: Filtrar las muestras si están
dif- turbias.
ferente al del NOM. En el espectro3 de NO− , la absorbancia b. Estándares: Diluya 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, y 2.5 mL de solución
aumenta rápidamente de 230 a 210 nm, mientras que en los madre A de NO− -N hasta 100 mL con agua reactiva 3
para
espectros de NOM, la absorbancia aumenta gradualmente en el preparar estándares que contengan 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, y 2.5 mg de
mismo intervalo de longitudes de onda. El cálculo de la segunda NO− -N/L. También se aceptan concentraciones 3
alternativas.
derivada de un espectro de muestra elimina eficazmente la Prepare un estándar de rango medio a partir de la solución
contribución de fondo del NOM. madre B para usarlo como CVS.
b. Interferencias: Los espectros UV de NO− y NO− son c. Medición: Verter el patrón o la muestra en una cubeta.
similares,
- 2 3 -
pero las concentraciones de NO2 suelen ser mucho menores que Vacíe y rellene la cubeta. Escanear de 250 a 200 nm. Diluir la
las de NO3 . El bicarbonato absorbe débilmente a longitudes de muestra si es necesario para mantener las lecturas en escala.
onda <210 nm Registrar cualquier dilución. Calcular el espectro de la segunda
pero no afecta a la señal del segundo derivado del NO− . Bromuro derivada. Hallar la segunda derivada máxima.
-3
(Br- ) interfiere a concentraciones de agua de mar (68 mg Br /L,
salinidad derivada en el intervalo de 230 a 220 nm y registre el valor. Si
35%), por lo que este método no puede utilizarse 3
para el espectrofotómetro no puede calcular espectros de segunda
-
determinar NO− en agua de mar o en muestras que contengan derivada, configúrelo para que lea la absorbancia cada 1,0 nm y
altas concentraciones de Br . Ni el hierro (Fe) ni el cobre (Cu) transfiera los espectros al ordenador después de cada
interfieren a 2 mg/L, pero ambos metales3
interfieren mucho a 20 exploración.
mg/L.1 Para concentraciones de NO− -N de hasta 3 mg/L, el
espectro de absorbancia UV tiene un pico a 203 nm. Para 5. Cálculo
concentraciones superiores, el pico se desplaza gradualmente a
207 nm y el máximo de la segunda derivada también se desplaza a. Calibración: Si el espectrofotómetro no puede calcular
de 224 nm a longitudes de onda superiores. La forma de los espectros de segunda derivada, calcúlelos y encuentre el máximo
espectros UV y de segunda derivada puede verse afectada por la para cada muestra, blanco o patrón. Utilice el procedimiento
anchura de la rendija del espectrofotómetro. El método se ha simplificado de mínimos cuadrados2,3 para suavizar y diferenciar
probado con agua potable, pero no con aguas residuales. simultáneamente los espectros. (Se puede obtener una hoja de
cálculo de Microsoft Excel para este cálculo de Tom Holm,
2. Aparatos Illinois State Water Survey, 2204 Griffith Drive, Champaign, IL
61820). Utilice una hoja de cálculo electrónica, una calculadora
a. Espectrofotómetro capaz de escanear de 250 a 200 nm. o un programa informático para realizar una regresión lineal por
Algunos espectrofotómetros pueden calcular la segunda mínimos cuadrados utilizando las segundas derivadas de los
derivada de un espectro; si el instrumento no lo hace, se necesita espectros en blanco y estándar:
una interfaz informática (véase ¶ d más adelante).
b. Cubetas, de cuarzo de 1 cm emparejadas. SD = I + C × S
c. Pipetas: Si se utilizan pipetas ajustables, calibrar según las
instrucciones del fabricante. donde:
d. Ordenador, cable y software para transferir datos del
SD = segunda derivada máxima I
espectrofotómetro y calcular espectros de segunda derivada. El = intercepto de la línea de
cable y el software pueden obtenerse del fabricante del regresión C = concentración
espectrofotómetro. Estos elementos sólo son necesarios si el S = pendiente de la línea de regresión
espectrofotómetro no puede calcular espectros de segundas
derivadas. Así,
3. Reactivos
3
a. Solución madre de nitrato A, 100 mg
dirigido en 4500-NO− B.3b
NO− -N/L: Preparar como SD - I
u obtenerlo de una fuente comercial. C=
3
-
S
-
b. Solución madre de nitrato B, 100 mg NO3 -N/L: Compra a b. Muestras: Calcular NO3 concentración (C) a partir de la
una fuente comercial diferente de la solución madre de nitrato A tión anterior. equa
o
D. Método del electrodo de nitrato (4500-
NO3 ¯ )
6. Precisión y sesgo 2. Savitsky A, Golay MJE. Smoothing and differentiation of data by
simplified least squares procedures. Anal Chem. 1964;36(8):1627–
Las concentraciones de nitrato determinadas mediante el 1639.
método UV de segunda derivada se compararon con las 3. Steinier J, Termonia Y, Deltour J. Comments on smoothing and
differentiation of data by simplified least squares procedures. Anal
determinadas mediante cromatografía iónica para 79 muestras Chem. 1972;44(11):1906–1909.
de agua potable con concentraciones de NO -N− 4. Holm TR, Kelly WR, Sievers LF, Webb DL. A comparison of ultra-
3
de hasta 40 mg NO3− -N/L.4 La pendiente de la re línea de gresión violet spectrophotometry with other methods for the determination of
fue nitrate in water. Spectroscopy. 1997;12(9):38-45.
0,94, con un error estándar de 0,005. En 65 de 79 muestras, la
diferencia entre las concentraciones
3 de NO− -N determinadas por Bibliografía
espectrofotometría UV de segunda derivada y cromatografía
iónica fue de
0,5 mg o menos de NO−3 -N por litro. La diferencia máxima
-
para todas las muestras fue de 1,6 mg NO3 -N/L. Las diferencias Simal J, Lage MS, Iglesias I. Second derivative ultraviolet spectros-
entre copy and sulfamic acid method for determination of nitrates in water.
Las3concentraciones de NO− -N determinadas por los dos J Assoc Offic Anal Chem. 1985;68:962-965.
métodos parecían ser aleatorias, pero no tenían una distribución Suzuki N, Kuroda R. Direct simultaneous determination of nitrate and
normal. nitrite by ultraviolet second-derivative spectrophotometry. Analyst.
1987;112(7):1077–1079.
Referencias
1. Crumpton WG, Isenhart TM, Mitchell PD. Análisis de nitrato y N

orgánico con espectroscopia de segunda derivada. Limnol Oceanogr.
1992;37(4):907-913.
-
4500-NO3 D. MÉTODO DEL ELECTRODO DE NITRATO
1. Debate general b. Electrodo selectivo de iones nitrato, combinado (Thermo

Scientific Orion Modelo 97-07BN, o equivalente) o de media celda
a. Principio: El electrodo de iones NO− es un sensor selectivo (Thermo Scientific Orion Modelo 93-07BNWP, o equivalente)
3
que desarrolla un potencial a través de una fina membrana inerte con electrodo de referencia de doble unión (Thermo Scientific
que mantiene en su lugar un intercambiador de iones líquido Orion Modelo 90-0200, o equivalente): Llene la cámara exterior
inmiscible en agua. El electrodo responde a la actividad del ion con una solución que contenga sulfato de amonio [(NH ) SO ].
NO− entre aproximadamente 10− 5 y 10− 1 M Siga cuidadosamente las instrucciones
42 4
del fabricante.
3 -
(0,14 a 1400 mg NO3 -N/L). La respuesta del electrodo está instrucciones del fabricante sobre el cuidado y almacenamiento.
linealmente relacionada con el3 logaritmo de la actividad de NO− c. Agitador magnético o motorizado: Barra agitadora
. El límite inferior de detección viene determinado por la recubierta de tetrafluoroetileno (TFE).
solubilidad pequeña pero finita del intercambiador de iones d. Pipetas: Si se utilizan pipetas ajustables, calibrar según las
líquido. instrucciones del fabricante.
b. Interferencias: Los patrones y las muestras deben estar
todos a la misma temperatura ±1 °C. Iones cloruro (Cl− ) y
bicarbonato (HCO ).− 3
-
interfieren cuando sus proporciones en peso respecto al NO3 -N 3. Reactivos
son superiores al 10
o superior a 5, respectivamente. Los iones que son interferencias a. Agua reactiva: Preparar como se describe en 4500-NO−
3
potenciales pero que normalmente no se presentan en niveles B.3a. Utilizar para todas las soluciones y diluciones.
significativos en las aguas potables son Br− , clorato (ClO− ),
cianuro
- (CN− ), hidrosulfuro
- -
3
-
(HS ), yoduro (I ), NO2 , y perclorato (ClO4 ). Aunque los b. Solución madre de nitrato A, 100 mg/L: Adquirir en un
electrodos funcionan satisfactoriamente en tampones cuyo pH establecimiento comercial (caducidad indicada por el fabricante)
oscila entre 3 y 9, se han observado respuestas erráticas cuando o preparar secando el KNO en una estufa de 103 a 105 °C durante
el pH no se mantiene con- 24 h. Disolver3
0,7218 g
stante. Dado que el electrodo responde a la3actividad del NO− y ±0,0005 g en agua y diluir hasta 1000 mL; 1,00 mL = 100 µg
no a su concentración, la fuerza iónica debe ser constante en NO3− N. La solución es estable durante al menos 6 meses.
todas las muestras y patrones. Minimice estos problemas c. Solución madre de nitrato B, 1 mL = 100 µg NO3
−
-N:
utilizando
con sulfatouna solución
de plata (Agtampón
SO ) para eliminar Br− , Cl− , CN− , I− , Compra
2 4 de una fuente comercial diferente de la solución madre de nitrato
A
y HS− interferencias, ácido sulfámico para eliminar NO− , un o preparar como se indica en el punto b anterior utilizando KNO
tampón a -
de un producto comercial
NO3 ¯ )
2 3
pH 3 para eliminar el y mantener constante el pH y la distinta de la utilizada para preparar la solución madre de nitrato
HCO3 A.
y sulfato de aluminio [Al2(SO4)3] a los ácidos orgánicos complejos. d. Soluciones estándar de nitrato: Diluya 1.0, 10.0, y 50.0
Por ejemplo, 10 mL de tampón compensarán unos 781 mg/L de mL de solución madre de nitrato A a 100 mL con agua reactiva
interferencia de cloruro de la matriz de la muestra. para obtener soluciones estándar de 1.0, 10.0, y 50.0 mg NO− -
N/L, respectivamente. Si la curva de calibración3 no es lineal,
2. Aparatos consulte el manual que viene con el medidor. Es posible que se
recomienden estándares adicionales. Algunos medidores de
a. Medidor de pH/mV/ISE (modo de concentración) o pH/ISE realizan automáticamente la calibración no lineal.
medidor de pH, de escala expandida o digital, capaz de una e. Estándar de verificación de calibración: Diluya 10.0 mL
resolución de 0,1 mV (sin modo de con- centración). de solución madre de nitrato B a 100 mL con agua reactiva. La
concentración de nitrato
3
es de 10 mg NO− -N/L.
NO3 ¯ )
f. Solución tampón: Disolver 17,32 g de Al2(SO4)3 - 18H2O, 3,43 g e. Medición de la muestra en un pH-metro: Sumergir la(s)
de Ag2SO4, 1,28 g de H3BO3 y 2,52 g de ácido sulfámico (H2NSO3H) en punta(s) del electrodo de forma que la(s) unión(es) esté(n)
unos 800 mL de agua reactiva. Ajustar a pH 3,0 añadiendo sumergida(s) y comenzar a agitar. Registrar la lectura de
lentamente potencial cuando sea estable (ΔE/Δt < 0,5 mV/min, típicamente.
0,10 N NaOH. Diluir hasta 1000 mL y guardar en una botella de
vidrio ámbar. Alternativamente, obtener de una fuente comercial
(Thermo Scientific Orion 930710, o equivalente).
g. Hidróxido de sodio (NaOH), 0,1 M.
h. Solución de relleno del electrodo de referencia: Disolver 0,53
g de (NH4)2SO4 en agua reactiva y diluir hasta 100 mL, u obtener
una solución de relleno que contenga (NH4)2SO4 de una fuente
comercial (Thermo Scientific-Orion 900046, o equivalente).
4. Procedimiento
a. Tratamiento de estándares y muestras: Pipetear 10 mL de

cada3 estándar de calibración NO− -N o muestra en vasos de
precipitados de 50 mL. Pipetear un volumen igual de tampón en
cada estándar y muestra. Asegúrese de que el volumen total es
suficiente para sumergir el electrodo o electrodos y permitir la
agitación; si es necesario, aumente la cantidad de muestra y de
tampón en proporción 1:1. Si las muestras se han refrigerado,
deje transcurrir un tiempo para que se enfríen. Si las muestras se
han refrigerado, deje tiempo para que los patrones y las muestras
alcancen la misma temperatura ±1 °C.
b. Calibración en un medidor ISE o pH/ISE: Siga las
instrucciones del fabricante para operar en modo de
concentración. Establezca las unidades en mg/L y active la
función de calibración no lineal (por ejemplo, Autoblank). 3
Realice una calibración de 3 puntos utilizando patrones de
nitrato de 1,0, 10,0 y 50,0 mg NO3
−
- N/L. Sumerja la(s) punta(s)
del electrodo de manera que la(s) unión(es) esté(n) sumergida(s)
en la solución 3estándar de 1 mg NO− -N/L y comience a agitar.
Retire los electrodos, enjuáguelos y séquelos con un paño.
Repita el procedimiento para los estándares de 10 y 50 mg NO− -
N/L. La pendiente debe ser negativa, con un valor absoluto ≥50
mV/década.
c. Calibración en un ISE o medidor de pH/ISE en mV:
Realice una calibración de 3 puntos utilizando 3
1, 10 y 50 mg
NO− -N/L de nitrato estándar. Sumerja la(s) punta(s) del
electrodo de manera
3 que la(s) unión(es) esté(n) sumergida(s) en
la solución estándar de 1 mg NO− -N/L y comience a agitar.
Registrar la lectura de milivoltios cuando se estabilice (cuando
la velocidad de cambio3 de la lectura sea <0,5 mV/min). Retire
los electrodos, enjuáguelos y séquelos con un paño. Repita para
los estándares
3
de 10 y 50 mg de NO− -N/L. Para las lecturas en
milivoltios, utilice una hoja de cálculo electrónica para trazar el
logaritmo común (base 10) de la concentración de NO− -N en el
eje x (abscisas) y el potencial (en milivoltios) en el eje y
(ordenadas). Se espera una línea recta con una pendiente de -57
±3 mV/década a 25 °C. Si la pendiente está fuera del rango
aceptable, siga el procedimiento de resolución de problemas del
fabricante
3
del electrodo. Una calibración no lineal es aceptable y
puede dar lugar a resultados más precisos. Para una curva de
calibración cuadrática, utilice estándares de 1.0, 3.0, 10.0, 20.0,
y 50.0 mg NO− -N/L. El valor r2 debe ser superior a 0,99.
d. Medición de la muestra en un ISE o medidor de pH/ISE:
Sumergir la(s) punta(s) del electrodo en una muestra preparada
de manera que la(s) unión(es) esté(n) subfusionada(s) y
comenzar a agitar. Lea la concentración de la muestra
directamente en la pantalla del medidor. Diluya la muestra si la
lectura está por encima del intervalo de calibración.
NO3 ¯ )
al menos 1 min). Diluya una muestra si la lectura está por

encima del rango de cali- bración.
5. Cálculos
Si el medidor ISE o pH/ISE funciona en modo de

concentración, no es necesario realizar cálculos; lea el resultado
directamente del medidor. Para mediciones de mV en un
medidor de pH, hallar la pendiente, la intersección y el
coeficiente de correlación de la línea de calibración mediante
regresión lineal por mínimos cuadrados utilizando una hoja de
cálculo electrónica o una calculadora.
E = I + S*Log10(C)
donde:
E = potencial del electrodo,
I = intercepción de la línea de calibración,
S = pendiente de la recta de calibración, y
C = concentración de NO− -N en el patrón. 3
Utilice I y S para calcular NO -N en las muestras:

−
3
E-I
C = 10 S
Utiliza una hoja de cálculo electrónica para la calibración

cuadrática.
6. Control de calidad
Analice una alícuota fresca del estándar de 10 mg/L

inmediatamente después de la calibración. La concentración
calculada debe coincidir con el valor real dentro de ±10%. Para
lecturas de mV en un medidor de pH, retrocalcule la 3
concentración de NO− -N a partir de la lectura para cada
estándar. Las concentraciones reales y retrocalculadas deben
coincidir en ±10%. Si no es así, deténgase y corrija el 3
problema. Para el pico de matriz, seleccione una muestra para
la cual la concentración de NO− -N después del pico esté dentro
del rango de calibración.
Bibliografía
Keeney DR, Byrnes BH, Genson JJ. Determination of nitrate in waters

with the nitrate-selective ion electrode. Analyst. 1970;95:383-386.
Langmuir D, Jacobson RI. Specific ion electrode determination of
nitrate in some fresh waters and sewage effluents. Environ Sci
Technol. 1970;4(10):834-838.
Milham PJ, Awad AS, Paul RE, Bull JH. Analysis of plants, soils and
waters for nitrate by using an ion-selective electrode. Analyst.
1970;95:751-758.
Synnott JC, West SJ, Ross JW. Comparison of ion-selective electrode
and gas-sensing electrode technique for measurement of nitrate in
environmental samples. En: Pawlowski L, Verdier AJ, Lacy WJ,
editors. Chemistry for protection of the environment. Nueva York
(NY): Else- vier Science Publishing Co.: 1984. p. 143-154.
(Studies in environmental science; No. 23)
E. Método de reducción del cadmio (4500-
NO3 ¯ )
-
4500-NO3 E. MÉTODO DE REDUCCIÓN DEL CADMIO
1. Debate general
a. Principio: El nitrato (NO− ) se reduce casi cuantitativamente a

- 3
nitrito (NO2 ) en presencia de cadmio (Cd). Este método utiliza
gránulos de Cd disponibles en el mercado tratados con sulfato de
cobre (CuSO4 ) y empaquetados en una columna de vidrio.
A continuación,
2 el NO− se diazotiza con sulfanilamida y se
acopla con dihidrocloruro de N-(1-naftil)-etilendiamina (NED)
para formar un colorante azoico muy coloreado que se mide
colorimétricamente. Para corregir
para cualquier
2
NO− presente en la muestra antes
3
de la reducción de NO− , las muestras
debe analizarse sin la etapa de reducción. El intervalo aplicable
de este método es de 0,05 a 1,0 mg NO− -N/L. El método es recom-
- 3
mendado especialmente para niveles de NO3 -N inferiores a 0,1
mg N por litro para los que otros 3
métodos carecen de la a. Agua reactiva: Véase 4500-NO− B.3a. Utilizar para todas
sensibilidad adecuada. las soluciones y diluciones.
b. Interferencias: La materia en suspensión en la columna
puede restringir el flujo de la muestra, por lo que se3 recomienda
filtrar las muestras turbias (véase 4500-NO− A.l). Las
concentraciones de hierro, cobre u otros metales superiores a varios
miligramos por litro disminuyen la eficacia de la reducción;
añada ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) al reactivo
tampón para eliminar esta interferencia. Si es necesario, extraiga
previamente el aceite y la grasa con un disolvente orgánico
(Sección 5520) para evitar que recubra la superficie del Cd. El
sulfuro de hidrógeno en muestras de agua o aguas residuales
procedentes de masas de agua anóxicas puede desactivar la
columna; trate las muestras olorosas acidificadas burbujeando
con aire durante 15 min. El cloro residual puede oxidar la
columna de Cd, reduciendo su eficiencia, así que revise las
muestras por cloro residual (vea los métodos DPD en la Sección
4500-Cl) y, si es necesario, elimínelo agregando una solución de
tiosulfato de sodio (Na2S2O3) (Sección 4500-NH3 B.3d). El color de
la muestra que absorbe a unos 540 nm interfiere con los
resultados; diluya las muestras o mida la absorbancia de las
muestras tratadas a las que no se ha añadido reactivo de color y
réstela de la absorbancia después de añadir el reactivo de color.
2. Aparatos
a. Columna de reducción: Compre o construya la columna

(Tudor Scientific Glass Co., Cat. No. TP-1730, o equivalente)
(Figura 4500-NO
3
−
:1) a partir de una pipeta volumétrica de 100
ml quitando la parte superior. La columna también puede
construirse a partir de dos tubos unidos por sus extremos: una un
tubo de 3 cm de diámetro interior de 10 cm de longitud con un
tubo de 3,5 mm de diámetro interior de 25 cm de longitud.
Añada una llave de paso de TFE con válvula dosificadora1 para
controlar el caudal.
b. Pipetas: Si se utilizan pipetas ajustables, verifique la
calibración de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
c. Equipo colorimétrico: Se requiere uno de los siguientes:
1) Espectrofotómetro, para uso a 543 nm, con un paso de luz
de 1 cm o más.
2) Fotómetro de filtro, con un paso de luz de 1 cm o más y un
filtro cuya transmitancia máxima esté próxima a 540 nm.
3. Reactivos
NO3 ¯ )
Figura 4500-NO− :1. Columna de reducción. 3
b. Gránulos de cobre-cadmio: Lavar 25 g de gránulos de Cd

nuevos o usados de malla 20 a 100 (≥99%) con HCl 6 M y
enjuagar con agua. Agitar el Cd con 100 mL de solución de
CuSO al 2%4 durante 5 min o hasta que el color azul se
desvanezca parcialmente. Decantar y repetir con CuSO fresco4
hasta que empiece a formarse un precipitado coloidal marrón.
Enjuagar con una solución de cloruro amónico-EDTA (¶ d
abajo) para eliminar todo el Cu precipitado. Almacenar el Cd
activado cubierto con solución diluida de cloruro amónico-
EDTA (¶ e abajo).
c. Reactivo de color: A 800 mL de agua reactiva, añadir 100
mL de ácido fosfórico al 85% y 10 g de sulfanilamida. Después
de disolver completamente la sulfanilamida, añadir 1 g de
NED. Mezclar para disolver, luego diluir a 1 L con agua. La
solución es estable durante aproximadamente un mes si se
almacena en una botella ámbar en el frigorífico. Desechar si la
solución es muy coloreada u oscura o si se forma un
precipitado.
d. Solución de cloruro amónico-EDTA: Disolver 13 g de
NH4 Cl y 1,7 g de tetraacetato disódico de etilendiamina en 900
mL de agua reactiva. Ajustar a pH 8,5 con hidróxido amónico
concentrado (NH4 OH) y diluir a 1 L con agua reactiva. Esta
solución es estable durante 1 año.
e. Diluir la solución de cloruro de amonio-EDTA: Diluir 300
mL de solución NH4 Cl-EDTA hasta 500 mL con agua. Utilice
este reactivo como solución de almacenamiento de la columna
de reducción de cadmio.
NO3 ¯ )
f. Ácido clorhídrico, 6M: Añadir cuidadosamente 500 mL de sugerencia; pueden utilizarse otras concentraciones siempre que
HCl concentrado a aproximadamente 400 mL de agua reactiva. cumplan los requisitos de notificación). Prepare un CVS usando
Diluir hasta 1 L con agua reactiva. Esta solución es estable la solución B de nitrato intermedio. A 25.0 mL de cada estándar,
durante 1 año. agregue 75 mL de solución NH4 Cl-EDTA y mezcle. Vierta el
g. Solución de sulfato de cobre al 2%: Disolver 20 g de estándar mezclado en la columna y recoja a una velocidad de 7 a
CuSO4 - 5H2 O en 500 mL de agua reactiva y diluir hasta 1 L 10 mL/min. Desechar los primeros 50 mL. Recoger el resto en
con agua reactiva. Esta solución es estable durante 1 año. un matraz de muestras limpio. No es necesario lavar las
h. Solución madre de nitrato A: Preparar como se indica en columnas entre muestras, pero si las columnas no se van a
4500-3
NO− B.3b u obtener de una fuente comercial. reutilizar durante varias horas o más, vierta 50 mL de solución
i. Solución madre de nitrato B: Adquirir de una fuente diluida de NH4 Cl-EDTA en la parte superior y déjela pasar por
comercial diferente de la solución madre de nitrato A o preparar el sistema. Guarde la columna de Cu-Cd en esta solución y no
como se indica en deje que se seque.
4500-NO− B.3b utilizando KNO de una fuente comercial Para verificar la eficacia de la columna de reducción, compare
diferente 3 al menos una
3 - -
de la utilizada para preparar la solución madre de nitrato A. estándar de NO medio2 a un estándar de NO reducido3 a la
j. Solución intermedia de nitrato A: Preparar como se indica misma concentración. Reactivar los gránulos de Cu-Cd como se
en 4500- NO− B.3c utilizando la solución madre de nitrato A. describe en 4500-
3 NO3− E.3b cuando la eficacia de la reducción no supera el cri-
k. Solución intermedia de nitrato B: Preparar como se indica terión (4500-NO3 - E.6).
en 4500-.
NO− B.3c utilizando la solución madre de nitrato B.
3
l. Solución madre de nitrito: Ver Sección 4500-- B.3e. 5. Cálculo
NO2
m. Solución intermedia de nitrito: Véase la sección 4500-NO
2
−
B.3f. Utilice una hoja de cálculo electrónica, una calculadora o el

n. Solución de nitrito de trabajo: Diluir 50.0 mL de solución software del instrumento para hallar la pendiente, la intersección
intermedia
2
de NO− -N hasta 500 mL con agua reactiva; 1.00 mL y el coeficiente de correlación (r) o el coeficiente de
-
= 5 µg NO2 -N. Preparar fresca diariamente. determinación (r2 ) de la curva de calibración mediante regresión
lineal por mínimos cuadrados. Calcule la concentración
3
de NO−
4. Procedimiento -N a partir de la siguiente ecuación:
a. Preparación de la columna de reducción: Insertar un tapón

de lana de vidrio en el fondo de la columna de reducción y C=
A-I
llenarlo con agua. Añadir suficientes gránulos de Cu-Cd para S
obtener una columna de 18,5 cm de largo. Mantener el nivel del
agua por encima de los gránulos de Cu-Cd para evitar que quede donde:
aire atrapado. Lavar la columna con 200 ml de solución diluida
de NH4 Cl-EDTA. Accionar la columna haciendo pasar a 3través C = concentración,
de ella, a una velocidad de 7 a 10 mL/min, varias porciones de A = absorbancia,
100 mL de una solución compuesta de 1 parte de 1,0 mg de patrón I = intercepto de la línea de regresión, y
NO− -N/L y 3 partes de solución de NH4 Cl-EDTA. S = pendiente de la línea de regresión.
Precaución: El cadmio es tóxico y cancerígeno. Recoger y Informe como miligramos de N oxidado por litro (la suma de
almacenar todos los residuos de Cd. Cuando manipule Cd, NO− -N- -
3
utilice guantes y siga las precauciones descritas en la ficha de
datos de seguridad del Cd.
b. Tratamiento de la muestra:
más NO2 -N) a menos que la concentración de NO2 -N se
1) Eliminación de la turbidez: filtrar las muestras turbias3 (véase determine por separado y se sustraiga.
4500-NO− A.1).
2) Ajuste del pH-Ajuste el pH entre 7 y 9, según sea
necesario, con HCl diluido o NaOH. Esto garantiza un pH de 8,5 6. 6. Control de calidad
después de añadir la solución de NH4 Cl-EDTA. Ejecutar un NO de
pornivel
un medio -N estándar seguido
−
inmediatamente
3) Reducción de la muestra-A 25,0 mL de muestra o una
porción diluida
a 25,0 mL, añadir 75 mL de solución NH4 Cl-EDTA y mezclar. Verter - 2
mezclar la muestra en la columna y recoger a una velocidad de 7 NO3 -N estándar de la misma concentración. Calcular la eficiencia
a 10 mL/ min. Desechar los primeros 25 mL. Recoger el resto en de reducción de la siguiente− manera:
Eficacia = (respuesta NO -N/respuesta NO− -N) × 100.
una muestra limpia
matraz. No es necesario lavar las columnas entre muestras, pero 3 2
si las columnas no se van a reutilizar durante varias horas o más, posible (≤15 min después de la reducción), añada 2,0 mL de
vierta 50 mL de solución diluida de NH4 Cl-EDTA en la parte reactivo de color a 50 mL de muestra y mezcle. Entre 10 min y 2
superior y déjela pasar por el sistema. Guarde la columna de Cu- h después, mida la absorbancia a 543 nm frente a un blanco de
Cd en esta solución y no la deje secar nunca. agua destilada y reactivo. Nota: Si la concentración de NO− -N
4) Desarrollo y medición del color: Tan pronto como sea excede el rango de la curva estándar (alrededor de 1 mg N/L), use
3
NO3 ¯ )
el resto de la muestra reducida para hacer una dilución apropiada La eficacia debe ser del 90% al 110%. Si no es así, deténgase
y analice de nuevo. y corrija el problema siguiendo las instrucciones del fabricante o
haciendo pasar HCl 6 M a través de la columna seguido de un
enjuague con una solución diluida de cloruro de amonio-EDTA.
Prepare o, si no puede reactivarse, compre una nueva columna
según
3
4500- NO− E.3b y actívela según 4500-NO 3
−
E.4a.
7. Precisión y sesgo
En un solo laboratorio que utilizó muestras de aguas

residuales a concentraciones de 0,04, 0,24, 0,55 y 1,04 mg NO−
+ NO− -N/L, el 3 2
c. Calibración: Usando la solución intermedia de nitrato A, Las desviaciones estándar fueron de ±0,005, ±0,004, ±0,005 y
prepare estándares de 0.05, 0.10, 0.20, 0.50, y 1.0 mg NO− -N/L ±0,01, respectivamente. En un único laboratorio, utilizando
por 3
adiciones de aguas residuales de
diluyendo los siguientes volúmenes a 100 mL en matraces 0,24, 0,55 y 1,05 mg NO− + NO3
−
-N/L,
2
las recuperaciones fueron
aforados: de
0,5, 1,0, 2,0, 5,0 y 10,0 mL. (Este intervalo de calibración es sólo a100% , 102% y 100%, respectivamente.2
F. Método automatizado de reducción del cadmio (4500-
NO3 ¯ )
Referencias Bibliografía
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Métodos para el análisis químico de aguas y residuos. Washington International; 2019. (Vol. 11.01.)
DC: Office of Research and Develop- ment, U.S. Environmental
Protection Agency; 1983.
-
4500-NO3 F.MÉTODO AUTOMATIZADO DE REDUCCIÓN DEL CADMIO
1. Debate general
a. Principio: Véase 4500-NO 3

−
E.1a.
b. Interferencias: La materia en suspensión puede restringir el flujo
de la muestra en la columna, por lo que deben filtrarse
3
las muestras
turbias (véase 4500-NO− A.1). Las concentraciones de hierro,
cobre u otros metales superiores a varios miligramos por litro
pueden disminuir la eficacia de la reducción; el ácido
etilendiaminotetraacético (EDTA) añadido al reactivo tampón
elimina esta interferencia. Si es necesario, evite que el aceite y la
grasa recubran la superficie del Cd extrayéndolos previamente de
las muestras con un disolvente orgánico (véase la Sección 5520). El
sulfuro de hidrógeno en muestras de agua o aguas residuales de
cuerpos de agua anóxicos puede desactivar la columna; si es
necesario, trate las muestras acidificadas olorosas burbujeando con
aire durante 15 min. El cloro residual puede oxidar la columna Figura 4500-NO3− :2. Colector de nitrato-nitrito, método automatizado
de Cd, reduciendo su eficiencia, así que compruebe si hay cloro de reducción de cadmio.
residual en las muestras (véanse los métodos DPD en la Sección
4500-Cl) y, si es necesario, elimínelo añadiendo solución de Na2S2O3 es tóxico y cancerígeno. Recoger y almacenar todos los
(Sección 4500-NH3 B.3d). Sam- residuos de Cd. Cuando manipule Cd, utilice guantes y siga
ple color que absorbe a unos 540 nm interfiere; mida la absor- las precauciones descritas en la ficha de datos de seguridad
bancia de las muestras no tratadas y diluir, si es necesario, para del Cd.
reducir la absorbancia por debajo de la correspondiente al LMD. e. Ácido clorhídrico concentrado.
c. Aplicación: El nitrato y el nitrito, solos o juntos, en aguas f. Hidróxido de amonio, concentrado.
potables, superficiales y salinas y en aguas residuales g. Reactivo de color: Mientras se agitan aproximadamente
domésticas e industriales, pueden determinarse en un intervalo 800 mL de agua reactiva, añadir 100 mL de ácido fosfórico
de 0,05 a 10 mg N/L. concentrado (H3 PO4 ), 40 g de sulfanilamida y 2 g de NED.
Agitar hasta disolución y diluir a 1 L con agua reactiva.
2. Aparatos Almacenar en una botella ámbar y mantener en la oscuridad
cuando no se utilice. La solución es estable durante varios
a. Equipo analítico automatizado: Véase en la Figura 4500-3 meses.
NO− :2 un ejemplo de instrumento analítico de flujo continuo. h. Solución de cloruro amónico-EDTA: Disolver 85 g de NH4
Los volúmenes y caudales de los tubos se dan sólo como Cl y 1 g de sal disódica de EDTA en agua reactiva y diluir hasta
ejemplos; siga las instrucciones del fabricante. 1 L con agua reactiva. Esta solución es estable durante 1 año.
b. Pipetas: Si se utilizan pipetas ajustables, verifique la Añadir
calibración de acuerdo con las instrucciones del fabricante. 0,5 mL de polioxietilen 23 lauril éter (Brij-35, disponible en ICI
Americas, Inc., Wilmington, DE, o equivalente) por litro de
3. Reactivos reactivo justo antes de su uso.
i. Solución madre de nitrato A: Preparar como se indica en
4500-.
a. Agua reactiva: Véase 4500-NO− B.3a.
3 3
b. Solución de sulfato de Disolver 20 g de CuSO4 - 5H2O en NO− B.3b u obtenerlo de una fuente comercial.
cobre: 500
mL de agua reactiva y diluir hasta 1 L con agua reactiva. Esta j. Solución madre de nitrato B: Adquirir de una fuente
solución es estable durante 1 año. comercial diferente de la solución madre de nitrato A o preparar
c. Solución de lavado: Utilizar agua reactiva. como se indica en 4500-NO− B.3b utilizando KNO de una fuente
NO3 ¯ )
comercial diferente
d. Gránulos de
de cobre-cadmio: Véase 4500-NO− E.3b. Preparar 3 3
3 de la utilizada para preparar la solución madre de nitrato A.
la columna de reducción de cadmio según las instrucciones del k. Solución intermedia de nitrato A: Diluir 100 mL de solución3
fabricante
instrucciones o comprar una columna de reducción de cadmio prefabricada madre de NO
−
−
solución A a 1000 mL con agua; 1.00 mL = 10.0 µg NO3 -N.

o bobina del fabricante del instrumento. Precaución: Cadmio Conservar con 2 mL de CHCl3 /L. La solución es estable durante
6 meses.
NO3 ¯ )
l. Solución intermedia de nitrato B: Diluir 100 mL de solución La eficacia debe ser del 90% al 110%. Si no es así, parar y
madre de NO − corregir
-3
solución B a 1000 mL con agua; 1.00 mL = 10.0 µg NO3 -N. el problema siguiendo las instrucciones del fabricante o
Conservar con 2 mL de CHCl3 /L. La solución es estable durante haciendo pasar HCl 6 M a través de la columna seguido de un
6 meses. enjuague con una solución diluida de cloruro amónico-EDTA.
m. Soluciones patrón de nitrato: Usando la solución intermedia
3 Prepare o, si no se puede reactivar, compre una nueva columna
A de NO− -N y agua reactiva, prepare estándares para la curva de acuerdo con 4500-.
de calibración en el rango apropiado de NO− -N. Comparar un NO− E.3b y activar según 4500-NO− E.4a.
estándar de 1 mg/L -3
de NO -N− 3 3 3
a un estándar de 1 mg/L de NO2 -N o siga las instrucciones del
fabricante del instrumento.
para verificar la eficacia de la reducción de la columna. Para
examinar aguas salinas, preparar soluciones patrón con el agua
En la tabla siguiente se presentan los datos obtenidos en 3
oceánica sustitutiva descrita en la Sección 4500-NH3 G.3g.
laboratorios. Los laboratorios utilizaron sistemas automatizados
n. Solución estándar de nitrito, 100 mg/L: Adquirir en un
basados en principios químicos idénticos pero con
comercio (caducidad indicada por el fabricante) o disolver 0,6072 g
configuraciones ligeramente diferentes. Los análisis se
±0,0005 g KNO2 en agua y diluir hasta 1000 mL; 1,00 mL = 100 µg
realizaron en 4 muestras- de agua natural que contenían incre-
NO2− -N. Almacenar refrigerado y preparar fresco mensualmente.
- mentos de NO3 -N inorgánico:
o. Solución intermedia de nitrito A: Diluir 1,0 mL de solución
madre de NO2 1 hasta 100 mL con agua; 1,00 mL = 1,02µg NO− Incremento Desviaci
-N. Pre- como NO - ón Sesg Sesgo
se preparan frescas a diario. N3− estándar o (µg N/L)
(µg/L) (µg N/L) (%)
4. Procedimiento 290 12 +5.75 +17
350 92 +18.10 +63
Coloque el colector como se muestra en la figura 4500-NO −
:2 y siga las 2310
siguientes 318
instrucciones +4.47 +103
3
procedimiento general descrito por el fabricante. 2480 176 -2.69 -67
Si el pH de la muestra es inferior a 5 o superior a 9, ajústelo
entre 5 y 9 con HCl concentrado o NH concentrado4 OH. En un solo laboratorio que utilizó muestras de agua superficial
a concentraciones de 100, 200, 800 y 2100 µg N/L, las
5. Cálculo desviaciones estándar
fueron de 0, ±40, ±50 y ±50 µg/L, respectivamente, y a concentra-
Utilizar una hoja de cálculo electrónica, una calculadora o el de 200 y 2200 µg N/L, las recuperaciones fueron del 100% y del
software del instrumento para hallar la pendiente, la intersección 96%, respectivamente.
y el coeficiente de correlación (r) o el coeficiente de Se cree que la precisión y el sesgo del sistema aquí descrito
determinación (r2 ) de la curva de calibración mediante
3
regresión son comparables.
lineal por mínimos cuadrados. Calcule la concentración de NO−
-N a partir de la siguiente ecuación: Bibliografía
A-I Fiore J, O'Brien JE. Automatización en química sanitaria - Partes 1 y 2.

C=
S Determinación de nitratos y nitritos. Determinación de nitratos y nitritos.
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donde: JD. The measurement of upwell- ing and subsequent biological processes
by means of the Tech- nicon AutoAnalyzer and associated equipment.
C = concentración Deep Sea Res.
A = absorbancia 1967;14(3):381-389.
I = intercepto de la recta de regresión Agencia de Protección del Medio Ambiente de EE.UU. Colorimétrico,
S = pendiente de la línea de regresión reducción automatizada de cadmio, Método 353.2. En: Métodos
para el análisis químico del agua y los residuos. Washington DC:
6. Control de calidad Office of Research and Devel- opment, U.S. Environmental
Protection Agency; 1983.
Ejecute un nivel medio de NO− -N estándar o recomendado por el Libro anual de normas ASTM: Agua (I). West Conshohocken (PA):
fabricante ASTM International; 2019. (Vol. 11.01.)
2 -
seguido inmediatamente por un patrón NO3 -N de la misma
concentración. Calcular la eficiencia de reducción de la siguiente
manera:
Eficacia =(respuesta NO-N/respuesta NO-N)×100

3 2
-
4500-NO3 G. (RESERVADO)
H. Método automatizado de reducción de hidracina (4500-NO3 ¯ )
-
4500-NO3 H. MÉTODO AUTOMATIZADO DE REDUCCIÓN DE HIDRACINA
1. Debate general
a. Principio: Reducir NO− -N a NO− -N con hidracina sul-

3 - 2 -
destino. A continuación, diazotizar todo el NO2 (tanto el NO inicial de la muestra como el NO2
y su NO reducido ) con sulfanilamida
−
3
y acoplarlo con NED
para formar un colorante azoico muy coloreado. Mida el
colorante colorimétricamente para determinar la concentración
de NO2 de la muestra. La reacción es catalizada por una pequeña
concentración (alrededor de 0,5 a 1,0 mg/L) de ion Cu+2.1
b. Interferencias: El color de la muestra que absorbe en el
rango fotométrico utilizado interferirá. Las concentraciones de
iones sulfuro inferiores a 10 mg/L hacen que las concentraciones
de NO− y NO− varíen
3
hasta
-2
±10%.
-
c. Aplicación: NO3 + NO2 en aguas potables y superficiales y
en los residuos domésticos e industriales puede determinarse en
un intervalo de 0,05 a 10 mg N/L.
2. Aparatos
a. Equipo analítico automatizado: Véase la figura 4500-NO3 − :3

para ver un ejemplo del instrumento analítico de flujo continuo.
Los volúmenes de los tubos, los caudales y la configuración
del colector s e dan sólo como referencia; siga las instrucciones
del fabricante. Figura 4500-NO3− :3. Colector de nitrato-nitrito, método automatizado
b. Pipetas: Si utiliza p i p e t a s ajustables, verifique la de reducción de hidracina.
calibración de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
a 1000 mL; 1.00 mL ±100 µg NO− -N. 3
Conservar con 2 mL de
3. Reactivos
CHCl3 /L. La solución es estable durante al menos 6 meses.
Alternativamente, utilice
3
una solución madre comercial de NO− -
a. Reactivo revelador del color: A unos 500 mL de agua N de una fuente diferente a la de la solución madre de nitrato A.
reactiva, añadir 200 mL de ácido fosfórico concentrado y 10 g j. Soluciones patrón de nitrato: Prepare estándares de
3
de sulfanilamida. Una vez disuelta completamente la calibración de NO− -N en el rango de 0 a 10 mg/L diluyendo a
sulfanilamida, añadir 0,8 g de NED. Diluir a 1 L con agua 100 mL volúmenes conocidos de solución madre de NO− -N A.
reactiva, almacenar en una botella ámbar y refrigerar. La Prepare un CVS de rango medio.
solución es estable
b. Solución madredurante aproximadamente
de sulfato 1 mes.
de cobre: Disolver 2,5 g CuSO + 5H O -
3
-
4 2 de la solución madre de NO3 -N B. Compare al menos un NO2 -N
en agua y diluir hasta 1 L con agua reactiva. estándar a un estándar NO− -N a la misma concentración para verificar
3
c. Solución diluida de sulfato de cobre: Diluir 20 mL de la eficacia de la reducción.
solución madre a 2 L con agua reactiva. k. Solución de nitrito estándar: Véase la sección 4500-NO −
B.3e, f
2
d. Solución madre de hidróxido sódico, 10 M: Disolver 400 g y g.
de NaOH en 750 mL de agua reactiva, enfriar y diluir hasta 1 L
con agua reactiva.
e. Hidróxido sódico, 1,0 M: Diluir 100 mL de solución madre 4. Procedimiento
de NaOH en 1 L con agua reactiva.
Coloque el colector como se muestra en la Figura 4500-NO−
f. Solución madre de sulfato de hidracina: Disolver 27,5 g de 3
:3 y siga el procedimiento general descrito por el fabricante.
hidracina
Haga pasar un NO de 2,0 mg− -N/L y un patrón de 2,0 mg NO− -
sulfato (N2H4 - H2SO4) en 900 mL de agua y diluir hasta 1 L con N/L3por el colector. 2
- -
agua reactiva. La solución es estable durante aproximadamente 6 para comprobar la reducción del 100% de NO3 -N a NO2 -N.
meses. Los 2 picos deben coincidir dentro del 10%; si no es así, ajustar
Precaución: Tóxico si se ingiere. Marque el recipiente con la
N concentración
H - H SO. Si eldepico NO− -N es inferior al NO− -N
advertencia. 24 2 4 3 2
g. Solución diluida de sulfato de hidracina: Diluir 22 mL de pico, aumentar

si el pico de NO la
− concentración de N2H4 - H2SO4 hasta que se igualen;
de -N es superior al de NO -N, reducir la
−
concentración
solución madre
a 1 L con agua reactiva. 3 2
h. Solución madre de nitrato A: KNO seco e n estufa de 103 a N2H4 - H2SO4. Una vez determinada la concentración correcta,
105 °C
3
durante 24 h. Disolver 0,7218 g ±0,0005 3 g en agua reactiva y a 1000 mL; 1,00 mL = 100 µg NO− -N. Conservar con 2 mL de
diluir CHCl3 /L. La solución es estable durante al menos 6 meses.
3
Alternativamente, utilice una solución madre comercial de NO− - no es necesario ningún otro ajuste.
N.
i. Solución madre de nitrato B: Utilizando KNO3 de una 5. Cálculo
fuente diferente a la utilizada
3
para la solución madre de NO− 1,
séquela en un horno a 103 a 105 °C durante 24 h. Disuelva Utilice una hoja de cálculo electrónica, una calculadora o el
0,7218 g ±0,0005 g en agua y diluya software del instrumento para hallar la pendiente, la intercepción
y el coeficiente de correlación (r) o el coeficiente de
determinación (r2 ) de la curva de calibración por lo menos
I. Método de inyección en flujo de reducción de cadmio
(4500-NO3 ¯ )
regresión lineal por cuadrados. Calcular la concentración
3
de NO - 6. Precisión y sesgo
N−
a partir de la siguiente
ecuación: En un único laboratorio que utilizó agua potable, aguas
superficiales y residuos industriales a concentraciones de 0,39,
A-I
1,15, 1,76 y 4,75 mg NO− -N/L, las desviaciones estándar fueron
C= de3 ±0,02, ±0,01, ±0,02 y
S
±0,03, respectivamente. En un único laboratorio que utilizaba
agua potable
donde: a concentraciones de 0,75 y 2,97 mg NO− -N/L, las
3
C = concentración recuperaciones fueron del 99% y 101%, respectivamente.2
A = absorbancia
I = intercepto de la recta de Referencias
regresión
S = pendiente de la línea de 1. Kamphake LJ, Hannah SA, Cohen JM. Automated analysis for
regresión nitrate by hydrazine reduction. Water Res. 1967;1(3):205-216.
2. Agencia de Protección Ambiental de EE.UU. Método colorimétrico
automatizado de reducción de hidracina 353.1. En: Métodos para el
análisis químico del agua y los residuos. Washington DC: Oficina de
Investigación y Desarrollo; 1983.
-
4500-NO3 I. MÉTODO DE INYECCIÓN EN FLUJO PARA LA REDUCCIÓN DEL CADMIO
1. Debate general
a. Principio: Una muestra se hace pasar por una columna de

Cd cobreada para reducir cuantitativamente su contenido de NO−
-N a NO− -N. A continuación, 3 2
-
el NO2 -N se diazotiza con sulfanilamida y se acopla con NED
para producir un colorante hidrosoluble de color magenta cuyo
absorbancia a 540 nm es proporcional al NO− + NO− -N [total
3 2
nitrógeno oxidado (TON)] en la muestra.
Para determinar únicamente el contenido de nitrito de la
muestra, retire la columna de Cd, vuelva a calibrar el método
con patrones de nitrito y repita los análisis de la muestra. 2
Los
analistas también pueden ejecutar los métodos TON y NO− -N
FIA en paralelo para un conjunto de muestras. En este caso, las
concentraciones determinadas mediante el método FIA se
Figura 4500-NO− :4. Colector FIA de nitrato + nitrito.
extraen de las concentraciones correspondientes determinadas
mediante el método TON para calcular las concentraciones de
NO− -N de las muestras.
3
3
Véanse también las secciones 4130 y 4500-NO
-
2. para reducir la absorbancia por debajo de la correspondiente al
b. Interferencias: La materia en suspensión en la columna LMD.
puede restringir el flujo de la muestra; si es necesario, filtre
3
las
muestras turbias (véase 4500-NO− A.1). Las concentraciones de Fe, 2. Aparatos
Cu u otros metales superiores a varios miligramos por litro
disminuyen la eficacia de la reducción. Añada EDTA al tampón para
Equipo de análisis de inyección de flujo compuesto por:
eliminar esta interferencia. El aceite y la grasa recubrirán la
a. Válvula de inyección FIA con bucle de muestreo o
superficie del Cd, por lo que, si es necesario, elimínelos mediante
equivalente.
extracción previa con un disolvente orgánico (véase la Sección
5520). El sulfuro de hidrógeno en muestras de agua o aguas
residuales procedentes de masas de agua anóxicas puede
desactivar la columna, por lo que se recomienda burbujear las
muestras acidificadas olorosas con aire durante 15 minutos. El cloro
residual puede oxidar la columna de Cd, así que revise las
muestras por Cl residual (vea los métodos DPD en la Sección
4500-Cl) y, si es necesario, agregue solución de Na2S2O3 (Sección
4500-NH3 B.3d) para removerlo. Si el color de la muestra no
tratada absorbe a unos 540 nm, interferirá con los resultados. Medir
la absorbancia de las muestras no tratadas y diluir, si es necesario,
(4500-NO3 ¯ )
b. Bomba dosificadora multicanal.

c. Colector FIA (Figura 4500-NO− :4) con celda de flujo. La 3
-
figura 4500-NO3 :4 sólo muestra los caudales relativos. Los
volúmenes de los tubos se dan sólo como ejemplo; pueden
reducirse proporcionalmente. Utilice tubos colectores de un
material inerte, como TFE.
d. Detector de absorbancia, 540 nm, paso de banda de 10 nm.
e. Sistema de control y adquisición de datos de la válvula de
inyección.
f. Pipetas: Si se utilizan pipetas ajustables, calibrar según las
instrucciones del fabricante.
3. Reactivos
Utilice agua reactiva para preparar el soporte y todas las

soluciones. Para evitar la formación de burbujas en los tubos del
colector, rocíe el portador y el tampón con helio (He). Haga
pasar He a 140 kPa (20 lb/pulg.2) a través de un tubo de
desgasificación de He. Haga burbujear He a través de 1 L de
solución durante 1 min.
a. Tampón de cloruro amónico: Precaución: Humos. Use
una campana. En un recipiente de 1 L, añadir 800 mL de agua
reactiva, 107 mL de HCl conc, 62 mL de NH4 OH y 1,0 g de
EDTA disódico. Mezclar hasta disolución.
(4500-NO3 ¯ )
Tabla 4500-NO3− :1. Resultados de estudios de laboratorio único con productos seleccionados d. Solución de sulfato de cobre al 2%: En un
recipiente de 1 L, añadir 20 g
Matrices CuSO4 - 5H2 O a 900 mL de agua reactiva. Agitar para disolver,
Adición Desviació diluir a 1 L con agua reactiva y mezclar. Esta solución es estable
conocida n durante 1 año.
Designación (mg de Recupera estándar e. Gránulos de cadmio cobreado: Colocar de 10 a 20 g de
Matriz de la NO− -N/L) ción relativa gránulos gruesos de Cd (de 0,3 a 1,5 mm de diámetro) en un
muestra/blan (%) (%) vaso de precipitados de 250 mL. Lavar con 50 mL de acetona,
co
3 luego con agua, luego con dos porciones de 50 mL de 1 M
HCl (¶ c arriba). Aclarar varias veces con agua. Precaución: El
Tratamiento Referencia -
-
muestraa 102 cadmio es tóxico y cancerígeno. Recoger y almacenar todos
de aguas
afluente los residuos de Cd. Cuando manipule Cd, use guantes y siga
residuale
las precauciones descritas en la hoja de datos de seguridad
sde la
planta del Cd.
Blankb
0.2 100 - Añadir 100 mL de solución de sulfato de cobre al 2% (¶ d
0.4 100 - anterior) al cadmio preparado anteriormente. Agitar durante unos
Sitio Ac
0 - <1
0.2 101 - 5 minutos, luego decantar el líquido y repetir con una nueva
0.4 96 - porción de 100 ml de la solución de CuSO al 2%4 . Continúe este
Sitio Bc 0 - <1 proceso hasta que persista el color azul del Cu acuoso. Decantar
0.2 90 - y lavar con al menos cinco porciones de tampón NH4 Cl (ver ¶ a
0.4 88 - arriba) para eliminar el Cu coloidal. El Cd correctamente activado
Sitio Cc 0 - <1
0.2 95 - aparece negro o gris oscuro. Los gránulos de Cd cobreados
0.4 95 - pueden almacenarse en una botella bajo tampón NH Cl. Las
Aguas Referencia columnas
4
de Cd también pueden adquirirse comercialmente.
-
residuales f. Solución madre de nitrato A, 200 mg NO3 -N/L: En un volu-
efluentes de samplea
- 102 - de 1 L
depuradora matraz métrico, disolver 1,444 g ±0,0005 g de KNO3 en unos
600 mL de agua. Añadir 2 mL de cloroformo. Diluir hasta la
Blankb
0.2 100 -
0.4 95 - marca e invertir para mezclar. Esta solución es estable durante 6
Sitio Ac 0 - 0.9 meses.
0.2 95 - g. Solución madre de nitrato B, 200 mg NO− -N/L: En un volu-
de 1 L
0.4 102 - matraz métrico, disolver 1,444 g ± 3
Sitio Bc 0 - 0.7 0,0005 g de KNO3 en unos 600
0.2 91 - agua. -(Utilice KNO3 mL
0.4 101 - de una fuente distinta a la de las existencias
Sitio Cc 0 - 0.5 NO3 solución A.) Añadir 2 mL de cloroformo. Diluir hasta la
0.2 91 - marca y
0.4 96 -
invertir para mezclar. Esta solución es estable durante 6 meses.
Vertedero Referencia
h. Estándar stock de nitrito, 200.0 mg 2
NO− -N/L: En un
matraz aforado de 1 L, disuelva 0.986 g ±0.0005 g de nitrito de
sodio (NaNO2 ) o 1.214 g ±0.0005 g de nitrito de potasio (KNO2
) en aproximadamente 800 mL de agua. Añadir 2 mL de
cloroformo. Diluir hasta la marca e invertir para mezclar.
Refrigerar.
i. Solución patrón: Preparar los estándares NO− o NO− en el
3 2
lixiviado samplea
- 98 - rango de concentración deseado, utilizando la solución madre de
s
Blankb
0.2 100 - nitrato A. Pre- pare un CVS con la solución madre de nitrato B.
0.4 98 -
Sitio Ac 0 - <1 4. Procedimiento
0.2 104 -
0.4 96 -
Sitio Bc 0 - <1 Preparar un colector equivalente al de la figura 4500-NO− :4
3
y
0.2 95 - empaquetar la columna con gránulos de Cd cobreados. Siga los
0.4 94 - métodos suministrados por el fabricante de la columna y del
Sitio Cc 0 - <1 instrumento o el procedimiento operativo estándar del
0.2 91 <1
0.4 93 -
laboratorio para este método. Siga los procedimientos de control
de calidad descritos en la Sección 4020.
una
muestra QC de la EPA de EE.UU. , 1,98 mg N/L. 5. Cálculos
b
Determinado por duplicado.
c
Muestras sin adiciones conocidas determinadas 4 veces; muestras con adiciones Utilice una hoja de cálculo electrónica, una calculadora o el
conocidas determinadas por duplicado. Diferencia típica entre duplicados:
software del instrumento para hallar la pendiente, la intersección
influente, 2%; efluente, 1%; lixiviado, <1%.
y el coeficiente de correlación (r) o el coeficiente de
determinación (r2 ) de la curva de calibración3
por regresión
(4500-NO3 ¯ )
lineal de mínimos cuadrados. Calcular la concentración de NO - N−
El pH de este tampón debe ser de 8,5. (Ajuste el pH a 8 ,5 con a partir de la siguiente ecuación:
NH4 OH o HCl).
b. Reactivo de color de sulfanilamida: En un recipiente ámbar A-I
C=
tarado de 1 L, añada 850 mL de agua, 100 mL de H3 PO4 al S
85%, 40,0 g de sulfanilamida y
1,0 g de NED. Mezclar hasta humedecer y agitar con barra donde:
agitadora durante 30 min hasta disolución. Diluir hasta 1 L con C = concentración,
agua reactiva. Esta solución es estable durante 1 mes. Desechar A = respuesta (altura o área del
la solución si está muy coloreada u oscura. pico) I = intercepto de la línea de
c. Ácido clorhídrico, 1M: A un recipiente de 1 L, añadir 800 regresión S = pendiente de la línea
mL de agua reactiva y después 83 mL de HCl concentrado. de regresión
Mezclar y diluir hasta 1 L con agua reactiva. Esta solución es
estable durante 1 año.
(4500-NO3 ¯ )
6. Control de calidad 7. Precisión y sesgo
La absorbancia de NO −
-N debe ser del 90% al 110% de la En los estudios que se describen a continuación, se midió el
absorbancia de NO− -N NO− . Se
3 2 -3
absorbancia del patrón a la misma concentración. Si no es así, ninguna concentración significativa de NO2 -N en las muestras.
deténgase y Recuperación y desviación típica relativa: Tabla 4500-NO− :1
corregir el problema regenerando (4500-NO− E.3b) y
reactivando (4500-NO− E.4a 3 ofrece resultados de estudios de un solo laboratorio. 3
3 ) o sustituyendo la columna.
-
4500-NO3 J. MÉTODO MANUAL DE REDUCCIÓN ENZIMÁTICA
1. Debate general con ácido clorhídrico diluido (~5% volumen a volumen) y agua
reactiva justo antes de su uso. A continuación, estos artículos
a. Principio: El nitrato (NO 3
−
) en el agua se reduce deberán enjuagarse tres veces con pequeñas porciones de las
cuantitativamente soluciones que vayan
Acondicionar a contener.
las puntas de pipeta desechables dispensando el
primer aspi-
−
a nitrito (NO2 ) por la nitrato reductasa eucariota (NaR,

Comisión de enzimas número 1.7.1.1 o 1.7.1.2) y su cofactor, la volumen nominal a desperdiciar. Toque con la punta de la pipeta
forma reducida de β�� adenina dinucleótido la pared interior del recipiente que recibe las soluciones
(NADH). El NaR es el catalizador y el NADH es el agente dispensadas durante el paso de "soplado" manual o automático
reductor. Este método utiliza NaR.1 de las pipetas digitales.
El NO resultante−2 se determina colorimétricamente con los b. Equipo colorimétrico: Espectrofotómetro o fotómetro con
mismos reactivos de Griess [sulfanilamida (SAN) y N-(1-naftil)- filtro de interferencia de 540 ± 10 nm. Para cualquiera de los dos
dihidrocloruro de etilendiamina (NED)] utilizados en los métodos tipos de instrumentos, utilice una cubeta de vidrio o plástico de 1
de reducción del cadmio. El cromóforo magenta intenso absorbe al cm de longitud de paso con un volumen aproximado de 2 ml.
máximo a 543 nm. Duplique los volúmenes de muestra y reactivo si se requieren 4
Este método es adecuado para determinar las concentraciones mL para la longitud de paso del fotómetro.
combinadas de nitrito y nitrato (nitrito-nitrato) tanto en muestras
filtradas como en muestras conservadas en ácido (Tabla 1060:1 3. Reactivos
y 40 CFR Parte 136
Tabla 2). Nota: Las buenas prácticas de laboratorio y de gestión de
Las concentraciones de nitrato pueden calcularse como la residuos sugieren utilizar pesos y volúmenes proporcionalmente
diferencia entre las concentraciones de nitrito-nitrato y las equivalentes para las soluciones preparadas que sean coherentes
concentraciones de nitrito determinadas independientemente. con el uso previsto dentro de su vida útil.
Nota: Las concentraciones de nitrito en el agua suelen ser a. Solución amortiguadora de fosfato 27,5-mM: Disolver 3,75
insignificantes en comparación con las concentraciones de g de dihidrogenofosfato de potasio (KH PO , CAS 7778-77-0),
nitrato, 2
y
la especiación 0,01 g de
de nitrito/nitrato no es posible en muestras acidificadas.3-8 El
2 4
del límite de detección del método (MDL), soluciones de

El intervalo aplicable para este método es de 0,05 a 10 3
mg NO− - demostración inicial de la capacidad (IDC), blancos de métodos y
-
N por litro, dividido en un intervalo bajo3 (0,05-1,0 mg NO -N/L) reactivos, soluciones de blanco fortificadas en laboratorio (LFB) y
y un intervalo alto
3
(0,5-10 mg NO− -N/L). soluciones de matriz fortificadas en laboratorio (LFM) de acuerdo
b. Interferencias: Las muestras turbias deben filtrarse a través con las directrices de la Sección 4020. Es una buena práctica
de un filtro de 0,45 µm antes del análisis para eliminar la analítica enjuagar tres veces toda la cristalería volumétrica y los
interferencia de partículas. Las altas concentraciones de ciertos recipientes para reactivos, soluciones de calibración y control de
iones metálicos (cobre, hierro, plomo, zinc y otros metales calidad (CC).
pesados) reducen la eficacia de la reducción; un quelante en el
reactivo tampón minimiza esta interferencia. Las muestras
coloreadas que absorben cerca de 540 nm podrían interferir; el
pequeño volumen de muestra utilizado aquí mitiga esta
posibilidad.
2. Aparatos
a. Equipo volumétrico: Matraces aforados de clase A, probetas

graduadas "to deliver" (TD) de clase A y pipetas digitales que
abarcan el intervalo de volúmenes de 1 µl a 1000 µl. Utilícelos para
preparar soluciones de calibración, soluciones de verificación
continua de la calibración (CCV), soluciones de determinación
(4500-NO3 ¯ )
etilendiamina tetraacetato disódico dihidratado (C10H14O8N2Na2 ⋅ 2H2
O) (EDTA, CAS 6381-92-6), y 1,4 g de hidróxido potásico
(KOH, CAS 1310-58-3) en unos 500 mL de agua reactiva en
un matraz aforado de 1000 mL, diluir hasta la señal de enrase y
mezclar. Utiliza una tira reactiva de pH de rango estrecho para
verificar que el pH de este tampón es de 7,5 ± 0,3. Transfiera
esta solución a un recipiente con tapón de rosca y consérvela a
4 °C; es estable durante 6 meses.
b. Solución madre de β-nicotinamida adenina dinucleótido,
forma reducida (NADH, CAS 606-68-8) (16,0 mg/mL):
Disolver 400 mg de NADH en 10 mL de agua reactiva en un
matraz aforado de 25 mL (u otros pesos y volúmenes
proporcionalmente equivalentes), diluir hasta la marca y
mezclar. Transferir alícuotas de 1 mL a viales de polipropileno
incoloro con tapón a presión de 1,5 mL. Cuando se congela y
se almacena a 20 °C, esta solución es estable durante 1 mes.
(Nota: El NADH es un polvo blanco higroscópico que es
libremente soluble en agua. Los sólidos son estables si se
almacenan secos y protegidos de la luz. Las soluciones neutras
no tienen color y son estables durante 1 semana si se almacenan
a 4 °C, pero se descomponen rápidamente en condiciones
básicas o ácidas).
c. Solución de trabajo de NADH: Descongelar 1 vial de
solución madre de NADH (¶ b anterior) y diluir a 10 mL con
tampón fosfato (¶ a anterior). Este reactivo es estable de 8 a 12
h. Prepare suficiente solución de trabajo de NADH para el
número de muestras y estándares a determinar. (Nota: El
exceso de NADH puede inhibir la formación de color en la
reacción de color. La concentración molar de NADH en
J. Método manual de reducción enzimática (4500-
NO3 ¯ )
el medio de reducción debe ser aproximadamente el doble que el cuando no se utiliza. Su vida útil suele ser de unos 6 meses si se
del patrón de calibración más alto). almacena a temperaturas comprendidas entre 2 y 6 °C.
d. Reactivo de sulfanilamida (SAN) (10 g/L): A un matraz Alternativamente, se pueden utilizar soluciones madre de nitrito
aforado de 1000 ml que contenga unos 500 ml de agua reactiva y certificadas disponibles en el mercado a través de proveedores de
10,0 g de SAN (CAS 63-74-1), añadir 300 ml de ácido suministros químicos.
clorhídrico concentrado (HCl, 37% p/v) agitando j. Solución patrón de nitrito (10 mg/L NO2-N): Diluir 10 mL de
constantemente. Cuando el SAN esté completamente disuelto, solución madre de nitrito (¶ i arriba) a 1 L con agua. Almacene
diluir hasta la marca y mezclar. Esta solución es estable durante esta solución en un refrigerador cuando no esté en uso. Su vida
unos 6 meses si se almacena en una botella de vidrio translúcido o útil suele ser de aproximadamente 1 mes cuando se almacena a
de plástico a temperatura ambiente. temperaturas comprendidas entre 2 y 6 °C.
e. Solución de dihidrocloruro de N-(1-naftil)etilendiamina (NED) k. Estándares de trabajo: Utilice el patrón primario
3
de 1000 mg
(1 g/L): En un matraz aforado de 1000 ml que contenga de NO --N por litro para preparar al menos 3 patrones de trabajo
aproximadamente 500 ml de agua reactiva, añadir 0,20 g de NED para el método de alto rango diluyendo, por ejemplo, volúmenes
(CAS 1465-25-4) y mezclar hasta su completa disolución. Diluir de 50, 100, 250, 500 y 1000 µl a 100 mL en matraces aforados.
hasta la señal de enrase y mezclar. Almacenar el reactivo NED en Las concentraciones resultantes serán de 0,5, 1,0, 2,5, 5,0 y 10,0
mg de NO --N por litro, respectivamente. 3
un recipiente de vidrio ámbar o de plástico marrón con tapón de (Tabla 4500-NO 3-:1). - h arriba)
rosca, en el que es estable durante unos 2 meses a temperatura
ambiente. Utilice el estándar secundario de 100 mg NO3 -N por litro (¶
f. Nitrato reductasa (NaR, CAS 9029-27-0): Siga las preparar al menos 3 patrones de trabajo para el método de bajo
instrucciones del fabricante para preparar una solución de 1 rango diluyendo, por ejemplo, volúmenes de 50, 100, 250, 500 y
unidad de actividad NaR por mL de tampón fosfato (¶ a 1000 µl hasta 100 mL en matraces aforados. L a s
anterior). Almacene la solución a temperaturas entre 2 y 6 °C, concentraciones resultantes serán de 0,05,
3
0,1, 0,25, 0,5 y 1,0
donde es estable durante 24 a 36 h. Prepare suficiente NaR para mg de NO --N por litro, respectivamente.
el número total de muestras, estándares de nitrato y estándares (Tabla 4500-NO3 -:2).
de control de calidad a determinar. l. Agua reactiva: El agua reactiva o agua desionizada debe
Nota: En las muestras de agua natural y de aguas residuales, estar libre de cantidades detectables de nitrato y nitrito.
las sub-estancias húmicas con alto contenido fenólico (>2 mg de
carbono orgánico disuelto/L) empiezan a inhibir fuertemente Tabla 4500-NO− :1. Preparación de patrones de NO -N de alta gama
algunas formas de NaR a tem- 3 3
peraturas iguales o superiores a 20 °C, pero tienen poco efecto Cantidad de N en la solución Volumen (µL) de
sobre la actividad NaR entre 5 y 15 °C.2,9 Las sustancias húmicas nominal de NO3 -N (mg 1000 mg NO− -N/L solución madrea
no N/L)
3
inhiben el AtNaR (número de la Comisión de Enzimas 1.7.1.1) a
tem- 0.50 50
peraturas de hasta 37 °C (la temperatura de reacción más alta 1.00 100
ensayada), por lo que AtNaR es muy adecuado para este método 2.50 250
5.00 500
cuando se realiza a temperaturas ambiente de laboratorio o de 7.50 750
campo. Para las muestras que se espera que contengan ácidos 10.00 1000
húmicos, los analistas deben verificar la eficiencia de reducción a
Diluir hasta la señal de enrase en matraz aforado de 100 ml con agua reactiva.
como se describe en la sección de cálculo utilizando picos de
nitrito y nitrato nominalmente idénticos a la matriz de la muestra 4. Control de calidad
en cuestión.
Nota: El agua salada (muestras oceánicas, medios de Las prácticas de control de calidad que se consideran parte
crecimiento de algas marinas) también puede inhibir integrante de cada método se resumen en la Tabla 4020:1. Las
parcialmente la actividad de algunas formas de NaR. Se sugiere directrices de control de calidad se encuentran en las Secciones
el uso de AtNaR cuando se analicen este tipo de aguas, 1020 y 4020 y en el resto de esta- subsección.
especialmente para aguas que contengan menos de 1 ppm de Comparar al menos un NO estándar con un NO - estándar
reducido
NO3 -N.
g. Solución madre de nitrato (1000 mg/L NO3-N): Secar el
nitrato potásico (KNO3 , CAS 77757-79-1) en una estufa a 105
°C durante 24 h. Disolver 7,218 g en agua en unos 500 mL de
agua reactiva en un matraz aforado de 1000 mL, diluir hasta la
señal de enrase, mezclar y transferir a un plas- 2 3
frasco. Guarde esta solución en un frigorífico cuando no la mezcle y transfiera a una botella de plástico. Almacene esta
utilice. Su vida útil suele ser de unos 6 meses si se almacena a solución en un refrigerador cuando no esté en uso. Su vida útil
temperaturas comprendidas entre 2 y 6 °C. Alternativamente, se suele ser de aproximadamente 1 mes cuando se almacena a
pueden utilizar soluciones madre de nitrato certificadas temperaturas comprendidas entre 2 y 6 °C.
disponibles en el comercio a través de proveedores de suministros i. Solución madre de nitrito (1000 mg/L NO2-N): El nitrito de
químicos. potasio no es estable al calor; en lugar de secarlo en estufa, debe
h. Solución patrón de nitrato (100 mg/L NO3-N): Diluya 100 mL almacenarse, sin tapar, en un desecador durante al menos 24 h
de solución madre de nitrato (¶ g arriba) a 1 L con agua reactiva, antes de pesarlo. Tenga en cuenta que el nitrito de potasio se oxida
NO3 ¯ )
fácilmente; el nitrito de potasio apelmazado o descolorido no a la misma concentración para verificar la eficacia de la
debe utilizarse para preparar soluciones de calibración o de reducción. Reduc-
referencia. Pesar y disolver 6,072 g de nitrito potásico (KNO2 , La eficiencia debe ser del 90% al 110%.
CAS 7758-09-0) en unos 500 mL de agua contenidos en un
matraz aforado de 1000 mL. Diluir hasta la marca con agua Tabla 4500-NO− :2. Preparación de patrones de NO -N de gama baja
3 3
reactiva, mezclar y trasvasar a una botella de plástico. Guarde Cantidad de N en la solución Volumen (µL) de 100 mg NO3 ¯-
esta solución en un frigorífico cuando nominal de NO3 -N (mg N/L) N/L solución madrea
0.05 50
0.10 100
0.25 250
0.50 500
0.75 750
1.00 1000
a
Diluir hasta la señal de enrase en matraz aforado de 100 ml con agua reactiva.
a. Demostración inicial de la capacidad (IDC): Antes de

analizar muestras con este método de ensayo, los analistas deben
caracterizar tanto el rendimiento del instrumento como el del
laboratorio, demostrando el cumplimiento de las normas de
aceptación.
NO3 ¯ )
1) Rango operativo: determine el rango operativo (de debe ser inferior al LMD; en caso contrario, interrumpa el
calibración) antes de iniciar la prueba y verifíquelo siempre que análisis de la muestra hasta que se corrija el problema y, a
se espere u observe un cambio significativo en la respuesta del continuación, vuelva a analizar todas las muestras afectadas o
instrumento. Verifique la linealidad con un mínimo de 1 blanco indique que los resultados no cumplen los criterios de
y 3 estándares. Si alguno de los datos de verificación varía del funcionamiento del método de ensayo.
valor nominal del patrón en ±10%, restablezca la linealidad. Si 2) Matriz fortificada en laboratorio (LFM) y duplicado de
alguna porción del rango de prueba de linealidad no es lineal, matriz fortificada en laboratorio (LFMD)-Para comprobar si hay
entonces use suficientes estándares para definir claramente el interferencias en la matriz específica que se está analizando,
rango lineal (ver Sección 4020 B.1). pinchar una alícuota de al menos una muestra de cada lote con
a) Muestra de control de calidad: una muestra de control de una concentración conocida de nitrato-nitrito y someterla al
calidad es un estándar de concentración conocida cuya fuente método analítico. La suma de las concentraciones de nitrito-
externa es diferente de la utilizada para los estándares de nitrato en la muestra y en el suelo no debe superar la del patrón
calibración. Analice un estándar de control de calidad antes de de calibración más alto. La concentración de nitrito-nitrato de la
iniciar el ensayo y, a continuación, trimestralmente o según sea muestra enriquecida debe ser la mayor de las siguientes
necesario para cumplir los requisitos de control de calidad. El • de 2 a 5 veces superior a la concentración de una muestra
resultado de la muestra de control de calidad debe estar dentro no enriquecida, o
del ±10% de la concentración conocida; si no es así, identifique • de 10 a 50 veces superior al MDL.
el origen del problema y corríjalo antes de continuar con el IDC. Calcular el porcentaje de recuperación (P) de la espiga
b) Límite de detección del método-Establezca el LMD para el mediante la siguiente fórmula:
analito utilizando agua reactiva (blanco) enriquecida con nitrato
100 × �� A × (Vs + V ) - (B × Vs )��
a una concentración de 1 a 5 veces el LMD previsto. Siga los
procedimientos de 40 CFR Parte 136, Apéndice B, y como se
describe en
� �
Sección 4020 B. 2. P= C×V
2) Si la concentración fortificada utilizada para determinar el
LMD es más de 5 veces el LMD calculado, repita la
determinación del LMD con una concentración de muestra donde:
inferior. La MDL debe ver-
ificado de acuerdo con la Sección 4020 B. 9 y repetido cuando A = concentración de nitrito-nitrato (mg/L) en las muestras
un nuevo operario comience a trabajar, o siempre que se enriquecidas,
produzca un cambio significativo en el fondo o en la respuesta Vs = volumen de muestra (mL) utilizado,
de los instrumentos. V = volumen añadido de la solución de adición (mL),
b. Calibración y verificación de la calibración Antes del B = concentración de nitrito-nitrato (mg/L) en muestras no
análisis de la muestra, calibre el instrumento utilizando al menos enriquecidas, y
1 blanco y 3 patrones de trabajo que contengan concentraciones C = concentración de nitrito-nitrato (mg/L) en la solución de adición.
de nitrato que correspondan a la concentración esperada de la El porcentaje de recuperación de la espiga debe situarse
muestra. Lleve cada solución estándar a través del método de dentro de un margen de ±10% de la concentración de nitrito-
prueba analítica completo, incluyendo los pasos de preservación nitrato para el agua potable. Véanse las secciones 4020
y pretratamiento de la muestra. Antes de cada análisis, verifique
B.7 y B.8 para los procedimientos de establecimiento de límites
la calibración con una muestra de control de calidad de rango
de control en matrices de agua no potable. Si existe interferencia
medio. El resultado debe estar dentro del ±10% de la
de la matriz, vuelva a analizar todas las muestras afectadas
concentración conocida; si no es así, determine el problema y
utilizando un método de ensayo que no se vea afectado por la
recalibre el instrumento.
interferencia de la matriz, diluya la muestra enriquecida y vuelva
c. Rendimiento y recuperación iniciales (IPR): Los a analizarla, o bien indique que los resultados de las muestras
laboratorios que no hayan realizado antes este método de ensayo enriquecidas afectadas no se ajustan a los criterios de
o que hayan cambiado la plataforma del instrumento o el funcionamiento del método de ensayo.
analista deben realizar un estudio de precisión y sesgo para 3) Muestra de control de laboratorio (MCL)-Para verificar el
demostrar la capacidad del laboratorio. Analice 4 réplicas de una valor cuantitativo producido por el método, analice una MCL
solución estándar preparada a partir de un material de referencia como se describe en la Sección 4020 B.6.
certificado (CRM) independiente que contenga una
concentración media de nitrito-nitrato; la matriz y la
composición química de la solución deben ser similares a las de 5. Procedimiento
las muestras previstas. Siga cada réplica el método de ensayo
analítico completo, incluidos los pasos de conservación y a. Selección del intervalo del método y del tamaño de la
pretratamiento de la muestra. Calcule la media y la desviación muestra: Seleccione el volumen de la muestra en función de la
estándar de los 4 valores y compárelos con los rangos aceptables concentración de nitrato prevista. Para el método de rango bajo
3
proporcionados por el fabricante del CRM. Utilice este método (0,05-1,0 mg NO− -N/L), utilice 500 µL de muestra, solución de
de ensayo para analizar muestras únicamente si las calibración o agua reactiva (en el caso de blancos de reactivo) y
recuperaciones de DPI se encuentran dentro de los límites 450 µL de tampón fosfato; para el método de rango alto (0,5-
aceptados. 10,0 mg NO− -N/L), utilice 50 µL de muestra, solución de
d. Demostración continua de la capacidad: Para garantizar calibración,
que la 3 -
está en control, analice una muestra de control de calidad que contenga una concentración de nitrito-nitrato de rango medio con
3
NO3 ¯ )
cada lote de 10 o menos muestras. Lleve la muestra de control o agua reactiva y 900 µL de tampón fosfato (Tabla 4500-NO3 :3).
de calidad a través de todos los pasos del análisis. Para ambos rangos de concentración, utilice 50 µL de reactivo
NADH y 20 µL de reactivo NaR, como se muestra en la Tabla
4500-NO− :3.
método, incluida la conservación y el pretratamiento de la b. Tratamiento de la muestra:
muestra. El resultado de la muestra de control de calidad debe 1) Eliminación de la turbidez: utilice filtros de fibra de
situarse dentro de un margen de ±10% de la concentración vidrio, filtros de membrana de poliéter sulfonado o filtros de
conocida; de lo contrario, interrumpa el análisis de la muestra membrana de nailon para eliminar las partículas de las muestras
hasta que se corrija el problema y, a continuación, vuelva a antes de los análisis.
analizar todas las muestras afectadas o indique que los 2) Soluciones de trabajo para muestras conservadas en ácido:
resultados quedan fuera de los criterios de rendimiento del Para las muestras conservadas en ácido, utilice 800 µl de ácido
método de ensayo. sulfúrico 2,25 M de alta pureza por cada 100 ml de agua reactiva
1) Método en blanco: analice un ensayo en blanco de agua utilizada para preparar las soluciones de trabajo.
reactiva con cada lote de 10 o menos muestras. El nitrato-nitrito
del b l a n c o
NO3 ¯ )
y otras soluciones de control de calidad. Es un buen fue del 106% (valor pico = 5,3 ± 0,1 mg NO− -N/L para N = 25;
complemento para RSD 3
matrices de muestras conservadas al ácido.9 = 1.89%).
3) Reducción de la muestra: vierta los volúmenes adecuados En un único estudio de laboratorio utilizando agua de vertido
de muestra, tampón fosfato 27,5-mM y NADH en un tubo de de operaciones concentradas de alimentación animal (CAFO)
reacción o cubeta desechable. Tape el recipiente de reacción con enriquecida
3
con 5,0 mg/L de NO− -N, la recuperación media fue
un pequeño cuadrado de del 92% con una RSD del 1,55% para 5 réplicas.
Tabla 4500-NO− :3. Composición de las mezclas de reacción para los
3
productos de baja y media viscosidad Tabla 4500-NO3− :4. Evaluación de la precisión del método de reducción
Determinaciones de nitrato de alto rango enzimática manual
Constituyente Concentración de3 Concentración de3
Volumen NO -N de rango NO -N de rango
(µL) bajo (mg3 NO ¯- RSDa
alto (mg3 NO− - RSD
Constituyente Gama baja Gama alta N/L) N/L)
27,5 mM Tampón fosfato 450 900 0.05 1.85% 0.5 2.87%
Solución de NADH (0,16 mg/mL) 50 50 0.1 0.77% 1.0 2.88%
Muestra o patrón a analizar 500 50 0.25 0.43% 2.5 1.30%
NaR 20 20 0.5 0.45% 5.0 0.66%
Volumen total 1,020 ml 1,020 ml 1.0 0.26% 10.0 0.56%
a
Desviación típica relativa, N = 5
de laboratorio y mezcle su contenido invirtiéndolo suavemente 3
veces. Como alternativa, utilice un mezclador de vórtice. Retire Tabla 4500-NO3− :5. Resultados del estudio colaborativo con
la película de laboratorio, añada 50 µl de NaR, vuelva a tapar el precisión y sesgo del método
recipiente de reacción con la película de laboratorio y
mezclar de nuevo su contenido. No es necesario medir con Agua Aguas Efluentes
precisión el tiempo de reacción, pero se necesita un tiempo de potable superfi de
reacción de al menos 20 minutos para la reducción completa del ciales papelera
nitrato. s
4) Desarrollo del color y medición-Añada 500 µl de sulfa- Resultado medio (mg/L) 2.17 1.96 2.08
nilamida, mezcle y espere 1 minuto para asegurar la % RSDa (N = 5) 2.51 1.80 3.53
Resultado de la muestra enriquecida (mg/L) 7.54 7.06
diazotización completa del nitrito. Añadir 500 µL de NED y 7.15
mezclar. Después de añadir el reactivo NED, espere al menos 10 % RSD (N = 5) 4.05 2.23 1.43
min pero no más de 2 h antes de medir la absorbancia a 540 nm % Recuperación 107 102 101
frente a un blanco de reactivo-agua. (Nota: Las muestras que a
Desviación típica relativa, N = 5
tengan concentraciones de nitrato superiores a la del patrón de
calibración de alta concentración deben diluirse con agua
reactiva y volverse a analizar). En un estudio colaborativo de 5 laboratorios que analizaron 5
réplicas en cada una de 3 matrices a 2 concentraciones, la
6. Cálculo recuperación media fue del 103% y la RSD media del 2,61%. En
el cuadro 4500-NO− :5 figura3 un resumen de los resultados del
Obtenga una curva estándar trazando la absorbancia a 540 nm estudio.
de los estándares de nitrato frente a la 3concentración nominal de
NO− -N. Calcular las concentraciones de la muestra directamente Referencias
a partir de la curva estándar utilizando la ecuación de regresión
de la línea ajustada a los 3datos. Informe como mg/L de2 N 1. Campbell WHP, Song P, Barbier GG. Nitrato reductasa para el
2 análisis de nitrato en agua. Environ Chem Lett. 2006;4(2):69-73.
oxidado (la suma de NO− -N más NO− -N) a menos que la
2. Patton CJ, Kryskalla JR. Analytical properties of some commercially avail-
concentración de NO− -N se determine por separado y se reste. able nitrate reductase enzymes evaluated as replacements for cadmium in
Calcule el porcentaje de eficiencia de reducción de la siguiente automated, semi-automated, and manual colorimetric methods for deter-
manera: mination of nitrate plus nitrite in water; USGS Scientific Investigations
Report 2013-5033. 2013. Reston (VA): U.S. Department of the Interior,
Porcentaje de eficacia de reducción = 100 × CNO /CNO
2 3
U.S. Geological Survey, Office of Water Quality; [actualizado el 6 de
donde CNO 2 y C NO3
son las concentraciones medidas para septiembre de 2013; consultado el 15 de febrero de 2019]
stan- http://pubs.usgs.gov/sir/2013/5033/.
soluciones estándar que contienen concentraciones estándares NO− -N (N = 5) se muestran en la Tabla 4500-NO− :4.
nominalmente idénticas de
En un único laboratorio utilizando muestras de agua potable (Lago
nitrito y nitrato, respectivamente. Linden, MI) con adiciones de 0,50 mg NO− -N por litro, el recov-
En un solo laboratorio utilizando muestras de agua de

reactivo, las desviaciones estándar
3
relativas (RSD) para los
3
NO3 ¯ )
3. Brezonic PL, Lee GF. Preservation of water samples for inor- ganic 5. Delfino JJ. The stability of nitrate in unpreserved potable water samples.
nitrogen analyses with mercuric chloride. Air Water Pollut. J Am Water Works Assoc. 1979;71(10):584-586.
1966;10(8):549-553. 6. Williams TJ. An evaluation of the need for preservation of potable
4. Howe LH, Holley CW. Comparison of mercury (II) chloride and water samples for nitrate testing. J Am Water Works Assoc.
sulfu- ric acid as preservatives for nitrogen forms in water samples. 1979;71(3):157-160.
Environ Sci Technol. 1969:3(5):478-481.
3
ería fue del 102% (valor de pico = 0,51 ± 0,01 mg- NO3 -N/L para 7. Roman MR, Dovi R, Yoder R, Dias F, Warden B. Determinación por ion
N = 25; cromatografía y espectrofotometría de los efectos de la conservación
RSD = 1,96%). En un único laboratorio que utilizó muestras de sobre el nitrito y el nitrato. J Chromatogr A. 1991;546:341-346.
agua potable (Lake Linden, MI) con adiciones de3 5,0 mg NO− -N/L,
la recuperación
NO3 ¯ )
8. Patton CJ, Gilroy EJ. U.S. Geological Survey nutrient preservation Bibliografía
experiment-experimental design, statistical analysis, and interpre-
tation of analytical results; USGS Water-Resources Investigations Agencia de Protección del Medio Ambiente de EE.UU. Método 353.3:
Report 98-4118, p. 45. 1999. 1999. Reston (VA): U.S. Department of Métodos para el Análisis Químico de Aguas y Residuos. 1983.
the Interior, U.S. Geological Survey; [consultado el 15 de febrero de Cincinnati (OH): Laboratorio de Vigilancia y Apoyo Ambiental,
2019] https:// pubs.er.usgs.gov/publication/wri984118/. Oficina de Investigación y Desarrollo. [consultado el 15 de febrero
9. Patton CJ, Kryskalla JR. Determinación colorimétrica de nitrato más de 2019] https://
nitrito en agua por reducción enzimática, métodos de analizador wbdg.org/FFC/EPA/EPACRIT/epa600_4_79_020.pdf
discreto automatizado. En: U.S. Geological Survey Techniques and Baird RB, Eaton AD, Rice EW, eds. Método 4500-NO−3 . En: Standard
Methods, Book 5, Chap. B8. 2011. Reston (VA); U.S. Department of Methods for the Examination of Water and Wastewater. Washington,
the Interior, U.S. Geological Survey Office of Water Quality, DC: Asociación Americana de Salud Pública, 2017.
National Water Quality Laboratory [revisado el 30 de enero de 2013; Lopez-Avila V, ed. 5A.1.1-5A1.15: Determinación de nitrato en
consultado en 2019]. matrices acuosas utilizando nitrato reductasa. En: Current Protocols
15 de febrero] http://pubs.usgs.gov/tm/05b08/. in Field Ana- lytical Chemistry. Nueva York (NY): John Wiley &
Sons, Inc.; 1998.
NO3 ¯ )
Publicado en línea: 27 de agosto de 2018
Revisado: 20 de octubre de 2019

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N)/L; véanse las instrucciones en 4500-NO− D.4b o 4500-NO− D.4c.

1. Debate general frasco de polietileno de alta densidad (HDPE). La solución es

3 También pueden utilizarse concentraciones estándar. Tratar los

Espectrofotómetro, para uso a 220 y 275 nm con cubetas de

a. Agua reactiva: Utilizar agua reactiva tal como se define en

1. Crumpton WG, Isenhart TM, Mitchell PD. Análisis de nitrato y N

1. Debate general b. Electrodo selectivo de iones nitrato, combinado (Thermo

a. Tratamiento de estándares y muestras: Pipetear 10 mL de

al menos 1 min). Diluya una muestra si la lectura está por

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Keeney DR, Byrnes BH, Genson JJ. Determination of nitrate in waters

a. Principio: El nitrato (NO− ) se reduce casi cuantitativamente a

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Figura 4500-NO− :1. Columna de reducción. 3

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