FUNDAMENTOS DE

CROMATOGRAFÍA

Dilan Jair Sanchez

Diana Gabriela Alzate
 Estacionaria: Sólido,
Muestra se líquido ligado sobre
Estacionaria y Columnas empacadas
distribuye en dos tubo capilar o una
móvil superficie de partículas o capilares
fases
sólidas

Técnicas de
Móvil: gas, líquido o CG = FM gas separación – análisis Análisis cualitativos y
FS de muestras análisis cuantitativos
CL = FM líquido
complejas
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CLAE (Cromatografía Líquida de alta eficiencia) o
HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
Tipos de interacciones Fase Estacionaria

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CLAE (Cromatografía Líquida de alta eficiencia) o
HPLC (High Performance Liquid Chromatography)

• FE polar y FM Menos polar

CL en Fase normal
• Partículas de Silica

• FE no polar y FM más polar

CL en Fase reversa
• C18

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 FASE MÓVIL Y GRADIENTE

FASE MÓVIL
• Muestra soluble en FM
• Baja reactividad
• Compatible con el detector
• Baja toxicidad
• Baja viscosidad
• Alto grado de pureza

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CLAE (Cromatografía Líquida de alta eficiencia) o
HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
¿Qué características necesito para
seleccionar mi columna?
Diámetro interno

Longitud

Tamaño de partícula

Relleno

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EQUIPO

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PROCEDIMIENTO
1. Equilibrate the column and detector with
mobile phase at the specified flow rate until a
constant signal is received.
2. Inject a sample through the injector, or use
an autosampler.
3. Begin the gradient program.
4. Record the chromatogram.
5. Analyze as directed in the monograph.

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INTERPRETACIÓN DE UN CROMATOGRAMA
tm: tiempo requerido para la
elución de un componente no
retenido
W: ancho de la banda (min)
h: Altura
W1/2: Ancho de la banda a la
mitad de la altura

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PARÁMETROS
• PLATOS TEORICOS:
• RESOLUCIÓN:

• FACTOR DE RETENCIÓN:

• FACTOR DE SEPARACIÓN:

• ASIMETRÍA:

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RESOLUCIÓN Aumente N (eficiencia) mediante:

Aumento de la longitud de la columna

Disminución del tamaño de las partículas
Reducir las colas de los picos
Aumento de temperatura
Reducción del volumen extracolumna del sistema

Cambie α (selectividad) mediante:

Cambio de la fase estacionaria de la columna

Cambio del pH de la fase móvil
Cambio de disolvente (s) de fase móvil

Incrementar k por:

Usando un solvente con diferente polaridad

Usando una fase estacionaria más fuerte (cambio de
polaridad)

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