Nombre de la técnica Fundamento
Enzimas de restricción -Presentan actividad endonucleasa, son de origen
bacteriano y cortan los enlaces fosfodiéster del ADN en
una secuencia especifica denominada secuencia diana. Las
cuales estas enzimas sirven como herramienta
biotecnológica surgió de la necesidad de cortar las largas
cadenas de ADN genómico para manipularse y analizarse
en fragmentos más pequeños.
Vectores de colación - La introducción de un fragmento de ADN denominado
inserto dentro de una molécula de ADN denominada
vector, que puede replicarse de manera autónoma e
independiente del genoma de la célula hospedera. El
resultado es la obtención de millones de copias de una
molécula recombinante o clona molecular compuesta por
ADN proveniente del inserto y del vector.
-Los vectores de clonación o vector molecular son
moléculas transportadoras que transfieren y replican
fragmentos de ADN que llevan insertados mediante
técnicas de ADN recombinante. Para que sirva de vector,
una molécula debe ser capaz de replicarse junto con el
fragmento de ADN que transporta.
Sondas • Las sondas son segmentos de ADN o ARN de cadena
sencilla marcados con moléculas reporteras, como enzimas
o radioisótopos, que permiten su fácil detección, es decir,
su secuencia nucleotídica, es lo que le permitirá, entre
miles de fragmentos que forman parte del genoma de un ser
humano, identificar “un solo gen” o “el fragmento de un
gen”.
Aplicación
•Son una herramienta primordial para la ejecución de
diversos ensayos útiles en investigación clínica, desde la
determinación de polimorfismos de longitud de fragmentos
de restricción.
•Así como en la construcción de vectores con ADN
recombinante y clonación de secuencias de ADN
provenientes de humano, virus, bacterias y demás
microorganismos de interés para la generación de
conocimiento o para su aplicación en el área de la medicina.
•Este proceso puede emplearse para la producción de
proteínas eucariotas en bacterias (proteínas recombinantes),
como hormonas, antibióticos, vacunas.
•Generación de cultivos transgénicos resistentes a plagas o
sequías.
• Producción de animales transgénicos capaces de producir
en su leche proteínas recombinantes. así como para el
establecimiento de librerías genómicas o genotecas, que han
permitido secuenciar por completo el genoma humano y el
de otros organismos.
•Una sonda es una secuencia de ADN o ARN de cadena
simple que se utiliza para encontrar su secuencia
complementaria en el genoma de una muestra.
•Pueden sintetizarse y purificarse con relativa facilidad por
instrumentos comerciales disponibles en la actualidad.
En términos generales las sondas se obtienen a partir de
síntesis química o de plásmidos, que se clonan con la sonda

Las técnicas de hibridación molecular se basan en el
Técnicas de hibridación: estudio de secuencias específicas del ADN o ARN tanto en
su identificación como para su eventual cuantificación.
Se parte de sondas que son secuencias de ADN o ARN
complementarias a aquellas que se quieren detectar.
Para localizar fragmentos específicos se utiliza la técnica de
hibridación de ácidos nucleídos.
Southerblot -Esta técnica se utiliza para determinar la presencia de un •La técnica de ha sido de gran utilidad para identificar genes
gen o fragmentos del ADN específicos en una mezcla de
ácidos nucleicos previamente extraídos.
Northerblot •Es una técnica que permite la identificación de
secuencias específicas de ARN, en general ARNm.
Slot/Dotblot Tras el aislamiento y separación de los ácidos nucleicos,
éstos se aplican directamente a la membrana sin
separarlos, según su peso molecular; es decir, no se realiza
electroforesis. La fijación se hace generalmente con vacío y
en un molde cuyo pocillo puede tener forma de punto (dot
blot) o ser lineal (slot blot).
de interés. La especificidad de la síntesis de la sonda
asociados con enfermedades de transmisión.
• Genética, e identificar mutaciones, como rearreglos,
elecciones y dosis génica en caso de portadores.
• También se utiliza para detectar polimorfismos en los
fragmentos de restricción de diversos genes.
•Permite observar el patrón de expresión de un gen
particular entre tejidos, órganos, etapas de desarrollo,
niveles de estrés ambiental, infección por patógenos y
durante el tratamiento.
•La técnica se ha utilizado para mostrar la sobreexpresión de
oncogenes y la regulación negativa de los genes supresores
de tumores en células cancerosas en comparación con el
tejido "normal", así como la expresión de genes en el
rechazo de órganos trasplantados.
•Sirve para la detecciones no sólo cualitativas (positivo o
negativo) sino también cuantitativas, utilizando como patrón
diluciones seriadas de concentraciones conocidas del
genoma que se está determinando.
Hibridación in situ Es una técnica de laboratorio que consiste en marcar una
hebra sencilla de ARN o ADN denominada sonda y
permitir que se empareje con su secuencia complementaria
en el ARN o el ADN presente en una muestra de tejido o de
cromosomas. La sonda está marcada con una sustancia
trazadora química o radiactiva por lo que su unión puede
ser visualizada
Microarrays El método más utilizado es el de los microarrays de DNA,
que permite el análisis simultáneo de la expresión de miles
de genes. Se marca el ARN o el ADN copia (cDNA) de una
población celular con fluorescencia o radioactividad, y se
usa esta preparación para hibridar con el ADN de la
micromatriz. Los microarrays de DNA permiten elaborar
mapas finos de transcripción y proporcionan información
indirecta de los niveles de proteínas.
PCR punto final Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Permite la
amplificación de una secuencia especifica de ADN
mediante nucleótidos trisfosfatados y un ADN polimerasa
termoestable.Llevan a cabo la síntesis de la nueva cadena
de ADN emparejando los desoxirribonucleótidos trifosfato
con los desoxirribonucleótidos complementarios
correspondientes del ADN molde.
• Permite la localización de secuencias génicas a nivel
cromosómico, con lo que se pueden detectar translocaciones
y otras alteraciones cromosómicas, así como el estudio de
expresión de genes (ARNm) a nivel celular y subcelular.
• Las principales aplicaciones son la identificación de
infecciones virales en tejidos, así como el mapeo
cromosómico.
• Se usan para identificar genes cuya expresión se modifica
en respuesta a patógenos u otros organismos comparado la
expresión génica de la célula infectada, con la no infectada.
• Evaluación del tejido del genoma de diferentes especies.
• Verifican la identificación de organismos en alimentos y
cultivos.
• Detección de SNP
• La clonación de ADN para secuenciación, clonación y
manipulación de genes, mutagénesis de genes.
• Construcción de filogenias basadas enADN , o análisis
funcional de genes.
• Diagnóstico y seguimiento de enfermedades hereditarias.
• Análisis de huellas genéticas para perfiles de ADN (por
ejemplo, en ciencias forenses y pruebas de parentesco ).
• Detección de patógenos en pruebas de ácidos nucleicos
para el diagnóstico de enfermedades infecciosas.

PCR tiempo real Una reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real se
basa en la PCR punto final. Controla la amplificación de
una molécula de ADN dirigida durante la PCR, es decir, en
tiempo real, y no al final, como en la PCR convencional.
Se añade un componente fluorescente que permite medir la
luz. A más luz, más cantidad del ADN detectado.
RT-PCR Esta técnica es útil para el análisis de la expresión del
transgén en el ARNm. Es una modificación de la PCR que
incluye una extracción de ARN, una retrotranscripción
mediante transcriptasa inversa, la formación de un ADN de
doble cadena y, posteriormente, la PCR con primers
específicos para el transgén. Por último, se realiza el
análisis del fragmento amplificado mediante electroforesis
en gel de agarosa.
Western blot • Este método permite analizar la expresión del transgén
en la proteína. La proteína transgénica se separa de la
mezcla proteica celular mediante la técnica de
electroforesis en gel de poliacrilamida. Las proteínas
separadas por peso molecular .Posteriormente, se añade un
anticuerpo marcado específico contra la proteína. La
proteína de interés se detecta por autorradiografía o
fluorescencia
Inmunocitoquímica Implica el proceso de identificación selectiva de antígenos
(proteínas) en las células de una sección de tejido
explotando el principio de unión de anticuerpos
específicamente a antígenos en tejidos biológicos.
• La PCR permite el aislamiento de fragmentos de ADN a
partir del ADN genómico por amplificación selectiva de una
región específica de ADN.
•La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo
real se utiliza para la detección y cuantificación específicas
y sensibles de ácidos nucleicos diana.
•Usos diagnósticos.- Se aplica para detectar rápidamente
ácidos nucleicos que son diagnósticos de, por ejemplo,
enfermedades infecciosas, cáncer y anomalías genéticas. Y
se implementa como una herramienta para detectar
enfermedades emergentes, tales como nuevas cepas de la
gripe , en pruebas de diagnóstico.
• Usos microbiológicos .- Es utilizada por los microbiólogos
que trabajan en los campos de la seguridad alimentaria, el
deterioro de los alimentos y la fermentación y para la
evaluación de riesgos microbianos de la calidad del agua
(agua potable y recreativa) y en la protección de la salud
pública.
• Prueba de VIH, se usa como prueba confirmatoria.
• Prueba definitiva para encefalopatía espongiforme bovina,
“vacas locas”
• Confirmación para la infección por Hepatitis B y la
infección por HSV-2 (Herpes Tipo 2).
• Esta técnica utiliza principalmente fluoróforos para
visualizar la ubicación de los anticuerpos.
•Es la aplicación más común de inmunotinción.
inmunofluorescencia Son técnicas observadas en luz de microscopía con un •Con pruebas de inmunofluorescencia, es posible
microscopio de fluorescencia y se utiliza principalmente en demostrar, en algunas mujeres infértiles,
microbiológicos muestras. Utiliza la especificidad de los
anticuerpos contra su antígeno para dirigir colorantes • La presencia de Acs contra los espermatozoides,
fluorescentes a objetivos específicos de biomoléculas
dentro de una célula y, por lo tanto, permite la •Identificación de carcinomas, enfermedad de Hodgkin,
visualización de la distribución de la molécula objetivo a leucemia, cancer de próstata, de mama, carcinoma renal y
través de la muestra. gastrointestinal.
ELISA • Este método permite analizar la expresión del transgén en •Se trata de un examen de laboratorio comúnmente usado
la proteína y se fundamenta en una reacción antígeno- para detectar anticuerpos en la sangre.
anticuerpo, entre un anticuerpo específico contra la
proteína que genera el transgén. Al añadir la mezcla
proteica, el anticuerpo reconoce la proteína de interés y,
mediante una serie de reacciones químicas, se forma un
metabolito detectable que genera un cambio de color. • Este
producto indica de manera indirecta la presencia de la
proteína, lo que permite su cuantificación