John Querubn Franco Aguirre

La esterilizacin es un proceso que pretende la muerte de todas las formas de vida

microbiana: bacterias y sus esporas, hongos y virus. Este proceso es de gran importancia
en el laboratorio para garantizar la no contaminacin de materiales, instrumentos,
soluciones y medios de cultivo con microorganismos indeseados.

Existen diferentes mtodos para lograr la esterilidad de materiales y medios de cultivo; la

seleccin de este depender de las caractersticas particulares del material.
 Esterilizacin qumica: se fundamenta en que algunas Ojo
sustancias qumicas tienen la capacidad de promover una ESTERILIZACION
o ms reacciones qumicas capaces de producir la muerte
de los microorganismos. Al emplear este mtodo se DESINFECCION: en este
pueden usar agentes qumicos gaseosos o no gaseosos. proceso se eliminan los agentes
patgenos reconocidos, pero no
necesariamente todas las formas
Agentes Gaseosos
de vida microbianas. Es un
El xido de etileno es un agente alquilante que se ha trmino relativo, donde existen
convertido en uno de los mtodos de esterilizacin
qumica ms utilizados. Cuando se emplea este mtodo se diversos niveles de
debe determinar cuidadosamente el tiempo de exposicin desinfeccin.(ej: hipoclorito de
a emplear ya que ste depende de factores como la sodio, alcohol yodado, alcoholes
temperatura, humedad, concentracin del gas, la
permeabilidad del material que recubre los instrumentos a y amonios).
esterilizar y el tipo de microorganismo a eliminar.
Generalmente un perodo completo de esterilizacin tarda
varias horas.
 La esterilizacin por xido de etileno se puede
utilizar para esterilizar materiales sensibles al
calor y la humedad, tales como materiales
plsticos desechables (placas de Petri).Tiene
buena capacidad de difusin y penetrabilidad.

Es muy txico para la piel, ojos y mucosas. Es

inflamable, explosivo y carcinognico. Los ciclos
de esterilizacin son largos. Requiere aireacin
del material una vez esterilizado.

Temperatura de 37C durante 5 5.5 h (ciclo

fro). Temperatura de 55C durante 2 - 4h (ciclo
caliente). Humedad entre 40 - 70%.
 Agentes No Gaseosos
Glutaraldehido: agente alquilante que se usa en soluciones
al 2%.
La esterilizacin con este agente implica la inmersin del
material limpio y seco durante 10 horas asegurando que todas
las superficies estn en contacto con la solucin y
posteriormente enjuagar con abundante agua estril.
Puede resultar irritante para los trabajadores, adems de que
las soluciones diluidas al 2% pierden su efectividad
aproximadamente en dos semanas (El glutaraldehdo se usa
para la esterilizacin instrumentos o equipos como
endoscopios, termmetros, materiales de goma o plstico).
 Radiaciones

Radiacin ultravioleta: radiacin con longitudes de onda entre 100 y 400 nm. Afectan a los cidos
nucleicos provocando errores en la duplicacin y prdida de viabilidad.
El tiempo de exposicin varia de acuerdo con la intensidad de emisin y el tipo de microorganismos.
Tienen bajo poder de penetracin: solo se utilizan para la esterilizacin de superficies (cmaras de
bioseguridad, quirfanos, salas de envasado de medicamentos). Producen daos en ojos y piel.
 RADIACIONES
Radiaciones ionizantes: tienen mayor energa que las ultravioleta y por tanto mayor poder
de penetracin. Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos
nuclicos, protenas y otros componentes celulares. Se utilizan para la esterilizacin de
materiales termosensibles como jeringas, sondas, suturas, guantes, etc. No se utilizan para
medios de cultivo o soluciones porque producen alteraciones de los componentes. Solo se
utiliza a escala industrial por el alto costo.
 Filtracin: Mtodo usado para la esterilizacin de lquidos termolbiles. Existen
filtros de diferentes composiciones (polietersulfona, nylon, celulosa, etc). Estos
filtros tienen poros uniformes que varan en tamao entre 0,02 m hasta 25 m, los
ms utilizados son los de 0,22m de dimetro porque son capaces de retener hasta
a las bacterias ms pequeas.
Se saturan rpidamente y la velocidad de filtracin a travs de ellos es lenta.
No es un mtodo que como tal sea microbicida.

https://www.youtube.com/watch?v=ggpzNduZz_4
 Esterilizacin por calor seco: provoca desnaturalizacin de protenas, oxidacin
de componentes celulares y efectos txicos por altas concentraciones de
electrolitos debido a la deshidratacin . Menos efectivo que el calor hmedo; por
lo que requiere mayor tiempo de exposicin.
 Flameado
Exposicin entre 5-15 s.
Esterilizacin de asas, bocas de tubos y matraces
Carbonizacin de instrumentos en contacto directo
 Aire caliente
No es corrosivo para metales o
instrumentos.
Permite la esterilizacin de
sustancias en polvo y no acuosas (
aceites, glicerina) material
quirrgico y vidriera
termorresistente.
Bajo poder de penetracin.
Tiempos de exposicin largos

Temperatura Tiempo
160 C 120 minutos
170 C 60 minutos
180 C 30 minutos
 Incineracin
Descarte inmediato de material cortopunzante
(agujas)

Espectro de uso muy limitado

 Esterilizacin por calor hmedo: La destruccin trmica de los microorganismos se
produce de manera gradual a medida que aumenta la temperatura causando como efecto
final la desnaturalizacin y coagulacin de las protenas. El proceso de destruccin comienza
con la desnaturalizacin del ADN, a medida que aumenta la temperatura comienza la perdida
de la integridad funcional de la membrana citoplasmtica y finalmente la degradacin de
todas las protenas celulares.

Pasteurizacin: Temperatura entre 68 y 72C, este

proceso se realiza a productos lquidos que tienen
componentes susceptibles a altas temperaturas
(vitaminas) o a cambios en sus propiedades
organolpticas; este proceso solo elimina bacterias
en su forma vegetativa (no esporas).
 Ebullicin
Temperatura a 100C, este proceso
puede aplicarse a lquidos (medios
de cultivo) o materiales de
laboratorio y destruye las formas
vegetativas de bacterias y hongos; no
es efectivo contra esporas y virus.

El tiempo de esterilizacin por este

mtodo es de 20 a 30 min.
 Autoclavado .
Este proceso asegura la esterilizacin completa por una combinacin de temperatura
elevada, presin (15 -18 PSI) y tiempo (15 o 20 minutos). Asegura la destruccin de
formas vegetativas, esporas y virus.

Esterilizacin de medios de cultivo y plsticos no termolbiles (puntas de micropipetas),

volumtricos de vidrio y vidriera general de uso en el laboratorio.
 PRINCIPIO DE OPERACIN

Los autoclaves siguen unos ciclos de operacin, en los

cuales hay variaciones de la temperatura y la presin:

- Pretratamiento: inyeccin de vapor y extraccin del aire

- Inyeccin y presurizacin de la cmara de esterilizacin
- Esterilizacin; estabilizacin de las condiciones de
temperatura y presin.
- Postratamiento: despresurizacin y secado de elementos
- Entrada de aire y equilibrio de presin interna con presin
atmosfrica
 Controles fsicos o mecnicos .
Controles qumicos
Controles biolgicos
 Controles fsicos o mecnicos

Aseguran el funcionamiento correcto del sistema de esterilizacin y que las condiciones

internas de la cmara alcancen los parmetros definidos. Permiten detectar fallas en forma
precoz.

EJ. Manmetros, sensores de carga, termmetro, registro de impresora, pantalla informtica.

 Controles qumicos
Son elementos que sirven para monitorizar uno o mas de los parmetros que
intervienen en un ciclo de esterilizacin, confirmando que se han cumplido ciertas
condiciones necesarias en el proceso de esterilizacin.
Este tipo de controles deben:
Ser estables a travs del tiempo.
De fcil lectura e interpretacin.
Permitir la reproducibilidad del proceso.
Ser especficos para cada mtodo de esterilizacin.
Periodicidad: En cada ciclo y/o paquete.
Cumplir con la norma ISO 11140-1.
 Parmetros crticos segn mtodo de la esterilizacin :

Vapor: tiempo, temperatura, vapor saturado.

Calor seco: tiempo, temperatura.
Oxido de etileno: tiempo, temperatura, humedad, concentracin de OE.
Radiacin ionizante: dosis total absorbida y tiempo de exposicin

Las especificaciones de los diferentes tipos de control qumico varan segn el mtodo
de esterilizacin recomendado y los parmetros crticos a los cuales deber responder.
 Clase 1 o indicadores externos o de proceso. El objetivo de estos indicadores es
diferenciar los paquetes que han sido procesados de aquellos que no han sido
procesados. Contienen un qumico que reaccionan a un proceso especfico de
esterilizacin.

Clase 2 o indicadores de pruebas especificas. Se utilizan para evaluar el sistema de

evacuacin de aire en un esterilizador por prevaco ( test de Bowie & dick)
 Clase 3 o indicador uni-parmetro Son indicadores que responden a un solo parmetro crtico

Clase 4 o indicadores multi parmetro validan varios parmetros crticos del proceso de
esterilizacin.
 Clase 5 o indicador integrador: responden a todos los parmetros crticos del proceso de
esterilizacin.
Clase 6 o indicador emulador responden a todos los parmetros crticos del proceso de
esterilizacin. La caracterstica importante de estos indicadores es que cambian cuando el
ciclo de esterilizacin lleva un 95%
 Control Biolgico
Principio
Generalmente se componen de ampollas con caldo nutritivo, azcar e indicador de pH, as
como esporas bacterianas (Geobacillus stearothermophilus, bacillus subtilis). La termorresistencia
se ajusta de tal manera que las esporas mediante calentamiento en vapor a presin tras 15
minutos a no menos de 121 0,5 C (104-124 kPa) experimentan una destruccin total. A
temperatura ms baja o tiempo de accin ms breve las esporas sobreviven al menos
parcialmente.
Las ampollas se agregan al material de carga. Despus de haber tenido lugar el autoclavaje se
controla el xito de la esterilizacin mediante incubacin de las ampollas (60C por 48 h): si no
existe crecimiento queda demostrada una esterilizacin suficiente, mientras que la existencia de
crecimiento indica una esterilizacin insuficiente.
 Control Biolgico
Evaluacin
En caso de esterilizacin suficiente de las esporas. El
color del contenido de las ampollas permanece
violeta y transparente.
En caso de esterilizacin insuficiente sobreviven las
esporas de. El contenido de las ampollas muestra
dentro de 24 horas de incubacin un viraje de color
hacia el amarillo por formacin de cido como
consecuencia de la fermentacin del azcar as como
una leve turbidez debida al crecimiento microbiano.
En caso de viraje de la ampolla, se deber aumentar
el tiempo de esterilizado, revisin de fugas, presin
obtenida, cantidad de carga, etc. para volver a
realizar la validacin del proceso.
Caractersticas especiales de un controlador biolgico de esterilizacin

Concentracin de esporas (n)= 5 x 105 o x 107 por unidad (en cada ampolla)
Tiempo de reduccin decimal: tiempo que se requiere para reducir 10 veces la densidad de la poblacin a
una determinada temperatura (ej D121 = 1,5 a 2,0 minutos)

Cuanto es el tiempo de reduccin decimal requerido para reducir una concentracin de esporas = 6*109 a
uma temperatura de 121 C en 20 minutos?
z-Valor : es el cambio de temperatura que se requiere para modificar el valor D por un factor de 10. Este valor
se requiere en indicadores biolgicos para esterilizacin por calor hmedo y seco. 710 C

Dado lo anterior el nmero de esporas esta ajustado de tal manera que despus de un tiempo de esterilizacin
de 6 minutos y 121 0,5 C en todas las ampollas habran presentes esporas supervivientes, mientras que tras
un tiempo de esterilizacin de 15 minutos y 121 0,5 C todas las esporas estn destruidas. Para el perodo
intermedio se encuentran tanto ampollas con esporas vivas como ampollas con esporas muertas.
Si el valor Z= +8C cuanto seria el tiempo de reduccin decimal?
 https://www.youtube.com/watch?v=FOSExPnUgNc