Facultad de Ciencias Químicas

Licenciatura en Química de Alimentos

Laboratorio de Técnicas Experimentales
2do Semestre
Grupo 271

Práctica No 5

Técnicas de Tinción

Equipo 3:
Flores Vargas Cristobal Leonardo
Navarrete Ramírez Diego Emilio
Ruiz Mijangos Yael
Maestras:
Cevallos Sainz Ma . Aurelia
Vergara Ocáriz Ma. Dolores
Fecha:
14/03/2023
Objetivos
● Aplicar técnicas de tinción en diferentes tipos celulares.

INTRODUCCIÓN
Una tinción es un proceso en el cual se aplican sustancias químicas específicas,
llamadas tintes o colorantes, a una muestra biológica con el fin de resaltar o
distinguir estructuras o componentes específicos en la muestra.

Una tinción simple es una técnica de tinción que se utiliza para resaltar una
estructura o componente específico en una muestra biológica. La tinción simple se
utiliza comúnmente en microscopía, tanto para preparar muestras para la
observación bajo el microscopio como para resaltar estructuras o componentes
específicos.

Una tinción diferencial es una técnica de tinción que se utiliza para distinguir entre
diferentes tipos de estructuras o componentes en una muestra biológica.La técnica
de tinción diferencial se utiliza comúnmente en microbiología para distinguir entre
diferentes tipos de bacterias basándose en las diferencias en la pared celular.

Un mordiente es una sustancia química utilizada en la técnica de tinción para fijar el

colorante en la muestra y mejorar la fijación de la estructura o componente que se
está estudiando.

La tinción de Gram es una tinción diferencial desarrollada en 1844, llamada así por
el bacteriólogo de origen danés Christian Gram de este proceso los
microorganismos pueden dividirse en: gram positivos y gram negativos, estas se
tiñen de forma distinta debido a la constitución de su estructura en la pared celular.
Tinción de azul de lactofenol esta tinción se utiliza para observar hongos, el cual
tiene tres funciones importantes es una solución de tinción lista para usar para la
tinción de hongos en bacteriología con muestras de origen humano. El material se
tiñe en un solo paso con solución de azul de lactofenol. Los hongos aparecen de
color azul oscuro.

MATERIALES
● Asa microbiológica
● Cepa de bacterias (cocos y bacilos, proporcionados por el profesor)
● Cepas de hongos de pan o tortilla ( una por equipo)
● Charola de tinción
● Cubreobjetos
● Gotero
● Mechero fisher
● Microscopio
● Papel seda
● Piseta
● Portaobjetos
● Puente de tinción
REACTIVOS
● Aceite de inmersión
● Azul de algodón
● Cristal violeta
● Lugol
● Mezcla de alcohol-acetona
● Safranina
METODOLOGÍA E HIPÓTESIS
RESULTADOS
Tabla 1. Comparación de fotografías tomadas en el laboratorio con imágenes de
sitios web.

Espécimen Objetivo Imagen Imagen de Comparación

tomada en Internet entre
laboratorio imágenes

Saccharomyce 40x Célula

s cerevisiae eucariota
unicelular, en
nuestra
imagen se
puede
apreciar bien
cada célula de
este
(Research espécimen,
Gate, 2012) los cuales
tienen forma
de esfera.

Saccharomyce 100x Se observa de

s cerevisiae mejor manera
la forma
ovalada que
tienen las
células y se ve
cómo se
agrupan
(Bustos Martínez
María del Carmen
Capistran Cruz
Ameyalli Carolina
De la Rosa
Guardado María
Fernanda
Miranda Marroquín
Hassia Itzel,Equipo
4.LTE QFB)
Staphylococcu 40x En nuestra
s aureus muestra se
puede ver un
exceso de
colorante
realmente se
alcanza a ver
(Microbitos muy poco, en
blog, 2022) la imagen de
comparación,
se ve
claramente la
hilera de coco
la cual es la
forma de esta
muestra.

Staphylococcu 100x Con este

s aureus aumento se
observan las
células
grampositivas
(Microbitos
blog, 2022)
(Bustos Martínez
María del Carmen
Capistran Cruz
Ameyalli Carolina
De la Rosa
Guardado María
Fernanda
Miranda Marroquín
Hassia Itzel,Equipo
4.LTE QFB)

Escherichia 40x En las dos

coli imágenes se
observan
pequeñas
células de
forma bacilar,
(BUAP, 2019) las cuales son
gramnegativas
Escherichia 100x En la imagen
coli de laboratorio,
no se puede
observar muy
detalladament
e, pero en la
(BUAP, 2019) imagen
recuperada de
internet, se ve
mejor la
estructura de
la célula.

Bacillus 40x En nuestra

subtilis muestra se
observa un
exceso de
colorante,
(Microscope pero si se
World & puede
Profile, 2015) observar
algunas
células en el
centro de la
imagen, en
comparación a
la imagen
recuperada de
internet si se
aprecia de
mejor manera
los bacilos, los
cuales están
juntos.

Hongo de 10x En 10x solo se

muestra alcanza a
infectada visualizar el
(Pan) esporangio, la
foto de
internet no se
alcanza a
 Blogspot, visualizar.
(2015)

Hongo de 40x En la imagen

muestra se puede
infectada(Pan) observar muy
bien las hifas
de este tipo de
hongo junto
Univarra, con el
(2018) esporangio

Nota: Todas las imágenes con el objetivo 100x en la columna de imágenes sacadas
en laboratorio fueron sacadas de un trabajo de otro grupo.

Análisis de resultados
En el laboratorio se logró trabajar de una forma organizada y con precaución de
nunca salirnos de la zona esterilizada marcada por el mechero fisher más no
eficiente al no poder observar las muestras de cepas en el objetivo 100x por lo que
optamos por pedir a otro equipo sus imágenes de muestras en 100x con él fin de
obtener resultados más completos, al igual que no se logró observar las cepas en
10x
En la muestra de saccharomyces cerevisiae logramos observar de manera clara la
estructura de la levadura en nuestra muestra con el objetivo 40x no cambió de color
la muestra en cambio en el 100x se observa claramente que se tiñen de color azul.
En la muestra de Staphylococcus aureus nuestra tinción no nos salió, porque hubo
un exceso de colorante en la muestra y no logramos observar nada, en equipo
llegamos a la conclusión que fue por la falta de agua destilada al momento de
enjuagar las muestras con colorantes.
En la siguiente muestra que fue la de Escherichia coli aunque igual tuvimos un
exceso de colorante se logra ver un poco de su estructura.
En la muestra de Bacillus subtilis aunque igual se observa un exceso de colorante
se logran observar algunas células dentro de la bacteria al igual que su gram que es
positiva esto lo podemos saber por que al momento de la tinción la muestra se tornó
en un color azul y por último realizamos la muestra de pan por que los hongos al ser
esporas, estas podrían volar y contaminar el laboratorio, en la preparación húmeda
de esta muestra sí se logró observar bien las hifas de este tipo de hongo junto con
el esporangio, aunque al momento de colocar el cubreobjetos se crearon algunas
burbujas de aire. Por lo que podemos decir que las hipótesis del procedimiento 2 y 4
son correctas y la hipótesis del procedimiento 3 no pudo ser comprobada.

Conclusiones
Al término de la práctica se obtuvieron los conocimientos necesarios para poder
aplicar técnicas de tinciones de diversas bacterias y hongos, aún así no podemos
decir del todo que nuestro objetivo se cumplió ya que en una gran mayoría
resultaron con exceso de colorante, si bien pudimos realizar técnicas de tinciones no
se realizaron correctamente, en equipo creemos que esto pudo ser por la falta de
agua destilada al momento de enjuagar las muestras con colorantes, si hablamos
desde un punto de vista objetivo podemos decir que el objetivo planteado para esta
práctica no se cumple ya que se esperabamos tinciones bien realizadas, donde
pudiéramos observar con claridad la estructura de cada una de las bacterias y
hongos en el microscopio.
Referencias
BUAP. (2019). Implementación de un sensor óptico en la identificación bacteriana.
Repositorio Institucional BUAP.
https://repositorioinstitucional.buap.mx/bitstream/handle/20.500.12371/4633/8
78419TL.pdf?sequence=1
González, R., Cuevas, E., Cortés, E., Orduña, M., (2020). Las tinciones básicas en
el Laboratorio de Microbiología: Un enfoque gráfico. UNAM, FES Zaragoza

Harvey, R. A. Champe, P. C. & Fisher, B. D. (2008). Microbiología (2a. ed.).. Wolters

Kluwer Health.
https://s443-elibro-net.lasalle.lsproxy.net/es/lc/redulsa/titulos/125446

Microbitos blog. (2022). Staphylococcus aureus, S. epidermidis, y S. saprophyticus.

Estudiando microorganismos.
https://microbitosblog.com/2011/08/03/staphylococcus-aureus-epidermidis-sa
prophyticus/
Mora, A., Flores, Y., Marroquín. R., Marques, M. (2020). Manual de Microbiología
General II. UNAM, FES Zaragoza

Ondarza, R. Biología Moderna. ED. Trillas. 12ava edición. México, D.F. 2017.

Research Gate. (2012). S. Cerevisae view.

https://www.researchgate.net/figure/S-cerevisiae-view-at-an-optical-microscop
e-40-X-increased-White-cells-non-viable_fig1_272711883