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Documento EPA #: EPA/600/R-09/149
MÉTODO 538. DETERMINACIÓN DE CONTAMINANTES ORGÁNICOS SELECCIONADOS

EN AGUA POTABLE MEDIANTE INYECCIÓN ACUOSA DIRECTA-
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA/ESPECTROMETRÍA DE MASAS EN TÁNDEM
(DAI-LC/MS/MS)
Versión 1.0
noviembre de 2009
JA Zapatero
LABORATORIO NACIONAL DE INVESTIGACIÓN DE LA EXPOSICIÓN

OFICINA DE INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO
AGENCIA DE PROTECCIÓN AMBIENTAL DE LOS ESTADOS UNIDOS
CINCINNATI, OHIO 45268
538-1
MÉTODO 538
DETERMINACIÓN DE CONTAMINANTES ORGÁNICOS SELECCIONADOS EN BEBIDAS

AGUA POR INYECCIÓN ACUOSA DIRECTA-LÍQUIDO
CROMATOGRAFÍA/ ESPECTROMETRÍA DE MASAS EN TÁNDEM (DAI-LC/MS/MS)
1.ALCANCE Y APLICACIÓN
1.1 Este es un método de espectrometría de masas en tándem/cromatografía líquida de inyección

acuosa directa (DAI-LC/MS/MS) para la determinación de contaminantes químicos no volátiles
seleccionados en el agua potable. Se han generado datos de exactitud y precisión en agua
reactiva y aguas superficiales y subterráneas acabadas para los compuestos enumerados en la
siguiente tabla.
Servicios de extractos químicos

analito Número de registro (CASRN)
Acefato 30560-19-1
aldicarb 116-06-3
sulfóxido de aldicarb 1646-87-3
dicrotofos 141-66-2
Metilfosfonato de diisopropilo (DIMP) 1445-75-6
Fenamifos sulfona 31972-44-8
Sulfóxido de fenamifos 31972-43-7
metamidofos 10265-92-6
Oxidemeton-metil 301-12-2
quinolina 91-22-5
Tiofanox 39196-18-4
1.2 El nivel mínimo de notificación (MRL) es la concentración de analito más baja que cumple con los
objetivos de calidad de datos (DQO) que se desarrollan en función del uso previsto de este
método. El MRL de concentración más baja de un solo laboratorio (LCMRL) es la concentración real
más baja para la que se prevé que la recuperación futura caerá, con un nivel de confianza alto (99
%), entre 50 y 150 % de recuperación. Los LCMRL de un solo laboratorio para analitos en este
método oscilan entre 0,011 y 1,5 µg/L y se enumeran en la Tabla 5. El procedimiento utilizado para
determinar el LCMRL se describe en otra parte.1
538-2
1.3 No se requerirá que los laboratorios que utilicen este método determinen los LCMRL, pero
deberán demostrar que su LMR de laboratorio cumple con los requisitos descritos en
Sección 9.2.4.
1.4 La determinación del límite de detección (DL) para analitos en este método es opcional (Sect.
9.2.6). El límite de detección se define como la concentración mínima calculada estadísticamente
que se puede medir con un 99 % de confianza de que el valor informado es mayor que cero.2
El DL depende del compuesto y depende de la preparación de la muestra, la matriz de la
muestra, la concentración de la fortificación y el rendimiento del instrumento.
1.5 Este método está diseñado para ser utilizado por analistas expertos en la operación de
instrumentos LC/MS/MS y la interpretación de los datos asociados.
1.6 FLEXIBILIDAD DEL MÉTODO: en reconocimiento de los avances tecnológicos en los sistemas y técnicas
analíticos, el laboratorio puede modificar la técnica de separación, la columna de LC, la
composición de la fase móvil, las condiciones de LC y las condiciones de MS y MS/MS (Sec. 6.6, 9.4,
10.2, y 12.1). No se pueden realizar cambios en la recolección y conservación de muestras (Sección
8), o en los requisitos de control de calidad (Sección 9). Las modificaciones del método deben
considerarse solo para mejorar el rendimiento del método.
No se deben utilizar las modificaciones que se introducen con el interés de reducir el costo o el tiempo de
procesamiento de la muestra, pero que dan como resultado un rendimiento del método más deficiente.Los
analitos deben resolverse cromatográficamente de manera adecuada para permitir que el espectrómetro de
masas se detenga en un número mínimo de compuestos que eluyen dentro de una ventana de tiempo de
retención. La sensibilidad instrumental (o relación señal-ruido) disminuirá si se permite que eluyan
demasiados compuestos dentro de una ventana de tiempo de retención. En todos los casos en los que se
propongan modificaciones al método, el analista debe realizar los procedimientos descritos en la
demostración inicial de la capacidad (IDC, Secc. 9.2), verificar que se cumplan todos los criterios de aceptación
del control de calidad (QC) en este método (Sect. 9). , y que el rendimiento aceptable del método se puede
verificar en una matriz de muestra real (Sección 9.3.5).
NOTA:La sección de flexibilidad del método anterior pretende ser un resumen abreviado
de la flexibilidad del método. Las secciones 4 a 12 brindan información detallada de partes
específicas del método que pueden modificarse. Si se percibe algún conflicto entre la
declaración de flexibilidad del método general en la Sección 1.6 y la información específica
en las Secciones 4-12, las Secciones 4-12 reemplazan a la Sección 1.6.
2.RESUMEN DEL MÉTODO
2.1 Se recoge una muestra de agua de 40 ml en una botella que contiene omadina de sodio y acetato de
amonio. Se coloca una alícuota de la muestra en un vial de automuestreador y se agregan los
estándares internos. Se realiza una inyección de 50 µL o más en un LC equipado con un C18columna que
está conectada a un MS/MS operado en el modo de ionización por electrospray (ESI). Los analitos se
separan e identifican comparando los espectros de masas adquiridos y los tiempos de retención con los
espectros de referencia y los tiempos de retención de los estándares de calibración adquiridos en
condiciones idénticas de LC/MS/MS. El
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la concentración de cada analito se determina mediante la calibración estándar interna utilizando
estándares de procedimiento.
3.DEFINICIONES
3.1 LOTE DE ANÁLISIS: un conjunto de muestras analizadas en el mismo instrumento, que no exceda un
período de 24 horas e incluya no más de 20 muestras de campo, que comience y finalice con el
análisis de los estándares de verificación de calibración continua (CCC) apropiados. Es posible que
se requieran CCC adicionales según la duración del lote de análisis y/o el número de muestras de
campo.
3.2 ESTÁNDAR DE CALIBRACIÓN (CAL): una solución preparada a partir de la solución estándar de dilución
primaria y/o la solución estándar madre y los estándares internos. Las soluciones CAL se utilizan
para calibrar la respuesta del instrumento con respecto a la concentración del analito.
3.3 DISOCIACIÓN ACTIVADA POR COLISIÓN (CAD) – El proceso de convertir la energía de

traslación del ion precursor en energía interna mediante colisiones con moléculas de
gas neutral para provocar la disociación en iones de producto.
3.4 VERIFICACIÓN DE CALIBRACIÓN CONTINUA (CCC): un estándar de calibración que contiene los
analitos del método y los estándares internos. El CCC se analiza periódicamente para
verificar la precisión de la calibración existente para esos analitos.
3.5 LÍMITE DE DETECCIÓN (DL): la concentración mínima de un analito que se puede identificar,
medir e informar con un 99 % de confianza de que la concentración del analito es mayor que
cero. Esta es una determinación estadística de precisión (Sección 9.2.6), y no se espera una
cuantificación exacta a este nivel.2
3.6 DUPLICADOS DE CAMPO (FD1 y FD2): dos muestras separadas recolectadas al mismo tiempo y en el mismo
lugar en circunstancias idénticas, y tratadas exactamente de la misma manera durante los
procedimientos de campo y laboratorio. Los análisis de FD1 y FD2 dan una medida de la precisión
asociada con la recolección, conservación y almacenamiento de muestras, así como con los
procedimientos de laboratorio.
3.7 ESTÁNDAR INTERNO (IS): una sustancia química pura que se agrega a una solución estándar en cantidades
conocidas y se usa para medir la respuesta relativa de otros analitos del método que son
componentes de la misma solución. El patrón interno debe ser una sustancia química que sea
estructuralmente similar a los analitos del método, que no tenga potencial para estar presente en las
muestras de agua y que no sea un analito del método.
3.8 BLANCO FORTIFICADO DE LABORATORIO (LFB): un volumen de agua reactiva u otra matriz en blanco a
la que se agregan cantidades conocidas de los analitos del método y todos los reactivos de
conservación en el laboratorio. El LFB se analiza exactamente como una muestra, y
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su propósito es determinar si la metodología está bajo control y si el
laboratorio es capaz de realizar mediciones exactas y precisas.
3.9 MATRIZ DE MUESTRA FORTIFICADA EN LABORATORIO (LFSM, por sus siglas en inglés): una muestra de
campo preservada a la que se agregan cantidades conocidas de los analitos del método en el
laboratorio. El LFSM se procesa y analiza exactamente como una muestra, y su propósito es determinar
si la matriz de la muestra contribuye al sesgo de los resultados analíticos. Las concentraciones de fondo
de los analitos en la matriz de la muestra deben determinarse en una muestra separada y los valores
medidos en el LFSM deben corregirse para las concentraciones de fondo.
3.10 DUPLICADO DE MATRIZ DE MUESTRA FORTIFICADA DE LABORATORIO (LFSMD): un duplicado de la

muestra de campo utilizada para preparar la LFSM. El LFSMD está fortificado y analizado de
manera idéntica al LFSM. El LFSMD se usa en lugar del duplicado de campo para evaluar la
precisión del método cuando la presencia de analitos del método es baja.
3.11 BLANCO DE REACTIVO DE LABORATORIO (LRB): una alícuota de agua reactiva u otra matriz en blanco
que se trata exactamente como una muestra, incluida la exposición a todo el material de vidrio,
equipo, solventes y reactivos, conservantes de muestra y estándares internos que se usan en el
lote de análisis. El LRB se utiliza para determinar si los analitos del método u otras interferencias
están presentes en el entorno del laboratorio, los reactivos o el aparato.
3.12 NIVEL MÍNIMO DE INFORME DE CONCENTRACIÓN MÁS BAJA (LCMRL): el LCMRL de un

solo laboratorio es la concentración real más baja para la cual se espera una
recuperación futura, con un 99% de confianza, entre 50 y 150% de recuperación.1
3.13 HOJA DE DATOS DE SEGURIDAD DEL MATERIAL (MSDS): información escrita proporcionada por los proveedores sobre la
toxicidad, los peligros para la salud, las propiedades físicas, el fuego y los datos de reactividad de una sustancia
química, incluidas las precauciones de almacenamiento, derrame y manipulación.
3.14 NIVEL MÍNIMO DE NOTIFICACIÓN (MRL): la concentración mínima que se puede informar como un
valor cuantificado para un analito de método en una muestra después del análisis.
Esta concentración definida no puede ser inferior a la concentración del estándar de calibración más bajo
para ese analito y solo se puede usar si se cumplen los criterios de control de calidad aceptables para este
estándar. En la Sección 9.2.4 se proporciona un procedimiento para verificar el LMR de un laboratorio.
3.15 ION PRECURSOR: para los fines de este método, el ion precursor es la molécula protonada
([M+H]+) o aducción del analito del método. En MS/MS, el ion precursor se selecciona en masa
y se fragmenta mediante disociación activada por colisión para producir iones de productos
distintivos de menor tamaño.m/z.
3.16 SOLUCIÓN ESTÁNDAR DE DILUCIÓN PRIMARIA (PDS): una solución que contiene los analitos preparados en
el laboratorio a partir de soluciones estándar madre y se diluye según sea necesario para preparar
soluciones de calibración y otras soluciones de analitos necesarias.
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3.17 ION DE PRODUCTO: para los fines de este método, un ion de producto es uno de los iones de
fragmento producidos en MS/MS por disociación activada por colisión del ion precursor.
3.18 MUESTRA DE CONTROL DE CALIDAD (QCS) – Una solución de analitos de método de

concentraciones conocidas que se obtiene de una fuente externa al laboratorio y diferente de la
fuente de los estándares de calibración. El QCS se utiliza para verificar la integridad del
estándar de calibración.
3.19 SOLUCIÓN ESTÁNDAR STOCK (SSS): una solución concentrada que contiene uno o más analitos
del método preparados en el laboratorio utilizando materiales de referencia analizados o
adquiridos de una fuente comercial acreditada.
4.INTERFERENCIAS
4.1 Toda la cristalería debe limpiarse meticulosamente. Lave la cristalería con detergente y agua del grifo, enjuague
con agua del grifo, seguido de un enjuague con agua reactiva. La cristalería no volumétrica se puede
calentar en un horno de mufla a 400 °C durante 2 h o enjuagar con disolvente.
El material de vidrio volumétrico debe enjuagarse con solvente y no calentarse en un horno a más de 120
°C. Guarde la cristalería limpia invertida, cubierta con papel aluminio o tapada.
4.2 Las interferencias en los métodos pueden ser causadas por contaminantes en solventes, reactivos (incluida
el agua de reactivos), botellas y tapas de muestras y otros suministros o hardware de laboratorio que
conducen a artefactos discretos y/o líneas de base elevadas en los cromatogramas. Se debe demostrar
rutinariamente que todos los artículos como estos están libres de interferencias (menos de 1/3 del LMR
para cada analito del método) bajo las condiciones del análisis mediante el análisis de LRB como se
describe en la Sección 9.3.1.No se permite restar valores en blanco de los resultados de la muestra.
4.3 Las interferencias de la matriz pueden ser causadas por contaminantes en la muestra. La extensión de las
interferencias de la matriz variará considerablemente de una fuente a otra, dependiendo de la
naturaleza del agua. El material húmico y/o fúlvico presente en la muestra en niveles altos puede causar
una mejora y/o supresión en la fuente de ionización por electropulverización.3-4
El carbono orgánico total (COT) es un buen indicador del contenido húmico de la muestra. En las
condiciones de CL utilizadas durante el desarrollo del método, no se observaron efectos de matriz
debido al carbono orgánico total (TOC), hasta 8,7 mg/L.
4.4 Se agregan cantidades relativamente grandes de conservantes (Sección 8.1.2) a las botellas de muestra. Existe
la posibilidad de que existan contaminantes orgánicos a nivel de trazas en estos reactivos. Las
interferencias de estas fuentes deben monitorearse mediante análisis de LRB (Sección 9.3.1),
particularmente cuando se adquieren nuevos lotes de reactivos.
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5.SEGURIDAD
La toxicidad o carcinogenicidad de cada reactivo utilizado en este método no se ha definido con precisión. Cada
producto químico debe tratarse como un peligro potencial para la salud y la exposición a estos productos químicos
debe minimizarse. Cada laboratorio es responsable de mantenerse al tanto de las regulaciones de OSHA con respecto al
manejo seguro de los productos químicos utilizados en este método. Un archivo de referencia de MSDS debe estar
disponible para todo el personal involucrado en los análisis químicos. Se encuentran disponibles referencias adicionales
sobre la seguridad en el laboratorio.5-7
6.EQUIPO Y SUMINISTROS (Los nombres de marca y/o los números de catálogo se incluyen solo con
fines ilustrativos y no implican la promoción del producto).
6.1 RECIPIENTES PARA MUESTRAS: frascos de vidrio ámbar (40 ml o más grandes) equipados con tapones de rosca
revestidos de teflón (n.° de catálogo de Fisher: 02-912-377 o equivalente).
6.2 CONTENEDORES DE ALMACENAMIENTO DE SOLUCIÓN ESTÁNDAR: frascos de vidrio ámbar (10 ml o más grandes)
(n.º de catálogo de Kimble: 60815-1965 o equivalente) equipados con tapones de rosca revestidos de teflón
(n.º de catálogo de Kimble: 73802-15425 o equivalente).
6.3 VIALES PARA MUESTRAS AUTOMÁTICAS: viales de vidrio ámbar de 2,0 ml para muestreadores automáticos (n.º de catálogo
de National Scientific: C4000-2W o equivalente) con tapas (n.º de catálogo de National Scientific: C4000-53 o
equivalente).
6.4 MICROJERINGAS: los tamaños sugeridos incluyen jeringas de 5, 10, 25, 50, 100, 250,
500 y 1000 µL.
6.5 BALANZA ANALÍTICA – Capaz de pesar con una precisión de 0,0001 g.
6.6 CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS (LC)/ESPECTRÓMETRO DE MASAS EN TÁNDEM (MS/

MS) CON SISTEMA DE DATOS
6.6.1 SISTEMA LC: instrumento capaz de inyectar de forma reproducible alícuotas de al menos 50 µL
y realizar gradientes lineales binarios a un caudal constante cercano al caudal utilizado para
el desarrollo de este método (0,3 ml/min). El LC debe ser capaz de bombear la fase móvil de
formiato de amonio/metanol sin el uso de un desgasificador que genera vacío en la fase
móvil.botella (otros tipos de desgasificadores son aceptables). Desgasificadores que extraen
vacío en la fase móvil botella volatilizará la fase móvil del formiato de amonio, lo que
provocará que los picos del analito cambien a tiempos de retención más tempranos en el
transcurso del lote de análisis. El uso de un calentador de columna es opcional.
6.6.2 ESPECTRÓMETRO DE MASAS EN TÁNDEM: el instrumento MS/MS (Waters Micromass

Quattro Premier o equivalente) debe ser capaz de producir iones positivos ESI cerca
del caudal de LC sugerido de 0,3 ml/min. El sistema debe ser capaz de realizar MS/MS
para producir iones de producto únicos (Sección 3.17) para el método.
538-7
analitos dentro de los segmentos de tiempo de retención. Se requiere un mínimo de 10 escaneos
a través del pico cromatográfico para asegurar una precisión adecuada.
6.6.3 SISTEMA DE DATOS: se requiere un sistema de datos interconectado para adquirir, almacenar, reducir
y generar datos espectrales de masa. El software de la computadora debe tener la capacidad
de procesar datos almacenados de LC/MS/MS reconociendo un pico de LC dentro de cualquier ventana de
tiempo de retención dada. El software debe permitir la integración de la abundancia de iones de
cualquier ion específico dentro de los límites de tiempo o número de exploración especificados. El
software debe poder construir regresiones lineales o curvas de calibración cuadráticas y calcular
concentraciones de analitos.
6.6.4 COLUMNA ANALÍTICA – A Waters Atlantis T3C18columna (2,1 x 150 mm) rellena con 5 µm dpagC18
Se utilizaron partículas en fase sólida (Cat. No.: 36003736 o equivalente). Se puede utilizar
cualquier columna que proporcione una resolución, forma de pico, capacidad, exactitud y
precisión adecuadas (Sección 9).
7.REACTIVOS Y ESTÁNDARES
7.1 GASES, REACTIVOS Y DISOLVENTES: se deben usar productos químicos de grado reactivo o mejores. A
menos que se indique lo contrario, se pretende que todos los reactivos cumplan con las
especificaciones del Comité de Reactivos Analíticos de la Sociedad Química Estadounidense, donde
tales especificaciones estén disponibles. Se pueden utilizar otros grados, siempre que
primero se determina que el reactivo tiene una pureza suficientemente alta para permitir su
uso sin disminuir la calidad de la determinación.
7.1.1 AGUA REACTIVA: agua purificada que no contiene cantidades medibles de ningún
analito del método o compuestos que interfieran más de 1/3 del LMR para cada
analito del método de interés.
7.1.2 METANOL (CH3OH, CAS#: 67-56-1) – Alta pureza, demostrando estar libre de
analitos e interferencias (Fisher Optima LC/MS grade, Cat. No.: A-456 o
equivalente).
7.1.3 FORMIATO DE AMONIO (NH4CHO2, CAS#: 540-69-2) – Alta pureza,

demostrado estar libre de analitos e interferencias (grado Sigma-Aldrich
LC/MS, Cat. No.: 55674 o equivalente).
7.1.4 ACETATO DE AMONIO (NH4C2H3O2, CAS#: 631-61-8) – Alta pureza, se demostró

que está libre de analitos e interferencias (grado Sigma-Aldrich ACS, Cat. No.:
238074 o equivalente).
538-8
7.1.5 SODIUM OMADINE® (Sodium 2-pyridinethio-1-oxide, CAS#: 3811-73-2) – Alta
pureza demostrada libre de analitos e interferencias (Sigma-Aldrich Cat. No.:
H3261 o equivalente; Omadine es una marca registrada de Arch Chemicals,
Inc.).
7.1.6 FASE MÓVIL DE FORMIATO DE AMONIO/AGUA REACTIVA 20 mM – Para preparar 1 L,

agregue 1,26 g de formiato de amonio a 1 L de agua reactiva. Esta solución es propensa
a pérdidas por volatilidad y debe reemplazarse al menos cada 48 horas.
7.1.7 2 M ACETATO DE AMONIO/AGUA DE REACTIVO – Para preparar 100 mL, agregue

15,4 g de acetato de amonio a un matraz volumétrico de 100 mL. Diluir a volumen con agua
reactiva. Esta solución debe mantenerse refrigerada a ≤6ºC y reponerse al menos cada dos
semanas debido a las posibles pérdidas por volatilidad.
7.1.8 32 g/L DE OMADINE® DE SODIO EN AGUA DE REACTIVO – Para preparar 25 mL, agregue 0,80 g
de Omadine de sodio a un matraz volumétrico de 25 mL. Diluir a volumen con agua reactiva.
Esta solución debe conservarse refrigerada a ≤6ºC.
7.1.9 NITRÓGENO: ayuda en la generación de aerosoles del rocío líquido ESI y se utiliza como gas de
colisión en algunos instrumentos MS/MS. El nitrógeno utilizado debe cumplir o superar las
especificaciones del fabricante del instrumento.
7.1.10 ARGÓN: se utiliza como gas de colisión en los instrumentos MS/MS. El argón debe cumplir o superar
las especificaciones del fabricante del instrumento. Se puede usar gas nitrógeno como gas de
colisión siempre que se logre suficiente sensibilidad (formación de iones producto).
7.2 SOLUCIONES ESTÁNDAR: cuando se analiza que la pureza de un compuesto es del 96% o más, el peso se
puede usar sin corrección para calcular la concentración del estándar de reserva. Las concentraciones
de solución enumeradas en esta sección se utilizaron para desarrollar este método y se incluyen como
ejemplo. Se pueden usar concentraciones alternativas según sea necesario dependiendo de la
sensibilidad del instrumento y el rango de calibración utilizado. Los estándares para la fortificación de
muestras generalmente deben prepararse en el volumen más pequeño que se pueda medir con
precisión para minimizar la adición de exceso de solvente orgánico a las muestras acuosas.Aunque los
tiempos de estabilidad para las soluciones estándar se sugieren en las siguientes secciones, los
laboratorios deben usar prácticas estándar de control de calidad para determinar cuándo es
necesario reemplazar sus estándares.
7.2.1 SOLUCIONES ESTÁNDAR DE STOCK INTERNO (IS): este método utiliza los cinco compuestos
IS que se enumeran en la siguiente tabla. Los patrones internos se obtuvieron de
Cambridge Isotopes Laboratories, excepto metamidofos-d6que se obtuvo de EQ
Laboratories. Los IS pueden adquirirse de fuentes alternativas. Aunque se pueden usar
estándares IS alternativos siempre que sean compuestos marcados isotópicamente con
grupos funcionales similares a los del método
538-9
analitos, el analista debe tener razones documentadas para usar IS alternativos. Los SI alternativos
deben cumplir con los requisitos de control de calidad de la Sección 9.3.4.
Normas Internas
metamidofos-d6
Acefato-d6
Oxidemeton-metil-d6
Quinolina-d7
Metilfosfonato de diisopropilo-d14(DIMP-d14)
7.2.1.1 SOLUCIONES ESTÁNDAR STOCK IS (100-1000 µg/mL) – Estas soluciones estándar IS

Los estándares se pueden obtener como soluciones estándar estándar certificadas individuales.
Durante el desarrollo de este método, se utilizaron soluciones estándar madre de 100 µg/mL o
1000 µg/mL obtenidas comercialmente en acetonitrilo o metanol. Las soluciones estándar
estándar de IS se mantuvieron estables durante al menos seis meses cuando se almacenaron a
-15 C o menos.
7.2.1.2 DILUCIÓN PRIMARIA DEL ESTÁNDAR INTERNO (IS PDS) ESTÁNDAR (0,4-12,5 ng/
µL): prepare o adquiera en el mercado el IS PDS a una concentración sugerida
de 0,40-12,5 ng/µL en acetonitrilo. Si se prepara a partir de las soluciones
estándar madre individuales (Sección 7.2.1.1), la siguiente tabla se puede usar
como guía para preparar el IS PDS. Se ha mostrado el IS PDS
ser estable durante al menos seis meses cuando se almacena en botellas de vidrio ámbar
(Sección 6.2) a -4 C. Fortificación de las muestras finales de 1 ml con 10 µL de esta solución
de 0,40-12,5 ng/µL (Sección 11.2.1 ) producirá una concentración de 4-125 µg/L de cada IS
en las muestras de 1 mL.El volumen total de acetonitrilo agregado a la muestra de 1
ml no debe exceder el 2 % para evitar la ampliación del pico de los analitos de elución
temprana.Se pueden utilizar volúmenes de acetonitrilo superiores al 2 % siempre que el
laboratorio pueda documentar que estos volúmenes no afectan negativamente a la forma
del pico de ninguno de los analitos del método en las condiciones operativas del
laboratorio.
538-10
Conc. de ES vol. de ES Concentración final de
Existencias Existencias ES PDS

ES (µg/mL) (µL) (ng/µL)a
metamidofos-d6 100 40 0.40

Acefato-d6 100 40 0.40
Oxidemeton-metil-d6 100 40 0.40
Quinolina-d7 1000 125 12.5
Metilfosfonato de diisopropilo-d14 1000 4.0 0.40
aConcentraciones finales basadas en la preparación del IS PDS en un recipiente volumétrico y
diluyendo hasta la marca con acetonitrilo.
7.2.2 SOLUCIONES ESTÁNDAR DE ANALITO: las soluciones estándar se pueden preparar a partir de
soluciones certificadas disponibles comercialmente oa partir de compuestos puros. Si los
compuestos puros utilizados para preparar las soluciones tienen una pureza del 96 % o superior,
se puede utilizar el peso sin corregir la pureza para calcular la concentración del estándar de
reserva.Las concentraciones de solución enumeradas en esta sección se utilizaron para
desarrollar este método y se incluyen como concentraciones de ejemplo.. Con la excepción del
dicrotofos y la quinolina, el trabajo de desarrollo del método se realizó con soluciones estándar de
stock obtenidas comercialmente, que están fácilmente disponibles de la mayoría de los
proveedores de estándares ambientales. La quinolina se obtuvo de Aldrich y el dicrotofos de Chem
Service como materiales puros. En el momento del desarrollo del método, DIMP solo estaba
disponible a través de Cerilliant CIL, Inc. Prepare el stock de analito y los estándares de dilución
primarios como se describe a continuación.Se permite a los analistas utilizar otras
concentraciones y volúmenes de PDS y estándar de calibración según sea necesario para
lograr la sensibilidad adecuada.
7.2.2.1 SOLUCIÓN ESTÁNDAR MADRE DEL ANALITO (SSS) (1 mg/mL, excepto como
anotado) – Si se prepara a partir de material puro, pese con precisión aproximadamente 10
mg de material puro con una precisión de 0,1 mg en un matraz volumétrico tarado de 10
ml. Diluir hasta la marca con metanol para una concentración final de
1 mg/ml. Repita para cada analito del método. En el caso de la quinolina, pese con
precisión aproximadamente 20 mg de material puro con una precisión de 0,1 mg en un
matraz aforado tarado de 1 ml. Diluir hasta la marca con metanol para una concentración
final de 20 mg/mL. Estos estándares de stock se mantuvieron estables durante al menos
seis meses cuando se almacenaron a -15 C o menos. Como alternativa, se pueden adquirir
en el mercado estándares de stock individuales de los analitos en metanol o acetonitrilo.
Para el desarrollo de este método, se utilizaron estándares de stock de 1 mg/mL
adquiridos comercialmente para
538-11
hacer estándares de dilución primarios para todos los analitos excepto quinolina y
dicrotofos.
7.2.2.2 SOLUCIÓN ESTÁNDAR DE DILUCIÓN PRIMARIA DEL ANALITO METANÓLICO

(MEOH PDS) (40 -1600 ng/µL) – El analito MEOH PDS contiene todos
los analitos del método de interés a varias concentraciones en metanol. La respuesta de ESI
y MS/MS varía según el compuesto; por lo tanto, es posible que se necesite una mezcla de
concentraciones en el analito MEOH PDS. Durante el desarrollo del método, el analito MEOH
PDS se preparó de manera que se obtuvo aproximadamente la misma respuesta del
instrumento para todos los analitos. El analito MEOH PDS se prepara (tabla siguiente)
mediante la dilución de los analitos SSS combinados con metanol en un matraz aforado de 1
ml y se utiliza para preparar el analito AGUA PDS (Sección 7.2.2.3). Se ha demostrado que el
analito MEOH PDS es estable durante seis meses cuando se almacena a -15 C. Se aceptan
tiempos de almacenamiento más prolongados siempre que se documenten medidas de
control de calidad apropiadas que demuestren la estabilidad del analito MEOH PDS.
Analito SSS Analito SSS analito final

Conc. Volumen MEOH PDS Conc.
analito (mg/mL) (l) (ng/μL)a
metamidofos 1.0 40 40
Acefato 1.0 40 40
sulfóxido de aldicarb 1.0 80 80
Oxidemeton-metil 1.0 40 40
dicrotofos 1.0 40 40
aldicarb 1.0 80 80
quinolina 21.6 80 1728
DIMP 1.0 40 40
Sulfóxido de fenamifos 1.0 40 40
Fenamifos sulfona 1.0 40 40
Tiofanox 1.0 160 160
aCálculo de la concentración final basado en un volumen final de 1 ml.
7.2.2.3 SOLUCIÓN ESTÁNDAR DE DILUCIÓN PRIMARIA DE ANALITO ACUOSO (PDS DE AGUA)

(0,25 -10,7 ng/µL): el PDS de AGUA del analito contiene todos los analitos de interés
del método en varias concentraciones en agua reactiva que contiene 10 % de
metanol. El analito WATER PDS se prepara colocando 62 µL del analito MEOH PDS
en un matraz aforado de 10 mL y diluyéndolo con agua reactiva que contiene 10 %
de metanol y se usa para preparar los estándares CAL y fortalecer los LFB, los LFSM
y los LFSMD. y FD con los analitos del método. Se ha demostrado que el analito
WATER PDS es estable durante al menos un mes cuando se almacena a 4 C. Se
aceptan tiempos de almacenamiento más prolongados.
538-12
siempre que se documenten las medidas de control de calidad apropiadas que demuestren la
estabilidad del analito WATER PDS.
7.2.3 ESTÁNDARES DE CALIBRACIÓN (CAL): prepare una curva de calibración de procedimiento a partir de
diluciones del analito WATER PDS en agua reactiva conservada. Se requieren al menos de cinco a
siete concentraciones de calibración para preparar la curva de calibración inicial que abarca un
rango de concentración de 50 a 100 veces (Sección 10.2).
Prepare los estándares de calibración, agregando cantidades apropiadas de acetato de amonio y
omadina de sodio concentradas (Sec. 7.1.7 y 7.1.8) como se muestra en la tabla a continuación. Las
concentraciones de analitos objetivo que se encuentran en las Tablas 5-11 se pueden usar como
punto de partida para determinar el rango de calibración. A continuación se muestra un ejemplo
de las diluciones utilizadas para preparar las CAL, que se utilizaron para recopilar datos en la
Sección 17. La CAL de concentración más baja debe estar en o por debajo del LMR, lo que
dependerá de la sensibilidad del sistema. Las CAL también se pueden utilizar como CCC. Si se
almacenan en contenedores (Sección 6.2), los estándares acuosos deben refrigerarse de la misma
manera que las muestras. Se añade una cantidad constante de IS PDS a cada CAL preparado. Esto
se logra para cada CAL tomando 990 µL del CAL final que contiene acetato de amonio 20 mM y
omadina de sodio 64 mg/L, y colocándolo en un vial de muestreador automático de 2,0 mL y
agregando 10 µL de IS PDS (Sección 7.2). .1.2). Durante el desarrollo del método, se demostró que
los estándares CAL son estables durante al menos dos semanas cuando se almacenan a <6 ºC. Se
aceptan tiempos de almacenamiento más prolongados siempre que se documenten las medidas
de control de calidad apropiadas que demuestren la estabilidad CAL.
analito analito 2 millones 32g/L Final

AGUA AGUA Amonio Sodio CALIFORNIA Final Final Final
PDS PDS Acción de acetato Omadine estándar quinolina aldicarb Tiofanox
CALIFORNIA Conc. Volumen Volumen Volumen de existencias Conc. Conc. Conc. Conc.
Nivel (ng/μL)a (l) (l) (l) (μg/L)b (μg/L)b (μg/L)b (μg/L)b
1 0.25 2 100 20 0.050 2.1 0.10 0.20
2 0.25 5 100 20 0.12 5.4 0.25 0.50
3 0.25 10 100 20 0.25 11 0.50 0.99
4 0.25 20 100 20 0.50 21 0.99 2.0
5 0.25 40 100 20 0.99 43 2.0 4.0
6 0.25 100 100 20 2.5 107 5.0 9.9
7 0.25 200 100 20 5.0 214 10 20
aQuinolina = 10,7 ng/μL, Aldicarb y sulfóxido de Aldicarb = 0,50 ng/μL, Thiofanox = 1,0 ng/μL
bConcentraciones finales basadas en la preparación de CAL en una volumétrica de 10 mL y diluyendo hasta la marca con reactivo
agua.
538-13
8.OBTENCIÓN, CONSERVACIÓN Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS
8.1 PREPARACIÓN DE LA BOTELLA DE MUESTRA
8.1.1 Las muestras deben recolectarse en botellas de vidrio ámbar provistas de tornillos revestidos de PTFE.
tapas (Sección 6.1).
8.1.2 Antes del envío al campo, se debe agregar acetato de amonio y omadina de sodio a cada botella
ámbar. Si usa las botellas sugeridas de 40 mL (Sección 6.1) para recolectar una alícuota de 40 mL,
agregue 400 μL de la solución madre concentrada de acetato de amonio (Sección 7.1.7) y 80 μL de
la solución madre concentrada de omadina de sodio (Sección 7.1 .8). Si se utilizan otros volúmenes
de recolección, ajuste la cantidad de reactivo de conservación para que las concentraciones finales
de acetato de amonio y omadina de sodio en los recipientes de muestra sean de 1,5 g/L y 64 mg/L,
respectivamente. Tape los viales para evitar la evaporación de los reactivos de conservación.
Compuesto Cantidad Objetivo
omadina de sodio 64 miligramos por litro antimicrobiano
Acetato de amonio 1,5g/L Se une al cloro libre
8.2 TOMA DE MUESTRAS
8.2.1 Abra el grifo y permita que el sistema se enjuague hasta que la temperatura del agua se haya estabilizado
(aproximadamente de 3 a 5 minutos). Recoja una muestra representativa del flujo de agua utilizando un
vaso de precipitados de tamaño adecuado. Utilice esta muestra a granel para generar muestras
individuales según sea necesario. Transfiera un volumen de aproximadamente 40 ml a cada recipiente
de recolección. Como alternativa, recolecte la muestra directamente en la botella de muestra que
contiene los conservantes.
8.2.2 Cuando llene las botellas de muestra, tenga cuidado de no enjuagar los reactivos de conservación de la
muestra. Las muestras no necesitan recolectarse sin espacio de cabeza.
8.2.3 Después de recolectar la muestra, tape la botella y agite a mano para mezclar la muestra con los
reactivos de conservación. Mantenga la muestra sellada desde el momento de la recolección
hasta el análisis.
8.3 ENVÍO Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS: las muestras deben enfriarse durante el envío y no deben superar los
10 °C durante las primeras 48 horas después de la recolección. Se debe confirmar que la temperatura de la
muestra sea igual o inferior a 10 °C cuando se reciban las muestras en el laboratorio. Las muestras
almacenadas en el laboratorio deben mantenerse a una temperatura igual o inferior a 6 °C hasta su análisis,
pero no deben congelarse.
538-14
NOTA:Las muestras que están significativamente por encima de 10°C, en el momento de la recolección, pueden
deben congelarse o refrigerarse por un período de tiempo, para enfriarlos
antes del envío. Esto permitirá que se envíen con suficiente hielo para cumplir
con los requisitos anteriores.
NOTA:Muestras que llegan al laboratorio el mismo día de la toma de muestra

(exclusivamente debido a la proximidad del sitio de muestreo al laboratorio), puede que aún no
se hayan estabilizado a 10ºC o menos cuando lleguen al laboratorio. Estas muestras son
aceptables ÚNICAMENTE si se envasan en hielo o con paquetes de gel congelado inmediatamente
después de la recolección de la muestra y, por lo tanto, se entregan mientras las muestras están
en proceso de alcanzar una temperatura de equilibrio inferior a 10 ºC. Estas muestras deben
contener los conservantes descritos en la Sección 8.1.2.
8.4 TIEMPOS DE CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA: los resultados del estudio de estabilidad de almacenamiento de la muestra
(Tabla 12) indicaron que todos los compuestos enumerados en este método tienen una estabilidad adecuada durante
14 días cuando se recolectan, conservan, envían y almacenan como se describe en las Secciones 8.1, 8.2 y 8.3. Por lo
tanto, las muestras acuosas deben analizarse dentro de los 14 días posteriores a la recolección.
9.CONTROL DE CALIDAD
9.1 Los requisitos de control de calidad incluyen la demostración inicial de capacidad (IDC) y los requisitos de control
de calidad continuos que se deben cumplir al preparar y analizar muestras de campo. Esta sección describe
los parámetros de control de calidad, sus frecuencias requeridas y los criterios de desempeño que se deben
cumplir para cumplir con los objetivos de calidad de la EPA. Los criterios de control de calidad discutidos en
las siguientes secciones se resumen en las tablas 13 y 14. Estos requisitos de control de calidad se consideran
los criterios de control de calidad mínimos aceptables. Se alienta a los laboratorios a instituir prácticas de
control de calidad adicionales para satisfacer sus necesidades específicas.
9.2 DEMOSTRACIÓN INICIAL DE CAPACIDAD (IDC) – La IDC debe realizarse con éxito antes de
analizar cualquier muestra de campo. Antes de realizar el IDC, el analista primero debe
generar una Calibración inicial aceptable siguiendo el procedimiento descrito en la
Sección 10.2.
9.2.1 DEMOSTRACIÓN INICIAL DE ANTECEDENTES BAJOS DEL SISTEMA: cada vez que se utilice un lote
nuevo de solventes, reactivos y viales de muestreador automático, se debe demostrar que un
LRB está razonablemente libre de contaminación y que se cumplen los criterios de la Sección
9.3.1.
9.2.2 DEMOSTRACIÓN INICIAL DE PRECISIÓN (IDP) – Preparar y analizar cuatro

a siete LFB replicados (lo mismo que un CCC – Sección 9.3.3) fortificados cerca del rango medio de
la curva de calibración inicial de acuerdo con el procedimiento descrito en la Sección 11. Se debe
agregar el conservante de la muestra, como se describe en la Sección 8.1.2
538-15
a estas muestras. La desviación estándar relativa (RSD) de las concentraciones de los
análisis repetidos debe ser inferior al 20 %.
9.2.3 DEMOSTRACIÓN INICIAL DE PRECISIÓN (IDA) – Utilizando el mismo conjunto de datos

replicados generados para la Sección 9.2.2, calcule la recuperación media. La recuperación
media de los valores replicados debe estar dentro de ± 30 % del valor real.
9.2.4 CONFIRMACIÓN DEL NIVEL MÍNIMO DE NOTIFICACIÓN (MRL): establezca una

concentración objetivo para el MRL en función del uso previsto del método. el LMR
pueden ser establecidos por un laboratorio para su propósito específico o pueden ser
establecidos por una agencia reguladora. Establezca una Calibración Inicial siguiendo el
procedimiento descrito en la Sección 10.2. El estándar CAL más bajo utilizado para establecer la
Calibración inicial (así como el CCC de bajo nivel, Sección 10.3) debe estar en o por debajo de la
concentración del LMR. Establecer una concentración de MRL demasiado baja puede causar fallas
repetidas en los requisitos de control de calidad en curso. Confirme el MRL siguiendo el
procedimiento descrito a continuación.
9.2.4.1 Fortificar y analizar siete LFB replicados a la concentración de LMR propuesta. Estos LFB
deben contener todos los métodos de conservación descritos en la Sección 8.1.2.
Calcular la concentración media medida (Significar) y desviación estándar para los
analitos del método en estas réplicas. Determine el rango medio para el intervalo de
predicción de resultados (HORAPIR) para cada analito usando la siguiente ecuación
HORAPIR 3.963s
dónde
s =la desviación estándar
3.963 = un valor constante para siete repeticiones.1
9.2.4.2 Confirme que los límites superior e inferior para el Intervalo de predicción del resultado
(PIR = Media+ HORAPIR) cumplir con los límites de recuperación superior e inferior como se muestra a
continuación
El límite superior de PIR debe ser ≤150 % de recuperación.
FC mediaPIR
100% 150%
FortificadoConcentración
El límite inferior de PIR debe ser del 50 % de recuperación.
FC mediaPIR
100% 50%
FortificadoConcentración
538-16
9.2.4.3 El LMR se valida si los Límites PIR superior e inferior cumplen con los
criterios descritos anteriormente (Sec. 9.2.4.2). Si no se cumplen estos criterios, el LMR
se ha fijado demasiado bajo y debe confirmarse de nuevo a una concentración más
alta.
9.2.5 CONFIRMACIÓN DE CALIBRACIÓN – Analice un QCS como se describe en la Sección

9.3.7 para confirmar la precisión de los estándares/curva de calibración.
9.2.6 DETERMINACIÓN DEL LÍMITE DE DETECCIÓN(opcional)–Si bien la determinación de DL no

es un requisito específico de este método, puede ser requerida por varios organismos
reguladores asociados con el control del cumplimiento. Es responsabilidad del
laboratorio determinar si se requiere la determinación de DL en función del uso
previsto de los datos.
Los análisis duplicados para este procedimiento deben realizarse durante al menos tres
días (es decir, tanto la preparación de la muestra como los análisis LC/MS/MS deben
realizarse durante al menos tres días). Prepare al menos siete réplicas de LFB a una
concentración estimada cercana a la DL (p. ej., tres LFB fortificadas individualmente el
día uno, dos LFB fortificadas individualmente el día dos y dos LFB fortificadas
individualmente el día tres). Esta concentración se puede estimar seleccionando una
concentración de dos a cinco veces el nivel de ruido. Los DL en la Tabla 5 se calcularon a
partir de LFB enriquecidos en varias concentraciones como se indica en la tabla. Las
concentraciones de fortificación adecuadas dependerán de la sensibilidad del sistema
LC/MS/MS utilizado. Todos los reactivos de conservación enumerados en la Sección
8.1.2 también deben agregarse a estas muestras.
NOTA:Si un conjunto de datos de confirmación de LMR cumple con estos requisitos, un DL puede ser
calculado a partir de los datos de confirmación de LMR, y no se necesitan análisis
adicionales.
Calcula elDLusando la siguiente ecuación
Calle DL
(norte1,1 0.99)
dónde
s=desviación estándar de análisis repetidos
t(norte-1, 1-α=0.99)= valor t de Student para el 99% de confianza
nivel con n-1 grados de libertad
norte=número de réplicas.
NOTA:No reste valores en blanco al realizar cálculos de DL. el DL

es una determinación estadística de precisión solamente.2Si las réplicas de DL son
538-17
fortificados a una concentración lo suficientemente baja, es probable que no cumplan
con los criterios de precisión y exactitud para los CCC, y pueden dar como resultado una
DL calculada que es más alta que la concentración fortificada. Por lo tanto, no se
especifican criterios de precisión y exactitud.
9.3 REQUISITOS DE QC EN CURSO: esta sección resume los criterios de QC en

curso que se deben seguir al procesar y analizar muestras de campo.
9.3.1 REACTIVO EN BLANCO DE LABORATORIO (LRB): se requiere un LRB con cada lote de
análisis (Sección 3.1) para confirmar que los posibles contaminantes de fondo no
interfieren con la identificación o cuantificación de los analitos del método. Si el
LRB produce un pico dentro de la ventana de tiempo de retención de cualquier
analito que evitaría la determinación de ese analito, determinaría la fuente de
contaminación y eliminaría la interferencia antes de procesar las muestras. La
contaminación de fondo debe reducirse a un nivel aceptable antes de proceder. El
fondo de los analitos del método u otros contaminantes que interfieren con la
medición de los analitos del método debe estar por debajo de 1/3 del LMR. La
contaminación en blanco se estima por extrapolación, si la concentración está por
debajo del estándar CAL más bajo. Este procedimiento de extrapolación no está
permitido para los resultados de las muestras, ya que es posible que no cumpla con
los objetivos de calidad de los datos. Si los analitos del método se detectan en el
LRB en concentraciones iguales o superiores a 1/3 del LMR,
9.3.2 VERIFICACIÓN DE CALIBRACIÓN CONTINUA (CCC): los estándares CCC, que contienen
conservantes, se analizan al comienzo de cada lote de análisis, después de cada 10 muestras
de campo y al final del lote de análisis. Consulte la Sección 10.3 para conocer los requisitos de
concentración y los criterios de aceptación.
9.3.3 BLANCO FORTIFICADO DE LABORATORIO (LFB): dado que este método utiliza estándares de
calibración de procedimiento, que son aguas reactivas fortificadas, no hay diferencia entre
el LFB y el CCC. En consecuencia, no se requiere el análisis de un LFB separado como parte
del control de calidad en curso. Sin embargo, el acrónimo LFB se usa para mayor claridad
en el IDC.
9.3.4 ESTÁNDARES INTERNOS (IS): el analista debe monitorear las áreas máximas de los IS en todas las
inyecciones durante cada día de análisis. Las áreas de los picos IS en cualquier ejecución
cromatográfica deben estar dentro del 50-150 % de las áreas IS promedio en la curva de
calibración más reciente. Si las áreas IS en una corrida cromatográfica no cumplen
estos criterios, inyecte una segunda alícuota del mismo vial del muestreador automático.
9.3.4.1 Si la alícuota reinyectada produce una respuesta IS aceptable, informe los resultados
por esa alícuota.
538-18
9.3.4.2 Si la alícuota reinyectada no cumple con el criterio IS, el analista debe verificar la
calibración volviendo a analizar el estándar CAL aceptable más reciente. Si el estándar CAL
no cumple con los criterios de la Sección 10.3, se requiere una recalibración según la
Sección 10.2. Si el estándar CAL es aceptable, informe los resultados obtenidos de la
alícuota reinyectada, pero anótelos como "recuperación sospechosa/IS". Alternativamente,
prepare otra alícuota de la muestra como se especifica en la Sección 11.2 o tome una
nueva muestra y vuelva a analizar.
9.3.5 MATRIZ DE MUESTRA FORTIFICADA DE LABORATORIO (LFSM): se requiere el análisis de una

LFSM en cada lote de análisis y se utiliza para determinar que la matriz de la muestra no
afecta negativamente la precisión del método. La evaluación de la precisión del método se
logra mediante el análisis de un duplicado de campo (FD) (Sección 9.3.6); sin embargo, la
aparición poco frecuente de analitos del método dificultaría esta evaluación.
Si la aparición de analitos del método en las muestras es poco frecuente, o si las tendencias
históricas no están disponibles, se debe preparar y analizar una segunda LFSM o LFSMD a partir
de un duplicado de la muestra de campo. Los lotes de análisis que contienen LFSMD no
requerirán el análisis de un FD. Si se analiza regularmente una variedad de matrices de muestra
diferentes, por ejemplo, agua potable de fuentes de agua subterránea y superficial, se debe
establecer el rendimiento del método para cada una. Con el tiempo, el laboratorio debe
documentar los datos de LFSM para todas las fuentes de muestras de rutina.
9.3.5.1 Dentro de cada lote de análisis (Sección 3.1), se requiere un mínimo de una muestra de campo.
fortificado como un LFSM por cada 20 muestras de campo analizadas. El LFSM se
prepara agregando a una muestra una cantidad adecuada del Analito AGUA PDS
(Sección 7.2.2.3). Seleccione una concentración adicional que sea mayor o igual
que la concentración de fondo de la matriz, si se conoce. Use datos históricos y
rote entre las concentraciones baja, media y alta al seleccionar una concentración
fortificante.
9.3.5.2 Calcular el porcentaje de recuperación (%R) para cada analito usando la ecuación
dónde
A = concentración medida en la muestra fortificada =
B concentración medida en la muestra no fortificada =
C concentración de fortificación.
9.3.5.3 Las recuperaciones de analitos pueden presentar un sesgo de matriz. Para muestras enriquecidas en o
por encima de su concentración nativa, las recuperaciones deben oscilar entre el 70 y el 130 %,
excepto para la fortificación de bajo nivel cerca o en el MRL (dentro de un factor de dos veces la
concentración del MRL), donde las recuperaciones del 50 al 150 % son aceptables.
538-19
9.3.5.4 Si la precisión de cualquier analito cae fuera del rango designado en el LFSM, y se
demuestra que el desempeño del laboratorio para ese analito está bajo control en los
CCC, y los CCC para el lote no se prepararon recientemente el día del análisis , se
debe comprobar si hay pérdidas de analito en el PDS de AGUA del analito utilizado
para fortalecer la muestra de matriz. Verifique la precisión del Analyte WATER PDS
usándolo para preparar un CCC nuevo. El CCC nuevo debe cumplir con los criterios de
la Sección 10.3. Si el CCC nuevo no cumple con los criterios de la Sección 10.3, se debe
preparar un nuevo Analyte WATER PDS y repetir el análisis LFMS.
9.3.5.5 Si la precisión de cualquier analito cae fuera del rango designado, y el

se muestra que el rendimiento del laboratorio para ese analito está bajo control en los CCC, así como en
el PDS de AGUA del Analito, se considera que la recuperación está sesgada por la matriz. El resultado de
ese analito en la muestra no fortificada se etiqueta como "sospechoso/matriz" para informar al usuario
de los datos que los resultados son sospechosos debido a los efectos de la matriz.
9.3.6 DUPLICADO DE CAMPO O DUPLICADO DE MATRIZ DE MUESTRA FORTIFICADA EN

LABORATORIO (FD o LFSMD): dentro de cada lote de análisis (que no exceda los 20
Muestras de campo, secc. 3.1), se debe analizar un mínimo de un FD o LFSMD. Los duplicados verifican la
precisión asociada con la recolección de muestras, la preservación, el almacenamiento y los
procedimientos de laboratorio. Si los analitos del método no se observan de forma rutinaria en las
muestras de campo, se debe analizar un LFSMD en lugar de un FD.
9.3.6.1 Calcular la diferencia porcentual relativa (RPD) para mediciones duplicadas

(FD1yFD2) usando la ecuación
DF1 DF2
RPD 100
DF1 DF2 / 2
9.3.6.2 Los RPD para FD deben ser ≤30%. Se puede observar una mayor variabilidad cuando los FD
tienen concentraciones de analito que están dentro de un factor de dos del LMR.
A estas concentraciones, los FD deben tener RPD ≤50 %. Si el RPD de cualquier analito cae fuera
del rango designado, y se demuestra que el rendimiento del laboratorio para ese analito está
bajo control en el CCC, se considera que la recuperación está sesgada por la matriz. El resultado
de ese analito en la muestra no fortificada se etiqueta como "sospechoso/matriz" para informar
al usuario de los datos que los resultados son sospechosos debido a los efectos de la matriz.
9.3.6.3 Si se analiza un LFSMD en lugar de un FD, calcular el RPD para LFSM

duplicados (LFSM y LFSMD) utilizando la ecuación
538-20
LFSM LFSMD
RPD 100
LFSM LFSMD/2
9.3.6.4 Los RPD para LFSM duplicados deben ser ≤30% para muestras enriquecidas en o
por encima de su concentración nativa. Se puede observar una mayor variabilidad cuando los
LFSM se enriquecen en concentraciones de analito que están dentro de un factor de dos del LMR.
Los LFSM enriquecidos a estas concentraciones deben tener RPD ≤50%. Si el RPD de cualquier
analito cae fuera del rango designado, y se demuestra que el rendimiento del laboratorio para
ese analito está bajo control en el CCC, se considera que la recuperación está sesgada por la
matriz. El resultado de ese analito en la muestra no fortificada se etiqueta como "sospechoso/
matriz" para informar al usuario de los datos que los resultados son sospechosos debido a los
efectos de la matriz.
9.3.7 MUESTRAS DE CONTROL DE CALIDAD (QCS): como parte del IDC (Sección 9.2), cada vez que se
prepara un nuevo Analito MEOH PDS (Sección 7.2.2.2), y al menos trimestralmente, analice
una muestra de QCS de una fuente diferente de la fuente de los estándares CAL. Si no hay un
segundo proveedor disponible, se debe usar un lote diferente del estándar. El QCS debe
prepararse cerca del punto medio del rango de calibración y analizarse como un CCC. Los
criterios de aceptación para el QCS son idénticos a los de los CCC; la cantidad calculada para
cada analito debe ser ± 30% del valor esperado. Si las concentraciones de analito medidas no
tienen una precisión aceptable, verifique todo el procedimiento analítico para localizar y
corregir el problema.
9.4 REQUISITOS DE QC PARA LA MODIFICACIÓN DEL MÉTODO: el analista puede modificar las columnas de LC,
las condiciones de LC, los estándares internos y las condiciones de MS y MS/MS. Cada vez que se
realicen tales modificaciones al método, el laboratorio debe confirmar que las modificaciones
proporcionen un rendimiento aceptable del método, tal como se define en las Secciones 9.4.1-9.4.3.Las
modificaciones a las condiciones de LC aún deben producir condiciones tales que la coelución de
los analitos del método se minimice para reducir la probabilidad de efectos de supresión/mejora
de ESI.
9.4.1 Cada vez que se realicen modificaciones al método, el analista debe repetir los procedimientos del IDC (Sección 9.2) y
verificar que todos los criterios de control de calidad se puedan cumplir en las muestras de control de calidad en curso
(Sección 9.3).
9.4.2 También se requiere que el analista evalúe y documente el desempeño del método para las
modificaciones del método propuesto en matrices reales que abarquen el rango de aguas
que analiza el laboratorio. Este paso adicional es necesario porque las modificaciones
que funcionan aceptablemente en el IDC, que se lleva a cabo en agua reactiva, pueden fallar los
requisitos de control de calidad del método en curso en matrices reales. Esto es particularmente
importante para los métodos sujetos a efectos de matriz. Si, por ejemplo, el laboratorio analiza las
aguas tratadas de los municipios de aguas superficiales y subterráneas, este requisito puede
cumplirse mediante la evaluación de la precisión y exactitud (Secciones 9.2.2 y 9.2.3) en aguas
superficiales con carbono orgánico total de moderado a alto.
538-21
(TOC) (p. ej., 2 mg/L o más) y un agua subterránea dura (p. ej., 250 mg/L o más como
carbonato de calcio).
9.4.3 Los resultados de las Secciones 9.4.1 y 9.4.2 deben ser debidamente documentados por el analista y deben
ser evaluados de forma independiente por el departamento de calidad del laboratorio.
Oficial de aseguramiento (QA) antes de analizar muestras de campo.
9.4.3.1 Al implementar modificaciones de métodos, es responsabilidad del laboratorio

revisar de cerca los resultados del control de calidad en curso y, en particular,
los resultados asociados con los LFSM (Sección 9.3.5), FD o LFSMD (Sección 9.3.
6), CCC (Sect. 9.3.2) y el área IS cuenta (Sect. 9.3.4). Si se observan fallas
repetidas, se debe abandonar la modificación.
10CALIBRACIÓN Y ESTANDARIZACIÓN
10.1 Se requiere demostración y documentación de una calibración inicial aceptable antes de analizar
cualquier muestra. Después de que la calibración inicial sea exitosa, se requiere un CCC al
principio y al final de cada período en el que se realizan los análisis, y después de cada décima
muestra de campo.
10.2 CALIBRACIÓN INICIAL
10.2.1 SINTONIZACIÓN ESI-MS/MS
10.2.1.1 Calibre la escala de masas del MS con los compuestos y procedimientos

de calibración prescritos por el fabricante.
10.2.1.2 Optimizar [M+H]+para cada analito del método infundiendo aproximadamente

1,0-5,0 µg/ml de cada analito (preparado en agua que contiene un 10 % de metanol)
directamente en el MS al caudal de fase móvil de LC elegido
(aproximadamente 0,3 ml/min). Este ajuste se puede realizar con una mezcla de los analitos del método.
Los parámetros de MS (voltajes, temperaturas, flujos de gas, etc.) varían hasta que se determinan las
respuestas óptimas del analito. Los analitos del método pueden tener valores óptimos diferentes, lo que
requiere cierto compromiso entre los valores óptimos. Consulte la Tabla 2 para conocer las condiciones
de ESI-MS utilizadas en el desarrollo del método.
10.2.1.3 Optimice el ion producto (Sección 3.17) para cada analito mediante la infusión de aproximadamente
1,0-5,0 µg/mL de cada analito (preparado en las condiciones iniciales de la fase móvil)
directamente en el MS a la velocidad de flujo de la fase móvil LC elegida (aproximadamente 0,3
ml/min). Este ajuste se puede realizar con una mezcla de los analitos del método. Los parámetros
MS/MS (presión del gas de colisión, energía de colisión, etc.) varían hasta que se determinan las
respuestas óptimas del analito. Consulte la Tabla 4 para conocer las condiciones de MS/MS
utilizadas en el desarrollo del método.
538-22
10.2.2 Establecer parámetros operativos de LC que optimicen la resolución y la forma de los picos. Las condiciones
de LC sugeridas se pueden encontrar en la Tabla 1. Las condiciones de LC enumeradas en la Tabla 1
pueden no ser óptimas para todos los sistemas de LC y es posible que el analista deba optimizarlas. Si es
posible, optimice las condiciones cromatográficas de manera que un ion de cuantificación único esté
disponible para cada analito que esté libre de interferencias debido a un ion de producto idéntico en
cualquier pico coeluyente (o superpuesto).
NOTA:Durante el desarrollo del método, el flujo de LC se desvió a los desechos para el

primeros tres minutos del análisis. El flujo se desvió para evitar la posible
contaminación de la fuente de ESI por los componentes de la muestra, incluidos los
conservantes. No se requiere que los laboratorios desvíen el flujo de LC, pero puede
ser necesario un mantenimiento más frecuente si el flujo no se desvía antes de la
elución del primer analito.
10.2.3 Inyecte un estándar CAL de nivel medio en condiciones de LC/MS para obtener los tiempos de
retención de cada analito del método. Divida el cromatograma en ventanas de tiempo de
retención para que cada ventana contenga uno o más picos cromatográficos.
Durante el análisis MS/MS, fragmente un pequeño número de iones precursores seleccionados ([M+H]+;
Secta. 3.15) para los analitos en cada ventana y elija el ion de producto más abundante. Los iones de
producto (también los iones de cuantificación) elegidos durante el desarrollo del método se encuentran
en la Tabla 4, aunque dependerán del instrumento. Para obtener la máxima sensibilidad durante el
desarrollo del método, se utilizaron para la cuantificación pequeñas ventanas de masa de ±0,5 daltons
alrededor de la masa de iones del producto.
10.2.4 Inyecte un estándar CAL de nivel medio en condiciones optimizadas de LC/MS/MS para
garantizar que cada analito del método se observe en su ventana de MS/MS y que haya al
menos 10 escaneos en el pico para una precisión óptima.
PRECAUCIÓN:Al adquirir datos MS/MS, las condiciones de operación del LC deben ser
cuidadosamente reproducidos para cada análisis para proporcionar tiempos de
retención reproducibles. Si esto no se hace, los iones correctos no serán monitoreados
en los momentos apropiados. Como medida de precaución, los picos cromatográficos
de cada ventana no deben eluir demasiado cerca del borde de la ventana de tiempo
del segmento.
10.2.5 Prepare un conjunto de al menos cinco estándares CAL como se describe en la Sección
7.2.3. El estándar CAL de concentración más baja debe estar en o por debajo del LMR, lo
que dependerá de la sensibilidad del sistema. Se recomienda que al menos cuatro de los
estándares CAL estén en una concentración mayor o igual al LMR.
10.2.6 El sistema LC/MS/MS se calibra utilizando la técnica IS. Utilice el software del sistema de datos LC/MS/
MS para generar una regresión lineal o una curva de calibración cuadrática para cada uno de los
analitos. Las curvas pueden ser ponderadas por concentración, si es necesario.
538-23
10.2.7 CRITERIOS DE ACEPTACIÓN DE LA CALIBRACIÓN: cuando se cuantifica usando la curva de calibración
inicial, cada punto de calibración, excepto el punto más bajo, para cada analito debe calcularse
dentro del 70-130 % de su valor real. El punto CAL más bajo debe calcularse entre el 50 y el 150 %
de su valor real. Si no se pueden cumplir estos criterios, el analista tendrá dificultades para cumplir
con los criterios de control de calidad continuos. Es
recomienda que se tomen medidas correctivas para volver a analizar los estándares CAL,
restringir el rango de calibración o seleccionar un método alternativo de calibración.
10.3 VERIFICACIÓN DE CALIBRACIÓN CONTINUA (CCC): la verificación de calibración diaria mínima es la

siguiente. Verifique la calibración inicial al principio y al final de cada grupo de análisis, y después
de cada décima muestra durante los análisis. En este contexto, una “muestra” se considera una
Muestra de Campo. Los LRB, CCC, LFSM, FD y LFSMD no se cuentan como muestras. El CCC inicial
de cada lote de análisis debe estar en o por debajo del LMR para verificar la sensibilidad del
instrumento antes de cualquier análisis. Si los estándares se han preparado de manera que todos
los puntos CAL bajos no estén en la misma solución CAL, puede ser necesario analizar dos
estándares CAL para cumplir con este requisito. Alternativamente, las concentraciones de analitos
en el PDS de analitos pueden personalizarse para cumplir con este criterio. Los CCC subsiguientes
deben alternar entre un estándar CAL de concentración media y alta.
10.3.1 Inyecte una alícuota del estándar CAL de concentración adecuada y analice con las
mismas condiciones utilizadas durante la calibración inicial.
10.3.2 Determine que las áreas absolutas de los iones de cuantificación de los IS están dentro del 50-150 %
de las áreas promedio medidas en la calibración más reciente. Si alguna de las áreas IS ha
cambiado más de estas cantidades, se deben hacer ajustes para restaurar la sensibilidad del
sistema. Estos ajustes pueden incluir la limpieza de la fuente de iones MS u otro mantenimiento
como se indica en la Sección 10.3.4. El mantenimiento principal del instrumento requiere
recalibración (Sección 10.2) y verificación de la sensibilidad mediante el análisis de un CCC en o
por debajo del LMR (Sección 10.3). Los gráficos de control son ayudas útiles para documentar los
cambios de sensibilidad del sistema.
10.3.3 Calcular la concentración de cada analito en el CCC. La cantidad calculada

para cada analito para CCC de nivel medio y alto debe estar dentro de ± 30% del valor real. La
cantidad calculada para el punto de calibración más bajo para cada analito debe estar dentro del ±
50 % del valor real. Si no se pueden cumplir estas condiciones, todos los datos del analito
problemático se deben considerar inválidos y se deben tomar medidas correctivas (Sección 10.3.4).
Esto puede requerir una recalibración. Todas las muestras de campo o de control de calidad que
hayan sido analizadas desde la última verificación de calibración aceptable deben volver a
analizarse después de que se haya restablecido la calibración adecuada, con la siguiente excepción.
Si el CCC al final del lote falla porque la concentración calculada es superior al 130 % (150 %
para el CCC de nivel bajo) para un analito de método en particular, y las muestras de campo
no muestran detección para ese analito de método, es posible que no se detecte. informarse
sin un nuevo análisis.
538-24
10.3.4 MEDIDAS CORRECTIVAS: el incumplimiento de los criterios de desempeño del control de calidad del CCC puede
requerir una acción correctiva. El mantenimiento principal, como la limpieza de la sonda de
electropulverización, la fuente de ionización a presión atmosférica, la limpieza del analizador de masas, el
reemplazo de la columna de LC, etc., requiere recalibración (Sección 10.2) y verificación de la sensibilidad
mediante el análisis de un CCC igual o inferior al MRL (Sección 10.3). ).
11PROCEDIMIENTO
11.1. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
11.1.1. Las muestras se conservan, recolectan y almacenan como se indica en la Sección 8. Todas las muestras de campo
y control de calidad deben contener los conservantes enumerados en la Sección 8.1.2, incluido el LRB.
11.1.2. Además de los conservantes, si la muestra es una LFSM o LFSMD, añadir la cantidad
necesaria de analito AGUA PDS (Apt. 7.2.2.3). Tape e invierta cada muestra para
mezclar.
NOTA:Si al laboratorio le preocupa que una matriz en particular pueda contener un alto
niveles de partículas que podrían causar la obstrucción del sistema LC, se puede
incorporar la filtración de muestras en el procedimiento. Si se incorpora el filtrado como
parte de la preparación de la muestra, el primer lote de filtros debe estar sujeto a los
procedimientos descritos en el IDC (Sección 9.2) y cumplir con los criterios de
aceptación definidos en la Sección 9.2 para garantizar que no introduzcan interferencias
o retengan cualquiera de los analitos del método. La verificación de lotes posteriores de
filtros se puede lograr examinando un LRB filtrado y muestras duplicadas de LFB
filtrados fortificados en el MRL. Los LFB filtrados deben calcularse dentro del 50 % del
valor real. Si el LRB o los LFB fallan en esta evaluación, será necesario repetir el IDC
completo con el nuevo lote de filtros. Los estándares CAL y CCC no deben filtrarse para
identificar pérdidas potenciales asociadas con los dispositivos de filtración de muestras.
Durante el desarrollo del método, Pall Gelman GHP Acrodisc, se evaluaron filtros de
jeringa de 25 mm con membranas GHP de 0,45 µm (n.º de cat.: 4560T) y se encontró
que superaban todos los criterios de control de calidad. Se pueden usar otros
materiales de filtro siempre que se cumplan los criterios de control de calidad de la
Sección 9.
11.2. ANÁLISIS DE MUESTRAS
11.2.1. Transfiera una alícuota de 990 µL de la muestra a un vial de automuestreador. Agregue 10 µL de IS PDS
(Sección 7.2.1.2) al vial del muestreador automático. Tape e invierta cada vial para mezclar.
11.2.2. Establezca condiciones de operación equivalentes a las resumidas en las Tablas 1-4 de
la Sección 17. Las condiciones del instrumento y las columnas deben optimizarse antes
de iniciar el IDC.
538-25
11.2.3. Establezca una ventana de tiempo de retención adecuada para cada analito. Esto debe basarse
en mediciones de la variación real del tiempo de retención para cada analito del método en
soluciones estándar CAL analizadas en el LC a lo largo del tiempo. Un valor
de más o menos tres veces la desviación estándar del tiempo de retención, obtenida
para cada analito del método al establecer la calibración inicial y completar el IDC, se
puede usar para calcular un tamaño de ventana sugerido. Sin embargo, la experiencia
del analista debe pesar mucho en la determinación del tamaño de ventana de retención
apropiado.
11.2.4. Calibre el sistema mediante el análisis de un conjunto de estándares CAL (Sección 10.2) o
confirmando que la calibración existente sigue siendo válida mediante el análisis de un CCC como
se describe en la Sección 10.3. Si establece una calibración inicial, complete el IDC como se
describe en la Sección 9.2.
11.2.5. Comience a analizar las muestras de campo, incluidas las muestras de control de calidad, con la frecuencia
adecuada mediante la inyección de alícuotas del mismo tamaño (se usaron 50 µL en el desarrollo del
método) en las mismas condiciones que se usaron para analizar los estándares CAL.
11.2.6. Al finalizar la adquisición de datos, utilice el mismo software que se utilizó en el procedimiento de
calibración para identificar picos de interés en ventanas de tiempo de retención predeterminadas.
Utilice el software del sistema de datos para examinar la abundancia de iones de los picos en el
cromatograma. Identifique un analito comparando su tiempo de retención con el del pico del
analito del método correspondiente en un estándar de referencia. La comparación de los
espectros de masas MS/MS no es especialmente útil dado el limitado rango de masas de ±0,5
dalton alrededor de un único ion producto para cada analito del método.
11.2.7. El analista no debe extrapolar más allá del rango de calibración establecido. Si el área de un
pico de analito excede el rango de la curva de calibración, la nueva alícuota de muestra
puede diluirse con agua reactiva y agregarse la cantidad adecuada de IS. Vuelva a inyectar la
muestra diluida. Incorpore el factor de dilución en los cálculos de concentración finales. Los
datos resultantes deben documentarse como una dilución, con un LMR aumentado.
12ANÁLISIS Y CÁLCULO DE DATOS
12.1. Al validar este método, las concentraciones se calcularon midiendo los iones de producto
enumerados en la Tabla 4. Se pueden seleccionar otros iones de producto a discreción del
analista.
12.2. Calcular las concentraciones de analito usando la calibración multipunto establecida en la Sección 10.2.
No utilice datos de verificación de calibración diarios para cuantificar analitos en muestras.
538-26
12.3 Antes de informar los datos, se debe revisar el cromatograma para identificar cualquier
pico incorrecto o integración deficiente.
12.4 Los cálculos deben utilizar todos los dígitos de precisión disponibles, pero las concentraciones
finales informadas deben redondearse a un número apropiado de cifras significativas (un dígito
de incertidumbre), generalmente dos y no más de tres cifras significativas.
13RENDIMIENTO DEL MÉTODO
13.1 PRECISIÓN, EXACTITUD Y NIVELES MÍNIMOS DE INFORME: las tablas para estos datos se
presentan en la Sección 17. Los LCMRL y los DL para cada analito del método se presentan en
la Tabla 5. La precisión y la exactitud se presentan para cuatro matrices de agua corriente:
agua reactiva (Tablas 6 y 7); agua superficial clorada (Cuadros 8 y 9); agua subterránea clorada
(terminada) (Tabla 10); agua superficial clorada fortificada con materia orgánica natural
(Cuadro 11).
13.2 ESTUDIOS DE ESTABILIDAD DE ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS: se llevó a cabo un estudio de estabilidad

de almacenamiento de analitos fortificando los analitos en muestras de agua superficial clorada que se
recolectaron, conservaron y almacenaron como se describe en la Sección 8. El agua superficial clorada se
ajustó a pH = 9,0 antes de agregar los conservantes. y analitos para simular el peor de los casos para
compuestos con potencial para degradarse en condiciones básicas de pH. La precisión y la recuperación
media de los análisis (n=7), realizados en los Días 0,
7 y 14, se presentan en la Tabla 12.
13.3 VERIFICACIÓN DE LABORATORIOS MÚLTIPLES: el rendimiento de este método fue demostrado por
varios laboratorios, con resultados de exactitud y precisión similares a los informados en la
Sección 17. Los autores desean agradecer la asistencia de los analistas y laboratorios que se
enumeran a continuación por su participación en la multi- demostración de laboratorio.
13.3.1 Dr. Andrew Eaton y Sr. Ali Haghani de MWH Laboratories, Monrovia, CA.
13.3.2 Dr. Yongtao Li de Underwriters Laboratories, Inc., South Bend, IN.
13.3.3 Sra. Tiffany Payne y Sr. Ed George de Varian, Inc., Walnut Creek, CA.
14PREVENCIÓN DE LA CONTAMINACIÓN
14.1 Este método utiliza DAI-LC/MS/MS para el análisis de los analitos del método en agua. Requiere el
uso de volúmenes muy pequeños de disolvente orgánico y cantidades muy pequeñas de analitos
puros, lo que minimiza los peligros potenciales tanto para el analista como para el medio
ambiente.
14.2 Para obtener información sobre la prevención de la contaminación que puede ser aplicable a las operaciones de
laboratorio, consulte “Menos es mejor: Gestión de productos químicos de laboratorio para residuos”.
538-27
Reduction” disponible en el Departamento de Relaciones Gubernamentales y Política Científica
de la American Chemical Society, 1155 16elStreet NW, Washington, DC, 20036 o en línea enhttp://
membership.acs.org/c/ccs/pub_9.htm (consultado en noviembre de 2009).
15.GESTIÓN DE RESIDUOS
15.1 Los procedimientos analíticos descritos en este método generan cantidades relativamente pequeñas de desechos
ya que solo se utilizan pequeñas cantidades de reactivos y solventes. Las matrices de preocupación son agua
potable terminada o agua de manantial. Sin embargo, las prácticas de manejo de desechos de laboratorio deben
llevarse a cabo de acuerdo con todas las reglas y regulaciones aplicables, y que los laboratorios protejan el aire,
el agua y la tierra al minimizar y controlar todas las emisiones de las campanas de extracción y las operaciones
de banco. Además, se requiere el cumplimiento de los permisos y reglamentos de descarga de aguas residuales,
en particular las reglas de identificación de desechos peligrosos y las restricciones de disposición en el suelo.
15.2 Es posible que las normas locales prohíban el desecho en el fregadero de agua que contenga omadina sódica. Por lo
tanto, el laboratorio debe determinar con los funcionarios locales cómo desechar de manera segura las muestras de
campo y control de calidad que contienen omadina de sodio.
dieciséis.REFERENCIAS
1. Winslow, SD, Pepich, BV, Martin, JJ, Hallberg, GR, Munch, DJ, Frebis, CP, Hedrick, EJ, Krop, RA
“Procedimientos estadísticos para la determinación y verificación de niveles mínimos de
notificación para métodos de agua potable”.Reinar. ciencia y tecnología2004, 40, 281-288.
2. Glaser, JA, DL Foerst, GD McKee, SA Quave, WL Budde, "Análisis de trazas para aguas
residuales".Reinar. ciencia Tecnología1981,15,1426-1435.
3. Leenheer, JA, Rostad, CE, Gates, PM, Furlong, ET, Ferrer, I. "Resolución molecular y fragmentación del
ácido fúlvico mediante ionización por electropulverización/espectrometría de masas en tándem
multietapa".Anal. química. 2001,73, 1461-1471.
4. Cahill, JD, Furlong ET, Burkhardt, MR, Kolpin, D., Anderson, LG “Determinación de compuestos
farmacéuticos en muestras de agua superficial y subterránea mediante extracción en fase sólida y
espectrometría de masas de ionización por electrospray de cromatografía líquida de alto
rendimiento. ”J. Chromatogr. A2004,1041, 171-180.
5. “Estándares de seguridad y salud de OSHA, industria general" (29CRF1910). Administración de seguridad y

salud ocupacional, OSHA 2206, (revisado el 1 de julio de 2001).
6. “Carcinogens-Working with Carcinogens,” Publicación No. 77-206, Departamento de Salud, Educación y

Bienestar, Servicio de Salud Pública, Centro para el Control de Enfermedades, Instituto Nacional de
Seguridad y Salud Ocupacional, Atlanta, Georgia, agosto de 1977.
538-28
7. "Seguridad en los laboratorios de química académica", Publicación de la Sociedad Química Estadounidense,
Comité de Seguridad Química, 7.ª edición. La información sobre cómo obtener una copia está disponible en
http://membership.acs.org/C/CCS/pub_3.htm (consultado en noviembre de 2009). También disponible a pedido
enOSS@acs.org .
538-29
17TABLAS, ESQUEMAS, DIAGRAMAS DE FLUJO Y DATOS DE VALIDACIÓN
TABLA 1. CONDICIONES DEL MÉTODO LC
Tiempo (min) % formiato de amonio 20 mM % metanol

Inicial 90,0 10.0
3.0 90,0 10.0
5.0 70.0 30.0
8.0 70.0 30.0
20 30.0 70.0
20.1 10.0 90,0
25 10.0 90,0
25.1 90,0 10.0
30 90,0 10.0
Aguas Atlantis T32,1 x 150 mm embalado con 5,0 µm C18fase estacionaria
Caudal de 0,3 ml/min
Inyección de 50 µL
TABLA 2. CONDICIONES DEL MÉTODO ESI-MS
Condiciones ESI
Polaridad Ion positivo
Voltaje de aguja capilar + 4 kV

Flujo de gas de cono 100 l/h
Flujo de gas de desolvatación de nitrógeno 1000 l/h
Temperatura del gas de desolvatación. 350ºC
538-30
TABLA 3. MÉTODO ANALITO TIEMPOS DE RETENCIÓN (RT) Y
REFERENCIAS SUGERIDAS
analito Cima # RT ES#

(Figura 1) (min) Árbitro
metamidofos 2 3.66 1
Acefato 4 5.24 2
sulfóxido de aldicarb 5 6.51 2
Oxidemeton-metil 7 7.50 3
dicrotofos 8 9.59 3
aldicarb 9 14.74 3
quinolina 11 15.77 4
DIMP 13 16.65 5
Sulfóxido de fenamifos 14 17.63 3
Fenamifos sulfona 15 18.07 3
Tiofanox dieciséis 18.79 5
metamidofos-d6 1 3.57 ES#1
Acefato-d6 3 5.16 ES#2
Oxidemeton-metil-d6 6 7.44 ES#3
Quinolina-d7 10 15.57 ES#4
DIMP-d14 12 16.44 ES#5
538-31
TABLA 4. CONDICIONES DEL MÉTODO MS/MSa,b
Cono Colisión
Ión precursord ProducciónDelaware Voltaje EnergíaF
SegmentoC analito (m/z) (m/z) (v) (v)
1 metamidofos 142 94 20 15
1 Acefato 184 143 20 15
2 sulfóxido de aldicarb 207 132 20 10
2 Oxidemeton-metil 247 169 20 15
3 dicrotofos 238 112 25 15
3 aldicarb 208 89 10 15
4 quinolina 130 77 35 30
4 DIMP 181 97 15 10
4 Sulfóxido de fenamifos 320 233 30 25
4 Fenamifos sulfona 336 266 30 20
5 Tiofanox 219 57 20 20
1 metamidofos-d6 148 97 20 15
1 Acefato-d6 190 149 20 15
2 Oxidemeton-metil-d6 253 175 20 15
4 Quinolina-d7 137 81 35 30
4 DIMP-d14 195 99 15 15
aEn la Figura 1 se muestra un cromatograma LC/MS/MS de los analitos.
bEstas condiciones se optimizaron durante el desarrollo del método y se utilizaron para recopilar los datos en
Sección 17. Las condiciones óptimas pueden variar en diferentes instrumentos LC/MS/MS.
C
Los segmentos son duraciones de tiempo en las que ocurren eventos de escaneo únicos o múltiples.
d
Los iones precursores y productos enumerados en esta tabla son masas nominales. Durante la
optimización de MS y MS/MS, el analista debe determinar las masas de iones precursores y productos con
un decimal ubicando el vértice del pico espectral de masas (p. ej.,m/z141,9 93,9 para metamidofos). Estas
masas de iones precursores y productos (con un decimal) deben utilizarse en el método MS/MS para todos
los análisis.
mi
Iones utilizados con fines de cuantificación.
F
Se utilizó argón como gas de colisión a un caudal de 0,3 ml/min.
538-32
TABLA 5. DL Y LCMRL EN AGUA REACTIVA
concentrado fortificado DLb LCMRLC
analito (µg/L)a (µg/L) (µg/L)
metamidofos 0.050 0.017 0.032
Acefato 0.050 0.019 0.044
sulfóxido de aldicarb 0.10 0.060 0.088
Oxidemeton-metil 0.050 0.010 0.019
dicrotofos 0.050 0.025 0.039
aldicarb 0.10 0.030 0.030
quinolina 2.1 1.2 1.5
DIMP 0.050 0.014 0.022
Sulfóxido de fenamifos 0.050 0.034 0.042
Fenamifos sulfona 0.050 0.0087 0.011
Tiofanox 0.20 0.090 0.18
aConcentración adicional utilizada para determinar la DL.
bLos límites de detección se determinaron analizando ocho réplicas durante tres días de acuerdo con
Sección 9.2.6.
CLos LCMRL se calcularon de acuerdo con el procedimiento de la referencia 1.
TABLA 6. PRECISIÓN Y EXACTITUD EN AGUA REACTIVA FORTIFICADA A

0,05-2,1 µg/L (n=8)
analito concentrado fortificado (µg/L) % medio de recuperación % RSD

Acefato 0.050 96,0 13
sulfóxido de aldicarb 0.10 96,9 21
Oxidemeton-metil 0.050 105 6.5
dicrotofos 0.050 114 15
aldicarb 0.10 106 9.5
quinolina 2.1 94.0 20
DIMP 0.050 103 9.2
Sulfóxido de fenamifos 0.050 118 19
Fenamifos sulfona 0.050 108 5.4
538-33
TABLA 7. PRECISIÓN Y EXACTITUD EN AGUA REACTIVA FORTIFICADA A
0,99-43 µg/L (n=7)

metamidofos 0.99 105 1.3
Acefato 0.99 107 4.3
sulfóxido de aldicarb 2.0 105 1.9
Oxidemeton-metil 0.99 96,0 3.6
dicrotofos 0.99 95,9 5.2
aldicarb 2.0 97.1 4.9
quinolina 43 101 5.3
DIMP 0.99 101 3.3
Sulfóxido de fenamifos 0.99 94.5 6.5
Fenamifos sulfona 0.99 92.3 4.7
Tiofanox 4.0 93.2 4.2
TABLA 8. PRECISIÓN Y EXACTITUD EN AGUA SUPERFICIAL CLORADA

FORTIFICADO A 0,05-2,1 µg/L (n=7)

Acefato 0.050 113 18
sulfóxido de aldicarb 0.10 106 18
Oxidemeton-metil 0.050 99.8 14
dicrotofos 0.050 93,9 dieciséis
aldicarb 0.10 116 15

quinolina 2.1 97.4 19
DIMP 0.050 98.9 15
Sulfóxido de fenamifos 0.050 111 dieciséis
Fenamifos sulfona 0.050 111 18

538-34
FORTIFICADO EN 0.99-43 µg/La(n=7)

Acefato 0.99 103 3.2
dicrotofos 0.99 98.4 3.5
aldicarb 2.0 112 2.1
quinolina 43 98.5 3.7
DIMP 0.99 102 2.7
Sulfóxido de fenamifos 0.99 110 3.5
Tiofanox 4.0 95.2 3.3
aTOC = 1,49 mg/L y dureza = 120 mg/L como carbonato de calcio.
TABLA 10. PRECISIÓN Y EXACTITUD EN CLORADOS FORTIFICADOS

AGUA SUBTERRÁNEA FORTIFICADA A 0.99-43 µg/La(n=7)

metamidofos 0.99 98.1 7.0
Acefato 0.99 106 4.4
sulfóxido de aldicarb 2.0 102 5.8
Oxidemeton-metil 0.99 97.0 5.2
dicrotofos 0.99 95.6 5.3
DIMP 0.99 99.2 4.5
Tiofanox 4.0 89.3 2.4
aTOC = 0,726 mg/L y dureza = 342 mg/L como carbonato de calcio.
538-35
QUE CONTIENE MATERIAL ORGÁNICO NATURALaY FORTIFICADO
CON ANALITOS A 0,99-43 µg/L (n=5)

Acefato 0.99 106 3.8
dicrotofos 0.99 102 3.4
DIMP 0.99 103 1.8
Tiofanox 4.0 104 4.9
aPreparado con agua disponible comercialmente (Sociedad Internacional de Sustancias Húmicas)
materia orgánica natural (NOM) aislada del río Suwannee. El agua superficial clorada se
fortificó con NOM para obtener una medida de TOC de 8,7 mg/L.
538-36
TABLA 12. DATOS DE TIEMPO DE RETENCIÓN DE MUESTRAS ACUOSAS PARA MUESTRAS DE AGUA SUPERFICIAL CLORADAa,
FORTIFICADO CON ANALITOS DEL MÉTODO Y CONSERVADO Y ALMACENADO SEGÚN LA SECCIÓN 8
(n=7)
Fortificado Día 0 Día 7 día 14

Conc. %Rec medio % RSD %Rec medio % RSD %Rec medio % RSD
analito (µg/L)
metamidofos 0.99 94.4 2.8 97.5 1.9 91.1 2.5
Acefato 0.99 105 3.3 106 4.4 94.7 4.1
sulfóxido de aldicarb 2.0 97.7 2.9 100 6.2 84.5 3.2
Oxidemeton-metil 0.99 92,9 3.4 85,9 2.5 80.0 2.3
dicrotofos 0.99 91.4 5.7 94.5 2.9 93.1 4.6
aldicarb 2.0 104 4.4 110 3.7 97.6 2.6
quinolina 43 97.8 2.6 98.0 4.0 99.9 2.4
DIMP 0.99 96.8 2.7 98.5 3.6 98.3 1.2
Sulfóxido de fenamifos 0.99 102 4.4 112 3.3 99.0 3.0
Fenamifos sulfona 0.99 101 4.3 117 3.0 99.6 2.6
Tiofanox 4.0 87.7 2.9 88.1 3.0 101 2.9
aTOC = 1,49 mg/L, pH = 9,0 y dureza = 120 mg/L como carbonato de calcio.
538-37
TABLA 13. REQUISITOS DE CONTROL DE CALIDAD DE LA DEMOSTRACIÓN INICIAL DE CAPACIDAD
Método
Referencia Requisito Especificación y frecuencia Criterios de aceptación
Analice LRB antes de cualquier otro paso de IDC y cada vez que un Demostrar que todos los analitos del método están por debajo de 1/3 del LMR
Demostración inicial de
Secta. 9.2.1 nuevo lote de solventes, reactivos y muestreador automático y que las posibles interferencias no impidan la
fondo bajo del sistema
Se utilizan viales. identificación y cuantificación de los analitos del método.
Demostración inicial de Analizar de cuatro a siete réplicas de LFB fortificadas cerca

Secta. 9.2.2 %RSD debe ser <20%
Precisión (IDP) la concentración de calibración de rango medio.
Demostración inicial de
Secta. 9.2.3 Calcule la recuperación media de las réplicas utilizadas en IDP. Recuperación media 30% del valor real
Precisión (IDA)
Fortifique y analice siete LFB replicados a la

concentración de MRL propuesta. Calcule la media y el
PIR superior 150%
Límite mínimo de informes rango medio (HR). Confirme que los límites superior e
Secta. 9.2.4
(LMR) Confirmación inferior para el Intervalo de predicción del resultado (PIR
superior y PIR inferior, Secc. 9.2.4.2) cumplan con los
PIR inferior 50%
criterios de recuperación.
Secta. 9.2.5 Muestra de control de calidad Analice un estándar de una segunda fuente, como
y 9.3.7 (CCS) parte del IDC, cada vez que un nuevo Analito MEOH
Los resultados deben estar dentro del 70-130% del valor esperado.
PDS (Sect. 7.2.2.2) está preparado, y al menos
trimestral.
Durante un período de tres días, preparar un mínimo de

Los datos de las réplicas de DL sonno requerido para cumplir con los
siete réplicas de LFB fortificadas a una concentración
Límite de detección (DL) criterios de precisión y exactitud del método. Si las réplicas de DL se
Secta. 9.2.6 estimada cercana a la DL. Analice las réplicas a través
Determinación (opcional) fortalecen a una concentración lo suficientemente baja, es probable que
de todos los pasos del análisis. Calcular la DL
no cumplirá con los criterios de precisión y exactitud para los CCC.
usando la ecuación en la Secc. 9.2.6.
NOTA: La Tabla 13 pretende ser un resumen abreviado de los requisitos de control de calidad proporcionados para comodidad del usuario del método. Porque la información ha sido
abreviado para ajustarse al formato de la tabla, puede haber problemas que necesiten una aclaración adicional o áreas donde se necesita información adicional importante del texto del
método. En todos los casos, el texto completo del QC en la Sección 9 reemplaza cualquier información faltante o contradictoria en esta tabla.
538-38
TABLA 14. REQUISITOS DE CONTROL DE CALIDAD EN CURSO (RESUMEN)
Método
Referencia Requisito Especificación y frecuencia Criterios de aceptación
Secta. 8.1 - 14 días con la adecuada conservación y almacenamiento como Los resultados de las muestras son válidos solo si las muestras se analizan dentro de la explotación de muestras.
Tiempo de retención de la muestra
Secta. 8.4 descrito en las Secciones 8.1-8.4. tiempo.
Demostrar que todos los analitos del método están por debajo de 1/3 del LMR y confirmar que
reactivo de laboratorio Un LRB con cada lote de análisis de hasta 20 Field las posibles interferencias no impiden la cuantificación de los analitos del método. Si los
Secta. 9.3.1
En blanco (LRB) Muestras. objetivos exceden 1/3 del MRL o si hay interferencias, los resultados para estos
los analitos en cuestión en el lote de análisis no son válidos.
Si se debe analizar un LFB debido a una falla del LFSM, los resultados de los análisis de LFB
Laboratorio Fortificado No se requiere LFB a menos que LFSM no cumpla con los criterios de control de calidad (Sect.
Secta. 9.3.3 debe ser 70-130% del valor verdadero para cada analito del método para todos excepto el
En blanco (LFB) 9.3.5.4).
estándar más bajo, que debe ser 50-150% del valor real.
Los estándares internos se agregan a todos los estándares y muestras, Las áreas máximas (o concentraciones calculadas) para todos los IS en todas las inyecciones deben ser
Secta. 9.3.4 Norma Interna (IS) incluidas las muestras de control de calidad. Comparar áreas IS con dentro del 50% de las áreas pico promedio calculadas durante la calibración más reciente. Si no se
las áreas IS promedio en la calibración más reciente. cumple este criterio, los resultados se etiquetan como "recuperación sospechosa/IS".
Analice un LFSM por lote de análisis (20 muestras o menos)
Laboratorio Fortificado
reforzado con analitos del método a una concentración
Secta. 9.3.5 Matriz de muestra Ver secc. 9.3.5 para obtener instrucciones sobre la interpretación de los resultados de LFSM.
cercana pero mayor que la concentración nativa, si
(LFSM)
conocido. Calcule las recuperaciones de LFSM.
Laboratorio Fortificado Analice al menos un FD o LFSMD con cada análisis
Matriz de muestra lote (20 muestras o menos). Un LFSMD puede sustituirse
Secta. 9.3.6 Ver secc. 9.3.6 para obtener instrucciones sobre la interpretación de los resultados de LFSMD o FD.
Duplicado (LFSMD) o por un FD cuando la frecuencia de las detecciones es
Duplicados de campo (FD) bajo. Calcular RPD.
Control de calidad Analizar al menos trimestralmente o al preparar nuevos
Secta. 9.3.7 Los resultados deben estar dentro del 70-130% del valor esperado.
Muestra (QCS) estándares, así como durante el IDC.
Utilice la técnica de calibración IS para generar lineal o
Cuando cada estándar CAL se calcula como un valor desconocido utilizando la curva de calibración,
curvas de calibración cuadráticas. Utilice al menos cinco
Secta. 10.2 Calibración inicial los resultados del analito deben ser del 70 al 130 % del valor real para todos excepto el
concentraciones estándar. Comprobar la curva de calibración
estándar más bajo, que debe ser 50-150% del valor real.
como se describe en la Secc. 10.2.7.
Verifique la calibración inicial analizando un nivel bajo (en el
Secta. 9.3.2 LMR o inferior) CCC antes de analizar las muestras. La recuperación para cada analito debe estar dentro del 70-130% del valor real para todos menos
Calibración continua
y secta. Luego, los CCC se inyectan después de cada 10 muestras y después el nivel más bajo de calibración. Recuperación para cada analito en el CAL más bajo
Cheque (CCC)
10.3 de la última muestra, rotando las concentraciones para cubrir el nivel CCC debe estar dentro del 50-150% del valor real.
el rango calibrado del instrumento.
NOTA: La Tabla 14 pretende ser un resumen abreviado de los requisitos de control de calidad proporcionados para comodidad del usuario del método. Porque la información ha sido abreviada.
para ajustarse al formato de la tabla, puede haber problemas que necesiten una aclaración adicional o áreas en las que se necesite información adicional importante del texto del método. En todos
los casos, el texto completo del QC en la Sección 8-10 reemplaza cualquier información faltante o contradictoria en esta tabla.
538-39
FIGURA 1. CROMATOGRAMA DE EJEMPLO PARA AGUA REACTIVA FORTIFICADA CON LOS ANALITOS DEL MÉTODO 538 A LOS
NIVELES DE CONCENTRACIÓN INDICADOS EN LA TABLA 7. LOS PICOS NUMERADOS SE IDENTIFICAN EN LA TABLA 3.
538-40

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MÉTODO 538. DETERMINACIÓN DE CONTAMINANTES ORGÁNICOS SELECCIONADOS

LABORATORIO NACIONAL DE INVESTIGACIÓN DE LA EXPOSICIÓN

DETERMINACIÓN DE CONTAMINANTES ORGÁNICOS SELECCIONADOS EN BEBIDAS

1.1 Este es un método de espectrometría de masas en tándem/cromatografía líquida de inyección

Servicios de extractos químicos

sulfóxido de aldicarb 1646-87-3

Metilfosfonato de diisopropilo (DIMP) 1445-75-6

Fenamifos sulfona 31972-44-8

Sulfóxido de fenamifos 31972-43-7

2.RESUMEN DEL MÉTODO

3.3 DISOCIACIÓN ACTIVADA POR COLISIÓN (CAD) – El proceso de convertir la energía de

3.10 DUPLICADO DE MATRIZ DE MUESTRA FORTIFICADA DE LABORATORIO (LFSMD): un duplicado de la

3.12 NIVEL MÍNIMO DE INFORME DE CONCENTRACIÓN MÁS BAJA (LCMRL): el LCMRL de un

3.18 MUESTRA DE CONTROL DE CALIDAD (QCS) – Una solución de analitos de método de

6.5 BALANZA ANALÍTICA – Capaz de pesar con una precisión de 0,0001 g.

6.6 CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS (LC)/ESPECTRÓMETRO DE MASAS EN TÁNDEM (MS/

6.6.2 ESPECTRÓMETRO DE MASAS EN TÁNDEM: el instrumento MS/MS (Waters Micromass

7.1.3 FORMIATO DE AMONIO (NH4CHO2, CAS#: 540-69-2) – Alta pureza,

7.1.4 ACETATO DE AMONIO (NH4C2H3O2, CAS#: 631-61-8) – Alta pureza, se demostró

7.1.6 FASE MÓVIL DE FORMIATO DE AMONIO/AGUA REACTIVA 20 mM – Para preparar 1 L,

7.1.7 2 M ACETATO DE AMONIO/AGUA DE REACTIVO – Para preparar 100 mL, agregue

7.2.1.1 SOLUCIONES ESTÁNDAR STOCK IS (100-1000 µg/mL) – Estas soluciones estándar IS

Existencias Existencias ES PDS

metamidofos-d6 100 40 0.40

7.2.2.2 SOLUCIÓN ESTÁNDAR DE DILUCIÓN PRIMARIA DEL ANALITO METANÓLICO

Analito SSS Analito SSS analito final

7.2.2.3 SOLUCIÓN ESTÁNDAR DE DILUCIÓN PRIMARIA DE ANALITO ACUOSO (PDS DE AGUA)

analito analito 2 millones 32g/L Final

8.1 PREPARACIÓN DE LA BOTELLA DE MUESTRA

Compuesto Cantidad Objetivo

omadina de sodio 64 miligramos por litro antimicrobiano

Acetato de amonio 1,5g/L Se une al cloro libre

8.2 TOMA DE MUESTRAS

NOTA:Muestras que llegan al laboratorio el mismo día de la toma de muestra

9.2.2 DEMOSTRACIÓN INICIAL DE PRECISIÓN (IDP) – Preparar y analizar cuatro

9.2.3 DEMOSTRACIÓN INICIAL DE PRECISIÓN (IDA) – Utilizando el mismo conjunto de datos

9.2.4 CONFIRMACIÓN DEL NIVEL MÍNIMO DE NOTIFICACIÓN (MRL): establezca una

El límite superior de PIR debe ser ≤150 % de recuperación.

El límite inferior de PIR debe ser del 50 % de recuperación.

9.2.5 CONFIRMACIÓN DE CALIBRACIÓN – Analice un QCS como se describe en la Sección

9.2.6 DETERMINACIÓN DEL LÍMITE DE DETECCIÓN(opcional)–Si bien la determinación de DL no

Calcula elDLusando la siguiente ecuación

NOTA:No reste valores en blanco al realizar cálculos de DL. el DL

9.3 REQUISITOS DE QC EN CURSO: esta sección resume los criterios de QC en

9.3.5 MATRIZ DE MUESTRA FORTIFICADA DE LABORATORIO (LFSM): se requiere el análisis de una

9.3.5.5 Si la precisión de cualquier analito cae fuera del rango designado, y el

9.3.6 DUPLICADO DE CAMPO O DUPLICADO DE MATRIZ DE MUESTRA FORTIFICADA EN

9.3.6.1 Calcular la diferencia porcentual relativa (RPD) para mediciones duplicadas

9.3.6.3 Si se analiza un LFSMD en lugar de un FD, calcular el RPD para LFSM

9.4.3.1 Al implementar modificaciones de métodos, es responsabilidad del laboratorio

10.2 CALIBRACIÓN INICIAL

10.2.1 SINTONIZACIÓN ESI-MS/MS

10.2.1.1 Calibre la escala de masas del MS con los compuestos y procedimientos

10.2.1.2 Optimizar [M+H]+para cada analito del método infundiendo aproximadamente

NOTA:Durante el desarrollo del método, el flujo de LC se desvió a los desechos para el

10.3 VERIFICACIÓN DE CALIBRACIÓN CONTINUA (CCC): la verificación de calibración diaria mínima es la

10.3.3 Calcular la concentración de cada analito en el CCC. La cantidad calculada

11.1. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

11.2. ANÁLISIS DE MUESTRAS

12ANÁLISIS Y CÁLCULO DE DATOS