INTRODUCCION

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica empleada en la biología

molecular con el fin de obtener múltiples copias de una región específica de ADN.
Esta técnica se fundamenta en la propiedad que tiene las ADN polimerasas para replicar las
hebras de ADN, para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas.
En un principio la técnica era lenta ya que las polimerasas constantemente se
desnaturalizaban en cada cambio de temperatura (95°C) y había que agregar nuevas
polimerasas sin embargo se realizaron más investigaciones en las que se obtuvieron ADN
polimerasas termoestables extraídas de organismos que toleran estas temperaturas.
La ADN polimerasa que normalmente se utiliza en la PCR se llama Taq polimerasa, por la
bacteria tolerante al calor de la que se aisló (Thermus aquaticus).
La Taq polimerasa es ideal para la PCR gracias a esta estabilidad térmica, la PCR utiliza
altas temperaturas repetidamente para desnaturalizar el molde de ADN o separar sus
cadenas.
La PCR es una técnica cotidiana y normalmente indispensable en laboratorios de
investigación médica y biológica para una variedad de aplicaciones entre las que
encontramos, el análisis funcional de genes, el diagnostico de trastornos hereditarios, la
identificación de huellas genéticas, la detección y el diagnóstico de enfermedades
infecciosas.
El proceso se lleva a cabo en tres fases: desnaturalización, hibridación y elongación.
En primer lugar es necesario que el ADN se desnaturalice, es decir, que las dos cadenas de
ADN se separen. Esta primera fase se conoce como desnaturalización y se lleva a cabo
elevando la temperatura a alrededor de 94ºC. El siguiente paso consiste en un descenso de
la temperatura para permitir que los cebadores se unan por complementariedad al ADN
molde. Esta segunda fase se conoce como hibridación. Las temperaturas habituales en esta
fase oscilan entre 55 y 65ºC. Por último, en la fase de elongación o extensión, la enzima
polimerasa incorpora nucleótidos complementarios a partir del extremo de la región en que
han hibridado los cebadores. La temperatura a la que se lleva a cabo esta fase depende de la
enzima polimerasa empleada; si se utiliza Taq polimerasa la temperatura de elongación
suele ser de 72ºC. Estas tres fases constituyen un ciclo de la PCR. Por una parte, cuanto
mayor sea la temperatura utilizada en la fase de hibridación, más específica es la reacción.
Mediante el uso de la PCR, una secuencia de ADN se puede amplificar millones o miles de
millones de veces y producirá suficientes copias de ADN para que se analicen mediante
otras técnicas. Por ejemplo, el ADN se puede visualizar por electroforesis en gel.
Uso de electroforesis en gel para
visualizar los resultados de una PCR

los resultados de una reacción de PCR se

pueden visualizar mediante electroforesis
en gel logrando una separación según su
tamaño. Al gel va incluido un
Los resultados de una reacción de PCR, se pueden visualizar mediante electroforesis en gel,
logrando una separación según su tamaño. Al gel va incluido un marcador de peso
molecular para comparar el tamaño de los fragmentos resultantes de la PCR, formando
bandas que se visualizan con ayuda de reveladores de ADN, como el bromuro de etidio.
BIBLIOGRAFIA
Cortazar Martinez, Adriana. “MÉTODOS FÍSICO-QUÍMICOS EN
BIOTECNOLOGÍA.” UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO:
Instituto de Biotecnologia. Accessed October 16, 2017.
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/pcr.pdf
Fermentas. Catálogo de marcadores de pesos moleculares para electroforesis de
DNA: Lambda DNA markers. Disponible en:
http://www.fermentas.com/en/products/all/dna-electrophoresis/lambda-
dnamarkers/sm010-lambda-dna-hindiii
McGraw Hill. Animación del proceso de PCR. Disponible en:
http://highered.mcgraw-hill.com/olc/dl/120078/micro15.swf
Scanelis. Animación del proceso de PCR. Disponible en:
http://www.scanelis.com/webpages.aspx?rID=679
The Health News. Animación del proceso de PCR. Disponible en:
http://www.thehealthnews.org/news/06/08/02/pcr.html
https://www.studocu.com/es/document/universidad-de-santander/fisiologia-del-
ejercicio/practica/informe-laboratorio-pcr/4045883/view
https://es.slideshare.net/harveymondragon/prctica-de-laboratorio-pcr

Uso de electroforesis en gel para

visualizar los resultados de una PCR

los resultados de una reacción de PCR se

pueden visualizar mediante electroforesis
en gel logrando una separación según su
tamaño. Al gel va incluido un
Uso de electroforesis en gel para
visualizar los resultados de una PCR
 CONCLUSION

Como conclusión, esta práctica permitió una adecuada identificación y realización de los
procesos llevados a cabo en biología molecular como lo son la extracción de ADN a
través de la técnica PCR, la cual es de gran utilidad en una variedad de campos, incluidas,
la genética, la epidemiología, las ciencias forenses, la microbiología, el diagnóstico de
enfermedades infecciosas y diagnóstico de virus. Es significativo que sé que se apliquen
dichas técnicas ya que ofrece un diagnóstico confiable y rápido. Es importe tener en cuenta
que cuando se vaya a utilizar PCR la secuencia de oligonucleótidos que se usará como
cebador es uno de los parámetros más importantes debido a su alta sensibilidad ya que
puede ser muy susceptible a contaminarse.

En la práctica de laboratorio también se pudo efectuar correctamente la electroforesis en gel

de agarosa para la visualización del ADN obtenido por PCR, ya que al observar la
electroforesis bajo luz se puede ver cada banda fluorescente, lo cual es debido a la
presencia de material genética en la muestra.
La electroforesis en gel de agarosa es una de las técnicas más adecuadas
para la visualización del ADN, ya que es fácil su preparación, y solo es necesario aplicar
un colorante fluorescente como el bromuro de etidio y de esta manera visualizar el ADN.