INGENIERÍA BIOQUÍMICA

TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO EN CELAYA

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE CELAYA

D.C. SILVA MARTÍNEZ GUILLERMO ANTONIO
FECHA: VIERNES 31 DE MARZO DEL 2023

UNIDAD II: MÉTODOS Y TÉCNICAS DE CULTIVO MICROBIANO

PRÁCTICA 7 “TINCIÓN DE ESPORAS”

MICROBIOLOGÍA “A”
Pacheco Ramírez Carlos Emmanuel 20030600
Ramírez Juárez Alin 20030916
Sánchez Balderas María Teresa 20030665
Sánchez Jiménez Montserrat 20030189

Semestre enero 2023 - junio 2023

Microbiología 22 de marzo de 2023

TINCIÓN DE ESPORAS
Ramírez Juárez, A., Pacheco Ramírez, C., Sánchez Balderas, M. y Sánchez Jiménez M.

RESUMEN

La tinción de esporas o también llamada tinción de Schaeffer-Fulton es ampliamente utilizada para teñir las
estructuras de resistencia que forman algunos géneros bacterianos cuando se encuentran en condiciones
desfavorables, estas estructuras corresponden a una forma de supervivencia. Existen muchos géneros que
forman esporas, generalmente son los géneros Bacillus y Costridium (son considerados relevantes debido a
que poseen especies patógenas para el ser humano).

1. COMPETENCIA estructuras fueron descritas solamente como

Que el alumno observe los componentes de las
bacterias mediante esta técnica especial.
2. MARCO TEÓRICO
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas
es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio
óptimo. La principal dificultad es la falta de contraste
entre la célula y el medio que la rodea, y el medio
más simple de aumentar el contraste es la utilización
de colorantes. Estos pueden emplearse para
distinguir entre tipos diferentes de células o revelar
la presencia de determinados constituyentes
celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas,
paredes celulares, centros de actividad respiratoria,
etc.
cuerpos refringentes debido a que no podían ser
teñidas utilizando los compuestos acuosos típicos,
como el azul de metileno, safranina, violeta de
genciana, entre otros, que eran aplicados en los
procedimientos básicos de tinción, debido a su
impermeabilidad a estos.
Una vez que fue descubierto que las endosporas
eran una forma bacteriana latente, que demostraban
una resistencia única en los tratamientos con calor,
los resultados de las investigaciones hicieron
hincapié en el control de las endosporas
bacterianas, consiguiendo mejorar las técnicas de
esterilización y la prevención de infecciones.
(Dominguez, K., et al., 2013)

Las células generalmente son tratadas para
coagular el protoplasma antes de teñirlas, proceso
llamado fijación. Para bacterias, la fijación por el
calor es lo más corriente, aunque también puede
fijarse con sustancias químicas como formaldehido,
ácidos y alcoholes. Después de la fijación se añade
el colorante, no se producen ulteriores cambios
estructurales en el protoplasma. La fijación se realiza
habitualmente el encogimiento de las células, la
tinción hace que las células que han sido fijadas o
teñidas no puedan realizarse con mucha precisión.
La mayoría de los colorantes son compuestos
orgánicos que tienen alguna afinidad específica por
los materiales celulares. Muchos colorantes
utilizados con frecuencia son moléculas cargadas
positivamente (cationes) y se combinan con
intensidad con los constituyentes celulares cargados
negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los
polisacáridos ácidos. (Corona, B., et al, 2018)
Las endosporas fueron observadas y reportadas por
numerosos científicos como Perty en 1852, Pasteur
en 1869, Koch en 1876 y por Cohn en 1872. Estas
Las endosporas bacterianas pueden distinguirse en
las preparaciones microscópicas sin previa
coloración debido a la gran refringencia de su
protoplasma, que la diferencia de las células
vegetativas. En las preparaciones teñidas por
métodos comunes, las endosporas no se colorean
debido a la resistencia que ofrece su gruesa cubierta
a la impregnación por los colorantes habituales
utilizados en la parte coloreada (vegetativa) de la
bacteria. No obstante, es posible lograr la tinción de
las endosporas por medio de métodos especiales en
los que se emplea el calor como mordiente.
Las endosporas, debido a las características de sus
envolturas no se tiñen con procedimientos
habituales. El método más empleado es el de
Schaeffer-Fulton donde la suspensión de
microorganismos se tiñe en caliente con el colorante
verde de malaquita, un colorante soluble en agua por
cuya razón no se utiliza habitualmente en tinciones
convencionales. El calor modifica la permeabilidad
de las endosporas y permite la entrada del colorante
a través de las capas externas. A continuación, el

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lavado con abundante agua produce la decoloración

de las formas vegetativas, así como de los extremos
de las bacterias esporuladas, que se tiñen por último
con un colorante de contraste, la safranina.
(Reynoso, M. et al, 2022)

3. MATERIALES Y MÉTODOS
Para llevar a cabo esta tinción se preparó un frotis
del cultivo de agar EMB inoculado con caldo nutritivo
de la práctica anterior, se cubrió con el colorante
verde de malaquita y se calentó hasta producir vapor
durante 5 minutos en el mechero de Bunsen, ya que
se calentó se dejó enfriar durante otros 5 minutos Figura 3. Diagrama de flujo de Sánchez Balderas María Teresa.
para después enjuagar con cuidado en una corriente
suave de agua. Posteriormente, se agregó colorante
de contraste safranina durante un minuto, luego se
lavó con cuidado, se secó con presión leve y por
ultimo se observó mediante el objetivo de inmersión.

Figura 4. Diagrama de flujo de Sánchez Jiménez Montserrat.

4. RESULTADOS
Ya que en la práctica de tinción de Gram únicamente
Figura 1. Diagrama de flujo de Ramírez Juárez Alin.
se observaron bacilos en el agar Eosina Azul de
Metileno, se procedió a realizar esta tinción en ese
cultivo.

Figura 2. Diagrama de flujo de Pacheco Ramírez Carlos Emmanuel.

Figura 5. Tinción de esporas con el objetivo 10x

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Microbiología
Figura 6. Tinción de esporas con el objetivo 40x
Figura 7. Tinción de esporas con el objetivo 100x
5. ANÁLISIS DE RESULTADOS
Debido a la poca cantidad y a la densidad del
colorante verde de malaquita con el que se contaba
en el laboratorio, no se pudo obtener una correcta
tinción y por ende no se observaron las esporas
esperadas, únicamente se apreciaron manchas del
colorante.
6. CONCLUSIÓN
A pesar de que la práctica no salió de la forma
esperada, por el colorante, se pudo observar la
importancia de una buena práctica, desde la
metodología que se siguió, hasta la preparación de
los colorantes con los que se realizará la práctica. Se
hubiera esperado observar la estructura interna de
la célula bacteriana, a pesar de que esta sea de un
tamaño pequeño.
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7. CUESTIONARIO
1. Hacer una lista de varios patógenos
aeróbicos y anaeróbicos que formen
esporas, así como de las enfermedades que
causan.
AEROBIOS:
• Bacillus antharacis: causa la
enfermedad de ántrax.
• Bacillus cereus: causa
intoxicaciones alimentarias,
infecciones oculares e infecciones
localizadas.
ANAEROBIOS:
• Clostridium tetani: causa tétanos.
• Clostridium botulinum: causa la
gangrena gaseosa.
• Clostridium difficile: causa diarrea
asociada a antibióticos y colitis
pseudomembranosa.
2. ¿En qué forma pueden aumentar las
esporas la infectividad?
De manera que las esporas son las
encargadas de la proliferación de los
hongos, ya que son dispersadas por el
viento u otros factores, de esa manera los
hongos se propagan y la capacidad de
infectar a un hospedero aumenta.
3. El primer organismo que se probó que era el
agente etiológico de una enfermedad fue el
formador de esporas, ¿De cuál se trata?
¿Cómo demostró Robert Koch su
conclusión?
Se trata del Bacillus anthracis, Koch
descubrió que una bacteria estaba siempre
presente en la sangre de los animales que
murieron de ántrax. Tomó una pequeña
cantidad de sangre de un animal infectado y
la inyectó en un ratón sano, que enfermó y
murió. Tras repetir varias veces el ensayo,
logró recuperar la bacteria del ántrax del
ratón muerto y la comparó con la obtenida
del primer animal infectado, logrando
demostrar por primera vez que una bacteria
específica es la causa de una enfermedad
específica.
8. BIBLIOGRAFÍA
1. Corona, B., Puy, M., Noriga, B., Vázquez,
A. (2018) Análisis microbiológico de las
fuentes termales del hotel misión
comanjilla, Guanajuato, México.
Microbiología 22 de marzo de 2023

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Texto%20del%20art%C3%ADculo-10200-
1-10-20181123%20(1).pdf
2. Dominguez, KG., Soria, R., Sistos A.,
Molano D., Hernández, R. (2013). Tinción
DOMS. Técnica para teñir bacilos
esporulados de interés médico.
Recuperado: 19 de marzo 2023 de
https://www.pacal.org/n/Datos/documentos
/MEDLAB%202013%205-1.pdf
3. Microscopio SEIBERT 1887. Utilizado por
Robert Koch. (s.f.) Real Academia Nacional
de Medicina de España. Recuperado 19 de
marzo 2023 de
https://www.ranm.es/lente/Microscopios/Mi
croscopios/museo34h/museo34hmas.html
#:~:text=En%201876%2C%20Koch%20de
scubri%C3%B3%2C%20utilizando,sano%
2C%20que%20enferm%C3%B3%20y%20
muri%C3%B3
4. Muñoz, R. (s.f.) El ántrax: protagonista
destacado en la Historia de la Biología.
UMA. Recuperado 19 de marzo 2023 de
https://www.uma.es/estudios/centros/Cienc
ias/publicaciones/encuentros/encuentros7
5/antrax.htm#:~:text=Bacillus%20anthracis
%20fue%20el%20primer,humanos%2C%2
0como%20antes%20hemos%20dicho
5. Reynoso, M., Magnoli, C., Barros, G.,
Demo, M. (2022). Coloración de
endosporas. LibreTexts.
https://espanol.libretexts.org/Biologia/Micro
biolog%C3%ADa/Manual_de_microbiolog
%C3%ADa_general/02%3A_Fundamentos
_de_microscopia_montaje_y_coloraciones
_de_muestras/2.05%3A_Tinciones_comun
mente_usadas_en_microbiologia/2.5.04%
3A_Coloracion_de_endosporas_(tincion_di
ferencial)
6. Riedel, S. (2020). Microbiología Médica.
Capítulo 11: Bacilos grampositivos
formadores de esporas: especies de
Bacillus y Clostridium. Mc Graw Hill: Lange
(28va ed). Recuperado 19 de marzo 2023.