TÉCNICAS DE MARCAJE CELULAR

Son los denominados RADIOFÁRMACOS AUTÓLOGOS.

Los radiofármacos basados en muestras autólogas son los que
se preparan a partir de un componente biológico del propio
paciente al que se quiere realizar el estudio diagnóstico.
Ejemplos de radiofármacos autólogos son las células
sanguíneas (leucocitos, eritrocitos y plaquetas) y algunos
componentes del plasma (albúmina) marcados con diversos
radioisótopos.

La utilización de componentes sanguíneos marcados aporta

un método no invasivo que aprovecha los patrones de
biodistribución específico de cada población celular, para
llevar a cabo estudios cinéticos o de diagnóstico por la
imagen.
En la actualidad LOS MÁS
UTILIZADOS SON:

- QUELATOS DEL 111In.

(oxina, tropolona y MERC)

- 51Cr-CROMATO SÓDICO.

- 99mTc-HMPAO.
COMPOSICIÓN DE LA SANGRE
Como todo tejido, la sangre se compone de células y
componentes extracelulares (su matriz extracelular).

Estas dos fracciones tisulares vienen representadas por:

1.- LOS ELEMENTOS FORMES (también llamados

ELEMENTOS FIGURADOS).
Son elementos semisólidos (es decir, mitad líquidos y
mitad sólidos) y particulados (corpúsculos) representados
por células y componentes derivados de células.

2.- EL PLASMA SANGUÍNEO

Un fluido traslúcido y amarillento que representa la matriz
extracelular líquida en la que están suspendidos los
elementos formes.
Los elementos formes constituyen alrededor del 45% de la
sangre. Tal magnitud porcentual se conoce con el nombre de
HEMATOCRITO (fracción "celular"), la cual corresponde casi en
totalidad a la masa eritrocitaria.

El otro 55% está representado por el PLASMA SANGUÍNEO

(fracción acelular).
Los elementos formes de la sangre son variados en tamaño,
estructura y función, y se agrupan en:

A.- LAS CÉLULAS SANGUÍNEAS

Son los GLÓBULOS BLANCOS O LEUCOCITOS, células que
"están de paso" por la sangre para cumplir su función en
otros tejidos.

B.- LOS DERIVADOS CELULARES

No son células estrictamente sino fragmentos celulares; están
representados por los ERITROCITOS Y LAS PLAQUETAS.
Son los únicos componentes sanguíneos que cumplen sus
funciones estrictamente dentro del espacio vascular.
REQUISITOS PARA EL MARCAJE CELULAR DE
UN RADIOFÁRMACO
Existen unos requisitos necesarios para que un determinado
radiofármaco y procedimiento de marcaje puedan aplicarse con
éxito en marcajes celulares.

Éstos son:
- La energía de emisión y el período de semidesintegración del
radionúclido (T1/2), deben adaptarse al tipo de estudio (imagen,
estudio cinético, etc.).
- El radiofármaco deberá permanecer unido a las células
durante el tiempo necesario para completar el estudio, sin que
la incorporación del radiofármaco y el procedimiento de marcaje
supongan la alteración en las propiedades de aquellas.
Es decir, no alterar ni la funcion ni la viabilidad celular.
 - Para realizar satisfactoriamente un marcaje es esencial que
el comportamiento de las células marcadas no se vea alterado
con respecto al de las no marcadas.
- Además, como la detección del isótopo es la forma de
realizar el seguimiento del destino de las células marcadas, una
vez hayan sido reinyectadas el radionúclido debería quedar
unido a las células durante toda la investigación clínica, sin que
sea reutilizable o metabolizable en el caso de abandonar la
célula.
- Elevada especificidad para las células de interés.
- Alta estabilidad de marcaje
Como los radionúclidos disponibles no presentan ningún tipo de
selectividad celular, para marcar un tipo celular determinado
hace falta separarlo previamente y proceder posteriormente al
marcaje.
Tenemos dos fases:
1.- SEPARACIÓN CELULAR.
2.- EL MARCAJE PROPIAMENTE DICHO.
 SEPARACIÓN CELULAR
Esta encaminada a obtener una fracción celular lo más pura
posible (CONCENTRADO CELULAR o BOTÓN CELULAR), sin
contaminación con otros tipos celulares.

La separación puede realizarse:

- Sedimentación espontánea.
- Sedimentación por agentes químicos.
- Centrifugación, centrifugación fraccionada, etc…

Una vez separadas las células éstas debe ser resuspendidas e

incubadas con una cantidad adecuada del radionúclido
marcador.
 SEDIMENTACIÓN

Se trata de una operación de separación sólido-fluido en la

que las partículas sólidas de una suspensión, más densas que
el fluido, se separan de éste por la acción de la gravedad.

En algunos casos, como cuando existen fuerzas de interacción

entre las partículas y éstas son suficientemente pequeñas
(suspensiones de tipo coloidal), la sedimentación natural no es
posible, debiendo antes proceder a la floculación o coagulación
de las partículas (sedimentación por agentes químicos).
 CENTRIFUGACIÓN
La centrifugación es una técnica de sedimentación acelerada
gracias al uso de fuerza centrífuga.
Se usa para ayudar a la sedimentación cuando ésta es lenta.
Se aplica al análisis o a la separación de mezclas de partículas,
células, orgánulos o moléculas.
 TIPOS DE MARCAJE
Hay dos tipos marcaje:
1.- MARCAJE CELULAR IN VIVO. Es menos frecuente.
2.- MARCAJE CELULAR IN VITRO

Incluso, existiría el marcaje IN VIVITRO (o vivtro).

Las células se marcan generalmente IN VITRO, utilizando
para ello poblaciones celulares del paciente aisladas a partir
de una muestra de sangre (en ocasiones se usan células de
un donante).
Una vez finalizado el marcaje y efectuado el control de calidad
son reinyectadas, y la biodistribución esperada es función del
tipo de célula y de la patología del paciente.
MARCAJE CELULAR IN VITRO

Marcaje a partir de un concentrado celular.

Proporciona mayor esterilidad, funcionalidad, viabilidad y pureza.
(El concentrado celular se obtiene mediante centrifugación y
sedimentación).

Cualquier marcaje de componentes sanguíneos realizado in

vitro requiere de unas CONDICIONES DE TRABAJO ASÉPTICAS
(es necesario utilizar una cabina de flujo laminar estéril u otro
tipo de cabinas diseñado a tal efecto).
Además, el personal que realice los marcajes debe estar bien
adiestrado en el trabajo con material radiactivo y en condiciones
asépticas.
Durante el procedimiento de marcaje es necesario manipular
componentes sanguíneos del paciente que podrían estar
infectados con agentes patógenos.
Para evitar la contaminación del operador que está realizando el
marcaje, éste debe:
- Usar guantes impermeables durante todo el proceso.
- Debe tener especial cuidado al manipular agujas.
- Realizar el marcaje celular en una cabina de flujo laminar,
instalada de acuerdo con las normas locales.
Dado que las células marcadas tienen que ser reinyectadas al
paciente, se requieren estrictas condiciones asépticas para el
procedimiento de marcaje.
Para ello se deben utilizar únicamente reactivos estériles, material
plástico desechable, guantes estériles, gorro y mascarilla.
SALA DE MARCAJE
Dependencia en la que se efectúa el marcaje celular.
Las condiciones de esterilidad ambiental impuestas por la
manipulación de células que se reinyectarán, exige trabajar
con cámaras de flujo laminar que garanticen la ausencia de
elementos patógenos.
Los equipos utilizados en la preparación de estos radiofármacos
(cabinas de flujo laminar, centrífugas, etc.) deben estar
desinfectados antes de su utilización.
Se pueden desinfectar con:
- Una solución de hipoclorito/detergente que contenga 0,4%
de cloro activo.
- Con isopropanol.

Además deben tomarse todas las PRECAUCIONES necesarias para la

ADECUADA PROTECCIÓN:
- De los componentes sanguíneos respecto al ambiente.
- Del operador respecto a la radiactividad.
- Del posible material infeccioso de la muestra sanguínea.
El marcaje celular simultáneo de múltiples pacientes no se
recomienda, con el fin de prevenir una posible CONTAMINACIÓN
CRUZADA.
Los marcajes celulares de diferentes pacientes deben llevarse a
cabo en lugares separados físicamente, a menos que se utilicen
dispositivos cerrados.

En todo momento se debe garantizar la correcta identificación de

los productos de la sangre del paciente.
Todas las jeringas, tubos y cualquier material en contacto con los
componentes de la sangre del paciente deben estar claramente
etiquetados con el nombre del paciente, con código de barras.
 CONTROL DE CALIDAD
El control de calidad realizado sobre los componentes sanguíneos
marcados incluye:
- COMPROBACIÓN DE LA VIABILIDAD CELULAR.
- TRÁFICO DE CÉLULAS IN VIVO.
- EFICIENCIA DE MARCAJE.

La EFICACIA DE MARCAJE (EM) es el parámetro más utilizado.

Expresa el porcentaje de actividad ligada a las células con
relación a la actividad total empleada para el marcaje.
 NORMATIVA LEGAL
- EL GRUPO NACIONAL DE RADIOFÁRMACOS DE LA REAL
FARMACOPEA ESPAÑOLA estableció GUÍAS SOBRE LOS
“PROCEDIMIENTOS GENERALES DE RADIOFÁRMACOS”, para
que puedan servir de punto de referencia, respecto de las
normas de correcta preparación de radiofármacos.

- EL COMITÉ INTERNACIONAL PARA LA ESTANDARIZACIÓN EN

HEMATOLOGÍA (ICSH) publica las recomendaciones con relación
a la ESTANDARIZACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS DE MARCAJE
CELULAR.
- LA SOCIEDAD INTERNACIONAL DE ELEMENTOS SANGUÍNEOS
RADIOMARCADOS (ISORBE), tiene el objetivo principal de
promocionar un foro de intercambio de experiencia en los
estudios clínicos y experimentales sobre radiomarcaje de
elementos sanguíneos.