UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA INDOAMÉRICA

CARRERA:

MEDICINA

TEMA:

INFORME DE GENÉTICA BÁSICA

AUTORES:
ÁNGELES BARRERA
MABELIN MENA
MIKAELA VILLAMAR
RUTH YANCHA

DOCENTE:

DRA. PATRICIA SALERNO

 ÍNDICE

Contenido

ÍNDICE.............................................................................................................................2

INTRODUCCIÓN...........................................................................................................3

MÉTODOS.......................................................................................................................4

RESULTADOS................................................................................................................6

DISCUSIÓN.....................................................................................................................8

RESUMEN.....................................................................................................................12

BIBLIOGRAFÍA...........................................................................................................13
INTRODUCCIÓN
El ADN genómico se encuentra en el núcleo celular, donde forma los cromosomas. Los
cromosomas contienen proteínas llamadas histonas que se unen al ADN. El ADN tiene
dos cadenas que conforman una estructura helicoidal que se llama hélice. Los
nucleótidos adenina (A), timina (T), guanina (G) y citosina (C) son los cuatro elementos
fundamentales del ADN que forman pares de bases (A con T y G con C) mediante
enlaces químicos que unen las dos cadenas del ADN. Los genes son segmentos
pequeños de ADN que contienen información genética específica. La obtención de
ácido desoxirribonucleico, es el punto de partida para la mayoría del análisis genéticos;
incluso contando con pequeñas cantidades de ADN(1).
La extracción de ADN es el protocolo mediante el cual se obtiene una muestra de AND
genómico de células nucleadas, preservando su integridad y obteniendo un producto lo
más limpio posible de contaminantes, que permitan su uso para cualquiera de las
estrategias que se utilizará para la secuenciación de genes(2).
La agarosa es un polímero natural, polisacárido formado por galactosas alfa y beta que
se extrae de las algas de los géneros Gellidium y Gracillaria. La agarosa es soluble en
agua a temperaturas superiores a los 65 ºC, dependiendo del grado de sustituciones
hidroxietílicas de sus cadenas laterales. Su temperatura de gelificación puede variar
entre los 17 y los 40ºC y forma fibras helicoidales súper enrolladas con radio entre 20-
30 nm dependiendo de su concentración. La polimerización de la agarosa resulta en una
red tridimensional de poros con diámetros entre 50 – 200 nm de acuerdo a la
concentración de agarosa utilizada(3).
El instrumento NanoDrop es un instrumento espetrofotómetro UV visible compactado y
autónomo diseñado para el análisis de micro volúmenes de ácidos nucleicos y una
amplia variedad de proteínas purificados. El sistema de retención muestras permite la
medición de muestras de alta concentración sin necesidad de disolución. Mide la
concentración de oligonucleótidos ADNmc o AR purificados que adsorben a 260nm(4).
MÉTODOS

1. Recepción de la muestra de sangre en el laboratorio

Se obtuvieron 7 muestras de sangre total (2|00 ul) utilizando jeringuillas y un
tubo EDTA que actúa como un potente anticoagulante al unirse al calcio la
sangre. Este tubo ofrece una protección integral para las células sanguíneas.
Luego homogeneizar la muestra para permitir las mismas características en toda
la sangre. Se rotulo el tubo de EDTA con el nombre de la persona analizada.
2. Extracción de ADN
Se añadió a la muestra de sangre 200 ul de proteinasa K y 20 ul de RNAsa
Mezclar por vórtex por 10seg para homogenizar todas las sustancias.
Se agregó 200 μL de solución de buffer lisis, mezclar bien agitando en vórtex o
pipeteando por 10seg para obtener una suspensión uniforme.
Se Inóculo la muestra a 55 °C durante 10 minutos en el termobloque,
homogenizando en el vórtex cada 15 minutos.
Se Agregó 200 μL de etanol (96-100%) y mezclar en el vortex por 10seg.
Se transfirió la mezcla preparada 700ul a la columna en el eppendorf.
Centrifugar durante 5 minuto a 6.000 rpm.
Desechar el tubo de recolección. Poner la columna en un nuevo tubo de
recolección de 2 mL.
Se añadió la columna 500 μL de Buffer 1 de lavado.
Centrifugamos durante 5 min a 6000 rpm. Desechar el tubo colector y colocar la
columna en un tubo de recolección nuevo.
Se añadió 500 μL de Buffer 2 de lavado a la columna. Centrifugar durante 5 min
a 6000 rpm
Se desecho el tubo de recolección y transferir la columna a un tubo rotulado de
eppendorf.
Se agregó 30μL de buffer de elución al centro de la membrana de la columna
para eluir el ADN.
Incubamos durante 2 minutos a temperatura ambiente y centrifugar durante 5
minuto a 6000 RPM
Rotulamos el tubo con el nombre correspondiente y colocar que es el AND
genómico, fecha de la extracción. Como se puede observar en la ilustración 1.
 Ilustración 1 EXTRACCIÓN
TOTAL 9-052023 Ángeles
Barrera

3. Calidad y extracción del DNA genómico

Preparamos un gel de agarosa a una concentración determinada que varía en función

del tamaño del ADN que se quiera visualizar.
Pesamos 0.8 gr de Agarosa.
Agregamos 100 ml de buffer TAE 1X para ello se utilizará la siguiente formula
Preparación del buffer TAE 1X
V1: C2 – V2/C: 1 x 500/50: 10ml
Se colocó en la placa de mezclado caliente, y esperar a que se homogenice
completamente. Luego de homogenizar sacar del calor y agregar 10 ul de SRBY
SAFE.
Se agregó la cámara de gel y el Buffer TAE 1X para la corrida del gel.
Colocamos el líquido homogenizado en la cámara del gel con mucha precaución.
Se puso la peinilla y esperar que se solidifique el gel.
Arreglamos el gel para la corrida, luego sacar con cuidado las peinillas y la
cámara con gel.
Cargamos él y arreglamos en el sentido correcto de acuerdo con la corriente y
agregar el buffer TAE 1X hasta sumergir el gel.
Colocamos la tapa a la cubeta y seleccionar la intensidad de la corriente eléctrica
a 120V por minutos.
Apagamos la corriente, y sacar el gel de la cámara usando guantes.
Colocamos el gel en el visualizador y tomar fotos del resultado.
 4. Para medir los ácidos nucleicos – cuantificación genómica.

Se pipeteó 1ul de solución blanco en el pedestal inferior y bajar el brazo del

NanoDrop.
Colocar el genomic elution buffer 1 ul.
Tocar el banco y esperar a que termine la medición.
Levantamos el brazo y limpiar ambos pedestales con una toallita delgada con
mucho cuidado.
Se pipeteó 1ul de solución de muestra en el pedestal y bajar el brazo
Comenzamos la medición de la muestra.
Cuando termina la medición de la muestra, aparece el espectro y los valores
proporcionados por el NanoDorp.
Finalmente levantamos el brazo y limpiamos ambos pedestales con una toallita
nueva.

RESULTADOS
La práctica realizada el 9 de mayo del 2023. Se extrajo 7 muestras de diferentes

individuos. Todas las muestras obtenidas fueron exitosas al momento de realizar los

primeros pasos, sin embargo, hubo muestras que tuvimos que centrifugar dos o tres

veces, y al final al momento de pasar por la columna una muestra no paso y tuvimos que

descartarla. Las muestras fueron congeladas a –20 °C hasta su uso.

La segunda practica realizada el 16 de mayo del 2023. Se agregaron 2microlitros de

ADN en una gota 8 microlitros de 10X de Blue Juice. Para luego poner en el bloque

solidificado en la rejilla, teniendo en cuenta que siempre en el primero pocillo debe ir

una sustancia llamada Track 100bpDNA ladder. (color verde). Desde el segundo pocillo

empezamos a poner las muestras. De todas las muestras que se corrieron en el gel

pudimos visualizar que dos muestran no brillaban y que les pertenecían a mis

compañeros Heidi Moyolema y Dayana Toapanta, como podemos ver en la siguiente

imagen.
 Ilustración 2 Muestras de los corridos en gel

El proceso de cuantificación se realizó por medio de espectrofotometría. Con el

NanoDrop (espectrofotómetro ND-1000) se cuantificó cada una de las 7 muestras

evaluadas por triplicado y se determinó el valor promedio de la concentración de ADN

de cada una de las muestras.

La distribución del tiempo de almacenamiento presentó un rango entre 8 a 10 días. La

concentración de ADN mostró una variabilidad representada en un rango entre 81.7

ng/uL a 22.4 ng/uL. La relación 260/280, que permite cualificar que tantas proteínas

tiene el ADN, exhibió un rango de 1.87 hasta 1.22 nm. Para la relación 260/230, que

nos permite cualificar la pureza del ADN, se calculó un rango de variación entre 0.17 a

1.40 nm.

Muestra ADNbc ng/ μl A260 A260/A280 A260/A230

Mabelin Mena 80.6 1.613 1.84 1.40
81.7 1.65 1.87 1.30
80.3 1.605 1.82 1.36
Heidi 29.5 0.590 1.22 0.17
 Moyolema 30.5 0.611 1.22 0.18
29.7 0.594 1.21 0.18
Àngeles 42.1 0.842 1.75 1.30
Barrera 42.8 0.856 1.78 1.38
41.1 0.802 1.81 1.31
Dayana 23.0 0.460 1.66 0.68
Toapanta 22.4 0.448 1.68 0.81
25.4 0.509 1.58 0.85
Maria José 42.0 0.840 1.71 0.98
Garces 39.6 0.791 1.75 1.08
23.5 0.471 1.70 1.22
Melanie 54.9 1.099 1.76 1.03
Zamora 55.8 1.116 1.76 1.03
54.8 1.096 1.77 1.03

DISCUSIÓN
A través de la venopunción se obtuvo muestras de compañeros, el procedimiento de
venopunción fue realizado de manera correcta, posteriormente en el proceso de
centrifugación hubo compañeros que realizaron el procedimiento varias veces porque la
muestra salió defectuosa, otros la sacaron antes del tiempo establecido de la centrifuga,
las demás muestras salieron bien y se realizó el siguiente paso que fue pasar por la
columna, aquí también hubo complicaciones ya que algunas muestras no pasaban por la
columna, esto se debería a la contaminación con las pipetas, mezcla de químicos y al
final solo pasaron 7 muestras para los demás procedimientos que primero se guardó las
muestras en un lugar aislado(1).
Las muestras guardadas tuvieron gran variabilidad. Esa variabilidad es producto de
diferentes tiempos de almacenamiento, fluctuación en la temperatura, técnica en la toma
de muestras, procesamiento, almacenamiento y transporte (10). Pese a ello, en este
estudio no se evalúan el efecto de todos los factores, y solo evaluó como el tiempo de
almacenamiento afecta la concentración del ADN (ng/ uL). La disminución en la
concentración en la muestra de ADN (ug/uL) representa un cambio negativo en el valor
esperado en el tiempo de almacenamiento. Esto es explicable, dado que el ADN, aunque
es una molécula estable presenta una tasa de degradación ((1)).
En la siguiente practica en la que ya se iba a visualizar el ADN se utilizaron algunos
instrumentos como los marcadores de Track 100 bp DNA Ladder que son una
combinación única de productos de PCR y plásmidos preparados con los enzimas
adecuados de restricción para proporcionar 11 fragmentos que son ideales para usarse
como marcador estándar para geles de agarosa. El ADN incluye fragmentos 100-1,500
pares base. Las bandas 500 y 1,500 pares base tienen mayor intensidad para ser usadas
como puntos de referencia, por dicha función del producto se debe utilizar en el primer
pocillo para que esta nos proporcione los fragmentos que se usaron como marcadores
estándar para el gel de la agarosa que se realizó posteriormente.
Posteriormente se uso una corriente eléctrica para mover las moléculas a través de
un gel. Los poros del gel actúan como un tamiz, lo cual permite que las moléculas más
pequeñas se muevan más rápido que las moléculas más grandes.(2)
Para poder visualizar las muestras se realizó electroforesis en ácidos nucleicos que es
muy versátil, porque nos permite la observación directa de cada fragmento separado
directamente en el gel, ya que, su tinción mediante un compuesto llamado bromuro de
etidio, hace visible al ADN o ARN (fluórese) mediante la emisión de luz ultravioleta.
Una vez que los fragmentos se han separado, podemos examinar el gel y saber el
tamaño de las bandas que se encuentran en él. Cuando un gel se tiñe con un pigmento
que se une al ADN y se coloca bajo luz UV, los fragmentos de ADN brillarán, lo cual
nos permite ver el ADN presente en distintos lugares a lo largo del gel(3).
Al visualizar las muestras que brillan en el gel se puede deducir que si algunas muestras
no brillaron fue por la cantidad de ADN que hayamos puesto en el pocillo, la pureza de
la muestra o que de alguna manera la muestra se haya contaminado con el kit que
utilizamos o que probablemente se haya mezclado con el agua al momento de limpiar la
máquina.
Los datos de nuestra practica muestran una relación entre la concentración del ADN y la
relación 260/280, en donde cambios en el tiempo de almacenamiento generaron
cambios en la concentración del ADN. En promedio las muestras analizadas
independientes del tiempo transcurrido tienen una media para la relación 260/280 de
1.87 ± 1.22 nm. El ADN tiene una absorción máxima a 260nm, mientras la mayoría de
las proteínas presentan una fuerte absorción a 280nm. Sin embargo, los ácidos nucleicos
tienen una absorción significativa a 280nm lo que dificulta tener una medida precisa(2).
A260/280: Relación de absorbancia de la cantidad de ADN medida a 260 nm sobre la
cantidad de proteína media a 280 nm. A260/230: Relación de absorbancia de la cantidad
de ADN medida a 260 nm sobre la cantidad de ARN medida a 230 nm. Sin embargo,
cuando se estudia la proporción A260/A280 para el ADN y esta se acerca a 1,87 nos
indica que las muestras son puras.
Al final de la práctica de la cuantificación de ADN se obtuvo estos resultados:
 En la examinación al ADN del individuo Mabelin Mena A260/280 se encontró
con un rango de 80.3 a 81.7 ng/ uL. Lo cual se considera bastante bueno porque
es el que más brilla dentro del gel. Esta muestra es de buena calidad determinada
después de pasar por el Nano Drop esto debe ser a que la muestra no se
contamino, fue extraída de manera correcta y que se haya hecho cada uno de los
pasos de carácter adecuado.
 El análisis del ADN de Heidi Moyolema en A260/A280 tiene un rango de 29.5 a
30.5 ng/uL, esta se considera que la nuestra no tiene mucha calidad, es una de
las muestras que menos brilla en el gel que podría ser por distintas causas como
contaminación, pureza de muestra y la cantidad de muestra que se haya puesto
en el pocillo. La muestra de Heidi el gel no brilla la causa de esto podría ser a la
calidad de ADN.
 Análisis de ADN de Ángeles Barrera en A260/280 está en un rango de 41.1 a
42.8 ng/uL. Es de baja calidad. En el gel se no se visualiza que esta muestra no
brilla lo que quiere decir que es de baja calidad como también podría tener otras
causas como el que se haya hecho mal el procedimiento o que su muestra se
haya deteriorado.
 Análisis de ADN de Dayana Toapanta en A260/280 está en un rango 22.4 a 25.4
ng/uL. Es de baja calidad. Esta muestra fue la que menos brillo en el gel, se
determina que pudo haber contaminación con la muestra o que se haya
deteriorado cuando estaba en congelación.
 Análisis de ADN de María José Garcés en A260/280 está en un rango de 23.5 a
42.0 ng/uL. Es de baja calidad. En el gel se puede ver que esta muestra brilla un
poco más que las que menos brillan sin embargo también es considerada de baja
calidad. Se podría determinar que es por contaminación o que la muestra se haya
deteriorado.
 Análisis de ADN de Melanie Zamora en A260/280 está en un rango de 54.8 a
55.8 ng/uL. Aunque es un poco alto a los demás también es de baja calidad. Es
 uno que su brillo si se puede ver ósea que está un poco más alto que el de Heidi,
Ángeles y Dayana que son las que menos brillas sin embargo también es
considerada de baja calidad por el rango en el que se encuentra. Podría ser por
contaminación o porque la muestra se haya deteriorado en cualquier momento
de los procesos anteriores que se dieron antes de llegar al Nano Drop.
 Análisis de ADN de Ángel Carrasco en A260/280 está en un rango de
…………..Dentro del gel se puede ver que es uno de los que también presenta
más brillo al igual que el de Mabelin Mena que podrían ser considerados los que
tiene mejor calidad de ADN y que poseen el mismo rango dentro de A260/280.

El Nano Drop es un instrumento útil para mediar la calidad de ADN y este además
asegura un contacto adecuado entre la muestra y las superficies de medida con una alta
repetitividad y exactitud en las medidas de absorbancia(4).
Cada una de las muestras tuvieron una baja calidad de ADN según el Nano Drop. El de
Mabelin Mena es la muestra con un rango alto en la medición de la calidad de ADN.
Las de más muestras podrían estar contaminadas, la cantidad de muestra que hayamos
colocado en el gel o también se podría deber a que nos hayamos equivocado en alguno
de los pasos desde el proceso de la venopunción, congelamiento, gel, y medición de la
calidad.
Aunque también se pudo visualizar que las mediciones variaban en la misma muestra
esto se cree que es por la limpieza y el procedimiento que se realiza en el momento de
medir la calidad de ADN en el Nano Drop. Como el que se haya mezclado con el agua,
con el kit utilizado o la contaminación de muestra o kit.

RESUMEN
EXTRACCION DE ADN
La extracción consiste en separar el ADN de otros componentes celulares con el fin de
poder estudiarlo o manipularlo.
En algunas circunstancias, cuando no es posible obtener muestras de sangre, el ADN
obtenido a partir de cabellos o bulbos capilares puede ser utilizado para análisis
genéticos. Las uñas son otra fuente accesible de ADN. Gracias al estudio del ADN se
puede, además, conocer cuáles enfermedades se tiene el riesgo de padecer; descubrir al
autor de un crimen; identificar restos humanos; verificar la paternidad; o hasta diseñar
un tratamiento contra el envejecimiento a medida.
NANODROP
Este equipo permite realizar medidas de espectrofotometría en un amplio rango de
longitudes de onda (220-750 nm) con gran exactitud y reproducibilidad, sin necesidad
de emplear cubetas. Tan sólo requiere un volumen de muestra de 1-2 μl y gracias a su
pequeño tamaño y fácil manejo permite medir un gran número de muestras en poco
tiempo.
BIBLIOGRAFÍA

1. Gonzales C, Luis J. Obtención de ácido desoxirribonucleico ( ADN ) útil para

análisis genético , a partir de uñas recortadas . 2003;0(4):230–3.

2. Cruz-Enríquez JA, Espinosa-Padilla SE, Medina-Torres EA. Importancia del

adecuado protocolo de extracción de DNA para estudios moleculares. Alergia, Asma e
Inmunol Pediátricas. 2021;30(2):50–3.

3. Greenberg ME. Preparation and analysis of RNA. Current protocols in

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Seidman, J.A. Smith, and K. Struhl. Current Protocols in Molecular Biology Vol. 1.
New York: John Wiley and Sons. pp 4. 1994.

4. Micro-uv N. NanoDrop One 使用説明書. 2016;

5. Detección, cuantificación y análisis de ácidos nucleicos (ADN/ARN) |
Molecular Devices [Internet]. [citado 5 de junio de 2023]. Disponible en:
https://es.moleculardevices.com/applications/nucleic-acid-detection-quantitation-and-
analysis

6. Electroforesis en gel (artículo) | Khan Academy [Internet]. [citado 5 de junio de

2023]. Disponible en: https://es.khanacademy.org/_render

7. Marcadores de ADN – Cientifica Senna [Internet]. [citado 5 de junio de 2023].

Disponible en: https://www.cientificasenna.com/producto/marcadores-de-adn/

8. ESPECTROFOTÓMETRO NANODROP ONE | LR Diagnóstico [Internet].

2016 [citado 5 de junio de 2023]. Disponible en:
https://www.lrdiagnostico.com/nanodrop-one-espectrofotometro-de-microgota-con-
pedestal-yo-cubeta/