DEPARTAMENTO DE PATOLOGÍA.

FACULTAD DE MEDICINA.
UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

• DR. MIGUEL ÁNGEL CASTANEDA DIAZ.

• MEDICO PATÓLOGO
 ESTUDIO HISTOLÓGICO
TRANSOPERATORIO. MICROSCOPÍA
CITOLOGÍA AUTOPSIA
(BIOPSIA POR ELECTRÓNICA.
CONGELACIÓN).

INMUNOHISTOQUÍMICA E
HIBRIDACIÓN IN SITU. PCR. CITOMETRÍA DE FLUJO.
INMUNOFLUORESCENCIA.
La biopsia de congelación se realiza en el contexto de una intervención
quirúrgica o peri-operatoria, (durante el acto operatorio).
La única indicación es para que el cirujano tratante pueda elegir entre dos
o más opciones quirúrgicas, dependiendo de cual sea el informe anátomo-
patológico intraoperatorio.
En la mayoría de los casos, al cirujano le basta que el patólogo establezca si
se trata de una lesión benigna o de un cáncer.

DIAGNÓSTICO RÁPIDO de 20-15 min.

En términos generales, el diagnóstico de
malignidad no presenta mayores problemas
para un patólogo con experiencia.
Sin embargo, en un bajo porcentaje de casos,
la decisión debe postergarse uno o dos días,
hasta que se hayan examinado más muestras
procesadas con la técnica por parafina, ya que
los cortes congelados pueden dar artefacto al
momento de estudiarlos.
Otros objetivos de la biopsia por congelación son:

Determinar la presencia de lesión en los bordes de

resección quirúrgica

Determinar la presencia de cancer en una estructura

que apoyarìa estadiaje.

—omo parte de la tecnica para inmunofluorescencia o

C
histoquimica enzimatica.
Define límites, presencia
de neoplasia, definir No se usa para
malignidad o diagnóstico definitivo.
benignidad.

Usos para tecnica de No se debe enviar para

inmunofluorescencia o satisfacer una
histoquimica enzimatica curiosidad, jugar a
( musculo estriado y engañar al patologo o
nervios ) por impericia
CRIOSTATO (criotomo) Del griego: κρυος
(kruos: frio)
 FORMA DEL REPORTE

a) Macroscópico

b) Microscópico: generalmente se
omite

c) Diagnostico anatomopatologico

d) Hacer diagnostico si está fácil

e) Diferir el diagnostico a parafina

f) No dar un diagnostico pero

afirmar o negar malignidad
 Definición: Es la ciencia derivada de la biologia
que se dedica al estudio de la celula.
 Cito: celúla Logos: estudio

Objeto de la citología:

Diagnóstico precoz del cáncer ginecológico (screening).

Diagnóstico de benignos o malignos, junto con la biopsia.

Recuentos celulares y esterilidad.

 1. Citología exfoliativa:
a. Ginecológica: cérvico-vaginal y endometrial.
b. Boca y tracto digestivo.
c. Tracto respiratorio: esputo y cepillados o aspirados
bronquiales.
d. Líquidos: orina, derrames (ascítico, pleural, pericárdico,
articular), líquido cefalorraquídeo, ampollas cutáneas, etc.
e. Semen (estudios de esterilidad).
f. Test de Tzanck

 2. Citología por punción-aspiración con aguja fina (PAAF),

tanto de lesiones cutáneas y de los tejidos blandos
superficiales, como de los órganos profundos.
 TÉCNICAS DE ESTUDIO UTILIZADAS
• Macroscópicas (Macropatología).
• Microscópicas, con el microscopio óptico
(Citopatología).
• Generales o convencionales.
• Citoquímica.
• Inmunocitoquímicas.
• Morfométricas (Morfometría Estática).
• Ultramicroscópicas, con el Microscopio
Electrónico.
• Moleculares (Patología Molecular). TIEMPO DE RESPUESTA:
• Otras: Citometría de Flujo, etc. Citología urgente: recuentos celulares, diagnóstico
60 minutos.
Citología normal: diagnóstico en 24-48 horas.
 INDICACIONES.

 Lesiones superficiales de fácil abordaje

 En el estudio de patología mamaria,
patología tiroidea y patología ginecológica
(citología cervico-vaginal), ganglio linfático
 Estudio de lesiones virales con formación de
vesículas (virus herpes)
 Lesiones de la lengua y cavidad oral
 Indice de maduración vaginal
VENTAJAS DE LA TECNICA
• Respuesta es rápida.
• Facilita la terapéutica cuando se
diagnostican microorganismos.
• Fácil abordaje.
• Se pueden estudiar poblaciones
fácilmente, para luego hacer
estudios mas de cerca a los
positivos.
LIMITANTES DE LA TECNICA
 No es diagnostica, es un
tamizaje.
 La negatividad no excluye la
malignidad.
 La positividad acelera mas la
necesidad de hacer biopsia.
 El microscopio electrónico (EM) fue desarrollado por primera vez en 1930 en Alemania, desde
entonces ha sido objeto de modificaciones a fin de añadir extenso nuevo conocimiento para
nuestra comprensión de la estructura y función de las células normales y anormales a nivel de
los orgánulos celulares.

 Áreas de diagnóstico en patología:

1. En la patología renal en combinación con

2. Ultraestructura de los tumores de
microscopía de luz e inmunofluorescencia.
histogénesis incierta.

3. Estudio subcelular de los macrófagos en

4. Para fines de investigación.
las enfermedades de almacenamiento.
PRIMER MICROSCOPIO ELECTRONICO SE ATRIBUYE A ERNST RUSKA (ALEMAN) Y SUS
COLABORADORES EL CUAL FUE CONSTRUIDO ENTRE 1931 Y 1934

Esta técnica juega un papel muy importante en el estudio de las enfermedades del
riñón, en particular en glomerulopatías primarias y secundarias.

Junto con la inmunofluorescencia directa representan el estudio básico para llegar a

un diagnóstico preciso en cada caso.

Otras aplicaciones son la identificación de partículas virales intranucleares y

citoplasmáticas.

También en enfermedades metabólicas para estudiar el tipo de inclusiones o cuerpos

de inclusión en las células afectadas (Niemann-Pick, Tay-Sachs, amiloide, etcétera).
FIJACIÓN

• Piezas delgadas de tejido de no más de 1 mm de espesor deben fijarse en glutaraldehído tamponado al 2-4% o en mezcla de
formalina y glutaraldehído.

• Posteriormente debe de fijarse en solución tamponada de tetróxido de osmio para aumentar el contraste.

INCLUSIÓN
• Con resina en una rejilla

SECCIONES SEMIFINAS
• Las secciones semifinas se cortan en un espesor de 1 micra y se tiñen con azul de metileno o azul de toluidina.

CORTES ULTRAFINOS
• Para el examen ultraestructural, los cortes ultrafinos se cortan con un bisturí de diamante.

• Con el fin de aumentar la densidad de los electrones, las secciones delgadas se pueden teñir haciendo inmersión de la rejilla en
una solución de citrato de plomo y urinyl acetato.
 Tipos de microscopia electrónica

 MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISIÓN

 En esta técnica la preparación teñida es traspasada por un haz de
electrones, lo cual proporciona la imagen ultrafina sobre una
pantalla ad hoc.
 El microscopio electrónico de transmisión es capaz de generar un
haz de electrones a alta tensión (80kV) y concentrarlo sobre la
preparación mediante un complejo sistema de campos
electromagnéticos equivalentes a las "lentes" del microscopio de luz.
 La mayor utilidad de la microscopía electrónica de transmisión es en
Oncología
 Tipos de microscopia electrónica

 MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO:

 La microscopía electrónica de barrido permite el estudio de superficies celulares.
 La imagen se obtiene rastreando la superficie de la muestra con un haz
electrónico ultrafino.
 Las señales generadas se recolectan, amplifican y captan en un tubo de rayos
catódicos.
 Se utiliza en forma rutinaria en el estudio de enfermedades del tallo piloso.
 En estas condiciones hay anomalías estructurales y de superficie de los pelos, que
pueden identificarse fácilmente con esta técnica.
 De esta forma, es posible incluso establecer un pronóstico de reversibilidad de las
alteraciones utilizando esta técnica.
Las limitaciones de la microscopía electrónica se puede resumir de la siguiente forma:

Dificultades en el muestreo, ya que sólo una pequeña proporción de

la neoplasia o del tejido a procesar, puede ser estudiado.

La escasez de características ultraestructurales verdaderamente

específicos, ya que el número de orgánulos u otras estructuras que son
exclusivos de un tipo de célula o tejido es muy pequeña.

Posible interpretación errónea de elementos no neoplásicas como

pertenecientes al tumor. Ciertamente, esta posibilidad existe con
cualquier técnica, pero es particularmente notable con microscopía
electrónica debido a las dificultades en la evaluación de las relaciones
espaciales en una pequeña muestra de tejido.
La inmunohistoquímica (IHQ), o
inmunocitoquímica, es un
método para localizar antígenos
específicos en tejidos o células
basados en el reconocimiento
antígeno-anticuerpo.
ANTICUERPOS COMO REACTIVOS ESPECÍFICOS DE TEJIDO

Un anticuerpo es una molécula que tiene la

propiedad de combinarse específicamente con
una segunda molécula, denominada antígeno.
 ANTÍGENO

ES CUALQUIER SUSTANCIA QUE ES CAPAZ DE INDUCIR LA

FORMACIÓN DE ANTICUERPOS CUANDO SE INTRODUCE EN UN
ORGANISMO.

REACCIONANDO ESPECIFICAMENTE CON LOS ANTICUERPOS QUE

SON FORMADOS.
 ANTICUERPO

ES UNA PROTEÍNA DEL SUERO O INMUNOGLOBULINA QUE SE

FORMA EN RESPUESTA A LA INVASIÓN DE UNA SUSTANCIA
AJENA AL CUERPO Y AL UNIRSE A ESTA LE CONFIERE
PROTECCIÓN AL ORGANISMO.
Partes de un anticuerpo
Fracción
Cadena constante
pesada

Fracción
variable

KAPPA

{
Cadena
ligera
0
LAMBDA
 Desde que fue concebida la técnica por COONS (1942) se ha avanzado mucho en la
obtención de los anticuerpos.
 KOHLER Y MILLSTEIN (1975) idearon una técnica para obtener anticuerpos monoclonales
fusionaron las células de un mieloma murino y los linfocitos del bazo de un ratón
inmunizado con hematíes de carnero, cultivo resultante formaron hibridomas capaces de
producir inmunoglobulinas que reconocen a los antígenos empleados en la inmunización.
 POLICLONALES: mezcla anticuerpos contra diferentes antígenos de una misma proteína.
 MONOCLONALES: cuando mezcla anticuerpos contra un único antígeno de una proteína
 VENTAJAS DE LA MONOCLONALIDAD
 Los anticuerpos obtenidos son homogéneos
 No se requiere de antígenos purificados para las inmunizaciones, a pesar de ello se
obtienen antìgenos de gran pureza.
 Los cultivos permanentes pueden proporcionar el anticuerpo de manera ilimitada
• El principio está basado en la presencia de sustancias
antigénicas que se albergan tanto en la membrana
citoplasmática, el citoplasma , como en el núcleo
celular.
• Básicamente es una reacción de tipo AG-AC , en donde
conocemos nosotros el AC que vamos a utilizar y
queremos detectar el AG con una molécula marcadora
que puede ser:
• FLUOROCROMO
• ENZIMA
• METAL PESADO
• ISOTOPO RADIOACTIVO
Aplicaciones generales
• Clasificacion de neoplasias: linfoides/hematologicas
• Identificación de origen primario desconocido
• Identificación de sobre-expresion de
proteinas asociadas a translocaciones
• Identificación de blancos terapeuticos
• Infecciones.
• Caracterización de sustancias extracelulares.
Tipos de proteinas que se pueden detectar ?

• Proteinas estructurales
• Citoesqueleto (CK, GFAP)
• Uniones intercelulares (E-cadherina, B-catenina)
• Proteinas asociadas a vesiculas secretoras
• Cromogranina A, sinaptofisina, CD68

• Receptores
• HER2, EGFR1, RE, RP,

• Factores de transcripcion /ciclo celular

• P53, Ki67, TTF1, PAX5, Miogenina
MARCACION NUCLEAR
MARCACION MEMBRANA
E-Cadherina Distrofina

CD30

Membrana y Golgi
MARCACION CITOPLASMICA
La técnica de inmunofluorescencia se emplea para localizar moléculas de antígeno en las células por el examen
microscópico.

Esto se hace mediante el uso de anticuerpos específicos contra la molécula antigénica formando así un complejo
antígeno-anticuerpo en el sitio antigénico específico que se hace visible mediante el empleo de un fluorocromo
que tiene la propiedad de absorber la radiación en la forma de luz ultravioleta de manera que sea visible dentro
del espectro de la luz en el examen microscópico.
 1- MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

• Se basa en el principio de que la radiación de excitación de la luz ultravioleta de longitud de onda más corta (360 nm) o
COMPONENTES ESENCIALES

la de la luz azul (Longitud de onda 400 nm) provoca la fluorescencia de ciertas sustancias y posteriormente re-emite luz
de una longitud de onda más larga.

• FLUORESCENCIA PRIMARIA: vitamina A, porfirina, clorofila.

• FLUORESCENCIA SECUNDARIA: Es la producción de fluorescencia tras la adición de colorantes o productos químicos

denominados fluorocromos.

2- FUENTE DE LUZ
• Lámparas de vapor de mercurio y gas xenón

3- FILTROS
• Filtro de absorción de calor, filtro de stop de luz roja, filtro excitador
• La luz excitadora es removida por otro filtro llamado filtro de barrera el cual se encuentra entre el objetivo y el
observador.

4- CONDENSADOR
• Se utiliza un condensador de campo oscuro de manera que la luz no cae directamente en el objeto y en cambio da fondo
oscuro que hace contraste con la fluorescencia.
 TÉCNICAS DE FLUORESCENCIA

DIRECTA

• Introducido por primera vez por Coons (1941)

INDIRECTA

• Técnica indirecta se aplica para detectar

autoanticuerpos en el suero del paciente.
 APLICACIONES DE LA INMUNOFLUORESCENCIA

Detección de autoanticuerpos en el suero.

En enfermedades renales para la detección de depósitos de inmunoglobulinas,

complemento y fibrina.

En enfermedades de la piel para detectar depósitos de inmunoglobulina.

Para el diagnóstico específico de los trastornos infecciosos, por ejemplo, virus de la

hepatitis.
Fig. 22.--Depósito de IgG intercelular en pénfigo vulgar.
APLICACIONES 1. En neoplasias: hematológicas y no hematológicas

2. En enfermedades infecciosas: agentes causales, estudios

epidemiológicos e identificación de nuevos agentes infecciosos.

3. En enfermedades genéticas heredadas: Prueba de portador,

diagnóstico prenatal y diagnóstico directo de la enfermedad genética.

4. Determinación de identidad: trasplante de tejidos, patología

forense y test de parentezcos.
Permite la detección y localización de secuencias
de ácidos nucleicos en estructuras biológicas
morfológicamente conservadas.
APLICACIONES
1. Infecciones virales (HPV, EBV, HIV,
CMV)

2. En tumores humanos (detección de

la expresión de genes y oncogenes).

3. Desordenes cromosómicos
La PCR constituye un sencillo método para la clonación in vitro
de cualquier segmento de DNA, sin necesidad de recurrir a la
metodología convencional.
Amplificación de DNA para
clonación o análisis TRASTORNOS HEREDITARIOS

• Investigaciones criminales
ENFERMEDADES GENETICAS ADQUIRIDAS
• Investigación fósil (CANCER, AUTOINMUNIDAD)
• Secuenciación de ADN
MEDICINA FORENSE Y LEGAL
Pruebas para la presencia de
secuencias de DNA
específicas DETECCION DE PATOGENOS INFECCIOSOS

ENFERMEDADES MONOGÉNICAS
Comparación de moléculas de
DNA
La técnica de citometría de flujo consiste en la medición de diversos
parámetros, mientras que una suspensión de células fluye a través de un
haz de luz detectores estacionarios últimos.

El instrumento se enfoca hidrodinámicamente una suspensión de células

en una cámara de muestra y pasa a las células individuales a través de
una fuente de luz, generalmente un láser.

La luz dispersada en varios ángulos por las células es registrado por los
detectores y se convierte en señales electrónicas, que luego son
digitalizados, almacenados y analizados por el ordenador para producir
un histograma . Esta técnica permite el análisis de 5000-10000 células
por segundo.
En función de su contenido de ADN, los tumores se dividen en
diploides y aneuploides.

La citometría de flujo puede ser utilizado para analizar la ploidía del

ADN.
El índice de ADN (DI) es la relación del contenido de ADN del pico
aneuploide para el contenido de ADN del pico diploide. Tumores
tetraploides son un subconjunto de tumores aneuploides en los que el
DI es 1.9-2.1.
La fracción hiperdiploide es el porcentaje de células por encima del
límite superior de la población diploide y constituye una medida de la
fase S o fracción de proliferación de una población de células.
La principal limitación de la citometría de flujo es que las
células necesitan estar en una única suspensión de células
con el fin de ser analizado.

Este requisito se consigue fácilmente en sangre y otros

fluidos

De hecho, el análisis de citometría de flujo de las leucemias

y linfomas se ha convertido en rutina
Para ser justos, es preciso señalar que el papel
de la citometría de flujo en el diagnóstico
inicial de los tumores es bastante limitado.

Su función principal parece ser como un

indicador pronóstico, ya que la vasta literatura
sobre el tema indica.
 Las finalidades de la autopsia clínica son, entre otras, las siguientes:

Determina o corrobora la naturaleza de la enfermedad, así como su extensión.

Investiga la causa principal o básica de muerte y aquellos procesos contribuyentes.

Estudia los procesos secundarios o asociados y los accesorios.

Correlaciona signos y síntomas clínicos de la enfermedad con los hallazgos morfológicos

terminales.
Comprueba los resultados de la terapéutica médica o quirúrgica.

Investiga, en su caso, aquellas enfermedades contagiosas, hereditarias o transmisibles.

 Las indicaciones de la autopsia clínica son:

2. Todas las muertes en las

1. Muertes en las que la
autopsia pueda ayudar a
explicar las complicaciones
médicas existentes.
4. Muertes no esperadas o
que la causa de muerte o el 3. Casos en los que la
inexplicables tras
diagnóstico principal autopsia pueda aportar a la
procedimientos diagnósticos
(padecimiento fundamental) familia o al público en
o terapéuticos, médicos o
no sea conocido con general datos importantes.
quirúrgicos.
razonable seguridad.

6. Muertes aparentemente
5. Muertes de pacientes que 7. Muertes por infecciones
naturales no esperadas o 8. Todas las muertes
han participado en de alto riesgo y
inexplicables, no sujetas a obstétricas.
protocolos hospitalarios. enfermedades contagiosas.
la jurisdicción forense.

12. Muertes ocurridas en las

11. Muertes de donantes de
primeras 24 horas del
10. Muertes por órganos en los que se
9. Todas las muertes ingreso en el hospital y/o en
enfermedad ambiental u sospeche alguna
perinatales y pediátricas. aquellas que pudieran estar
ocupacional. enfermedad que pueda
influidas por su estancia
repercutir en el receptor.
hospitalaria.
 Autopsias clínicas: Son las
autopsias de pacientes que fallecen
por causas naturales o por una
enfermedad. La autopsia confirma o,
en su caso, determina el
padecimiento fundamental, las
alteraciones secundarias al mismo y
aquellas otras derivadas del
tratamiento, describe los hallazgos
accesorios asintomáticos, silentes
clínicamente, e investiga la causa de
muerte. Este tipo de autopsias las
realiza un médico anatomopatólogo
 Autopsias judiciales o médico-legales:
las sometidas a un proceso judicial. El
principal objetivo de la autopsia judicial
es establecer la causa de muerte, muchas
veces en circunstancias violentas, extrañas
o poco claras, sospechosas de
criminalidad.
 Este tipo de autopsias las realiza un
médico forense, y el patólogo, a instancias
de aquél, puede erigirse en consultor. Este
tipo de informes o estudios forman parte,
pues, de los denominados genéricamente
“interconsultas”.
Técnica de Letulle: Consiste en la apertura
oval del tórax permitiendo observar
claramente las vísceras.

Técnica de Mata: Consiste en la apertura

desde la apofisis mastoide hasta la clavícula
unidas por un corte supraesternal. Por otro
lado se realiza la apertura desde la cavidad
torácica hasta la fosa ilíaca anterosuperior.

TIEMPOS DE RESPUESTA MEDIO

Informe provisional: 48 horas.
Informe final: 1 mes.
Técnica de Virchow: Consiste en la
apertura del cadaver desde el mentón
hasta los genitales bordeando el
ombligo por la parte izquierda.

Técnica en T: Consiste en realizar una

incision biacromial por la parte
superior del esternón y una segunda
incisión medial a la anterior.
Método de Virchow : Se basa en
la extracción de órganos de
forma individual lo cual requiere
elevados conocimientos
anatómicos.
Método de Rokitansky : Se basa
en la extracción de órganos en
bloque lo cual requiere un
examen previo in situ.
 Debe de incluir portada, descripción
macroscópica, exámenes de laboratorio
postmorten, descripción microscópica
con interpretación de tinciones de
histoquímica e inmunohistoquímica
requeridas si el caso aplica, y por ultimo
un listado de diagnósticos
anatomopatologicos.
Patología. Ciencias Básicas de Medicina
Andrade Rafael, et al.
1ª. Edición.
Corporación para Investigaciones Biológicas

Patologia quirúrgica Rosai and Ackerman's

Juan Rosai. 11th. Edicion, Mosby.