FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA

EDUCACIÓN
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
PROGRAMA DE BIOLOGÍA

PRUEBAS GENERALES PARA CARBOHIDRATOS

Resumen
Los carbohidratos son moléculas esenciales para los sistemas biológicos, son la
fuente esencial de energía, además de ser los productos iniciales para la síntesis de
grasas y aminoácidos no esenciales en la mayoría de los organismos. En el
laboratorio se realizaron pruebas a 9 muestras de carbohidratos diferentes con el
objetivo de determinarlos e identificarlos cualitativamente, así como familiarizarse
con la metodología de las pruebas. Se lograron clasificar por sus características
principales a partir de resultados colorimétricos de las 6 pruebas y determinaron si
era un carbohidrato, una cetohexosa, pentosas o hexosas, un polisacárido, un
azúcar reductor o monosacárido. Finalmente, se concluye que las pruebas funcionan
para caracterizar carbohidratos de acuerdo a su estructura, pero los factores de la
metodología son claves para un buen resultado.

.
 Resultados
Figura 1. Resultados cualitativos de la prueba
de Molish, colores atípicos, se utilizó material
sucio, posible contaminación. Falsos negativos.
Figura 3. Se observaron 3 colores distintos.
Para la fructosa y muestra de jugo predominó el
color rojo, siendo las primeras en reaccionar,
posteriormente reacciona la sacarosa luego de 1
minuto con el mismo color. En el minuto 2 y 3, la
ribosa, y la muestra problema adquieren una
tonalidad verde. Finalmente el almidón y la
glucosa presentan color amarillo oscuro; cabe
resaltar que aunque en un principio la muestra
de jugo toma color rojo, en el minuto 4 cambia
nuevamente a amarillo oscuro. Similar a la
galactosa, donde los cambios a un color verde
se reflejan en el último minuto.
Figura 2: Resultados cualitativos de la prueba
de Seliwanoff resultó positiva para la fructosa,
la muestra de jugo y la sacarosa (color rojizo)
en ese orden de tiempo. Y negativa para el
almidón, la glucosa, galactosa, ribosa, lactosa y
muestra problema.
Figura 4. La prueba de Benedict dio positivo
para la glucosa, galactosa, ribosa, fructosa,
lactosa y maltosa al tornarse de un color rojo.
Las soluciones de almidón, sacarosa, muestra
problema y el agua dieron negativos al no
cambiar de color.
 Figura 5. Resultados de la prueba de yodo,
solo dio positivo para el almidon al presentar
cambio de color, el resto de los soluciones
dieron negativo para esta prueba.
Figura 6. Resultados de la prueba de
Barfoed, precipitado rojo marca como positivo
para sacarosa, glucosa, galactosa, ribosa,
fructosa, muestra problema. El resto de las
soluciones dio negativo al no presentar
precipitado

Tabla 1. Resultados de las pruebas de caracterización de carbohidratos a las 9 muestras problema

CARBOHIDRATOS PRUEBAS

Molish Seliwanoff Bial Benedict Lugol Barfoed

Almidón + - Poco precp. rojo - + -

Sacarosa + + Amarillo oscuro + - +

Glucosa - - Amarillo oscuro + - +

Galactosa + - Verde oscuro + - +

Ribosa + - Verde + - +

Fructosa + + Rojo fuerte + - +

Lactosa + - Verde + - -

Muestra problema + + Amarillo oscuro + - -

1 (jugo)

Muestra problema - - Verde oscuro + - +

Análisis de resultados

Para entender los resultados en las diferentes pruebas primero se debe tener en
cuenta las características de cada reactivo otorgadas por la misma estructura interna
de las moléculas.
Almidón. Es una cadena larga de glucosa Sacarosa. disacárido formado por glucosa
en forma de amilosa y amilopectina y fructosa.

Glucosa. Monosacárido, clasificado Galactosa. Monosacárido, clasificado como

como hexosa con un grupo hexosa con un grupo hemiacetal
hemiacetal en el C anomérico. en el C anomérico.

Ribosa. Monosacárido, clasificado Fructosa. Monosacárido, clasificado como

como pentosa con un grupo hemiacetal pentosa con un grupo acetal en su C
en su C anomérico. anomérico.

Lactosa. disacárido conformado por la unión de una molécula de glucosa y otra de galactosa

Prueba de Molisch

En esta prueba la presencia de carbohidratos es positiva debido a la actividad del

ácido sulfúrico el cual provoca una deshidratación en las muestras que contenían
carbohidratos figura 7 y da paso a la formación de compuestos furfúricos, los cuales
pasan a reaccionar con el reactivo de Molisch figura 8, haciendo que aparezca
este viraje en la coloración al formarse un complejo violeta, púrpura o sus
derivados.[1] Como se observa en la siguiente reacción:
 Figura 7 : Deshidratación de carbohidratos a hidroximetilfurfural o a furfural

Figura 8: Reacción ocurrida durante la prueba de Molisch

Según los datos obtenidos, se presentaron colores en la gama de púrpura en

diferentes intensidades y muy bajas excepto en la glucosa y en la muestra problema
como se ve en la figura 1 Según la teoría, el color resultante de la prueba de
Molisch puede variar según las concentraciones y el tipo de carbohidrato presente
en la muestra, por lo que se toman como resultados positivos. Por otro lado la
glucosa generó un precipitado amarillo no esperado en la prueba, al igual que la
galactosa y la muestra 2; en algunos casos la presencia de algunos compuestos
fenolicos puede interferir en la formacion del furfurar produciendo un color amarillo,
no obstante, la glucosa no coniene compuestos fenolicos por lo que el error en los
resultados se considera puntualmente experimental y sistémico, se le atribuye a
impurezas en los instrumentos utilizados que impidieron la interaccion entre el acido
y el alfa- naftol, obteniendo intensidades de color bajas o nulas. [2]
El problema muestra un resultado negativo, aunque no es confiable debido al error
no controlado.

Prueba de seliwanoff

Los resultados demostraron visualmente como la prueba y el reactivo tiene

selectividad por las cetosas y aldosas. El medio pasó de incoloro a rojo: la fructosa,
el jugo y la sacarosa reaccionaron primero con el reactivo figura 2. En la prueba se
produce una reacción de deshidratación, que da lugar al hidroximetilfurfural, el cual
reacciona más rápido con las cetohexosas dando lugar a un producto rojo oscuro
mediante una reacción de condensación figura 9. [3]

Figura 9: reacción de deshidratación y condensación en prueba de seliwanoff

Se esperaba que tan solo la fructosa diera un resultado positivo al ser una
cetohexosa, sin contar con la muestra 1 y la muestra 2 donde no conocemos
específicamente sus compuestos. A pesar de ello, la sacarosa da positiva, se infiere
que se lleva a cabo una hidrólisis ácida, lo que la convierte en un azúcar invertido o
invertasa, donde se rompe el enlace alfa (1-2), generando como productos la D-
glucosa y la D- fructosa como se detalla en la figura 10, por lo que esta última
molécula logra reaccionar con el reactivo, permitiendo que la reacción con esta
prueba de un resultado positivo. [4]

Figura 10 : Hidrólisis de la sacarosa

En el caso de las aldohexosas, solo se tornan un poco anaranjadas; sin embargo, el

color sigue siendo traslúcido, he aquí la importancia del tiempo de reacción, ya que
el calentamiento prolongado puede provocar incluso la isomerización de la glucosa
en fructosa, arrojando un resultado positivo.
Cabe resaltar, que con la muestra de jugo de toronja (M1) se obtiene un resultado
positivo debido a que contiene principalmente carbohidratos simples, en forma de
azúcares naturales como la fructosa, glucosa y sacarosa, lo que permite que tanto la
fructosa como la sacarosa al hidrolizarse reaccionen con el reactivo de seliwanoff
produciendo un resultado positivo, es importante mencionar que la cantidad de
carbohidratos presentes en el jugo puede variar.

Prueba de Bial

La reacción de bial usa como mecanismo la oxido-reducción para convertir los

grupos aldehídos de las pentosas en ácidos aldónicos que reaccionan con el
reactivo formando un complejo cúprico color verde azulado. Teniendo en cuenta que
el reactivo Bial está conformado por un complejo cúprico en solución ácida, tartrato
de sodio y potasio como agentes complejantes [5] Por otra parte, para el caso de las
hexosas, al contener como grupo funcional una cetona y no un aldehído, se produce
una reacción distinta, que causa la deshidratación de su grupo funcional color
marrón o rojo, como se detalla en la figura 11.

Figura 11 : Reacción de bial con pentosas y hexosas

Para la prueba de bial es esencial tener en cuenta el tiempo de reacción, en este

caso la primera en reaccionar fue la fructosa adquiriendo un color rojo fuerte, esto se
debe a que la molécula es mucho más sensible a la prueba, ya que tiene un grupo
cetona en su estructura, que reacciona más rápido y con mayor intensidad en
comparación del grupo funcional aldehído. [6]

Posteriormente, reacciona la sacarosa, aunque no se esperaba su reacción, pudo

ocurrir una hidrólisis, liberando glucosa y fructosa, ambas cetohexosas que
permitieron la formacion de una solucion de color amarillo oscuro figura 10.

La lactosa es un disacárido formado por la unión de una molécula de glucosa y una

molécula de galactosa mediante un enlace glucosídico beta (1-4). La estructura de la
lactosa no contiene un grupo aldehído o cetona libre que pueda reaccionar con el
reactivo de Bial. Por lo tanto, la lactosa no debería dar una reacción positiva en la
prueba de Bial para pentosas.
Sin embargo, esta puede hidrolizarse figura 12 en presencia de ácido y temperatura
elevada para producir una molécula de glucosa y una molécula de galactosa.

Figura 12 : Hidrólisis de la lactosa

Asimismo, en el caso de la galactosa. la prueba bial dió positiva para pentosas a

pesar de no ser una, ya que en algunos casos puede ser susceptible al grupo
funcional aldehído, sin embargo, es posible que la intensidad de la reacción sea
mucho más débil que para las pentosas, además se le debe sumar un factor
importante y es el tiempo de reacción, ésta tardó más minutos en comparación con
la ribosa para reaccionar [7]

Prueba de Benedict

La prueba de Benedict se utiliza para determinar la presencia de azúcares

reductores, en esta prueba los monosacáridos se van a encontrar en su forma lineal
debido al NaOH (presente en el reactivo) que forma un medio básico. Este último
también reacciona con el sulfato de cobre para formar hidróxido de cobre en
presencia de calor.

El hidróxido de cobre reacciona con el grupo aldehído de los monosacáridos para

formar óxido de cobre el cual da una coloración rojiza el cual indica positivo para
azúcar reductor.

Según esto, es de esperar que todos los monosacáridos al tener un grupo aldehído
den positivo para el reactivo de Benedict, lo cual concuerda con los resultados
obtenidos. Por otra parte los disacáridos como la lactosa dieron positivo marcando
una fase rojiza y otra azul como se ve en la figura 4 ya que tienen un extremo
reductor libre, en el caso de la sacarosa (disacárido) se infiere que debido a una
prolongada exposición al calor, se hidrolizó en los monosacáridos que la componen
figura 10 y produjo la oxidación. El almidón, a pesar de tener un extremo reductor
tiene muchos más extremos no reductores lo cual lo hace difícilmente oxidable.[8]
 Prueba de lugol

La prueba de yodo es específica para la identificación de yodo, en esta prueba no se

da ninguna reacción química, lo que sucede en esta prueba es que el almidón forma
un complejo con el yodo, en el que este último se acomoda entre la amilopectina,
por esta razón da negativo la prueba para el resto de las muestras, figura 5.

En este complejo, las cadenas de glucosa se enrollan alrededor del yodo, formando
una estructura helicoidal, aquella estructura es capaz de absorber la luz de
diferentes longitudes de onda, lo que le da al complejo la coloración azul oscuro o
violeta característico. Es importante destacar que la reacción de la prueba de lugol
no es una oxido reducción, sino una reacción de formación de complejos. [9]

Prueba de Barfoed

Se utiliza para detectar monosacáridos reductores en disolución. Los monosacáridos

reductores son oxidados por el ion de cobre, formando ácido carboxílico y una
precipitación rojiza de ion cobre figura 13. Los disacáridos reductores tienen la
misma reacción pero lo hacen más lento.[10]

Figura 13: Prueba de Barfoed

tomado de: https://microbenotes.com/barfoeds-test/

Es similar a la prueba de Benedict, pero esta vez se hace en medio ácido por lo cual
se corre el riesgo de que los enlaces de los disacáridos se hidrolicen y también den
positivos. En los resultados únicamente el almidón, la lactosa y el jugo dieron
negativo como se detalla en la figura 6, el almidón al ser un polisacárido se espera
un resultado negativo y concuerda con lo esperado, no se tuvo en cuenta el tiempo
de reacción por lo que pudo afectar los resultados de los disacáridos como la lactosa
y sacarosa al igual que en las otras pruebas. El jugo al dar negativo se espera que
sea un disacárido.

Preguntas complementarias
¿Por qué la fructosa da una prueba positiva con el reactivo de Benedict el cual
es específico para azúcares reductores?
Un azúcar reductor, es un tipo de carbohidrato que tiene la capacidad de llevar a
cabo reacciones de oxido-reducción al donar electrones y de esta manera oxidarse,
gracias a que contienen grupos funcionales como cetonas o aldehídos dentro de su
estructura. En el caso de la fructosa, la prueba de Benedict arroja un resultado
positivo ya que contiene un grupo funcional cetona, que es capaz de donar
electrones y como resultado oxidarse a sí mismo. No obstante, este azúcar reductor
se considera menos reactivo que la glucosa y otros azucares reductores, ya que su
forma cíclica o de anillo hace que el grupo cetona esté menos disponible para
reaccionar con otros compuestos; incluso, la fructosa puede actuar en ciertos casos
como azúcar no reductor, debido a que puede formar enlaces covalentes con otras
moléculas. Sin embargo, de acuerdo a los datos obtenidos en la prueba de Benedict,
la fructosa actúa como azúcar reductor posiblemente porque esta se encuentra en
su forma lineal, permitiendo que el grupo cetona sea más accesible a reaccionar con
otros compuestos. [11]

¿Por qué se dice que la maltosa y la lactosa tienen un potencial grupo

aldehído?

Tanto la lactosa como la maltosa son disacáridos, una compuesta por una molécula
de glucosa y otra de galactosa, mientras que la segunda compuesta por dos
moléculas de glucosa, la importancia como potencial grupo aldehído radica en la
molécula de glucosa, que participa en la formación del enlace glucosídico y que
presenta en su estructura este grupo funcional, que se caracteriza por ser muy
reactivo y participar en reacciones de oxido-reducción. A pesar de que estos dos
carbohidratos no presentan grupos aldehídos libres en su estructura , se dice que
tienen un potencial grupo aldehído debido a que la molécula de glucosa participa en
el enlace glucosídico, por lo tanto , se puede establecer que aunque la lactosa y la
maltosa no son reductores en condiciones normales, en condiciones de oxidación
tienen un potencial grupo aldehído que les permitirá actuar como reductores. [12]

2.7.3 ¿Por qué el glucógeno y el almidón dan resultados negativos para los
azúcares reductores?
Los polisacáridos como el glucógeno y el almidón no poseen poder reductor porque
no se oxidan fácilmente, esto debido a que son cadenas ramificadas de glucosa que
contienen solo un extremo reductor y muchos extremos no reductores.
2.7.4 Explique por qué en la prueba de Barfoed los disacáridos reaccionan más
lentamente que los monosacáridos.

El reactivo de barfoed se compone de acetato de cobre que contiene el cobre que se

va a reducir y ácido acético que da el medio ácido para mejorar el rendimiento de la
reacción de oxidación de los carbohidratos.

Los monosacáridos reaccionan directamente para oxidarse, pero en disacáridos

primero se tienen que hidrolizar el enlace glucosídico, reacción que se favorece en el
medio ácido.

Conclusiones

- Las pruebas realizadas durante la práctica son herramientas útiles en el

análisis de carbohidratos y pueden proporcionar información valiosa sobre la
composición de las muestras, debido a que pueden ser ampliamente
utilizadas por ejemplo en la industria alimentaria y en la investigación
biomédica

- Las reacciones de Seliwanoff, Bial, al igual que la prueba de molisch, se

basan en la formación de furfural o sus derivados, permitiendo que ante la
detección de determinadas estructuras o grupos funcionales, formen
complejos coloreados que permitan identificar y clasificar la muestra entre los
diferentes tipos de carbohidratos que existen a excepción de la prueba de
molisch, que establece o no la presencia de carbohidratos.

- Se establece que el tiempo de reacción es esencial, ya que el calor y un

medio ácido puede conllevar a la hidrólisis de ciertas moléculas, como el caso
de la sacarosa, donde en la pruebas de benedict, seliwanoff y bial se
obtuvieron falsos positivos como resultado.

- Los protocolos de las pruebas son esenciales y se debe practicar para un

buen resultado, factores como la concentración de la muestra y los reactivos,
el tiempo de exposición, calidad de los instrumentos. Son decisivos para
correctos resultados.

- A pesar de que la muestra problema 2 en la prueba de molisch no formó un

complejo violeta, se puede establecer que es un carbohidrato gracias a las
pruebas posteriormente realizadas, con las que se pudieron establecer las
 siguientes características: Es un monosacárido, no es una cetohexosa, es
una pentosa; adicionalmente, es un azúcar reductor.

Bibliografía

1) Anderson Guarnizo Franco, Pedro Nel Martínez Yepes, En experimentos de quimica

orgánica; editorial Elizcom S.A.S. Costa Rica (2007) p. 138. ISBN:9789589774465,
9589774466
2) Artículo : "Effect of impurities on the Molisch test for carbohydrates" de RB Wardle y
RM Preece (Journal of Clinical Pathology, 1962).
3) Debnath, S., Biswas, S., & Mukherjee, A. K. (2016) Un estudio comparativo de
diferentes métodos de estimación de azúcar reductor. Revista Internacional de
Estudios Químicos4(4), 26-30. (India)

4) "Hydrolysis of sucrose", por Daniel L. Kirsch, publicado en la revista Journal of

Chemical Education (Estados Unidos), en el año 1973.
5) Benedict, S. R. (1909). A reagent for the detection of reducing sugars. Journal of
Biological Chemistry, 5(6), 485-487. Estados Unidos..

6) Lenhinger, A. L., Nelson, D. L & Cox, M.M. En Principios de la bioquimica (2017)

Seccion 11.2 “Monosacaridos” Editorial: Omega. (Estados Unidos)
7) Stryer, L., Berg, J. M., & Tymoczko, J. L. (2007). Biochemistry (6th ed.). W.H.
Freeman and Company. (Estados unidos)Chapter 7: Carbohydrates and Glycobiology

8) Fundamentos de la prueba de Benedict y Lugol. (2023, 1 de abril). Scribd,

recuperado
de:https://es.scribd.com/doc/280382388/Fundamento-de-Prueba-de-Benedict-y-Lugol
9) Vázquez-Carrillo, L. I., Sánchez-Pardo, M. E., & Rivera-Cabrera, F. (2009).
Introducción a la química de los alimentos. México: Limusa p.10
10) Brown, W. H., Foote, C. S., Iverson, B. L., & Anslyn, E. V. (2018). Organic Chemistry
(8th ed.). Cengage Learning. (Estados Unidos) - www.cengage.com
11) Kamerling, J. P., & Gerwig, G. J. Em glicosilación (2004) Capítulo 4” Comprehensive
glycoscience”. Eds Montreuil, J.I. Vol 1. pp. 61- 86

12) Brown, W. H., Foote, C. S., Iverson, B. L., & Anslyn, E. V. (2018). Organic Chemistry
(8th ed.). Cengage Learning. (Estados Unidos) - www.cengage.com
13) Tahuilan, B. (2021, April 8). ¿por qué los polisacaridos no son reductores?
Aleph.org.mx. https://aleph.org.mx/por-que-los-polisacaridos-no-son-reductores