MICROBIOLOGIA.

UNIDAD I TEMA 2 2023 1

BIOSEGURIDAD Y ESTERILIZACION
INHIBICION DEL CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS

DEFINICIONES Y CONCEPTOS

Esterilización: eliminación de toda forma de vida, incluídas las esporas.

Desinfección: proceso de destruir los agentes infecciosos NO incluídas las esporas..

Asepsia: técnicas empleadas para impedir el acceso de microorganismos al campo de trabajo.

Antimicrobianos: sustancias que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos

(antibacterianos, antifúngicos, etc.).

Antibióticos: sustancias producidas por un ser vivo que se oponen a la vida de otro ser vivo.

ESTERILIZACION: La OMS define la esterilización como la técnica de saneamiento cuya finalidad es la

destrucción de toda forma de vida, aniquilando todos los microorganismos, tanto patógenos como no
patógenos, incluidas sus formas esporuladas, altamente resistentes. La esterilización supone el nivel más
alto de seguridad (y por lo tanto de letalidad, o eficacia biocida ) en la destrucción de microorganismos o de
sus formas de resistencia.

Estos microbios se eliminan, inhiben o matan por medio de agentes físicos o agentes químicos, otros
incluyen los agentes mecánicos.

La resistencia de los microorganismos presenta diferentes grados y está relacionada con su estructura,con
su capacidad de producir esporas, o con la presencia de ciertos componentes en su pared celular(lípidos,
proteínas) o de su grosor.

Otros factores que influyen en la mayor o menor resistencia frente a los medios de esterilización son los
siguientes:

❖ La carga bacteriana total

❖ La presencia de materia orgánica
❖ La presencia de sales minerales
❖ El pH
❖ Temperatura (https://www.mheducation.es/bcv/guide/capitulo/8448164180.pdf)

Cuando una carga microbiana se expone a un método de esterilización, la velocidad en la que se produce
su muerte es proporcional a la aplicación de ese método durante un tiempo determinado. En función de esto,
experimentalmente se determinan las curvas de muerte de los microorganismos que permiten evaluar los
métodos de esterilización.

Este estudio incluye 2 parámetros: VALOR Z Y VALOR D

Valor Z: Temperatura requerida para reducir el 90% de los microorganismos sobre un objeto determinado
en un tiempo concreto.
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Valor D: Tiempo de reducción decimal de una carga de microorganismos. Puede definirse también como el
tiempo necesario para destruir el 90% de los microorganismos sobre un objeto determinado en una
temperatura concreta.

El medio de esterilización ideal sería aquel que pudiera reunir las siguientes características:

✓ Máximo poder de destrucción

✓ Seguro, sencillo y fácil de manejar
✓ Inofensivo para la salud.
✓ Compatibilidad con las características del material.
✓ Capacidad de monitorizar o controlar.
✓ Gran poder de penetración en el interior de los paquetes o instrumentales.
✓ Rápida actividad en poco tiempo.
✓ Bajo coste y alto rendimiento.
✓ Valido para esterilizar cualquier tipo de material.

La esterilización implica el uso de agentes que básicamente se dividen en físicos, químicos y mecánicos.

A continuación, abordaremos como primer punto los agentes esterilizantes físicos.

AGENTES ESTERILIZANTES FISICOS

Los agentes físicos que consiguen la esterilización de materiales son el calor , las radiaciones y la Filtración

1.-ALTAS 2.-BAJAS
3.-RADIACIONES
TEMPERATURAS TEMPERATURAS

CALOR HÚMEDO
Radiaciones
•Ebullición Ionizantes
•Tindalización
•Pasteurización
•Vaporización (Autoclave)
Rayos Gamma

CALOR SECO
•Flameado e Incineración
Rayos X
•Horno Pasteur
(Aire caliente)

Rayos
Ultravioleta

1.- Altas Temperaturas

La alta temperatura combinada con un alto grado de humedad es uno de los métodos más efectivos para
destruir microorganismos. La utilización del calor y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de
exposición y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acción del
calor. Hay que distinguir entre calor húmedo y calor seco. El calor húmedo mata los microorganismos porque
coagula sus proteínas siendo más rápido y efectivo que el calor seco que los destruye al oxidar sus
constituyentes químicos.
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¿Cómo podemos caracterizar o medir en la práctica la inactivación por calor de una suspensión bacteriana?
He aquí algunos parámetros utilizados:

tiempo térmico mortal: es el tiempo mínimo requerido para que mueran todas las bacterias de una
determinada suspensión a una determinada temperatura;

tiempo de reducción decimal: es el tiempo requerido para reducir al 10% la densidad de la suspensión, a
una determinada temperatura (también llamado valor D);

punto térmico mortal: es la temperatura mínima que mata a todas las bacterias en un tiempo determinado
(normalmente el tiempo de referencia empleado es de 10 min).

La inactivación (total o parcial) por calor se debe a la desnaturalización de proteínas y a la fusión de lípidos
de membrana, debido a que se rompen muchos enlaces débiles, sobre todo los puentes de hidrógeno entre
grupos -C=O y H2-N-. Estos enlaces se rompen más fácilmente por calor húmedo (en atmósfera saturada
de vapor de agua), debido a que las moléculas de agua pueden desplazar a los puentes de hidrógeno.

a. Esterilización por calor húmedo

Los materiales húmedos conducen mejor el calor que los secos : el agua tiene mayor coeficiente de
transferencia de calor que el aire. Por eso el vapor de agua es más eficaz que el calor seco matando a los
microorganismos

Autoclave: La esterilización en autoclave es el método de calor húmedo más efectivo y el más

universalmente utilizado para el control de los microorganismos. El calor en la forma de vapor a saturación
y a presión es el agente más práctico para esterilizar ya que el vapor a presión proporciona temperaturas
superiores a las que se obtienen por ebullición. Los autoclaves de laboratorio se emplean generalmente a
una presión de vapor de una atmósfera por encima de la presión atmosférica lo cual corresponde a una
temperatura de 121° C.

Elimina microorganismos por la desnaturalización de sus proteínas. Para ello intervienen: Presión, Vacío,
Humedad, Vapor Saturado y Temperatura.

Etapas de la Esterilización:

Elevación de temperatura
Exposición o Esterilización

Tindalización: Se utiliza cuando las sustancias químicas no pueden calentarse por encima de 100° C sin
que resulten dañadas. Consiste en el calentamiento del material de 80 a 100° C hasta 1 hora durante 3 días
con sucesivos períodos de incubación. Las esporas resistentes germinarán durante los períodos de
incubación y en la siguiente exposición al calor las células vegetativas son destruidas.

Pasteurización: La leche, nata y ciertas bebidas alcohólicas (cerveza y vino) se someten a tratamientos de
calor controlado que sólo matan a ciertos tipos de microorganismos pero no a todos.
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Tras la pasteurización, el número de bacterias viables desciende un 97-99%. Los potenciales patógenos que
pueda llevar la leche (Brucella, Salmonella, bacilo tuberculoso, Streptococcus, etc) son eliminados
fácilmente. La pasteurización también se emplea para la preparación de vacunas a base de microorganismos
inactivados por el calor.

b. Esterilización por calor seco

(Se utiliza para materiales sólidos estables al calor) la esterilización por calor seco necesita recurrir
a mayores temperaturas que la efectuada por el calor húmedo, ya que al no existir agua, la rotura de
puentes de hidrógeno y la desnaturalización de proteínas, así como la fusión de membranas, se
efectúan a mayores energías. Otros efectos del calor seco son los daños por oxidación y el provocar
un aumento de la concentración de electrolitos.

Horno Pasteur: El calor seco se utiliza principalmente para esterilizar material de vidrio y otros
materiales sólidos estables al calor. Para el material de vidrio de laboratorio se consideran suficientes dos
horas de exposición a 160° C.

Flameado e incineración .-Esta técnica tiene por objeto pasar el material por la llama del mechero
Bunsen hasta lograr su incandescencia. Se acostumbra utilizar en laboratorios de microbiología para
esterilizar asas de siembra , tubos de vidrio o pipetas, mediante la aplicación directa de la llama.

2.- Bajas Temperaturas

El frío forma parte de los agentes físicos que elimina o inhibe el desarrollo de los microorganismos. A
temperatura de congelación (0 °C), su mecanismo de acción se encuentra basado en la formación de
cristales al interior de las células vivas, lo cual provoca un aumento considerable de volumen y una posterior
lisis celular.

Actualmente, el frio es la base de métodos de preservación de microorganismos como la desecación por

congelamiento o liofilización.

3.- Radiaciones

Se puede definir la radiación como la propagación de energía por el espacio. Los principales tipos de
radiaciones que pueden tener efectos sobre los seres vivos son:

a. Radiaciones ionizantes.- Iones y radicales libres que alteran las bases de los componentes
esenciales para la viabilidad de los microorganismos, dando lugar a mutaciones que los incapacitan
metabólicamente para sobrevivir . Tienen un gran poder de penetración lo que permite se puedan
utilizar para la esterilización de productos luego de ser embalados. En general, los microorganismos
son más resistentes a las radiaciones ionizantes que los seres superiores.
Los efectos de las radiaciones ionizantes son letales, tanto directos como indirectos, así como
mutagénicos.
• Rayos gamma.- Este tipo de esterilización se aplica a productos o materiales termolábiles y
de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar antibióticos, vacunas, alimentos,
etc.
• Rayos catódicos. Son los rayos X y los radiosótopos Co60 y Cs137. Efectos son letales y
mutagénicos. Muy penetrantes. Penetran bien, pero requieren mucha energía, son pocos
operativos para su empleo masivo, su uso es muy costoso, por lo tanto son muy poco usados
con fines de esterilización
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Las principales aplicaciones de las radiaciones ionizantes son la esterilización de:

• material farmacéutico (antibióticos, hormonas, etc);

• material médico-quirúrgico (guantes de cirujano, suturas de nylon, jeringas desechables,
agujas, bisturíes, catéteres, prótesis, etc);
• alimentos envasados (aunque en algunos países aún sigue abierta la polémica por parte de
ciertos grupos sobre la seguridad de este tratamiento).
b. Radiaciones no ionizantes
• Luz ultravioleta. Afectan a las moléculas de ADN de los microorganismos. Se utilizan para
superficies, se utilizan para la esterilización en quirófanos. Los rayos UV no tienen actividad
ionizante, pero provocan cambios químicos en las moléculas absorbentes, de modo que
aparecen moléculas alteradas denominadas genéricamente fotoproductos.
La luz UV es efectiva sobre bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. La dosis letal para
células vegetativas suele estar entre 1800 y 6500 mwatt·cm-2, pero las endosporas requieren
10 veces más dosis.

AGENTES ESTERILIZANTES MECANICOS

• Filtración

Se realiza a través de filtros capaces de retener los microorganismos. Los filtros pueden ser de diversos
materiales (acetato de celulosa, nitrato de celulosa, policarbonato o teflón) en función del fluido a filtrar.
Varían de tamaño de poro (0.22 µm - 0.45 µm) usualmente se utilizan los de 0.22 µm. Hay que tener en
cuenta que estos filtros usados en el laboratorio no retienen virus debido al pequeño tamaño de los virus,
nunca es posible tener certeza de que, por los métodos de filtración que dejan libre de bacterias una solución,
se van a eliminar también los virus.

a) Filtros de membrana . Los filtros de membranas son discos de ésteres de celulosa con poros tan
pequeños que previenen el paso de los microorganismos. Estos filtros son desechables.
b) Filtros HEPA . Un filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air) está compuesto por pliegues de acetato
de celulosa que retienen las partículas (incluídos los microorganismos) del aire que sale de una
campana de flujo laminar.

La filtración también se utiliza para el recuento de microorganismos cuando están presentes en baja
concentración. Una aplicación es el análisis bacteriológico de aguas.

Otros agentes físicos mecánicos son la centrifugación (sedimentación) y la ruptura celular. La primera
permite la separación de los microorganismos desde un líquido. Producirá un precipitado, en el cual estarán
contenidos la mayoría de los microorganismos y un sobrenadante transparente no estéril. La ruptura celular
mediante ultrasonido o presión conduce a la muerte celular. Estos métodos de laboratorio permiten la
recuperación de algunos componentes celulares microbianos utilizados en distintos tipos de estudios.

AGENTES ESTERILIZANTES QUIMICOS

Los métodos químicos de esterilización son aquellos que involucran el empleo de sustancias letales para
los microorganismos, ya que presentan la capacidad de promover una o más reacciones químicas capaces
de dañar los componentes celulares de los microorganismos (proteínas, membranas, etc.)
https://esp.labbox.com/metodos-quimicos-de-esterilizacion-de-material-de-laboratorio/
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Existen ciertas sustancias químicas que influyen negativamente sobre las bacterias, pudiendo ejercer dos
tipos de efectos diferentes:

bacteriostáticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano;

bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.

En general, si no sólo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de microorganismos, hablamos
respectivamente de agentes microbiostáticos y microbicidas. Ahora bien, para una misma sustancia química,
la línea de demarcación entre un efecto microbiostático y otro microbicida depende muchas veces de la
concentración de dicha sustancia y del tiempo durante el que actúa.

¿Cómo podemos saber que un microorganismo está “muerto”? El único criterio válido es la pérdida
irreversible de la capacidad de división celular, es decir, de la pérdida de viabilidad, y se suele comprobar
empleando técnicas con placas de Petri (es decir, confirmando que no crecen en medios sólidos adecuados).

Antes de proceder al estudio de las diversas moléculas que pueden afectar el crecimiento o la viabilidad de
los microorganismos, veamos unas cuantas definiciones básicas.

Agentes esterilizantes son aquellos que producen la inactivación total de todas las formas de vida
microbiana (o sea, su “muerte” o pérdida irreversible de su viabilidad).

Agentes desinfectantes (o germicidas) son agentes (sobre todo químicos) antimicrobianos capaces
de matar los microorganismos patógenos (infecciosos) de un material. Pueden (y en muchos casos suelen)
presentar efectos tóxicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen emplear sólo sobre materiales inertes.

Agentes antisépticos son sustancias químicas antimicrobianas que se oponen a la sepsis o

putrefacción de materiales vivos. Se trata de desinfectantes con baja actividad tóxica hacia los tejidos vivos
donde se aplican.

Todos los días usamos agentes químicos para controlar el crecimiento microbiano: detergentes y jabones
para el cuerpo y la ropa, cloración de las aguas potables, antisépticos para la piel y el tratamiento de heridas,
desinfectantes para tratar superficies en la industria y en los laboratorios, quimioterápicos y antibióticos para
tratar enfermedades bacterianas, etc.
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ANTISÉPTICOS

• Alcoholes
• Iodo
• Agentes catiónicos, aniónicos y anfóteros
• Órgano Mercuriales
• Colorantes

DESINFECTANTES

• Cloro y Compuestos clorados

• Aldehídos
• Óxido de Etileno
• Compuestos Fenólicos
• Ácidos y Alcalís

BIOSEGURIDAD

DEFINICIÓN

◼ Conjunto de mecanismos y medidas preventivas que permiten proteger la salud y la seguridad

del personal de laboratorios , personal de salud, de los pacientes y de la comunidad, frente a
riesgos producidos por agentes biológicos, físicos, químicos y mecánicos.

OBJETIVOS

◼ Reconocer situaciones de riesgo.

◼ Prevenir las infecciones

◼ Prevenir los accidentes laborales.

◼ Aplicar las precauciones estándar.

◼ Producir cambios de actitud.

◼ Establecer normas de Bioseguridad en los servicios

Normas de Bioseguridad

Las normas de bioseguridad están destinadas a reducir el riesgo de transmisión de microorganismos de

fuentes reconocidas o no reconocidas de infección en instalaciones vinculadas a accidentes por exposición
a sangre y fluidos corporales.

ALGUNOS TERMINOS:

• Riesgo biológico: Procedente de un agente de origen biológico que tiene la capacidad de

producir efectos en seres humanos p.e. microorganismos, toxinas. Alergénicos y toxinas
derivadas de plantas y animales superiores.
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• Universalidad: Asumir que toda persona esta infectada y que sus fluidos y todos los objetos
que se han utilizado en su atención son potencialmente infectantes, ya que es imposible saber
a simple vista, si alguien tiene o no alguna enfermedad.
• Colocación de barreras protectoras: Un medio eficaz para evitar o disminuir el riesgo de
contacto con fluidos o materiales potencialmente infectados, es colocar una “barrera” física,
mecánica o química entre personas o entre personas y objetos.

Para trabajar con material biológico deben utilizarse medidas de seguridad adecuadas a sus características,
al tipo de trabajo que se realizará y a las vías de exposición.

Niveles de Bioseguridad

Son una combinación de prácticas y técnicas de laboratorio, equipos de seguridad e instalaciones

específicas para cada situación.

Estos niveles de bioseguridad constituyen las condiciones bajo las cuales se puede trabajar en forma segura
con ese agente de tipo biológico

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 1 . Los equipos de seguridad y las instalaciones son adecuados para trabajar
con microorganismos que no se conocen como generadores sistemáticos de enfermedades en humanos
adultos sanos.

El trabajo es generalmente realizado sobre mesadas abiertas y no se requiere equipamiento de contención

ni diseño especial de infraestructura.

• Agentes Biológicos BSL 1: Aquel que resulta poco probable que cause un enfermedad en el ser
humano.

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 2 . Se usa en trabajos que involucran agentes de riesgo potencial moderado
para el personal y el medio ambiente.

El tipo de agente con el que se trabaja puede causar enfermedades graves, pero solo se transmite por vía
sanguínea, no inhalatoria.

 Agentes Biológicos BSL 2: Aquel que puede causar una enfermedad en el ser humano y puede
suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y
existiendo generalmente una profilaxis o tratamiento eficaz

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 3 . Se aplica en laboratorios donde se llevan a cabo trabajos con agentes
exóticos que pueden producir una enfermedad grave o potencialmente letal como resultado de la
exposición por vía de inhalación.

 Agentes Biológicos BSL 3: Aquel que puede causar una enfermedad grave en el ser humano y
presenta un serio peligro para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y
existiendo generalmente un tratamiento eficaz

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 4 . Se usa para trabajar con agentes peligrosos y exóticos que poseen un
riesgo alto de producir infecciones letales, transmitidas por aerosoles y para las que actualmente no se
cuenta con vacunas ni tratamiento.
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 Agentes Biológicos BSL 4: Aquel que causando una enfermedad grave en el ser humano, supone un
serio peligro para los trabajadores, con muchas posibilidades que se propague a la colectividad y sin
que exista un tratamiento eficaz.