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“Año De La Inversión Para El Desarrollo

Rural Y La Seguridad Alimentaria”

Determinación de alfa-amilasa en la
Cebada





ESPECIALIDAD: Ingeniería Ambiental y Seguridad Industrial.


CURSO : Bioquímica


DOCENTE : Cesar Torres Díaz


ALUMNAS :
Vega Peña, Eliabeth Caroline
Reyes Calle, Gabriel


CICLO : III




SULLANA –2013



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INDICE
Indice________________________________________________________1
Introduccion____________________________________________________2
Objetivos_______________________________________________________3
Las enzimas____________________________________________________4
Características de las enzimas______________________________________5
Estructura enzimática_____________________________________________6
Factores que afectan la acción enzimática____________________________7
Nomenclatura y clasificación de las enzimas___________________________8
Cuadro de clasificación de las enzimas_______________________________9
Importancia biomédica de las enzimas_______________________________10
Deficiencia por falta de enzimas____________________________________11
Amilasa_______________________________________________________12
Alfa-amilasa___________________________________________________13
Propiedades y usos de la cebada___________________________________14
Propiedades de la cebada________________________________________15
Propiedades medicinales_________________________________________16
Métodos parar determinar el alfa –amilasa____________________________17
Determinación de alfa-amilasa en la cebada__________________________19
Conclusiones__________________________________________________23
Bibliografia____________________________________________________24




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INTRODUCCION
En la presente monografía explicaremos detalladamente el concepto de
enzimas, su clasificación y como punto especifico la determinación de alfa-
amilasa en la p Cebada. Además las características de esta fruta en cuanto a
su valor nutricional, aplicación medicinal e industrial.
Las enzimas son proteínas complejas que producen un cambio químico
específico en todas las partes del cuerpo. Por ejemplo, pueden ayudar a
descomponer los alimentos que consumimos para que el cuerpo los pueda
usar. La coagulación de la sangre es otro ejemplo del trabajo de las enzimas.
Las enzimas son necesarias para todas las funciones corporales. Se
encuentran en cada órgano y célula del cuerpo, como en: La sangre, los
líquidos intestinales, la boca (saliva), el estómago (jugo gástrico)
Se inició con el estudio de los procesos de fermentación y de putrefacción y
Antoine-Laurent Lavoisier (1743- 1794) fue el primero en plantear sobre bases
cuantitativas el proceso de la fermentación alcohólica al observar una relación
entre cantidad de azúcar presente y productos formados durante el proceso.
Sostuvo que la fermentación podía ser considerada como una
reacción química cualquiera. No obstante Pasteur demostró pronto que los
procesos de putrefacción y fermentación eran provocados por la presencia
de bacterias y levadura.
Si bien algunos químicos consideraron esos procesos como metamorfosis de
sustancias que provocaban excitaciones en otras que estaban cerca de ellas,
esta cuestión fue, como ya se ha dicho, definitivamente resuelta por Buchner
hacia finales del siglo XIX; exprimiendo masas celulares de Saccharomyces
cerevisie obtuvo un liquido sin células, capaz de producir la mismas reacciones
químicas que se obtenían utilizando la suspensión de células, es decir, la
transformación del azúcar en alcohol y anhídrido carbónico. Por tanto, de la
levadura se podía extraer una sustancia capaz de regular un proceso
químico concreto.


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OBJETIVOS


 Aprender las características de las enzimas

 Conocer los Factores que afectan la acción de la enzima

 Aprender sobre las Deficiencias por falta de enzimas

 Conocer las propiedades y usos de la cebada

 Determinar el alfa-amilasa en la cebada

 Manejar el tema de la determinación de alfa-amilasa en la cebada de
una manera rápida y sencilla







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LAS ENZIMAS

Las enzimas son catalizadores. La mayoría son proteínas. (Unos enzimas
ribonucleoprotein se han descubierto y, para algunos de ellos, la actividad
catalítica se encuentra en la parte de ARN en lugar de la parte de la proteína.
Enlace a la discusión de estas ribozimas).Las enzimas se unen temporalmente
a uno o más de los reactivos - el sustrato (s) - de la reacción que catalizan. De
este modo, reducen la cantidad de energía de activación necesaria y por lo
tanto acelerar la reacción.
La enzima es antibacteriana porque degrada el polisacárido que se encuentra
en las paredes celulares de muchas bacterias. Esto se hace mediante la
catálisis de la inserción de una molécula de agua en la posición indicada por la
flecha roja (un enlace glucosídico).
















El rasgo particular de las enzimas es que pueden catalizar
procesos químicos a baja temperatura, compatible con la
propia vida, sin el empleo de sustancias lesivas para
los tejidos. La vida es, en síntesis, una cadena de procesos
enzimáticos, desde aquellos que tienen por sustratos
los materiales mas simples, como el agua (H2O) y el
anhídrido carbónico (CO2), presentes en los vegetales para la
formación



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I.- CARACTERISTICAS DE LAS ENZIMAS

 Las enzimas son catalizadores de naturaleza proteínica que regulan la
velocidad a la cual se realizan los procesos fisiológicos, producidos por
los organismos vivos.

 Las enzimas, en los sistemas biológicos constituyen las bases de las
complejas y variadas reacciones que caracterizan los fenómenos vitales.

 Las enzimas, por lo tanto, se consideran como catalizadores altamente
específicos que:
 Modifican la velocidad de los cambios promovidos por ellas.
 Determinan que sustancias particulares, de preferencia a otras
distintas son las que van a sufrir los cambios.
 Impulsan dentro de los distintos cambios posibles que pueda
seguir una sustancia, cual de ellos en especial, será el utilizado.













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II.- La estructura enzimática

Por su estructura y composición química puede afirmarse que el origen de las
enzimas esta vinculando al origen de las sustancias proteicas. Al hablar
del origen de la vida se ha citado el éxito de los experimentos realizados en el
laboratorio para la producción de aminoácidos; estos aminoácidos son los que
precisamente constituyen la base del edificio proteico. También en el
laboratorio se ha intentado la síntesis de proteínas a partir de aminoácidos.
La sede de las enzimas es el citoplasma. Los cloroplastos vegetales contienen
una amplia gama enzimas encargadas de la función clorofílica, proceso que a
través de reacciones químicas complejas y encadenadas transforman
compuestos inorgánicos, como el agua, y el anhídrido carbónico, en sustancias
complejas adecuadas para ser entre otras cosas el alimento fundamental de los
animales.
En las mitocondrias existe un sistema de transporte de electrones que
determinan importantes fenómenos de oxido reducción, durante los cuales se
forman notables cantidades de ATP, que es un compuesto altamente
energético del que depende la mayor parte de metabolismo, y coma, por
tanto el trabajo de las células; en las mitocondrias se produce el metabolismo
enzimático de los ácidos grasos, los cuales son en parte elaborados también
en el citoplasma.
En los ribosomas tiene lugar concretamente todas las síntesis de las sustancias
proteicas, mientras que en los lisosomas se producen enzimas hidrolíticos
cuya misión escindir, con la intervención del agua, moléculas grandes en otras
menores, que pueden a su vez ser utilizadas por las células; en cambio, las
enzimas glucolíticos están difundidos en el citoplasma.



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III.- FACTORES QUE AFECTAN LA ACCIÓN DE LA ENZIMA:


La actividad de las enzimas se ve fuertemente afectado por los cambios en el
pH y la temperatura. Cada enzima funciona mejor a un cierto pH (gráfico de la
izquierda) y la temperatura (gráfico de la derecha), la disminución de su
actividad a valores por encima y por debajo de ese punto. Esto no es
sorprendente teniendo en cuenta la importancia de la estructura terciaria (es
decir, la forma) en función de la enzima y fuerzas no covalentes, por ejemplo,
las interacciones iónicas y enlaces de hidrógeno, en la determinación de esa
forma.












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IV.- NOMENCLATURA Y CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS

Las enzimas se clasifican en seis grupos principales, correspondientes por sus
términos a las raciones que cada enzima ejerce sobre el sustrato. Estos grupos
se subdividen en otro, según el tipo de sustrato y los átomos concretos que son
sensibles a sus acciones.

 Oxido-reductasas: Son las enzimas relacionadas con las oxidaciones y
las reducciones biológicas que intervienen de modo fundamental en los
procesos de respiración y fermentación.
 Las Transferasas: Estas enzimas catalizan la transferencia de una
parte de la molécula (dadora) a otra (aceptora).
 Las Hidrolasas: Esta clase de enzimas actúan normalmente sobre las
grandes moléculas del protoplasma, como son la de glicógeno, las
grasas y las proteínas.
 Las isomerasas: Transforman ciertas sustancias en otras isómeras, es
decir, de idéntica formula empírica pero con distinto desarrollo.
 Las Liasas: Estas enzimas escinden (raramente construyen) enlaces
entre átomos de carbono, o bien entre carbono y oxigeno, carbono y
nitrógeno, y carbono y azufre.
 Las Ligasas: Es un grupo de enzimas que permite la unión de dos
moléculas, lo cual sucede simultáneamente a la degradación del ATP,
que, en rigor, libera la energía necesaria para llevar a cabo la unión de
las primeras.







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GRUPO ACCIÓN EJEMPLOS
1. Oxido-reductasas Catalizan reacciones de
oxidorreducción. Tras la acción
catálica quedan modificados en su
grado de oxidación por lo que debe
ser transformado antes de volver a
actuar de nuevo.
Deshidrogenasas
Aminooxidasa
Deaminasas
Catalasas

2. Transferasas Transfieren grupos activos (obtenidos
de la ruptura de ciertas moléculas) a
otras sustancias receptoras. Suelen
actuar en procesos de
interconversiones de azucares, de
aminoácidos, etc.
Transaldolasas
Transcetolasas
Transaminasas
3. Hidrolasas Verifican reacciones de hidrólisis con
la consiguiente obtención de
monómeros a partir de polímeros.
Suele ser de tipo digestivo, por lo que
normalmente actúan en primer lugar
Glucosidasas
Lipasas
Peptidasas
Esterasas
Fosfatasas
4. Isomerasas Actúan sobre determinadas moléculas
obteniendo de ellas sus isómeros de
función o de posición. Suelen actuar
en procesos de interconversion
Isomerasas de azúcar
Epimerasas
Mutasas
5. Liasas Realizan la degradación o síntesis
(entonces se llaman sintetasas) de los
enlaces denominados fuertes sin ir
acoplados a sustancias de
alto valor energético.
Aldolasas
Decarboxilasas
6. Ligasas Realizan la degradación o síntesis de
los enlaces fuertes mediante el
acoplamiento a sustancias ricas en
energía como los nucleosidos del ATP
Carboxilasas
Peptidosintetasas



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V.- IMPORTANCIA BIOMÉDICA DE LAS ENZIMAS


Sin enzimas, no sería posible la vida que conocemos. Igual que la biocatálisis
que regula la velocidad a la cual tienen lugar los procesos fisiológicos, las
enzimas llevan a cabo funciones relacionadas con salud y la enfermedad. En
tanto que, en la salud todos los procesos fisiológicos ocurren de una manera
ordenada y se conserva la homeostasis, durante los estados patológicos, esta
última puede ser perturbada de manera profunda.
Por ejemplo, el daño tisular grave que caracteriza a la cirrosis hepática pueden
deteriorar de manera notable la propiedad de las células para producir enzimas
que catalizan procesos metabólicos claves como la síntesis de urea. La
incapacidad celular para convertir el amoniaco tóxico a urea no tóxica es
seguida por intoxicación con amoniaco y por ultimo coma hepático. Un conjunto
de enfermedades genéticas raras, pero con frecuencia debilitantes y a menudo
mortales, proporciona otros ejemplos dramáticos de las drásticas
consecuencias fisiológicas que pueden seguir al deterioro de la actividad
enzimática, inclusive de una sola enzima.
Después del daño tisular grave (por ejemplo, infarto del miocardio o pulmonar,
trituración de un miembro) o siguiendo a multiplicación celular descontrolada
(por ejemplo, carcionoma prostático), las enzimas propias de tejidos
específicos pasan a la sangre. Por lo tanto, la determinación de estas enzimas
intracelulares en el suero sanguíneo proporciona a los médicos información
valiosa para el diagnostico y el pronostico.





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VI.- DEFICIENCIA POR FALTA DE ENZIMAS


La ausencia de enzimas es responsable de muchas enfermedades. En los
seres humanos, una enfermedad trágica llamada fenilcetonuria (PKU), que
causa retraso mental grave e incluso la muerte en los niños, es el resultado de
la ausencia de un tipo de enzima. La enfermedad de Tay-Sachs es un
resultado igualmente trágica de una deficiencia enzimática. Provoca retraso
mental, parálisis, y muchas veces la muerte en la niñez temprana si no se trata.

Nuestra capacidad de alterar las enzimas mediante la inhibición de sus
capacidades funcionales ha dado lugar a cientos de medicamentos que salvan
vidas. Un ejemplo es la penicilina, un antibiótico bien conocido que puede curar
la sífilis, la neumonía, y otras enfermedades. La penicilina actúa de unión a los
sitios activos de las enzimas que causa la enfermedad de las bacterias, en
última instancia, destruir la capacidad de las bacterias para sobrevivir y
reproducirse.


















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AMILASA

La amilasa es una enzima que descompone el almidón abajo en azúcar . La
amilasa está presente en humanos la saliva , donde comienza el proceso
químico de la digestión . Los alimentos que contienen mucho almidón pero
poco de azúcar, tales como el arroz y la patata , un sabor ligeramente dulce a
medida que se mastican ya que la amilasa convierte parte de su almidón en el
azúcar en la boca. El páncreas también hace amilasa (alfa amilasa) para
hidrolizar almidón de la dieta en disacáridos y trisacáridos que se convierten
por otras enzimas de la glucosa para suministrar energía al cuerpo. Las plantas
y algunas bacterias también producen amilasa. Como diastasa , amilasa fue la
primera enzima para ser descubierto y aislado (por Anselme Payen en
1833). Amilasa específica de proteínas se designan con diferentes letras
griegas. Todas las amilasas son glucósido hidrolasas y actúan en α-1, 4 -
enlaces glicosídicos .

USOS:
Amilasas encuentran uso en panificación y para descomponer los azúcares
complejos, como el almidón (que se encuentra en la harina), en azúcares
simples. Levadura entonces se alimenta de estos azúcares simples y los
convierte en los productos de desecho del alcohol y CO
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. Esto imparte sabor y
hace que el pan suba. Mientras amilasas se encuentran naturalmente en las
células de levadura, se necesita tiempo para que la levadura para producir
suficiente cantidad de estas enzimas para descomponer grandes cantidades de
almidón en el pan. Esta es la razón para masas fermentadas larga tales como
masa agria. Técnicas de panificación modernos han incluido amilasas (a
menudo en forma de cebada malteada ) en mejoradores de pan , lo que hace el
proceso más rápido y más práctico para el uso comercial.



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ALFA-AMILASA (α)
Alfa amilasa es una enzima que ayuda en la descomposición del almidón a
maltosa. A hidroliza lpha-amilasa enlaces entre glucosa se repite. Los
hidratos de carbono y azúcares son las principales moléculas de
almacenamiento de energía utilizadas por los organismos vivos. Las plantas
almacenan la energía del sol en azúcares mediante la fotosíntesis .
El nombre oficial de Alfa amilasa es 1,4-aD-glucano glucanohidrolasa; EC
3.2.1.1. Los nombres oficiales de los enzimas son mantenidos por
una comisión de nomenclatura de las enzimas .
Alfa amilasa se descompone el almidón mediante hidrólisis para liberar
maltosa. El almidón es una molécula compleja hecho sobre todo en las plantas
y bacterias. Se compone de dos tipos de polisacárido amilosa y amilopectina.






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PROPIEDADES Y USOS DE LA CEBADA

La cebada es un cereal altamente recomendable, dada sus excelentes
propiedades terapéuticas y nutricionales, sobretodo en primavera-verano ya
que nutre, relaja y refresca el hígado y la vesícula biliar. Se ha de incluir la lista
de cereales de uso regular aunque a menudo es "la gran omitida". Con esto
quiero decir que se suele ensalzar los beneficios del arroz, por ser el cereal
más equilibrado, del mijo por su gran aporte energético o de la quinoa (aunque
no sea un cereal) por su ligereza y digestibilidad, pero se suele a menudo
olvidar la cebada. Vamos a ver que la cebada nada tiene que envidiar a las
características citadas.

I.- CARACTERÍSTICAS NUTRICIONALES
La cebada es muy buena fuente de inositol, sustancia considerada durante
mucho tiempo como vitamina del grupo B. El inositol evita la rigidez de los
capilares, es tónico cardíaco, regula el colesterol, evita la acumulación de grasa
en el hígado, protege el sistema nervioso y combate ansiedad y depresión. La
cebada también posee vitaminas del grupo B, ácido fólico, colina y vitamina K.

En materia de minerales, la cebada es buena fuente de potasio, magnesio y
fósforo, pero su mayor virtud es la riqueza en oligoelementos: hierro, azufre,
cobre, cinc, manganeso, cromo, selenio, yodo y molibdeno. Esto la convierte en
alimento ideal para estados carenciales y para el proceso de crecimiento.






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La cebada es el cereal mejor dotado de fibra (17%) y sobre todo en materia de
fibra soluble (beta glucanos). Esta fibra retarda el índice de absorción de la
glucosa y reduce la absorción de colesterol. Además la cebada posee otras
sustancias benéficas, como los lignanos, antioxidantes y protectoras del
cáncer.

II.- PROPIEDADES DE LA CEBADA
Gran cantidad de propiedades tiene la cebada: es emoliente, reconstituyente,
digestiva, diurética, desintoxicante, tónica, ligeramente vasoconstrictora,
antiinflamatoria, laxante, alcalinizante, antiséptica, mineralizante y galactagoga
(incrementa la producción láctea). Es un cereal muy digerible si está bien
cocinado. Estimula el sistema neurovegetativo, siendo aconsejado como tónico
nervioso y cardiaco. Útil tanto para el trabajo físico, como para la tarea
intelectual.











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III.- PROPIEDADES MEDICINALES


También se utiliza la semilla como medicinal.

Además de nutritiva sus
principales propiedades son: antiespasmódica, algo astringente,
digestiva, antifebril.


 Se utiliza para tratamiento de tos irritativa, digestiones pesadas,
deficiencias en la secreción de jugos digestivos, irritaciones digestivas,
enfermedades febriles. Combate el estreñimiento en general por su
contenido en fibra, especialmente si se utiliza el grano entero.

 La horchata de cebada, que no es otra cosa que el agua que queda de
la cocción de la cebada, y que contiene almidón, resulta útil en el
tratamiento de hidratación de personas con vómitos y diarreas.

 Su uso es indicado para las personas que sufren de retención de
líquidos, ya que la cebada, al mismo tiempo que es refrescante hace
orinar.

 Uso externo: Se utiliza la harina de cebada para mezclarla con otras
hierbas para la preparación del cataplasma para aliviar la hinchazón
causada por golpes.




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MÉTODOS PARAR DETERMINAR EL ALFA –AMILASA

La necesidad de determinar la actividad de enzimas amilolíticas en productos
como harina, malta y otros, ha hecho desarrollar varios métodos analíticos que
miden, ya sea cambios físicos o transformaciones químicas, producidos por las
enzimas sobre substratos seleccionados. Entre estos métodos se cuenta el de
Lintner, el de la maltosa y el SKB (Sandstedt, Kneen, Blish) (64).

 Método de Lintner: Mide principalmente la actividad de la beta-amilasa
de malta o de jarabes y se basa en producir maltosa por un infuso de
malta, haciendo actuar una solución de enzima en solución tampón, bajo
condiciones estándares de tiempo y temperatura. Los grados de Lintner
se calculan a partir del poder reductor o contenido de maltosa del
almidón convertido, determinado ya sea por el ferricianuro o por la
solución de Fehling (41). Los grados de Lintner, multiplicados por el
factor 4, dan el equivalente en maltosa.














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 Método de la Maltosa: Se basa en suspender 10 g de harina en 46 ml
de solución tampón de pH 4,5-4,8 e incubar por 1 hora a 30°C. Esto
permite que la enzima presente en la harina actúe sobre el almidón y lo
convierte en maltosa, la que se determina por el método del ferricianuro.
El valor de maltosa se define como los mg de maltosa producidos por 10
g de harina bajo las condiciones ya señaladas.
La maltosa puede también determinarse por el método de Munson y
Walker, usando la reacción de Fehling I, 11, o bien por titulación
yodométrica de Cu no, reducido a (41).

 Método de Sandstedt, Kneen y Blish (64): Mide la dextrinización de un
preparado de alfa-amilasa en términos de tiempo de digestión, requerido
para producir un cambio de color que refleja la completa dextrinización
del almidón. La modificación al método original consiste en medir la
dextrinización en presencia de exceso de beta-amilasa para eliminar los
efectos variables de beta-amilasa presente en el extracto de malta:
Los resultados se expresan en unidades arbitrarias SKB y representa el
número de g de almidón soluble que bajo la acción de exceso de beta-
amilasa son dextrinizados por 1 g de malta en 1 hora a 30°C. El punto
final se compara con una solución de yodo-dextrina de color rojo pardo.



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DETERMINACIÓN DE ALFA-AMILASA EN LA CEBADA

Objetivos:

1- Presenciar la acción de la alfa - amilasa en las semillas de cebada a través
de un marcador molecular.

2- Estudiar y comparar la acción alfa - amilasa en semillas y extracto.


Materiales y métodos:

• 2 placas petri(con gel almidón 1% y agar 1%)
• 2 micropipetas( 20-50uL y 1000uL)
• Bisturí
• 2 tubos falcon
• Lugol 10%
• Semillas previamente tratadas
• Lugol 10%
• Buffer

Procedimiento:

1.- En un comienzo se preparó la solución correcta de lugol (estaba al 40% y se
necesitaba solución al 1’%). Luego se cortaron 6 semillas ya congeladas y
tratadas por la mitad rápidamente para que no ganen calor. Se procedió a
introducir cuidadosamente por el lado cortado en una de las placas con gel.

2.-Se dejó reposar por 35 minutos y se procedió incorporar la solución de lugol
10%. Esta parte se realizó rápidamente y se lavo inmediatamente con agua.







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3.- Las semillas ya tratadas previamente y homogeneizadas en buffer
son centrifugadas a 8.000 rpm en una centrífuga refrigerada por 20 minutos. Se
extrae el sobrenadante y se calienta a baño María a 70°C por 15 minutos.
Luego se enfría en hielo. Una vez precipitadas las proteínas se centrifuga a
8.000 rpm por 5 minutos el sobrenadante.
4.- Se elimina el precipitado de la solución resultante y el sobrenadante se
adiciona a las placas petri con gel en los pequeños orificios previamente
hechos al gel.

5.-Por último se procedió a realizar los mismos pasos que en 1, es decir, una
vez transcurrido el tiempo, se introduce rápidamente el lugol al gel y se lava
inmediatamente con agua.

Resultados:


a) Placa con gel (almidón 1% y agar 1%) y expresión de alfa-amilasa unida a
semillas.

Se observa claramente definida, al ser incolora, la pate del gel donde se
encontraban las semillas, en comparación al total del gel que quedó color azul
por acción del lugol.


b) Placa con gel (almidón 1% y agar 1%) y expresión de alfa-amilasa extraída
en solución

Se denota la misma diferencia de colores que en a) pero con una pequeña
circunferencia azul en el lugar donde estaban los orificios que contenían la alfa
-amilasa.









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Discusión:

Como se introdujo, la alfa-amilasa es una enzima que hidroliza polisacáridos,
como el almidón, degradándolos en monosacáridos como la glucosa. En el
proceso de germinación de las semillas aumenta el desarrollo de esta enzima
por ende su actividad se ve reflejada en la alta tasa de desaparición del
almidón.

Como segundo punto importante podemos nombrar la participación del lugol en
el experimento, que es el de reconocimiento de hidratos de carbono
específicamente en forma de polisacárido, tiñendo el lugar donde éste se
encuentre pasando de un color casi transparente a azul-violáceo.
Estas aseveraciones explican lo ocurrido en las dos etapas del práctico, ya que
éstas trataban de demostrar la existencia y eficacia de la α-amilasa, solo que la
primera mostraba la alfa-amilasa en un estado “in vivo” y la otra extraída en
solución, diferenciándose estas solo en la velocidad de acción. Como en las
dos se utilizaron semillas en estado inicial de germinación exitista una alta
actividad de la alfa-amilasa, hecho que es confirmado en la primera etapa ya
que la enzima, ya que la actividad de las proteasas por efecto de calor son
mínimas, aun en las semillas, degrado el almidón de las placas, donde fue
expuesta, en un periodo de 35 min.

Al depositar las semillas partidas a la mitad y la solución contenedora de α-
amilasa sobre los geles en las distintas placas ocurre la degradación lenta e
inmediata respectivamente del almidón, hidrolizándose este en monosacáridos,
luego para demostrar esta acción, se agrego lugol en toda la placa, tiñendo
este la totalidad del gel a excepción de los lugares donde actuó la α-amilasa
debido a que ya no exista almidón sino monosacáridos como glucosa.

Dentro del método en base al cual se realizó el practico se debió llevar la
solución contenedora de la enzima a un baño maría que poseía temperatura
constante de 70ºC ya que la alfa-amilasa se desnaturaliza a dicha temperatura
quedando a nuestra disposición solo la α-amilasa, la cual necesita
temperaturas mayores para desnaturalizarse. También debemos acotar el uso
de las centrifugas dentro de congeladores ya que las proteasas (enzimas que
degradan proteínas) son inactivas a temperaturas bajas.






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2do método:
La α-amilasa cataliza la hidrólisis del 2-cloro-4-nitrofenil-maltotriósido (CNP-G3)
a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP). La concentración catalítica se determina a partir
de la velocidad de formación del 2-cloro-4-nitrofenol, medido a 405 nm1,2,3.

COMPOSICIÓN
A. Reactivo: 5 x 20 mL. MES 50 mmol/L, cloruro de calcio 5 mmol/L, cloruro de
sodio 300
mmol/L, tiocianato de sodio 450 mmol/L, CNP-G3 2,25 mmol/L, pH 6,1.

CONSERVACIÓN
Conservar a 2-8ºC.
El Reactivo es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta,
siempre que se conserve bien cerrado y se evite la contaminación durante su
uso.
Indicaciones de deterioro:
− Reactivo: Presencia de partículas, turbidez, absorbancia del blanco superior
a 0,500 a 405nm (cubeta de 1 cm).

PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
El Reactivo está listo para su uso.









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CONCLUSIONES


 Las Funciones de las enzimas, se entrelazan y se pliegan una o más
cadenas polipeptídicas, que aportan un pequeño grupo de aminoácidos
para formar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el sustrato, y donde
se realiza la reacción. Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si
sus formas no encajan con exactitud. Este hecho asegura que la enzima
no participa en reacciones equivocadas.

 Dentro de los Factores que incluyen las reacciones enzimáticas
tenemos: Cambios en el pH, Cambios en la temperatura, Presencia de
cofactores, Las concentraciones del sustrato y de los productos finales,
Activación, Costes, Disponibilidad

 La cebada es un cereal altamente recomendable, dada sus excelentes
propiedades terapéuticas y nutricionales,

 La cebada es muy buena fuente de inositol, sustancia considerada
durante mucho tiempo como vitamina del grupo B, además contiene
ácido fólico, colina y vitamina K.

 La cebada estimula el sistema neurovegetativo, siendo aconsejado
como tónico nervioso y cardiaco. Útil tanto para el trabajo físico, como
para la tarea intelectual.







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BIBLIOGRAFIA

 http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/E/Enzymes.html

 http://www.monografias.com/trabajos5/enzimo/enzimo.shtml

 http://www.wisegeek.org/what-are-enzymes.htm

 http://www.princeton.edu/~achaney/tmve/wiki100k/docs/Amylase.html

 http://science.marshall.edu/murraye/alpha_amylase.htm

 http://agnesmacrobiotica.blogspot.com/2012/03/propiedades-y-usos-de-
la-cebada.html

















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ANEXOS

Enzimas:



















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Cebada:









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Usos de la cebada: