Tema11 - RESPUESTA CELULAR AL DAÑO DEL ADN

TEMA 11.
RESPUESTAS CELULARES AL DAÑO DEL ADN

1.-TIPO DE DAÑO CELULAR
2.-REPARACIÓN POST-REPLICACIÓN: MISMATCH REPAIR
2.1.-Bacterias
2.2.-Eucariotas
3.-REPARACIÓN SIN CORTE DE LAS BASES
4.-REPARACIÓN POR CORTE DE LAS BASES
4.1.-Reparación por corte de fragmentos grandes
5.-RESPUESTA AL DAÑO GENERALIZADO
5.1.-Respuesta al daño generalizado en bacterias
5.2.-Respuesta al daño generalizado en eucariotas
6.-MUERTE CELULAR PROGRAMADA
Craig et al: Molecular Biology

Copyright © Oxford University Press 2015
1.-TIPO DE DAÑO CELULAR
Agentes alquilantes Fuentes
Agentes intercalantes físicas: UV
Dimeros de
pirimidina (T/C)
Inserciones y Polimerasa no actúa

delecciones en sitio catalítico
Depurinación /
Depirimidación
Mutaciones Grandes
puntuales Fragmentos
Desaminación
C→U
Cambio Grandes
pauta lectura Efectos

La replicación del ADN no está libre de
errores: se agrega un nucleótido
incorrecto cada 105 a 106 bases. Esto
a menudo se debe a la presencia de
tautómeros del nucleótido. Tipos:
✓ Se produce una mutación de

transición si una purina (A o G) se
reemplaza por otra purina, o una
pirimidina (C o T) se reemplaza por
la otra pirimidina
✓ Una mutación de transversión es

cuando una purina se reemplaza
por una pirimidina o viceversa.

Copyright © Oxford University Press 2015 15.1: Types of DNA Damage Figure 15-01
Si no se repara un nucleótido alterado, después de la
siguiente ronda de replicación surgirá un cambio de
secuencia permanente. El daño del ADN a menudo es
causado por metabolitos celulares (como especies reactivas
de oxígeno). Los químicos exógenos pueden causar daños;
la mayoría de los carcinógenos actúan induciendo mutaciones

Copyright © Oxford University Press 2015 15.1: Types of DNA Damage Figure 15-02
El daño del ADN puede ocurrir por agentes intracelulares
y extracelulares.
Como ejemplo de agente intracelular, están las especies
reactivas como son los agentes alquilantes actúan como
potentes modificadores de la estructura del DNA añadiendo
metilos o etilos que impide las interaccione entre las
bases: ej 6-metilguanina o 7 etil guanina que se unen a la T
en vez de la C. Como agente extracelular, nitrosaminas
actuan agente alquilante que oxidan A y C) y extracelulares
(agentes alquilantes, nitrosaminas)
Los agentes que dañan el ADN pueden causar daños que
distorsionan la hélice y provocan inserciones y
eliminaciones en la replicación. Estas lesiones provocan
daños en un solo punto o nucleótido, provocando una
mutación puntual en la secuencia de DNA pero muchos
otros agentes tienen efectos mucho mas graves.
Copyright © Oxford University Press 2015 15.1: Types of DNA Damage Figure 15-03a
Los intercaladores, como el bromuro de etidio, que
desenrolla y extiende las hebras cuando este DNA es
replicado. Las inserciones y deleciones son
generados en el DNA nuevo que se esta sintetizando.
En las regiones que codifican proteínas se produce
un cambio en el marco de lectura

El DNA también se daña por fuentes físicas como la UV que promueve la
formación de dimeros de pirimidina, estas dimerizaciones provocan que la
polimerasa no pueda acomodar la base en el sitio catalitico lo que
genera inserciones o deleciones en la nueva hebra. Otra fuente es daño
por ionización por radiación como rayos X que produce rotura en una o dos
hebras de DNA

Copyright © Oxford University Press 2015 15.1: Types of DNA Damage Figure 15-03b
A veces el daño en el ADN ocurre en un solo nucleótido. Un
ejemplo de daño puntual es la depurinación /
depirimidación, donde la base se corta de la cadena principal
de azúcar y fosfato.

La desaminación (U-A en vez de G; partiendo de C), y la
alquilación también causan cambios en la estructura del ADN
que pueden causar mutaciones. En la células de mamíferos se
producen alrededor de depurinaciones y depirimidaciones de
18000 bases y 500 bases al día respectivamente

Copyright © Oxford University Press 2015 15.1: Types of DNA Damage Figure 15-04b,c
2.-REPARACIÓN POST-REPLICACIÓN (MISMATCH REPAIR)
2.1.-Bacterias
La “mismatch repair” corrige los errores cometidos durante la
replicación, usando la otra hebra como molde
En E. coli el sistema mismatch repair esta formado por 3
proteínas Mut: MutS, MutL y MutH
✓ Primero: se debe reconocer la falta de coincidencia (proteína
MutS; (1)
✓ Segundo: se debe reparar el nucleótido que no coincide en el
ADN recién sintetizado. MutH reconoce el nuevo ADN ya que
no está metilado (2).
✓ Tercero: el complejo MutSLH se ensambla (3) y MutH corta
la cadena nueva (4)
✓ Cuarto: la hebra mellada es digerida por una exonucleasa
(5,6) y el ADN se vuelve a sintetizar (7)

Copyright © Oxford University Press 2015 15.2: Post-Replication Mismatch Repair Figure 15-05
Ejemplo: MISMATCH REPAIR BACTERIANO (Truco)
MutH
HOMO (3)(4)
5´ 3´
MutL
LINK (2)
(4)
3´ 5´
MutS
SPY
Craig et (1) Biology
al: Molecular (5)
Ejemplo: MISMATCH REPAIR

2.2.-Eucariotas
En eucariotas, existen varias proteínas MutS y MutL que
interaccionan para formar heterodímeros. Como en E. coli, la
MutS reconoce el desajuste de Bases, la metilación en
eucariotas ocurre en los eucariotas pero no es exclusivo solo a
la hebra parental sintetizada entonces no hay homologo de
MutH en eucariotas.
Los eucariotas tienen una MutLalpha con actividad
endonucleasa y que es activada por MutS que se une al
desajuste de bases. Parece ser que el sistema de mismatch
repair es capaz de distinguir la hebra nueva sintetizada por la
discontinuidad de la nueva hebra sintetizada

Ejemplo: MISMATCH REPAIR EUCARIOTA (Truco)
5´ 3´
MutL
LINK (2)
MutLalpha
(3)
3´
MutS
SPY
Craig et (1) Biology
al: Molecular (5)
Por otro lado, las regiones repetitivas de ADN pueden formar
horquillas (negro) y que se pueden saltar durante la replicación
(verde). La región es más corta en la siguiente ronda de
replicación (azul).
Procesos similares pueden insertar repeticiones. La reparación

de falta de coincidencia se puede detectar y reparar horquillas:
el ADN recién sintetizado se degrada, la horquilla se
despliega y la nueva hebra se puede volver a copiar. Los
defectos en la reparación de desajustes conducen a mayores
tasas de cáncer y mutación espontánea

3.-REPARACIÓN SIN CORTE LAS BASES
Algunos daños en el ADN pueden repararse sin corte en este
caso hay enzimas especializadas que reconocen y revierten los
cambios.
Ejemplo 1: en algunos organismos la dimerización de
pirimidina se pueden corregir mediante Las fotoliasas que
usan energía que está cerca del UV para romper los dimeros y
revierte el daño ocasionado.
Ejemplo 2: La alquilación en guanina (azul claro) o el
esqueleto del ADN (azul oscuro) es reparada por
alquiltransferasas

Copyright © Oxford University Press 2015 15.3: Repair of DNA Damage by Direct Reversal Figure 15-07
Ejemplo 3: Alquil tranferasas
La metilacion de las adeninas y citosinas es un proceso
importante dentro del desarrollo normal de la célula. Sin
embargo el daño del DNA puede provenir de la metilación.
Los agentes alquilantes pueden añadir metilos a las bases o
al esqueleto del DNA. Estas modificaciones ocurren
frecuentemente en las guaninas que es particularmente
susceptible a estos agentes.
Las metilguaninas y los metilos en el esqueleto del DNA
son reconocidos por las alquiltransferasas que son capaces
de quitar el metilo y unirlo a una cisteina que tienen en el
sitio activo esa unión es irreversible y esa proteína se
suicida y se inactiva. Ratones que tienen inactivados los
alquiltransferasas son susceptibles a producir tumores

Ejemplo 4: AlkA en E.coli
La alquiltransferasa de E. coli es Ada,
ha evolucionado de tal manera que
cuando adquiere un metilo promueve su
propia expresión y estimula la
producción de AlkA (otra proteína
reparadora)
La alquilación en guanina (azul claro) o el
esqueleto del ADN (azul oscuro) es
reparada por la alquiltransferasas Ada en
E. coli.
Una vez unido a un grupo alquilo, Ada se
inactiva. Methyl-Ada estimula más la
producción de Ada y también estimula la
producción de AlkA.

4.-REPARACIÓN POR CORTE DE LAS BASES
La mayoría de los daños en el ADN se reparan mediante la reparación por
corte de las bases. Los nucleótidos abásicos; (2) son reparados por
endonucleasa apurínica / apirimidínica (endonucleasas AP); (3). Las
endonucleasas AP cortan en el esqueleto y el espacio se llena con
polimerasas reparadoras. Las bases no emparejadas también se reparan
de esta manera, pero las glicosilasas de ADN eliminan primero la base (1-2)

Copyright © Oxford University Press 2015 15.4: Repair of DNA Damage by Base Excision Repair Figure 15-08
4.1.-Reparación por corte de fragmentos grandes
Las lesiones voluminosas que distorsionan la hélice del ADN
se reparan mediante reparación por corte de nucleótidos: se
cortan y reemplazan de 10 a 30 nucleótidos. Tanto en
bacterias como en eucariotas realizan el mismo proceso pero
las proteínas de los dos sistemas no son homologas. El caso
mejor estudiado es el de las bacterias: UvrA, UvrB, UvrC, y
UvrD.
En bacterias, UvrA y UvrB rastrean el ADN en busca de
regiones distorsionadas (1), luego UvrB (una helicasa)
desenrolla la región dañada (2). UvrC corta el ADN dañado
(3), el ADN dañado luego es eliminado por UvrD (4), y el ADN
se vuelve a sintetizar a partir de la cadena no dañada(5)

Copyright © Oxford University Press 2015 15.5: Nucleotide Excision Repair of Bulky Lesions Figure 15-10
UvrA: rastrear
UvrB: rastrear + helicasa
UvrC: cortar
UvrD: elimina corte

Las proteínas de reparación por corte de nucleótidos operan
en cualquier parte del genoma (reparación genómica global;
GGR. El daño en los genes que se transcriben activamente se
repara preferentemente (reparación acoplada a la
transcripción; TCR). TCR elimina las ARN polimerasas
estancadas Los defectos en NER causan un aumento de las
tasas de cáncer, como la xerodermia pigmentosa.

El ADN dañado puede no repararse antes de que se
encuentre con una bifurcación de replicación, y esto puede
conducir a horquillas de replicación estancadas. Las
polimerasas de translesion (TLS) se reclutan para las
horquillas estancadas

Copyright © Oxford University Press 2015 15.6: Translesion DNA Synthesis Figure 15-12
Después de que las horquillas de
replicación se bloquean al encontrar ADN
dañado, las polimerasas de translesión
(TLS) pueden asumir la síntesis. Esto
tiene un coste: las polimerasas TLS
carecen de la capacidad de corrección
3‘- 5‘.
Ejemplo comparativo: el error de estas
polimerasas es de 10-2 10-4 mientras que
las polimerasas replicativas esta en 10-5
10-6

Los sitios activos de la polimerasa TLS son más abiertos y
flexibles (Dpo4) que las polimerasas replicativas (polimerasas
de las familias A y B)
Esta flexibilidad
permite evitar el
ADN problemático
y continuar la
síntesis, aunque
con menor
fidelidad.

Todas las polimerasas (incluidas
las polimerasas TLS) se reclutan
en el ADN a través de la
interacción con la sliding clamp.
Debido a su baja fidelidad, las
polimerasas TLS solo deben
reclutarse cuando sea
necesario. No está claro cómo se
produce el cambio entre
polimerasas

5.-RESPUESTA AL DAÑO GENERALIZADO
Cuando el daño es generalizado, se activa la
respuesta al daño del ADN en toda la célula:.
1)Las polimerasas encuentran lesiones (a) y
se estancan, lo que lleva a grandes regiones
de ADN monocatenario.
2)Las mellas en las hebras monocatenarias
pueden provocar roturas bicatenarias en el
ADN (b). Estos son muy dañinos ya que no
hay hebra que actúe como molde para la
reparación.
3)Estos tipos de daño son reconocidos por las
proteínas del sensor de daño.
4)En organismos multicelulares, el daño no
reparado puede desencadenar la muerte
celular programada
Copyright © Oxford University Press 2015 15.7: The DNA Damage Response Figure 15-16
5.1.-Respuesta al daño generalizado en bacterias
Las bacterias responden al daño con la respuesta SOS, que
involucra> 40 proteínas. RecA es una proteína SOS clave.
RecA normalmente está inactiva y la proteína LexA impide la
transcripción de muchos genes SOS al unirse a sus
operadores (1):
1)Cuando una horquilla de replicación se detiene, el ADN
monocatenario queda expuesto: RecA se une al stDNA(2). La
RecA unida forma un filamento en el ADN monocatenario y
estimula el corte de LexA. LexA no puede unirse al ADN, por lo
que los genes SOS se transcriben (2).
2)LexA también inhibe la progresión del ciclo celular, para dar
tiempo a que se repare el daño.
3)Las proteínas de reparación SOS reparan el ADN dañado.
La actividad de RecA disminuye y LexA vuelve a unirse al ADN
para desactivar la transcripción del gen SOS (3)
Copyright © Oxford University Press 2015 15.8: The DNA Damage Response in Bacteria Figure 15-17
SOS: 40 proteínas (RecA y LexA también)
RecA: se une a stDNA
LexA: impide transcripción SOS
DinI: proteína SOS, se une a LexA
Din1 imita la estructura del
ADN, por lo que RecA se
une a él en lugar de ADN
monocatenario:

Copyright © Oxford University Press 2015 15.8: The DNA Damage Response in Bacteria Figure 15-17
Figure 15-18
5.2.-Respuesta al daño generalizado en
eucariotas
Al igual que en las bacterias, las proteínas
sensoras detectan largos fragmentos de
ADN monocatenario y roturas de ADN
bicatenario en eucariotas (2). En eucariotas,
los sensores reclutan a las quinasas
reguladoras (ATM y ATR) que median en la
respuesta al daño (3). Las quinasas fosforilan
mediadores y efectores que conducen a
cambios en la transcripción y activan los
puntos de control del ciclo celular (4). Estos
cambios celulares producen proteínas que
reparan el ADN y pausan la progresión del
ciclo celular para proporcionar tiempo
suficiente para la reparación.

Copyright © Oxford University Press 2015 15.9: The DNA Damage Response in Eukaryotes Figure 15-19
6.-MUERTE CELULAR PROGRAMADA: APOPTOSIS
En un organismo multicelular, las células con ADN dañado
pueden dañar todo el organismo; por ejemplo, pueden crecer
sin control y volverse cancerosas. Por lo tanto, las células no
reparadas se mantienen permanentemente en G1, o sufren
apoptosis. La apoptosis está controlada por la proteína
p53.
La proteína p53 es muy importante: más de la mitad de los
cánceres humanos tienen mutaciones en p53.
La proteína p53 actúa uniéndose a los promotores de
genes diana para aumentar las proteínas que inhiben el
ciclo celular o estimulan la apoptosis, y disminuyen los
inhibidores de la apoptosis

Copyright © Oxford University Press 2015 15.10: DNA Damage and Cell Death in Mammalian Cells
La activación de p53 está diseñada para causar la muerte
celular, por lo que su actividad se regula cuidadosamente.
En el esquema se muestran los dominios p53. El dominio de
unión al ADN interactúa con el ADN. El dominio de
activación interactúa con la maquinaria de transcripción.
N y C terminales de la proteína son objetos de modificaciones
(como la acetilación). Estas modificaciones controlan
estrechamente la actividad de p53

Copyright © Oxford University Press 2015 15.10: DNA Damage and Cell Death in Mammalian Cells Figure 15-27
6.1.-Sin daño en el ADN
Cuando no hay daño en el
ADN (a) MDM2 ubiquitina
lisinas en el dominio C-
terminal de p53,
conduciéndola a la
degradación. Cualquier
p53 restante se exporta
desde el núcleo

6.2.-Con daño en el ADN
Cuando hay daño en el ADN (b), se
estimula la actividad de la quinasa y se
produce la fosforilación de p53 y MDM2,
por lo que ya no interactúan (1).
En ese momento p53 se convierte en un
tetrámero, bloquea la exportación
nuclear (2) aumentando su concentración
nuclear.
Por otro lado, p53 interactúa con las
proteínas de transcripción, incluida la
acetilasa p300, que acetila las histonas y
la p53. Esto conduce a la expresión de
proteínas relacionadas con la muerte
celular y detiene el ciclo celular.


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Craig et al: Molecular Biology

Inserciones y Polimerasa no actúa

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✓ Se produce una mutación de

✓ Una mutación de transversión es

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