Terapia Génica aplicada a

Anemia de Fanconi

Jesús Mansilla Guardiola

Alejandro Arias Peris

Seminario Bioquímica clínica

y patología molecular
 1. Introducción a la anemia de Fanconi
La anemia de Fanconi es un trastorno hereditario poco frecuente que se relaciona con mutaciones
que se manifiestan con defectos en la reparación del ADN.

A nivel celular: A nivel sistémico:

-Aumento de rotura -Pancitopenia progresiva

cromosómica -Malformaciones congénitas
-Reparación defectuosa -Hematopatías
del DNA -Tumores sólidos
 2. Epidemiología
Patrón de herencia autosómico recesivo
- -Frecuencia de heterocigotos en 1/200
(muy raramente herencia ligada al cromosoma X) (variabilidad étnica), con prevalencia de la
enfermedad al nacimiento en 1/360.000
individuos.
3. Etiología
- La AF se debe a mutaciones en los
genes implicados en la reparación
del ADN y en la estabilidad
genómica; se han identificado 22
genes implicados hasta la fecha.

- Codifican para proteínas FANC,

implicadas en el proceso celular de
la ruta de Fanconi.
Ruta de Fanconi

-Vía de reparación del DNA como respuesta a

daño celular.

-Esta ruta está formada por un complejo central

de 8 proteínas FANC y factores asociados,
esencial para que ocurra formación y
monoubiquinización del dímero FANCD2-FANCI.

-Cuando hay daño celular, estas proteínas se

envían a las zonas dañadas del núcleo
desencadenando la reparación del DNA para que
su replicación pueda continuar.
 Ruta de Fanconi
1) Formación del complejo central de
proteínas FANC A, B, C, E, F, G, L y M.

2) Activación de dímero FANCD2/FANCI:

permitiendo a FANCD2 coordinar la
reparación de entrecruzamientos entre
hebras con proteínas de reparación del
DNA.

3) Reclutamiento de proteínas de
reparación del DNA a los focos de
daño: una vez reclutado el
heterodímero FANCD2/FANCI, activado Diepoxibutano (DEP) y mitomicina D
y localizado en la cromatina,
4. Clínica
Anomalías somáticas: Las malformaciones son muy heterogéneas. Los primeros signos clínicos son
malformaciones congénitas y cutáneas (manchas café con leche, hiperpigmentación).
Insuficiencia medular: fallo medular progresivo que origina una pacitopenia en sangre periférica (déficit
de glóbulos rojos, blancos y plaquetas), generando la proliferación de infecciones.
Leucemia mieloblástica Síndrome mielodisplásico Tumores sólidos
aguda
 5. Tratamiento= Terapia Génica
-En 2019 se llevó a cabo un ensayo clínico de terapia génica con pacientes
con anemia de Fanconi subtipo A, en la división de Terapias Innovadoras
Hematopoyéticas del CIEMAT

GEN: FANC A

Vectores lentivirales
FANCA
Metodología
1. 4 pacientes pediátricos:
- FA-02002
- FA-02004
- FA-02005
- FA-02006

2. Recolección de células madre

hematopoyéticas (HSB)

3. Procesamiento inmediato de las células

recolectadas

4. Transducción con vectores lentivirales

Transducción lentiviral
- Vector: Lentivirus

- Basados en el VIH

- Capaces de infectar células

quiescentes

- Permiten integrarse en el genoma

- No permiten introducir transgenes

demasiado grandes
 Procesamiento de las células recolectadas
A. Inmunoselección celular para detección de células
CD34+
B. Estimulación de estas células
C. Transducción con el vector lentiviral
D. Se consiguió exitosamente introducir el gen que
codifica para FANC A

2-3 horas posteriores a la transducción se reintrodujeron

las células en los pacientes

Los signos vitales se registraron cada 5 minutos y la

temperatura cada 15 y fueron monitoreados durante 72
horas
Evolución de los pacientes
Parámetro del número medio de copias para el vector por célula
Análisis de proporción de CFC resistentes a mitomicina C
- Paciente FA-02002: se le infundió 250.000 CD34+/Kg. Alcanzó
55% en leucocitos de sangre periférica y 70% de linfocitos B a los
30 meses.
- Paciente FA-02004: Se infundió un número menor de CD34,
160000/kg. niveles del 9% sangre periférica y 25% en médula ósea
de células corregidas a los 24 meses
- Paciente FA-02005: 220000 CD34+/Kg, alcanzando niveles del 6%
en sangre periférica y 20% en los linajes de médula ósea a los 24 y
30 meses del injerto.
- Paciente FA-02006: Se le infundieron 410.000 CD34+/Kg. 17% de
células corregidas encontradas en sangre periférica a los 18 meses
y 8% en médula ósea a los 12 meses.
Estudio de los efectos adversos
1. Ninguna de las muestras de médula ósea analizada de estos
pacientes tratados con terapia génica mostró anomalías
citogenéticas, deducido del análisis de bandas G e hibridación
FISH
2. No se encontraron ninguna mutación en ningún gen de
malignidad mieloide
3. No se detectó reactividad inmunitaria frente a esta proteína en
ninguna muestra analizada.
4. los análisis de los recuentos de células PB sugieren una
detención en la progresión de la BMF
Conclusión
1. El estudio demuestra la factibilidad de corregir este defecto genético

2. Dado que la terapia génica en AF parece factible y segura en ausencia de

condicionamiento citotóxico, podría implementarse temprano en el curso de la
enfermedad para evitar BMF y otras complicaciones

3. En contraste con el trasplante alogénico, es poco probable que la terapia génica

autóloga propuesta aumente la incidencia de tumores sólidos.

4. En caso de que aparezcan tumores sólidos, se esperaría una mejor respuesta

hematológica a la quimioterapia y un sistema inmunológico más saludable
Otras aplicaciones: Leucodistrofia metacromática

-Acumulación de sulfátidos en células

nerviosas que conducen a
desmielinización de las neuronas

-Deterioro función motora y cognitiva que

conducen progresivamente a la muerte.
Otras aplicaciones: Leucodistrofia metacromática
Libmeldy

El principio activo de esta terapia son células CD34+

derivadas de la propia MO o sangre periférica del
paciente, modificadas a través de un vector lentiviral
para obtener copia funcional del gen ARSA.

Una vez transferidas al paciente, Libmeldy se

transporta a la MO proliferando en todos sus linajes.
Los leucocitos modificados se propagan por el
organismo produciendo ARSA funcional ayudando a
descomponer sulfátidos de las células circulantes.
 FIN
Gracias

Jesús Mansilla
Alejandro Arias