CÁLCULOS

pH

No. Tubo pH Azúcares Absorbancia

reducidos
(μmoles)
Testigo 5 0 0
1 2.5 0.06
2 3.5 0.110
3 4.5 0.231
4 5 0.590
5 5.5 0.811
6 6.5 0.488
Tabla.1 Resultados de la concentración de pH sobre la velocidad de reacción
𝐶1𝑉1 = 𝐶2𝑉2 ∴ 𝐶2 = 𝐶1𝑉1 𝑉2
Tubo 1 𝐶2 = (0.5µg/mL) (0.1𝑚𝐿) = 0.025
2𝑚𝐿
Tubo 2 𝐶2 = (0.5µg/mL) (0.2𝑚𝐿) = 0.05
2𝑚𝐿
Tubo 3 𝐶2 = (0.5µg/mL) (0.3𝑚𝐿) = 0.075
2𝑚𝐿
Tubo 4 𝐶2 = (0.5µg/mL) (0.4𝑚𝐿) = 0.1
2𝑚𝐿
Tubo 5 𝐶2 = (0.5µg/mL) (0.5𝑚𝐿) = 0.125
2𝑚𝐿
Tubo 6 𝐶2 = (0.5µg/mL) (0.6𝑚𝐿) = 0.15
2𝑚𝐿
 No. Tubo Enzima Azúcares Absorbancia
Reducidos
(μmoles)
Testigo 0.0 0
1 0.1 0.085
2 0.2 0.194
3 0.3 0.355
4 0.4 0.547
5 0.5 0.739

Tabla.3 Resultados de la concentración de enzima sobre la velocidad de reacción

𝐶1𝑉1 = 𝐶2𝑉2 ∴ 𝐶2 = 𝐶1𝑉1 𝑉2
Tubo 1 𝐶2 = (0.1µg/mL) (0.1𝑚𝐿) = 5x10-3
2𝑚𝐿
Tubo 2 𝐶2 = (0.2µg/mL) (0.2𝑚𝐿) = 0.02
2𝑚𝐿
Tubo 3 𝐶2 = (0.3µg/mL) (0.3𝑚𝐿) = 0.045
2𝑚𝐿
Tubo 4 𝐶2 = (0.4µg/mL) (0.4𝑚𝐿) = 0.08
2𝑚𝐿
Tubo 5 𝐶2 = (0.5µg/mL) (0.5𝑚𝐿) = 0.125
2𝑚𝐿
DISCUSIÓN La adición del ácido 3,5-DNS nos fue de gran utilidad en esta práctica gracias a que:
• permite la coloración de la reacción para poder cuantificar la presencia de azúcares reductores.
• proporciona un medio alcalino que permite la isomerización de la fructosa a glucosa.
• detiene la reacción enzimática
.
El ácido 3,5-DNS presenta un color amarillo en su estado oxidado, al tener contacto con un azúcar
reductor, desata una reacción de óxido reducción en la cual se forma un compuesto con
coloración diferente a la inicial

La fructosa es un azúcar no reductor por lo que no puede reaccionar directamente con el ácido
3,5-DNS, como el ácido está en una disolución alcalina (diluido con NaOH y agua), este provee de
las condiciones adecuadas para que se lleve a cabo la isomerización de la fructosa (cetosa) a
glucosa (aldosa). Por lo cual se considera estequiométricamente la reacción de dos moléculas de
glucosa.

El ácido 3,5-DNS además detiene la reacción enzimática ya que proporciona un medio alcalino que
modifica la estructura terciaria de la invertasa que tiene como resultado la pérdida de su actividad
enzimática.

A mayor cantidad de concentración de enzima mayor velocidad de reacción enzimática. Efecto del
pH Se observó que el pH del medio afecta la velocidad de reacción enzimática. El pH óptimo es el
punto donde la velocidad de reacción es máxima, después de ese punto la velocidad de reacción
decrece debido a la inactivación de la reacción provocada por las modificaciones a los grupos
iónicos de la enzima. En pH extremos ocurre la desnaturalización de la enzima, lo cual la inutiliza
totalmente.

CONCLUSIONES

El pH puede modificar la estructura terciaria de la invertasa, haciendo que pierda actividad

enzimática.
El pH modifica el estado de ionización del sitio activo de la sacarosa.
La concentración de enzima es directamente proporcional a la actividad enzimática,
siempre y cuando la concentración de sustrato sea constante y no se agote.
Poca concentración de enzima puede hidrolizar gran cantidad de sacarosa.