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MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA

•  Son proteínas cuya función es transportar oxígeno en


vertebrados.

¿Por qué los vertebrados necesitan proteínas transportadoras


de oxígeno?
Porque por su carácter apolar el oxígeno molecular se disuelve
muy poco en un medio acuoso, pero puede atravesar muy bien
las membranas

•  Mioglobina (Mb) transporta el O2 en el interior de las células


musculares (miocitos), desde la cara interna de membrana
citoplasmática hasta la cara externa de la membrana externa
mitocondrial.
•  Hemoglobina (Hb) transporta el O2 en la sangre a través de todo el
cuerpo desde los capilares pulmonares a los capilares de los tejidos.
La Hb está contenida en los eritrocitos que viajan en el torrente
sanguíneo.
Rosario A. Muñoz-Clares
Solubilidad de algunos gases en agua

Gas Estructura Polaridad Solubilidad en agua


(g/L)
Nitrógeno N N No polar 0.018 (40 °C)

Oxígeno O O No polar 0.035 (50 °C)

δ- δ-
Dióxido de No polar 0.97 (45 °C)
Carbono O C O

Sulfuro de H H Polar 900 (10 °C)


δ-
hidrógeno S

Amonio H Polar 1860 (40 °C)


H H δ-
N
Rosario A. Muñoz-Clares
COMPARACIÓN DE LAS SECUENCIAS DE AMINOÁCIDOS
DE LA MIOGLOBINA Y DE LAS DOS CADENAS DE LA
HEMOGLOBINA
•  Mb y Hb son proteínas
homólogas (proceden de
una proteína ancestral
común).

•  Sombreados en gris
están los aminoácidos
conservados y en rosa
los aminoácidos
importantes para la
función o estructura.

•  La Mb es un monoméro
mientras que la Hb es un
heterotetrámero
formado por dos tipos
de subunidades (α y β).
Rosario A. Muñoz-Clares
CONSERVACIÓN DE ESTRUCTURA TERCIARIA
EN PROTEÍNAS HOMÓLOGAS

En proteínas
homólogas, que
proceden de un gen
ancestral común, la
estructura terciaria se
conserva más que la
estructura primaria.

Tomado de Biochemistry, L. Stryer, 5th Edition


Rosario A. Muñoz-Clares
MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA

•  Son proteínas cuya función es transportar oxígeno en


vertebrados.

¿Qué características debe poseer una proteína transportadora


de oxígeno?

Debe ser capaz de unir al oxígeno en donde es abundante y de


liberarlo en donde es escaso.

Rosario A. Muñoz-Clares
MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA

•  Son proteínas cuya función es transportar oxígeno en


vertebrados.

¿Alguna de las cadenas laterales de los aminoácidos posee la


capacidad de unir reversiblemente al oxígeno?

Ninguna. Por esto la MB y la HB requieren de un grupo


prostético que posea esa capacidad.

Este grupo próstético es un hemo

Rosario A. Muñoz-Clares
ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE LA
MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA

•  La Mb y las subunidades
de Hb están formadas por
ocho hélices α.

•  Estas hélices forman una


cavidad donde se aloja el
grupo prostético: el hemo,
que es quien une al
oxígeno.

Rosario A. Muñoz-Clares
GRUPO HEMO
(PROTOPORFIRINA IX)

•  Un grupo hemo en general consiste de un átomo de Fe situado en el


centro de un anillo heterocíclico llamado porfirina.
•  En el caso de la Mb y Hb el anillo es la protoporfirina IX y el Fe está
como ion ferroso, Fe(II).
•  El Fe(II) de un grupo hemo en solución se oxida a Fe(III) cuando se
combina con el O2., pero la cavidad de la Mb y de la Hb en donde el
hemo se une evita que esto suceda. Rosario A. Muñoz-Clares
FUNCIONES DEL GRUPO HEMO EN LAS
PROTEÍNAS

Protoporfirina IX + Fe(II)

Proteínas Función

Mioglobina y hemoglobina Unión reversible de O2


(transporte)

Catalasa Conversión del H202 a H20

Citocromo C Transporte de electrones en


la cadena respiratoria
mitocondrial

Rosario A. Muñoz-Clares
Coordinación del átomo de Fe(II)
• Desoximioglobina (DesoxiMb) o
desoxihemoglobina (DesoxiHb)
•  Penta-coordinado con
•  4 N del anillo de la porfirina
•  1 N del residuo de histidina
proximal

•  Oximioglobina (OxiMb) u
oxihemoglobina (OxiHb)
•  Hexa-coordinado con
•  4 N del anillo de la porfirina,
•  1 N del residuo de histidina
proximal,
•  la molécula de O2

Rosario A. Muñoz-Clares
HISTIDINAS PROXIMAL Y DISTAL EN
MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA

Histidina distal

•  La histidina proximal
está unida por un
enlace de coordinación
al ión Fe2+.

•  La histidina distal está


unida por puente de
hidrógeno a la molécula
de O2.
Histidina proximal

Rosario A. Muñoz-Clares
UNIÓN DEL O2 Y DEL CO EN MIOGLOBINA Y
HEMOGLOBINA

•  En la Mb y Hb la molécula de O2 se une en forma oblicua al ion Fe2+.


•  El monóxido de carbono, CO, tiene una afinidad por el hemo mucho
mayor que la del O2 debido a que se une en forma perpendicular al ion
Fe2+.

•  Sin embargo, en la Hb y Mb la posición de la histidina distal obliga a la


molécula de CO a unirse como el O2, es decir en forma oblicua, lo que
disminuye mucho su afinidad por el Fe(II).
Rosario A. Muñoz-Clares
DEGRADACIÓN DEL GRUPO HEMO

•  En la degradación del
grupo hemo, que
normalmente se lleva a
cabo en el hígado, se
produce monóxido de
carbono.

•  La biliverdina y la
bilirrubina son las
responsables de los
colores de los
hematomas.

Rosario A. Muñoz Clares


ESPECTROS DE ABSORCIÓN DE LA LUZ
DE LA HEMOGLOBINA
•  El ión Fe(II) absorbe
diferente la luz si está
unido a la molecula
de O2.

•  Las diferencias en
los espectros de
absorción de las
oxiMb u oxiHb con los
de las desoxiMb o
desoxiHb permiten
conocer la proporción
de las formas
oxigenadas a
diferentes
concentraciones de
O2.
Rosario A. Muñoz-Clares
UNIÓN DEL O2 A LA MIOGLOBINA
Se establece el equilibrio:

desoxiMb + O2 oxiMb

YO2 = fracción de saturación = [oxiMb] / [Mb] total

La YO2 depende en forma hiperbólica de la concentración de oxígeno,


de acuerdo a la siguiente ecuación:

YO2 = pO2 / (P50 + pO2)

La P50 es la concentración de oxigeno a la que el 50% de la Mb está


oxigenada. Por tanto, es una medida de la afinidad de la Mb por el
oxígeno.

Rosario A. Muñoz-Clares
SATURACIÓN POR O2 DE LA Mb

•  La unión hiperbólica y la
afinidad de la MB por el O2
implica que la Mb oxigenada
sólo puede soltar el O2 si la
concentración de éste
disminuye mucho.

•  Dada la afinidad de la Mb
por el O2, casi toda la Mb
está oxigenada en un 90% a
la concentración de O2 que
existe en los capilares del
músculo, pero desoxigenada
en las inmediaciones de la
membrana externa de la
mitocondria de los miocitos,
donde la concentración de
O2 es casi cero.

Rosario A. Muñoz-Clares
ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE LA
HEMOGLOBINA

•  Las cadenas
polipeptídicas de la
hemoglobina se
ordenan en forma
simétrica.

•  El arreglo
simétrico de las
subunidades es
muy frecuente en
las proteínas con
estructura
cuaternaria.

Rosario A. Muñoz-Clares
UNIÓN DEL O2 A LA HEMOGLOBINA
Se establecen cuatro equilibrios:
P501
Hb + O2 HbO2
P502
HbO2 + O2 Hb(O2)2
P503
Hb(O2)2 + O2 Hb(O2)3
P504
Hb(O2)3 + O2 Hb(O2)4
P501 > P502 > P503 > P504
Cooperatividad positiva
La YO2 depende en forma sigmoidal de la concentración de
oxígeno, de acuerdo a la siguiente ecuación:

YO2 = (pO2)4 / {(P50)4 + (pO2)4 }


La P50 es la concentración de oxigeno a la que el 50% de la
Hb está oxigenada. Por tanto, es una medida de la afinidad
de la Hb por el oxígeno.
Rosario A. Muñoz-Clares
UNIÓN DEL O2 A LA MIOGLOBINA Y HEMOGLOBINA

MIOGLOBINA

YO2 = pO2 / (P50 + pO2)

HEMOGLOBINA

YO2 = (pO2)4 / {(P50)4 + (pO2)4 }

YO2 = fracción de saturación = [oxiProteína] / [Proteína]total

pO2 = [O2], P50 = concentración de O2 que produce el 50% de saturación

Rosario A. Muñoz-Clares
SATURACION POR O2 DE LA Hb

•  La saturación
sigmoidal de la Hb
por el O2 indica
cooperatividad
positiva entre las
subunidades de
Hb, de manera que
el O2 se une cada
vez mejor a
medida que estas
subunidades se
van llenando. Y
viceversa, se une
peor a medida que
estas subunidades
se van vaciando.
P50
Rosario A. Muñoz-Clares
RELEVANCIA FISIOLÓGICA DE LA
COOPERATIVIDAD POSITIVA DE UNIÓN
DEL O2 EN LA HB

¿Por qué la Hb necesita poseer cooperatividad positiva


de unión al oxígeno?

•  Porque las diferencias entre las concentraciones de O2


a las que se satura en los pulmones y las que encuentra
en los capilares de los tejidos periféricos son pequeñas
(sólo de 3-4 veces).

Rosario A. Muñoz-Clares
LA MIOGLOBINA NO NECESITA UNIR AL O2
COOPERATIVAMENTE PARA
TRANSPORTARLO EFICIENTEMENTE

¿Por qué la Mb no necesita poseer cooperatividad


positiva de unión al oxígeno?

•  Porque las concentraciones de O2 a las que se satura


en las células musculares son muchas veces mayores
que las que encuentra en la vecindad de las mitocondrias
donde tiene que liberar al O2

•  Porque la cooperatividad positiva de unión de un


ligando solo puede darse en una proteína oligomérica no
en una monomérica.
Rosario A. Muñoz-Clares
RELEVANCIA FISIOLÓGICA DE LAS DIFERENCIAS EN
LA SATURACION POR O2 DE LA Hb Y LA Mb

•  El O2 fluye de la Hb
hacia la Mb debido a
las diferencias de afinidad
de estas dos proteínas y a
la cooperatividad positiva
de la Hb. La Mb se carga
con el O2 que suelta la Hb.

Rosario A. Muñoz-Clares
RELEVANCIA FISIOLÓGICA DE LA
COOPERATIVIDAD POSITIVA DE UNIÓN
DEL O2 EN LA HB

¿Por qué la Hb es oligomérica y la Mb es monomérica?

•  Porque la cooperatividad positiva de unión a un ligando


sólo puede darse en una proteína oligomérica no en una
monomérica.

Rosario A. Muñoz-Clares
MECANISMO MOLECULAR DE LA
COOPERATIVIDAD POSITIVA DE UNIÓN DEL O2
EN LA HB

¿Cómo se produce a nivel molecular la cooperatividad


positiva de unión al O2?

•  La cooperatividad positiva surge porque:

•  Las subunidades de la Hb pueden existir en dos


estados conformacionales diferentes, uno de baja
afinidad (T) por el O2 y otro de alta afinidad (R).

•  Todas las subunidades de una molécula dada tienen


que tener el mismo estado conformacional.

Rosario A. Muñoz-Clares
LA HEMOGLOBINA POSEE DOS ESTADOS
CONFORMACIONALES
•  A medida que se satura, la Hb pasa
de un estado de baja afinidad por el O2
a uno de alta afinidad, y viceversa a
medida que libera el O2 .

•  Esto permite que se sature por O2 a


la presión parcial de éste que existe
en los capilares pulmonares, y que
libere el O2 a la presión a la presión
parcial que existe en los capilares de
los tejidos.

•  Si existiese sólo el estado de alta


afinidad se saturaría en los capilares
pulmonares pero al llegar a los
capilares de los tejidos liberaría muy
poco O2. Si existiese sólo el de baja
afinidad no se saturaría en los
pulmones. En cualquier caso, el O2
liberado en los tejidos sería
insuficiente. Rosario A. Muñoz-Clares
MODELO CONCERTADO DE DOS ESTADOS O
DE SIMETRÍA

•  En ausencia de O2 la forma
termodinámicamente más estable es la T.

•  A medida que se incrementa la


concentración de O2 el equilibrio se
desplaza hacia la forma R, de manera que
aparecen subunidades vacías de alta
afinidad que se llenan a la concentración
de O2 a la que se produzca este cambio.

•  Y viceversa, una vez que disminuye la


concentración de O2 y tenemos el estado
R con una o pocas subunidades
ocupadas, el equilibrio se desplaza hacia
la forma T de manera que el oxígeno se
Estado T Estado R
alta afinidad
libera de donde estaba unido.
baja afinidad
Rosario A. Muñoz-Clares
MECANISMO MOLECULAR DE LA
COOPERATIVIDAD POSITIVA DE UNIÓN DEL O2
EN LA HB

¿Cuáles son las diferencias estructurales entre estos dos


estados conformacionales que explican su diferente
afinidad por el O2?

•  La unión del O2 provoca cambios en la estructura terciaria de


las subunidades que tienen como consecuencia cambios en la
estructura cuaternaria de la molécula.

Rosario A. Muñoz-Clares
CAMBIOS EN EL GRUPO HEMO AL UNIR EL O2

•  El radio iónico del Fe2+ disminuye al pasar del estado penta-


coordinado al sexta-coordinado.
•  El Fe2+ al moverse hacia el centro del anillo de la porfirina
arrastra a la His proximal a la que está unido por el enlace de
coordinación.

Estado T Estado R
(DesoxiHB) OxiHb

Rosario A. Muñoz-Clares
TRANSICIÓN DESOXIHb→OXIHb
!  El movimiento de la
histidina proximal
arrastra a la hélice α a la
que este residuo
pertenece.

!  A su vez, el
movimiento de la hélice
se transmite a la
estructura terciaria de la
subunidad.

!  Finalmente, este
cambio conformacional
se transmite a las otras
subunidades a través de
las interacciones de las
intercaras entre ellas.

Rosario A. Muñoz-Clares
DOS ESTADOS CONFORMACIONALES DE LA Hb

•  Las estructuras cuaternarias de la desoxiHb y oxiHb son diferentes

Estado T Estado R
(desoxiHb) (OxiHb)

•  El estado T es de baja afinidad


•  El estado R es de alta afinidad
Rosario A. Muñoz-Clares
FACTORES QUE REGULAN EL GRADO DE
OXIGENACIÓN DE LA HEMOGLOBINA

•  Además de la concentración de O2, otras moléculas


e iones regulan el grado de oxigenación de la Hb:

–  CO2 Se produce en los tejidos por el metabolismo


oxidativo.

–  H+ Su concentración aumenta en los tejidos por el CO2


que se forma en el metabolismo oxidativo.

–  Bifosfoglicerato (BPG) Se encuentra en el interior de


los eritrocitos a concentraciones equimolares con las
de la Hb.

Rosario A. Muñoz-Clares
FACTORES QUE REGULAN EL GRADO DE
OXIGENACIÓN DE LA HEMOGLOBINA

¿Para qué se necesita esta regulación?

Para que en los tejidos se desplace aún más el


equilibrio entre la oxiHb y la desoxiHb hacia la
desoxiHb, de manera que la Hb libere más del O2 que
transporta.

Además, el pH y la concentración de CO2 son


indicadores de la actividad metabólica del tejido y
por tanto de sus requerimientos de O2.

Rosario A. Muñoz-Clares
FACTORES QUE REGULAN LA OXIGENACIÓN
DE LA HEMOGLOBINA

•  Concentración de CO2
CO2
OxiHb O2 + DesoxiHb DesoxiHb-COO- + H+

•  Concentración de H+
xH+
OxiHb O2 + DesoxiHb DesoxiHb protonada

•  Concentración de bifosfoglicerato (BPG)


BPG
OxiHb O2 + DesoxiHb BPG-DesoxiHb

Rosario A. Muñoz-Clares
TRANSPORTE DE CO2 POR LAS SUBUNIDADES β
DE LA DESOXIHEMOGLOBINA

•  Parte del CO2 producido en la respiración se transporta desde


los tejidos periféricos a los pulmones como carbamatos
formados con los grupos amino terminales de las subunidades
β de la desoxihemoglobina.

Rosario A. Muñoz-Clares
EFECTO DEL pH SOBRE LA UNIÓN DEL O2 EN LA HB
(Efecto Bohr)

•  La menor afinidad
por el O2 de la Hb a
medida que baja el
pH se mide por el
aumento en la P50

Rosario A. Muñoz-Clares
EFECTO DEL pH SOBRE LA UNIÓN DEL O2 EN LA HB
(Efecto Bohr)
CO2 + H2O -HCO + H+
3 •  La afinidad por el O2 de la Hb
disminuye a medida que baja
el pH.

•  El metabolismo oxidativo
hace que baje el pH de los
tejidos por la producción de
CO2.

•  A la concentración de O2 de
los tejidos la Hb está saturada
casi un 50% a pH 7.6,
aproximadamente un 35% a
pH 7.4 y sólo un 20% a pH 7.2.

•  A la concentración de O2 de
los pulmones la Hb está
saturada casi un 100% a
cualquiera de estos valores
de pH.
Rosario A. Muñoz-Clares
EFECTO DEL pH SOBRE LA UNIÓN DEL O2 EN LA HB
(Efecto Bohr)

•  La Hb toma O2 al
pasar de un pH 7.4
a un pH 7.6, aunque
exista la misma
concentración de
O2 en el medio.

Rosario A. Muñoz-Clares
EFECTO DEL pH SOBRE LA UNIÓN DEL O2 EN LA HB
(Efecto Bohr)

•  Y viceversa, la Hb
cede O2 al pasar de
un pH 7.4 a un pH
7.2, aunque exista
la misma
concentración de
O2 en el medio.

Rosario A. Muñoz-Clares
BASES ESTRUCTURALES DEL
EFECTO BOHR
•  En la desoxiHb, pero no en la oxiHb, el residuo de His del
carboxilo terminal de las subunidades β está próximo a un
residuo de Asp , por lo que se disminuye el pKa de esta His.

•  Por ello, la Hb toma protones al pasar de la forma oxi a la


desoxi y un pH bajo favorece la forma desoxi.

Rosario A. Muñoz-Clares
DOS ESTADOS CONFORMACIONALES DE LA Hb

•  Las estructuras cuaternarias de la desoxiHb y oxiHb son diferentes

Estado T Estado R
(desoxiHb) (OxiHb)

•  El estado T es de baja afinidad


•  El estado R es de alta afinidad
Rosario A. Muñoz-Clares
EFECTOS ADITIVOS DEL pH Y DE LA
CONCENTRACIÓN DE CO2 SOBRE LA UNIÓN DEL
O2 EN LA HEMOGLOBINA

•  La Hb cede aun más O2 en


los tejidos por los efectos
aditivos del bajo pH y la
alta concentración de CO2

Rosario A. Muñoz-Clares
EFECTOS DEL BPG SOBRE LA UNIÓN DEL O2 A LA HB

•  La Hb en la sangre
completa tiene
menor afinidad por
el O2 que la Hb
aislada en presencia
de CO2, y su afinidad
es aun menor que la
de la Hb sola.

Rosario A. Muñoz-Clares
EFECTOS DEL BPG SOBRE LA UNIÓN DEL O2 A LA HB

•  Si se añade BPG a la
disolución de Hb
aislada se disminuye
su afinidad por el O2,
pero la afinidad es
aún mayor que la de
la Hb en sangre
completa.

Rosario A. Muñoz-Clares
EFECTOS DEL BPG SOBRE LA UNIÓN DEL O2 A LA HB

•  La afinidad de la Hb
aislada por el O2 iguala a
la de la Hb en sangre
completa cuando se
añade a la disolución de
Hb aislada BPG y CO2.

•  A las concentraciones
de O2 que existen en los
pulmones la saturación
de la Hb es casi igual
con y sin BPG y CO2.

Rosario A. Muñoz-Clares
CORRELACIÓN ENTRE LOS CAMBIOS EN LA
CONCENTRACIÓN DE BPG Y LA AFINIDAD DE LA
HEMOGLOBINA POR EL O2

Rosario A. Muñoz-Clares
BASES ESTRUCTURALES DEL EFECTO DEL BPG
SOBRE LA UNIÓN DEL O2 A LA HB

Rosario A. Muñoz-Clares
BASES ESTRUCTURALES DEL EFECTO DEL BPG
SOBRE LA UNIÓN DEL O2 A LA HB

•  El BPG se une a la cavidad


central de la molécula de
desoxiHb, la formada por las
cuatro subunidades.

•  El BPG forma numerosos


puentes salinos con las
cadenas laterales cargadas
positivamente de residuos de
His, Lys y con el grupo amino
terminal de las dos
subunidades α.

•  El BPG no puede unirse a esta


cavidad en la oxiHb porque no
hay suficiente espacio.

Rosario A. Muñoz-Clares
CAVIDAD CENTRAL DE LAS MOLÉCULAS DE
DESOXI Y OXIHEMOGLOBINA

Desoxihemoglobina Oxihemoglobina

Rosario A. Muñoz-Clares
FLUJO DEL O2 DE LA HEMOGLOBINA
MATERNA A LA HEMOGLOBINA FETAL

•  La afinidad de la Hb
fetal por el O2 es mayor
que la de la Hb materna
porque está formada
por dos subunidades γ
en las que no existen
los residuos de His que
interaccionan con el
BPG.

•  La desoxiHb fetal une


por esto pobremente al
BPG.

Rosario A. Muñoz-Clares
ERITROCITOS NORMALES

Rosario A. Muñoz-Clares
ERITROCITOS EN ANEMIA FALCIFORME

Rosario A. Muñoz-Clares
RUPTURA DE ERITROCITOS EN
ANEMIA FALCIFORME

•  En la anemia
falciforme se
forman
fibras de
desoxiHb
que rompen al
eritrocito.

Rosario A. Muñoz-Clares
MUTACIÓN EN LA HEMOGLOBINA FALCIFORME

•  La formación de fibras de
Hb se debe a una mutación
en las cadenas β

Sequencia normal: ..Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys...


Sequencia mutada: ..Leu-Thr-Pro-Val-Glu-Lys...

El residuo de valina se une por interacciones


hidrofóbicas con una cavidad que existe en la
superficie de las subunidades β en la
desoxiHb.

Rosario A. Muñoz-Clares
FORMACIÓN DE FIBRAS DE HEMOGLOBINA
FALCIFORME

Rosario A. Muñoz-Clares

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