Tema 3

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Bioquímica y Biología Molecular
Victoria Bernardo Pisa
Grado en Farmacia
PROTEÍNAS TRANSPORTADORAS OXÍGENO:

MIOGLOBINA

HEMOGLOBINA
 INTRODUCCIÓN
Vertebrados: Organismos aerobios con un sistema circulatorio cerrado y un
mecanismo para la extracción de O2 del aire (o del agua) y liberación de
CO2 como productos de desecho.

✓ O2 inspirado, permite el uso eficaz de combustibles

metabólicos (glucosa y ácidos grasos)
✓ CO2 espirado, es un producto importante del metabolismo
celular.

Esta utilización de O2 como sustrato metabólico se acompaña de

la generación de especies de radicales libres que dañan todas las
macromoléculas biológicas.
INTRODUCCIÓN
Protección frente al daño por radicales.

✓ Secuestrando O2
✓ Limitando producción de O2
✓ Detoxificándolo

HEMOPROTEÍNAS: Participan en estos mecanismos protectores:

❖Mioglobina (Mb): En músculo estriado esquelético.Almacena O2 en

citoplasma y lo suministra a mitocondrias cuando hay demanda.

❖Hemoglobina (Hb): Sólo en eritrocitos, donde facilita el transporte de

O2 y CO2 entre pulmones y tejidos periféricos.
 Función respiratoria

1.-VENTILACIÓN PULMONAR (inspiración y

espiración).

2.-DIFUSIÓN DE GASES ENTRE ALVEOLOS Y LA

SANGRE

3.-PROCESOS METABÓLICOS EN LA CÉLULA

(consumo de O2 y eliminación de CO2)
Estructura proteínas globinas
Globinas: Metaloproteínas solubles

Las secuencias de aminoácidos en las globinas humanas (citoglobina,

-globina, -globina, A-globina, mioglobina y neuroglobina) están muy
conservadas.

Características:

Los residuos PheCD1 (F) y HisF8 (H) se conservan de forma absoluta en todas las
globinas y hay patrones característicos de residuos hidrófobos en segmentos
helicoidales.
Los segmentos helicoidales se identifican
mediante barras azules
PROTEÍNAS TRANSPORTADORAS OXÍGENO

MIOGLOBINA
Un solo polipéptido de globina (153 residuos de aas, 17053 Da)

HEMOGLOBINA

Ensamblaje tetramérico de 2 polipetidos de globina 

(141 residuos, 15868 Da) y 2 polipéptidos de globina 
(146 residuos, 15126 Da).

Un grupo prostético hemo se asocia a cada

apoproteína globina.
Apoproteína+ grupo prostético

Grupo HEMO

GRUPO HEMO

NUCLEO Fe
TETRAPIRRÓLICO
✓Aas polares se encuentran en la superficie exterior de los polipéptidos de globina y
contribuyen a la alta solubilidad.

✓Aas que tienen características polares e hidrofóbicas (treonina, tirosina y triptófano)

tienen orientadas sus funciones polares hacia el exterior de la proteína.

✓Los residuos hidrófóbicos están encerrados en el interior, donde estabilizan el

plegamiento del polipéptido y forman un bolsillo que acomoda el grupo prostético
hemo.

Excepción: 2 Hys que desempeñan una función clave en la función de la proteína y

que se disponen en la profundidad del bolsillo del grupo hemo.
Las cadenas laterales de estas Hys presentan una orientación perpendicular a cada
lado del grupo prostético hemo.
El Fe establece 4 enlaces con 4 nitrógenos del nucleo tetrapirrólico,
quedando 2 valencias de coordinación una por encima y otra por debajo

Hys F8
✓Uno de los N imidazólicos de la cadena
lateral del residuo de HysF8 está cerca para
unirse al átomo pentacoordinado de Fe+2.

En el lado opuesto del plano del grupo

hemo se encuentra la HysE7 que está
demasiado lejos del hierro del grupo hemo
para establecer enlace directo; su función
es indispensable para estabilizar el O2 por
puentes de H.

Hys E7
Globina oxigenada
El grupo hemo plano está
colocado entre las
histidinas proximal (F8) y
distal (E7).
La Hys F8 posee un
nitrógeno imidazólico lo
bastante cercano para
unirse al Fe2+.
El O2 ocupa la 6ª posición.
La Phe CD1 ejerce
interacciones hidrofóbicas
y electrostáticas de
apilamiento con el anillo
de porfirina.
GRUPO HEMO Parte fijadora de O2 común a Mb y Hb

ESTRUCTURA

Molécula de porfirina que tiene coordinado un átomo de Fe2+

Grupo prostético Fe-porfirina es plano e hidrófobo, excepto 2 grupos

propionato expuestos al disolvente.
El Fe2+ del grupo hemo tiene una coordinación octaédrica, establece 6
enlaces de coordinación:

• 4 con los N del anillo tetrapirrólico (situados en el plano del anillo)

• 1 con el N de la His 93 (F8) llamada His F8 ó His proximal
• El 6º enlace:
• Oximioglobina: una molécula de oxígeno, junto a la His distal
(número 64, E7).
• Desoximioglobina: no tiene oxígeno.
Grupo Hemo: Átomo de Fe 2+ unido al anillo
tetrapirrólico de la protoporfirina
 FUNCIÓN GRUPO HEMO
Componente integral de las holoproteínas de globina.

a) Confiere color rojo a las globinas, sangre y músculo

(púrpura en estado desoxigenado y rojo en estado oxigenado).

b) Poco soluble e hidrofóbico.

Las globinas aumentan su solubilidad en agua.

El bolsillo hidrofóbico creado por el polipéptido globínico plegado:
✓Se une a grupo hemo por enlaces no covalentes.

✓Protege al grupo hemo y en presencia de O2 minimiza la oxidación espontánea de Fe2+

a Fe3+
✓Así las globinas fijan y liberan O2, ya que si se produce el paso de Fe2+ a Fe3+ el grupo hemo
no puede interaccionar de modo reversible con el O2 , alterando la función de almacenamiento
y transporte de O2.
 MECANISMO DE UNIÓN DEL OXÍGENO
El oxígeno se une al grupo Síntesis del grupo hemo
hemo: un anillo tetrapirrólico
denominado protoporfirina
IX, que pertenece a la familia
de porfirinas, con un ión
ferroso (Fe2+) en el centro.
(citocromos, clorofila)
 Porfirias: Enfermedades metabólicas hereditarias o adquiridas que afectan a la síntesis del grupo
hemo, con acumulación de intermedios metabólicos (incluyendo o no porfirinas).

• Son hepáticas, eritrocitarias y mixtas.

• Sus consecuencias suponen una o varias de

las siguientes:

a) Trastornos hematológicos y fotosensibilización

con lesiones en la piel.

b) Ataques agudos de dolor abdominal

por acumulación deALA
(aminolevulinato) y PBG
(porfobilinógeno).

c)Trastornos neurológicos o psiquiátricos por

afectación del metabolismo neuronal por ALA,
PBG o ambos.
Enfermedades relacionadas con el grupo Hemo:
Porfinurias y porfirias:

•Porfinuria: Acumulación anormal de pigmentos porfirínicos en la orina,

por alteraciones del metabolismo porfirínico, por otras enfermedades o
fármacos.

Coproporfinuria de la enfermedad hepática crónica, el problema de

excreción hepática provoca la desviación de la coproporfirina I desde la
bilis a la orina.
 HEMOGLOBINA

Se encuentra exclusivamente en los eritrocitos

Une oxígeno en los pulmones y lo

transporta, vía sangre arterial, a los tejidos
donde lo libera

Además, une CO2 procedente del metabolismo

en los tejidos, y lo transporta, vía sangre
venosa, a los pulmones para ser eliminado

“Bioquímica” Mathews, van Holde y Ahern. Addison Wesley 2002

 ESTRUCTURA DE LA HEMOGLOBINA (Hb)
✓Tetrámero, con disposición tetraédrica de 2 globinas  idénticas y 2
globinas  idénticas.

✓En la estructura tetraédrica de Hb, cada subunidad está en contacto con las
otras tres. Subunidades similares a las de Mb.

✓Hay menor número de interacciones y son hidrófobas entre las subunidades

idénticas, en las interfases 1-2 o 1-2.

✓Las interacciones fuertes en cada heterodímero − y en la interfase entre

los dos heterodímeros son factores determinantes en la fijación y liberación
de O2

Actualmente, se considera a Hb más un dímero entre heterodímeros (−)

que un tetrámero (22)
ESTRUCTURA DE LA HEMOGLOBINA (Hb)

▪ Unión de varias cadenas polipeptídicas

(subunidades ó monómeros).

▪ Especialmente enlaces débiles.

▪ La proteína completa se llama oligomérica ó

polimérica.

▪ Posibilita la existencia de fenómenos de

cooperatividad y alosterismo.

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ANÁLISIS DE LA UNIÓN DEL OXÍGENO POR LA MIOGLOBINA
La curva de unión de oxígeno a la mioglobina es hiperbólica e indica que tiene una
elevada afinidad por el oxígeno ya que P50 es muy baja (unos 4 mm de Hg)

Saturación de O2

P50: Valor de PO2 en que están ocupados o

saturados la mitad de los lugares de fijación

✓En los capilares de tejidos (PO2 20 -40 mm Hg):

La Mb estaría saturada

✓ En los tejidos (PO2 baja):

La Mb capta O2 de la Hb de la sangre arterial
circulante y luego lo cede a los orgánulos
celulares que consumen oxígeno
(mitocondrias)
 TRANSPORTE DE OXÍGENO POR LA HEMOGLOBINA
La Hb capta oxígeno cuando es abundante (pulmones PO2 100 mm Hg) y lo
cede cuando disminuye (capilares PO2 30 mmHg)

La curva de unión del oxígeno a la Hb es SIGMOIDEA: Coeficiente de

Hill (n) mayor de 1

Hb: (n = 2,7): Alta cooperatividad en la fijación del ligando.

Este comportamiento se debe a fenómenos de

COOPERATIVIDAD en la unión de oxígeno.
Cada molécula de Hb tiene 4 lugares de unión de
O2. La unión del primer O2 produce un cambio
conformacional en la molécula, lo que facilita la
unión de los siguientes y viceversa

“Bioquímica” Mathews, van Holde y Ahern. Addison Wesley 2002

Hb tiene una afinidad menor por el O2 que la Mioglobina, ya que:
P50 Hb =27 mmHg
P50 Mb = 4 mmHg
 FENÓMENOS DE COOPERATIVIDAD
En Hb, las cadenas  / establecen interacciones fuertes.

Al pasar del estado desoxigenado al oxigenado se produce un cambio

estructural que afecta, sobre todo, a la interacción entre subunidades
(estructura cuaternaria). Un par  / rota y se desliza respecto al otro

En menor medida cambia

la estructura terciaria de
cada subunidad

“Bioquímica” Mathews, van Holde y Ahern. Addison Wesley 2002

 CAMBIOS ESTRUCTURALES QUE ACOMPAÑAN
A LA UNIÓN DEL OXÍGENO
El paso de la forma desoxigenada a la oxigenada explica la unión
cooperativa del oxígeno
1.Se rompen una serie de puentes salinos y enlaces de hidrógeno que
afectan a los C-terminales

2.Se crean otros enlaces dando lugar a la conformación más laxa llamada
forma relajada (R)

Por tanto, la entrada del primer O2 es más difícil porque han de romperse
enlaces iónicos entre subunidades. El resto de las moléculas de O2
encuentran los enlaces rotos y la situación espacial es más favorable

Cuando sale el O2 la Hb vuelve a su conformación desoxi o forma tensa (T)

restableciéndose los puentes salinos
 Mecanismo de cooperatividad:
Incluye un desplazamiento entre dos conformaciones
conocidas como T (tenso) y R (relajado).
Estado T: Interacciones entre heterodímeros son más fuertes
Afinidad por oxígeno más baja.

Estado R : Estos enlaces no covalentes son más débiles.

Afinidad por oxígeno más alta.

La transición entre estas estructuras se acompaña de la desaparición de

los enlaces no covalentes existentes y de la formación de nuevos
enlaces en las interfaces del heterodímero.

El contacto entre los dos heterodímeros se encuentra estabilizado por

una combinación de enlaces de H y fuerzas electrostáticas.
 Modelos para describir la transición de T a R de la Hb:

Modelo concertado: Las 4

subunidades cambian de manera
concertada, no se permiten los
estados híbridos y la fijación de
O2 desplaza el equilibrio entre los
estados T y R.

Modelo secuencial: Cada

subunidad de Hb responde de
manera secuencial a la fijación
de O2 con un cambio de
conformación, permitiendo así la
aparición de híbridos de los
estados T y R.
MODULACIÓN ALOSTÉRICA DE LA AFINIDAD
DE LA HEMOGLOBINA POR EL OXÍGENO

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 Proteínas y efectores alostéricos
Unión cooperativa de O2 por unión al grupohemo

Hb es una proteína alostérica (=otro sitio), es decir, su afinidad por el O2 se altera por determinados
efectores que no actúan directamente sobre el grupo hemo sino que interaccionan en otro lugar de la
proteína

❑Cuando un efector alostérico afecta a su propia fijación a la proteína (en otros lugares):
Proceso homotrópico.
Ej.: El efecto de la fijación de O2 en un lugar de la Hb aumenta, así mismo, la fijación de O2 a
otros lugares de laHb.

❑Cuando un efector alostérico es diferente del ligando cuya fijación se altera, el proceso se
denomina entonces heterotrópico.

Ej.: Efecto de los H+ sobre la P50 para la fijación de O2 a la Hb. Estas interacciones originan
desplazamientos horizontales de las curvas de fijación de oxígeno
EFECTOS ALOSTÉRICOS DE OTROS
LIGANDOS SOBRE LA Hb

EFECTORES ALOSTÉRICOS:
1. CO2
2. H+. Efecto BOHR
3. 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)

Todos ellos disminuyen la afinidad de la Hb por el O2 (desplazan las curvas

de saturación hacia la derecha)
 EFECTO BOHR
Afinidad de la Hb por el O2 es muy sensible al pH: EfectoBohr

Desplazamiento a la derecha de la curva de saturación del O2 cuando

disminuye el pH

Aumento en la [H+] (disminución pH) favorece el aumento de P50 (menor

afinidad para la fijación del O2 a la Hb)

Desplazamiento dependiente de H+ del estado R al estado T (H+ se unen a

His de cadenas  formando nuevos enlaces iónicos, estabilizando estado T)

H+: Efectores alostéricos heterotrópicos

EFECTO BOHR EN
LA HEMOGLOBINA
 EFECTO CO2
CO2 tiene capacidad para alterar la afinidad de la Hb por el O2

Igual que el efecto alostérico negativo de los protones:

el aumento de la pCO2 en los capilaresvenosos

disminuye la afinidad de la Hb por el O2

Al aumentar pCO2 la curva de saturación del ligando se

desplaza a la derecha
Efecto del 2,3-BISFOSFOGLICERATO (2,3-BPG)
❑Compuesto orgánico sintetizado por los hematíes humanos en una
derivación de la vía glicolítica.

❑Efector alostérico negativo indispensable que, cuando está fijado a Hb,

causa un acusado aumento de la P50.
BISFOSFOGLICERATO (BPG)

El CO2 y la [H+] actúan de forma rápida para facilitar el intercambio de O2 y CO2

El BPG es un efector que actúa a más largo plazo, permitiendo la adaptación a
cambios graduales de la disponibilidad de O2.

El BPG reduce la afinidad de la Hb por el O2:

•Se une a la Hb en una cavidad existente entre las cadenas , donde establece
interacciones con los grupos (+) que rodean esta cavidad.
• En la forma oxiHb la cavidad es pequeña y no puede unirse el BPG
• En la forma desoxiHb se une estabilizando esta conformación.
Unión del 2,3-BPG a la desoxihemoglobina

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Efecto de la temperatura

Trabajo muscular Productos metabólicos del metabolismo

aerobio: H+, CO2, y también libera calor.

Fijación O2 a grupo hemo proceso exotérmico

Afinidad Hb por O2 disminuye al aumentar la temperatura

Microambiente correspondiente a un músculo en ejercicio favorece

profundamente la liberación más eficaz a los tejidos adyacentes del O2
fijado a Hb
Efecto del CO
Disminuye el O2 unido a la hemoglobina y
causa un desplazamiento a la izda.
INTOXICACIÓN POR MONÓXIDO DE CARBONO
El CO se une a la hemoglobina con una
afinidad que es 250 veces superior a la del
oxígeno y forma la carboxihemoglobina.

El O2 no se puede unir a los grupos hemo

que están unidos al CO. La presencia de
CO disminuye el número de lugares de
unión de O2 disponible para la
hemoglobina.
La hemoglobina unida al oxígeno está
reducida al 50% (50% O2, 50% CO) y se
desplaza la curva de disociación hacia la
izda. Mayor afinidad de la Hb por el O2, será
más difícil que lo ceda a los tejidos
CONCLUSIÓN: Los efectores alostéricos disminuyen la afinidad de la Hb por el O2

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CONCLUSIÓN: Los efectores alostéricos disminuyen la afinidad de la Hb por el O2

A: Condiciones fisiológicas: Hb adulto curva saturación con alta

cooperatividad.

B: Al aumentar dentro de eritrocitos: [H+], [CO2], [2,3BPG], la curva se

desplaza a la derecha, lo que indica disminución de la afinidad por el
O2 (aumento del valor P50).

Las acciones efectores que modulan la afinidad son aditivas.

La disminución de cualquiera de los efectores alostéricos desplaza la

curva a la izquierda (posición A)

El aumento de la temperatura también desplaza la curva a la derecha.

 Hb minoritarias: Neuroglobina y citoglobina
Neuroglobina (Ngb): Se expresa en SNC y tejidos endocrinos.
151 residuos aas (16.933 Da).

Citoglobina (Cygb): En células origen fibroblástico.

190 residuos (21.045 Da)

❑Comparten un 25 % de la secuencia de Mb y Hb.

❑Presentan todos los elementos clave del dominio de globina: residuos His proximal y
distal, y bolsillo hidrofóbico con grupo hemo.

A dif. de Mb y Hb, contienen grupos hemo hexacoordinados para los dos estados de
valencia del Fe (+2 , +3)

His E7 distal, que sirve como sexto ligando debe ser desplazada para permitir la unión
del O2.
Afinidades por O2 muy altas:

P50 Ngb= 1-7,5 mmHg

P50 Cygb= 0,7-1,8 mmHg
P50 Hb= 27 mmHg
Unión O2 a Cygb dimérica es cooperativa independiente del pH
Unión O2 a Ngb monomérica dependiente del pH

Funciones:

❑Ngb media la difusión del O2 a la mitocondria de la retina.

❑Cygb es cofactor enzimático aporta O2 para la hidroxilación de las
cadenas laterales Pro y Lys en algunas proteínas.
VARIANTES NORMALES DE LA HEMOGLOBINA
HbA: 95 % Hb adulto. Composición de subunidades de globina 22.

HbA2: 2-3 % de la Hb total. Composición de subunidades 22.Aumenta

en la -talasemia (deficiencia de biosíntesis de globina ).

HbF: Subunidades -globina y -globina (< 1%)

Predomina en el feto (2º y 3º trimestre de la gestación)

Diferencia HbF y HbA es la disminución de la sensibilidad a 2,3-BPG.

Globina  tiene Ser en lugar de Hys 143 por tanto HbF no contiene dos
grupos catiónicos que participan en la fijación de 2,3-BPG
Se observa disminución o ausencia de cooperatividad en
Hb mutantes que han perdido los contactos funcionales
entre subunidades.

Hemoglobinopatías: Enfermedades en las que existen moléculas de Hb

anormales por:
*Alteración en su estructura, derivadas de mutaciones en los genes que las
codifican.
*Disminución en la síntesis de la Hb normal (Talasemias).
*Ambos defectos simultáneamente (Hemoglobinopatías talasémicas)
*Persistencia hereditaria de Hb fetal.
Hemoglobinopatía común: Anemia falciforme o drepanocitosis
Hemoglobinopatía estructural

❑Definición: Alteración hereditaria de la estructura de la Hb que se caracteriza por

una tendencia de los eritrocitos a distorsionarse y a limitar el flujo sanguíneo a los
capilares.

❑Causa: Mutación hereditaria de una sola base en el gen que codifica la -globina,
lo que lleva a la expresión de la variante HbS de la Hb. Mutación: Glu6bVal. Un aa
cargado, localizado en la superficie, es reemplazado por residuo hidrófobo.

❑Síntomas: Anemia hemolítica como resultado de rotura hematíes, trastornos del

crecimiento, susceptibilidad a infecciones y múltiples lesiones de órganos
 α-talasemia:
•Deficiencia en cadenas , hay problemas en HbA, A2 y F.

•Tetrámeros 4 (Hb H) y tetrámeros 4 (Hb de Bart).

•Tetrámeros: Transportan O2 pero no tienen cooperatividad y no

experimentan efecto Bohr.

Síndrome hidropesía fetal: Hb de Bart y Hb H únicamente, mortalidad

antes de nacer a las 34 semanas o a las pocas horas de nacer.
β-talasemia:

•Deficiencia en cadenas , persiste síntesis de

cadenas  y Hb F tras nacimiento (fallecimiento
antes de la madurez).

•Exceso de cadenas  origina su precipitación en el

interior del eritrocito y produce hemólisis, con
anemia.

•Talasemia + es más leve, la transcripción de genes 

está inhibida parcialmente, por lo que la producción de
globina  no está bloqueada por completo.
La separación de Hb y otras variantes Hb en el laboratorio clínico se realiza por electroforesis o cromatografía
Ej.: Detección neonatal

Acetato de celulosa HPLC

RN anemia falciforme

N rasgo falciforme

RN sano

Hb glicosilada, informa progresión y tratamiento

Diabetes mellitus