Manual de Micología: Mohamed Saleem Ali Shtayeh

Machine Translated by Google
Vea discusiones, estadísticas y perfiles de autor para esta publicación en: https://www.researchgate.net/publication/259451035
Manual de micología
Libro ∙ Enero 1998
CITAS LEE
0 8,147
3 autores, incluyendo:
Mohamed Saleem Ali Shtayeh Rana M Jamous
Centro de Investigaciones Ambientales y de Biodiversidad Centro de Investigaciones Ambientales y de Biodiversidad
299 PUBLICACIONES 5.138 CITAS 148 PUBLICACIONES 2.303 CITAS
VER EL PERFIL VER EL PERFIL
Algunos de los autores de esta publicación también están trabajando en estos proyectos relacionados:
Métodos Numéricos para la Solución de Ecuaciones Diferenciales No Lineales Ver proyecto
Conservación de ecosistemas críticos y plantas endémicas amenazadas en el Estado de Palestina con concentración en lirios reales: Iris lortetii var. samariae Ver proyecto
Todo el contenido que sigue a esta página fue subido por Mohammed Saleem Ali Shtayeh el 01 de septiembre de 2014.
El usuario ha solicitado la mejora del archivo descargado.
Diagnóstico de Laboratorio de Micosis; Prof. Dr. Mohammed Saleem AliShtayeh 23 de agosto de 2013
Diagnóstico de laboratorio de micosis
Mohamed Saleem AliShtayeh
Catedrático de Biología y Biotecnología
BERC, Til, Naplusa
Centro de Investigación Ambiental y de Biodiversidad, BERC, Til, Naplusa
1
2
TABLA DE CONTENIDO
Introducción
Experimento 1. Recolección de especímenes cutáneos y de uñas infectadas.
Experimento 2. Examen microscópico de especímenes clínicos.
Experimento 3. Examen ultravioleta (Luz de Wood) para cabellos fluorescentes.
Experimento 4. Cultivo de hongos.
Experimento 5. Identificación de aislados.
Identificación de dermatofitos comunes Experimento 6.
Pruebas adicionales utilizadas en la identificación de dermatofitos.
Experimento 7. Aislamiento de dermatofitos del suelo – técnica de cebo para el pelo.
Clave taxonómica de los patógenos fúngicos humanos y veterinarios más comunes
Experimento 8. Levaduras.
Experimento 9. Prueba del tubo germinativo.
Experimento 10. Producción de clamidosporas en CMATween 80.
Experimento 11. Prueba de fermentación de carbohidratos para identificación de levaduras.
Ejercicio 12. Actividad queratinolítica de los hongos.
Ejercicio 13. Pruebas de susceptibilidad antifúngica.
Referencias
3
4
Introducción:
El diagnóstico en el laboratorio se realiza mediante la demostración del hongo en la piel,
exudados o tejidos más profundos. El aislamiento del organismo en cultivo suele ser necesario.
para confirmar esto e identificar el hongo causante específico.
La detección de anticuerpos y antígenos en el suero de los pacientes es necesaria en el
infecciones sistémicas, particularmente cuando se desea un diagnóstico temprano, pero estas pruebas
generalmente se llevan a cabo en laboratorios especializados.
El diagnóstico de una infección fúngica superficial se realiza mediante la observación de hongos
elementos en la queratina infectada. Esto se puede llevar a cabo en unos pocos minutos mientras el
el paciente asiste a la clínica y generalmente se obtiene suficiente información para
tratamiento para comenzar.
La producción de fluorescencia bajo una lámpara de Wood (longitud de onda 365 A ) también
ayuda en la detección de ciertos pelos infectados y en algunas otras condiciones de la piel, por ejemplo
pitiriasis versicolor.
5
6
Experimento 1. Recolección de muestras cutáneas y de uñas infectadas:
Piel
Se toman muestras de las lesiones de la piel raspando con un bisturí sin filo y recogiendo las escamas en
portaobjetos de vidrio limpios (con una lesión en expansión se selecciona la periferia activa).
1. Limpie el área infectada (lesiones) con alcohol al 70 % para eliminar las bacterias.
contaminantes
2. Raspe el sitio de la infección (si la lesión se está extendiendo, se selecciona la periferia activa) suavemente
con el lado de una hoja de bisturí sin filo o con el borde de un vaso.
portaobjetos de microscopio. Cuando hay vesículas presentes, el techo de la ampolla, cortado con tijeras de
punta fina, a menudo revela abundantes hifas.
3. Recoja los raspados (escamas y pelos) en una placa de Petri o en un sobre de papel, o en portaobjetos de
vidrio limpios para su posterior procesamiento. Los pelos de Vellus de las extremidades o la cara a menudo
mostrarán micelio en el folículo cuando puede ser escaso en otros lugares.
Pelos:
Se utiliza un par de fórceps de punta plana para eliminar el vello corporal o del cuero cabelludo pero, si están
infectados, los mechones de cabello se pueden eliminar fácilmente raspando con un bisturí.
La morfología de la disposición de las esporas puede conservarse más fácilmente si los pelos permanecen
incrustados en una escama.
1. Con un par de pinzas de punta plana, elimine el vello corporal o del cuero cabelludo. Raspe infectado con un
bisturí. La morfología de la disposición de las esporas puede conservarse más fácilmente si los pelos
permanecen incrustados en una escama.
2. Recoja los pelos en una placa de Petri o en un sobre de papel, o en portaobjetos de vidrio limpios
para su posterior procesamiento.
3. Se pueden tomar muestras del cuero cabelludo para cultivo usando una técnica de cepillado que es un método
útil para encuestar a hermanos y contactos de niños infectados y también mascotas sospechosas en el
hogar.
7
Figura 1. Se presiona un cepillo de masaje comercialmente disponible en una placa de Petri que
contiene medio después de un cepillado vigoroso del cuero cabelludo.
Figura 2. Los niños clínicamente infectados producen colonias de hongos en muchos puntos del pincel.
8
Clavos:
Las uñas a menudo se espesan cuando se infectan y las tijeras son esenciales para cortar todo el grosor,
aunque los desechos sumergidos, extraídos con un bisturí o una sonda, pueden contener elementos fúngicos.
1. Con un cortaúñas, corte todo el grosor de las uñas infectadas. Eliminar
escombros sumergidos, con un bisturí o una sonda.
2. Recoja los recortes de uñas y los desechos sumergidos en una placa de Petri o en un sobre de papel, o
en un tubo estéril para su posterior procesamiento.
Mucosas:
Las mucosas se muestrean con hisopos de algodón. Estos se colocan en un medio transparente si va a
haber algún retraso antes del procesamiento.
Muestre con hisopos de algodón y coloque los hisopos en un medio transparente si va a haber algún retraso
antes del procesamiento.
Esputo, fluidos corporales, biopsias, etc.
Recoger en recipientes estériles.
Etiquetado de especímenes recolectados: la información de la etiqueta puede incluir, nombre del sujeto,
sexo, edad, profesión, parte infectada, tipo de infección, contacto con animales domésticos, medicación y
otras notas importantes.
Registre sus observaciones.
9
10
Experimento 2. Examen microscópico de especímenes clínicos.
Microscopía directa
Las muestras de piel, cabello o uñas se colocan en una gota de hidróxido de potasio (KOH) al 30%
directamente en un portaobjetos de microscopio; después de colocar un cubreobjetos en posición,
las muestras se pueden examinar inmediatamente.
El ablandamiento del tejido puede acelerarse calentándolo suavemente, pero los cabellos deben
manipularse con especial cuidado y dejar que se ablanden sin calor para que no se destruya la
disposición de las esporas.
La incorporación de dimetilsulfóxido (DMSO) en el hidróxido de potasio (40 ml de DMSO; 60 ml de
agua destilada; 30 g de KOH) también puede ayudar a clarificar las muestras.
Al examinar muestras, es importante asegurarse de que el material se haya ablandado
adecuadamente y que la intensidad de la luz que pasa a través de ella no sea demasiado fuerte.
También es necesario alterar el enfoque mientras escanea la diapositiva.
Las preparaciones sin teñir son generalmente satisfactorias para la demostración de hongos en la
queratina, pero se puede agregar clorazol negro E al DMSO para ayudar a diferenciar las hifas de
los artefactos comunes, como las fibras de algodón.
Si los pelos están infectados, el tamaño de las disposiciones de las esporas, junto con la capacidad
de fluorescencia bajo una lámpara de Wood, ayudará a identificar las especies de dermatofitos
involucradas.
Cuadro Invasión capilar por dermatofitos.
Especie Disposición de esporas Microsporum Tamaño (micras)
M. canis ectotrix * 23

M. gypseum ectotrix* 23
M. audouinii M. ectotrix* 23
ferrugineum ectotrix* 23
Trichophyton
T. violaceum Endothrix 48
T. tonsurans Endothrix 48
T. soudanese Endothrix 48
T. schoenleinii Endothrix
T. mentagrophytes ectothrix 35
T. verrucosum ectothrix 510
*Fluorescencia bajo lámpara de Wood
La tinción de Parker (partes iguales de KOH al 30% y tinta azulnegra de Parker) es particularmente
útil para demostrar el hongo en las escamas de la pitiriasis versicolor, ya que el organismo capta
esta tinción de inmediato . También puede ser útil para
11
Distingue algunas infecciones de las uñas que no son por dermatofitos, pero los dermatofitos solo
tomarán el color azul después de varias horas en la mancha.
Los frotis de las mucosas también se pueden examinar como preparaciones húmedas sin teñir
en solución salina o KOH, pero las preparaciones fijadas con calor se pueden teñir con Gram o
con ácido peryódico de Schiff (PAS).
Figura 3. Invasión de cabello por Ectothrix (arriba) que muestra la formación de artroconidios
en el exterior del tallo del cabello. La cutícula del cabello se destruye. Invasión de cabello
Endothrix (abajo) que muestra el desarrollo de artroconidios solo dentro del tallo del cabello.
La cutícula del cabello permanece intacta.
12
Figura 4. Raspado de piel que muestra hifas hialinas septadas diagnósticas de dermatofito.
El pus, los exudados y los fluidos corporales pueden centrifugarse y examinarse el depósito para
detectar la presencia de levaduras, filamentos o esférulas, ya sea sin teñir o después de teñir con
Gram, PAS, metenamina plata, Gemsa o mucicarmín según la enfermedad sospechosa.
Para la criptococosis, y particularmente cuando se examina cualquier material del LCR, se debe
incluir una preparación de tinta china.
Las secciones de las muestras de biopsia deben teñirse con las tinciones anteriores, según
corresponda.
Fluido de montaje de hidróxido de potasio (KOH) :
Se utiliza para buscar hongos en raspaduras de piel y cabello. El KOH al veinte por ciento hace
que la queratina se hinche y se aclare, y proporciona un índice de refracción ventajoso para
revelar las hifas del hongo.
con DMSO sin DMSO
Cristales de KOH 20 g Cristales de KOH 20 g
Dimetilsulfóxido (DMSO) 40 ml Glicerina 20ml
Agua destilada 60ml Agua destilada 80ml
El uso de KOH es uno de los métodos más rápidos para el examen directo de muestras clínicas.
La tasa de limpieza se puede aumentar calentando suavemente el portaobjetos. Si se usa sin
DMSO, el portaobjetos debe calentarse ligeramente para promover la limpieza. La adición de
DMSO permite un examen rápido, a menudo sin calentamiento. Adición de DMSO o
13
la glicerina evita el secado rápido del líquido, permite la observación del portaobjetos hasta 24 o 48 horas. Los
portaobjetos se pueden anillar con esmalte de uñas para guardarlos durante períodos más largos. Para proporcionar
una preparación semipermanente, el KOH debe ser reemplazado por glicerina por desplazamiento capilar. Seque un
lado del portaobjetos y agregue lentamente la glicerina del otro lado.
Prepare un montaje temporal de la siguiente manera.
a. Mezcle una pequeña porción de la muestra (escamas, cabello o uñas) en una gota de agua, solución salina
fisiológica o KOH al 10 30 % con glicerina al 10 % en un portaobjetos de microscopio. La incorporación de
sulfóxido de dimetilo (DMSO) en KOH (40 ml de DMSO; 60 ml de agua destilada; 30 g de KOH) también
puede ayudar a clarificar las muestras.
b. Agregue un cubreobjetos sobre la gota.
C. Si se usa KOH sin DMSO, caliente el portaobjetos en una placa caliente eléctrica o en un
llama muy baja del mechero Bunsen hasta que el tejido se haya aclarado. …
d. Presione suavemente el cubreobjetos para que la muestra sea casi transparente. Los pelos deben manipularse
con especial cuidado y dejar que se ablanden sin calor para que no se destruya la disposición de las esporas.
mi. Deje reposar la montura a temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos si el
muestra es gruesa o viscosa.
F. Examine microscópicamente para detectar la presencia de hifas u otras estructuras fúngicas.
Ilustra y registra tus observaciones.
14
Experimento 3. Examen ultravioleta (Luz de Wood) para
cabellos fluorescentes
Los cabellos infectados con la especie parasitaria Microsporum pueden detectarse por la
fluorescencia amarillo verdosa en ultravioleta 365 A. La piel en sí no emite fluorescencia.
En medicina veterinaria, la luz de Wood es útil para detectar infecciones por M. canis en
gatos, perros y otros animales pequeños.
15
dieciséis
Experimento 4. Cultivo de hongos:
Las placas de Petri son muy satisfactorias para el cultivo de hongos, pero también se pueden utilizar tubos tapados
con algodón.
Los frascos con tapa roscada son esenciales cuando se sospecha de especies peligrosas como Histoplasma
capsulatum y Coccidioides immitis , pero no permiten el máximo desarrollo de esporas y pigmentos que son necesarios
para la identificación de muchas especies.
Sabouraud Dextrose Agar (SDA) es el medio más utilizado (Peptonapreferiblemente micológica, 1 %, Dextrosa 4 %,
Agar 1,5 %, pH 5,6).
Se incorpora un antibiótico antibacteriano de amplio espectro, por ejemplo, cloranfenicol (0,005 %), y el medio puede
volverse selectivo para los dermatofitos agregando cicloheximida (0,05 %) para inhibir los hongos contaminantes;
excluirse o utilizarse una serie duplicada de placas. Tanto el cloranfenicol como la cicloheximida pueden agregarse al
medio antes de la esterilización.
Sabouraud Dextrose Agar está disponible comercialmente en forma deshidratada de varias fuentes, pero la morfología
de los hongos, particularmente la producción de pigmentos, variará según la fuente del medio. Esto también se aplica
a la naturaleza de la peptona si el medio se prepara a partir de ingredientes individuales.
Un medio que ayudará a un laboratorio no especializado a diferenciar los dermatofitos de otros hongos es el medio de
prueba de dermatofitos (DTM).
Un cambio de pH producido por la actividad proteolítica de los dermatofitos se demuestra mediante la incorporación
de rojo fenol en el medio. Un cambio de amarillo a rojo indica la presencia de un dermatofito.
El medio puede usarse para cultivos primarios si se incluyen antibióticos y tiene un uso particular en la identificación
de aislamientos de dermatofitos en estudios de campo grandes. Está disponible comercialmente.
Puede ser necesario un medio más rico como Brain Heart Infusion Agar para aislar los hongos que causan micosis
profundas, particularmente para las fases de levadura de las especies dimórficas.
El medio debe verterse para obtener placas gruesas (25 ml/placa) y dejar que se seque dejándolo a temperatura
ambiente durante la noche, de modo que se minimice la desecación del agar durante el largo tiempo de incubación.
Se colocan pelos, pequeños fragmentos de piel o uñas cortadas en trozos lo más pequeños posible sobre la superficie
del agar con la ayuda de una aguja recta y se presionan en la superficie para hacer una buena
contacto.
El material de biopsia se debe triturar o cortar en trozos pequeños para obtener numerosos inóculos y, para el cultivo
de sangre, se recomiendan frascos de hemocultivo ventilados con medios bifásicos.
La incubación a temperatura ambiente es adecuada para el aislamiento de los dermatofitos, pero se prefiere entre 26°
C y 28° C. Los cultivos pueden identificarse después de 10 a 14 días de incubación.
Las levaduras y aspergilli pueden aislarse a 37oC en placas incubadas durante 2 a 10 días. Cuando se sospecha la
presencia de un hongo dimórfico, los cultivos deben colocarse a 26 o C y 37 o C para aislar las fases filamentosa y de
levadura de los organismos, respectivamente.
17
Las placas o frascos de cultivo de tejidos más profundos deben incubarse hasta por 3 a 4 semanas según la
enfermedad que se sospeche.
Se pueden tomar muestras del cuero cabelludo para cultivo usando una técnica de cepillado que es un método útil para
encuestar a hermanos y contactos de niños infectados y también mascotas sospechosas en el hogar.
Medio de prueba de dermatofitos (DTM)
Dermatophyte Test Medium (DTM) es un agar especializado utilizado en micología médica. Se basa en SDA con
inhibición añadida del crecimiento saprotrófico,
cicloheximida
antibiótico
a para inhibir el crecimiento bacteriano y rojo fenol como
indicador de pH. El indicador de pH es útil para distinguir un hongo dermatofito, que utiliza material nitrogenado para
su metabolismo preferido, produciendo subproductos alcalinos, impartiendo un cambio de color rojo al medio.
Los hongos saprotróficos típicos utilizaron carbohidratos en el medio produciendo subproductos ácidos y sin cambio
de color rojo.
Este medio selectivo excluye la mayoría de las bacterias y muchos hongos contaminantes. Se combina con rojo fenol
(un indicador de pH amarillo → rojo) que es rápidamente afectado por dermatofitos y hongos relacionados para
permitir su reconocimiento temprano.
Fitona (BBL) 10 g
Dextrosa 10 g
Agar Agar 20 g
Fenol Rojo solución HCl 40 ml
(0,8 N) 6ml
Cicloheximida (Actidion) 0,5 g
Agua destilada 1000ml
sulfato de gentamicina 0,1g de fármaco activo (= 100 g/ml)
Clortetraciclina HCL 0,1 g (= 100 g / ml)
1. Agregue fitona, dextrosa y agar a 1000 ml de agua destilada, hierva hasta disolver.
2. Añadir 40 ml de solución de rojo de fenol mientras se agita [solución de rojo de fenol, 0,5 g de rojo de fenol disueltos
en 15 ml de NaOH 0,1 N, hasta 100 ml con agua destilada.
3. Añadir 6 ml de HCL 0,8 N con agitación.
4. Disolver 0,5 g de cicloheximida en 2 ml de acetona 5. , agréguelo al medio caliente mientras revuelve
Disolver polvo de sulfato de gentamicina en 2 ml de agua destilada, para dar una concentración final en el
medio de 100 g/ml de fármaco activo.
6. Esterilice en autoclave a 121 C durante 10 minutos, enfríe a 47 C.
7. Disolver 0,1 g de clortetraciclina HCL en 25 ml de agua destilada estéril y luego agregar al medio mientras se agita.
8. Vierta en tubos de cultivo de 30 ml (como inclinados) o en placas, enfríe.
9. Conservar en refrigeración.
10. Después de la inoculación, deje las tapas sueltas para permitir el crecimiento adecuado y el cambio de color.
La incubación es a 28 C.
18
11. El cambio de color del indicador (en caso de crecimiento de dermatofitos) debe interpretarse a más
tardar dos semanas después de la inoculación. Un cambio en el pH producido por la actividad proteolítica
de los dermatofitos se demuestra mediante el indicador rojo de fenol que se agrega al DTM, el cambio
de amarillo a rojo indica la presencia de dermatofitos.
El DTM incorpora antibióticos (gentamicina y clortetraciclina) para suprimir el crecimiento bacteriano,
cicloheximida para suprimir el crecimiento de hongos saprofitos y rojo fenol como indicador de color.
Proporciona nutrientes de carbohidratos y proteínas. Los dermatofitos (hongos pertenecientes a los
géneros Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton) utilizan preferentemente las proteínas como fuente
de energía, mientras que la mayoría de los hongos saprofitos utilizan primero los carbohidratos.
Esta es la clave para interpretar el cambio de color que se puede ver con DTM.
El crecimiento temprano de los dermatofitos generalmente hará que el DTM cambie de amarillo a rojo, debido
a la producción de subproductos alcalinos del metabolismo de las proteínas. Los saprofitos pueden hacer
lo mismo, pero generalmente solo cuando la colonia es mucho más grande. Esta es la razón por la
que es importante revisar los cultivos de hongos a diario: si ya ha crecido una colonia grande sobre el DTM, un
cambio de color rojo no es significativo.
Crecimiento de Trichophyton en DTM
Además de observar un cambio de color rojo, la interpretación del crecimiento de DTM debe incluir una
evaluación de la morfología de colonias macroscópicas y microscópicas.
Los dermatofitos que crecen en DTM generalmente tienen una pigmentación ligera (blanco, beige,
tostado o canela), mientras que los saprófitos comunes a menudo tienen una pigmentación oscura.
Las superficies de las colonias de los dermatofitos de importancia médica a menudo se describen
como polvorientas, granulares o algodonosas.
Se prepara un portaobjetos para el examen microscópico de colonias sospechosas tocando ligeramente la
superficie de la colonia con un trozo de cinta de celofán transparente y luego colocándolo en el portaobjetos
con una gota de azul de algodón de lactofenol. Los macroconidios de M. canis y M. gypseum suelen ser
fáciles de encontrar, pero T. mentagrophytes a menudo no produce macroconidios en DTM. Los
macroconidios de M. canis suelen tener seis o más células, paredes celulares gruesas y extremos nudosos.
Los macroconidios de M. gypseum tienden a ser numerosos, elipsoides, tienen paredes celulares más
delgadas y de cuatro a seis células. Algunas características microscópicas de T. mentagrophytes que pueden ser
19
se ven hifas espirales y racimos de microconidios unicelulares en forma de uva.
Microsporum canis macroconidios
Microsporum yeso
La integración de los resultados de cualquier cambio de color, la apariencia macroscópica de la
colonia y los hallazgos microscópicos produce la interpretación más precisa. El cultivo de hongos
es uno de los procedimientos de laboratorio más importantes en dermatología. Debe utilizarse
tanto para descartar tiña como para confirmarla.
Agar dextrosa de Sabouraud (SDA):
Dextrosa 40g
Peptona 10 g
Agar 20g
Mezclar los ingredientes, hervir para derretir el agar, ajustar el pH a 5,6 y esterilizar. Autoclave durante 10 min.
20
Se puede hacer un medio de aislamiento selectivo para dermatofitos complementando SDA con cloranfenicol (50 mg/L) y
cicloheximida (0,5 g/L). Para agregar cloranfenicol agregar 50 mg en 2 ml de etanol al 95 %, agregar este a medio de ebullición y
enfriar rápidamente. Para agregar cicloheximida, agregue 0,5 g en 2 ml de acetona; agréguelo al medio caliente mientras revuelve.
Agar dextrosa de Sabouraud modificado (SDA):
Dextrosa 40 g
Peptona 10 g
Agar 20g
Extracto de levadura 05g
Preparar como se indica arriba excepto: adición de extracto de levadura (5 g/L) y sulfato de gentamicina disuelto en 2 ml de agua
destilada estéril para dar una concentración final en el medio de 100 ug/ml de fármaco activo.
Agar patata dextrosa (PDA)
Patata (pelada y troceada) 200 g
Dextrosa (glucosa) 20 g
Agua 1000ml
Enjuague la papa con agua corriente y luego agréguela al agua. Hervir durante 1 hora. Filtre a través de un paño, exprimiendo la
mayor cantidad de pulpa posible. Autoclave a 15 psi durante 30 minutos. Útil para el crecimiento de muchos hongos, especialmente
fitopatógenos, y algunas bacterias.
Cultivo de escamas de piel, raspaduras de uñas y pelos:
a. Coloque escamas de piel, raspaduras de uñas o pelos en medio de cultivo de agar (SDA o SDA modificado suplementado con
cloranfenicol al 0,005 %, sulfato de gentamicina al 0,01 % y cicloheximida al 0,05 %) y sumerja las porciones debajo de la
superficie del agar con una aguja de inoculación. b. Incube los cultivos a 25 – 30 ºC durante 14 semanas.
C. Examinar colonias de hongos en crecimiento
Cultivo de uñas: las bacterias y otros factores limitan la posibilidad de aislar un dermatofito de piezas grandes de uña. Hay dos
tipos principales de infección de las uñas. 1. el tipo que invade debajo de la superficie de la uña y 2. el tipo de mancha blanca que
invade la superficie superior de la superficie de la uña. En el tipo profundo, se puede obtener material KOH positivo debajo de la
superficie de la uña y esparcirlo sobre el agar. En el tipo de onicomicosis de mancha blanca superficial, las manchas blancas
calcáreas en la superficie de la uña se raspan fácilmente y se esparcen en agar. Los hongos no dermatofitos pueden estar
involucrados en las infecciones de las uñas, y un porcentaje de uñas clínicamente sugestivas parece no albergar ningún hongo
filamentoso.
Cultivo de lesiones altamente inflamatorias del cuerpo, barba y cuero cabelludo (kerion): A veces son difíciles de cultivar porque
el hongo y los pelos parasitados pueden ser escasos y pueden estar en pus en el fondo de los folículos o pequeños abscesos en
una reacción tisular granulomatosa. . Se recomienda depilar y cultivar pelos y pus en DTM. Se pueden encontrar cadenas
dispersas de esporas en los cabellos mediante examen con KOH. La tinción de Gram a menudo revela fragmentos de hifas en el
pus con más éxito que una preparación con KOH. La tiña del cuerpo y la tiña de la barba de este tipo se asocian frecuentemente
con T. mentagrophytes, T. verrucosum y, a veces , T. rubrum.
Cultivo de hermanos y contactos de niños infectados y mascotas sospechosas en el hogar: el cepillo para el cabello (cepillo de
masaje) se usa para tomar muestras del cuero cabelludo de los niños infectados y también de las mascotas sospechosas
pelo. Luego, el cepillo se presiona en una placa de Petri que contiene medio después de un cepillado vigoroso de
21
el cuero cabelludo o la piel de un hoyo. Los sujetos clínicamente infectados producen colonias de hongos en muchos
puntos del pincel.
Cultivo de animales para infecciones por tiña: Antes de hacer el cultivo, primero se debe recortar el pelo de las lesiones y
lavar bien el sitio con agua y jabón. El cultivo debe consistir en raspados limpios de escamas epidérmicas y cultivo
selectivo de cabellos rotos o fluorescentes, en lugar de la inoculación del agar con mechones de cabello apelmazado y
con costra de las lesiones sin lavado previo. Se recomiendan cultivos múltiples siempre que se anticipe un problema de
contaminación. El indicador de pH en DTM es particularmente ventajoso para detectar el crecimiento temprano de
dermatofitos entre hongos contaminantes. Se favorece el aislamiento de T. verrucosum (tiña bovina) a 37 C.
Registre sus observaciones.
22
Experimento 5: Identificación de aislamientos
Los hongos suelen identificarse por el reconocimiento de características morfológicas y, en menor grado, por sus
propiedades bioquímicas.
Las características macroscópicas como la textura de la colonia, el color de la superficie y la producción de pigmentos
que se ven en el reverso de la placa pueden ser diagnósticas.
Para examinar bajo el microscopio, se extrae una pequeña porción del cultivo en una gota de azul de algodón con
lactofenol.
Lactofenol (medio de Aman):
Ácido láctico 20ml
Cristales de fenol 20 g
Glicerol 40ml
Agua 20ml
Azul de anilina 0,05g
Añadir en orden: 1. ácido láctico y glicerina, y agua destilada, 2. añadir fenol y disolver con calor uniforme, 3. añadir
el colorante (0,05 g de azul de anilina (azul de algodón) o azul de tripán por 100 ml) y disolver , 4. filtrar a través de
papel. (Método alternativo: el lactofenol se puede preparar calentando el fenol con agua hasta que se disuelva y
luego agregando ácido láctico y glicerol).
Si la esporulación es adecuada, una tira de cinta adhesiva presionada sobre la superficie del cultivo y luego colocada
sobre una gota de colorante y presionada sobre el portaobjetos revelará satisfactoriamente la disposición de las
esporas.
Un cultivo en portaobjetos preparado mediante la inoculación de cada lado de un bloque de agar en un portaobjetos
lleva más tiempo, pero puede ser necesario para fomentar la esporulación. Una vez que se ha desarrollado un
crecimiento suficiente, se descarta el bloque de agar y se hacen preparaciones teñidas con el crecimiento restante
en el portaobjetos y el cubreobjetos.
En algunos cultivos (p. ej., T. schoenleinii), las características diagnósticas se pueden ver colocando la placa de
cultivo directamente sobre la platina del microscopio y examinando el reverso directamente con un objetivo de baja
potencia.
Para la identificación de especies, véanse las descripciones de especies en Rebell & Taplin (1978) y cualquier otra
referencia disponible.
23
Identificación de dermatofitos comunes • La
identificación de dermatofitos (Tabla 2) se basa principalmente en la morfología
microscópica del hongo.
– Se requiere una buena preparación del portaobjetos y en algunas cepas puede ser necesaria la estimulación
de la esporulación.
– Las características del cultivo, como la textura de la superficie, la topografía y la pigmentación, son variables
y, por lo tanto, son los criterios menos fiables para la identificación.
• La información clínica como: el sitio, el
aspecto de la
lesión, la ubicación geográfica, el
historial de viajes, los contactos
con animales y la raza
también son importantes,
especialmente para identificar especies raras que no producen esporas, como M. audouinii y T. concentricum . ,
T. schoenleinii y muchos otros.
Tabla 2 Identificación práctica de dermatofitos comunes
Características clave Grupo especies comunes
1) Solo macroconidios lisos de paredes delgadas, epidermofiton E. floccosum

sin microconidios; las colonias son de color verde
marrón a caqui
2) Macroconidios con paredes rugosas presentes; Microsporum canis

también pueden estar presentes microconidias M. yeso
M. Nanum
3) Microconidios presentes, macroconidios de tricofiton T. rubrum

paredes lisas pueden o no estar presentes T. mentagrophytes
T. tonsurans
T. equinum
4) Sin presencia de conidios, colonias estériles. no esporulado M. audouinii
Nota: las clamidoconidias no son diagnósticas. Microsorum y M. ferrugrineum T.
especies de Trichophyton verrucosum T.
violaceum T.
schoenleinii T.
soudanense T.
concentricum
24
grupo Epidermophyton
• Epidermophyton floccosum es un dermatofito antropofílico con una distribución mundial
que a menudo causa tinea pedis, tinea cruris y tinea corporis.
• Las características clave
incluyen: cultivos característicos de color marrón verdoso o caqui,
– la producción de macroconidias lisas, de paredes delgadas y en forma de maza y
la ausencia de microconidios (Figura)
25
grupo microsporum
• En este grupo es fundamental observar macroconidias para hacer la
identificación.
Pueden surgir dificultades con las cepas de M. canis que no esporulan y con la diferenciación
entre M. canis y M. audouinii.
Microsporum canis
• es un dermatofito zoofílico de distribución mundial que es una causa frecuente
de tiña en humanos, especialmente en niños. •
Invade cabello, piel y, raramente, uñas. • Los
gatos y los perros son las principales fuentes de infección.
• Los pelos invadidos muestran una infección ectothrix y emiten una fluorescencia brillante
amarillo verdoso bajo la luz ultravioleta de Wood.
incluyen • macroconidias distintivas en forma de
huso, • características de cultivo (Figura) y •
abundante crecimiento y esporulación en granos de arroz pulidos y •
perforación in vitro del cabello.
26
lámpara de madera
Etimología: Robert W. Wood, físico estadounidense, 18681955 dispositivo
•
de iluminación con un filtro de óxido de níquel que retiene toda la luz excepto unos pocos rayos violetas del
espectro visible y longitudes de onda ultravioleta de aproximadamente 365 nm.
•
Se usa ampliamente para ayudar a diagnosticar infecciones fúngicas del cuero cabelludo y eritrasma. •
La luz hace que los pelos infectados con un hongo como Microsporum canis se vuelvan
brillantemente fluorescente.
(Principio: los rayos de una lámpara de cuarzo pasan a través del filtro de Wood, que filtra los rayos UV visibles y transmite
rayos UV invisibles más largos que, al entrar en contacto con algunos productos químicos, provocan una luminiscencia).
27
Perforación del cabello
28
Microsporum yeso
•
es un hongo geofílico con una distribución mundial que puede causar infecciones en animales y
humanos, particularmente en niños y trabajadores rurales durante climas cálidos y húmedos.
•
Suele producir una única lesión inflamatoria en piel o cuero cabelludo.
• Los pelos invadidos muestran una infección ectothrix pero no emiten fluorescencia bajo la luz ultravioleta de Wood
luz.
incluyen – macroconidios distintivos
y – características del cultivo (Figura)
29
Microsporum nanum
•
es un hongo zoofílico que frecuentemente causa lesiones crónicas no inflamatorias en cerdos y, rara vez,
causa tiña en humanos; también está presente en el suelo de los corrales de cerdos.
• Las infecciones humanas generalmente se contraen directamente de cerdos o fómites.
• Los pelos invadidos suelen mostrar una infección escasa por ectothrix o endothrix , pero no emiten fluorescencia.
bajo la luz ultravioleta de Wood. • La
distribución geográfica es mundial.
incluyen – macroconidios distintivos y
– características del cultivo (Figura)
30
grupo Trichophyton
• En este grupo, las macroconidias son menos distintivas ya menudo están ausentes.
• Las microconidias son más importantes y se debe tener en cuenta su forma, tamaño y disposición.
Las características de cultivo también son útiles.
• Las especies comunes incluyen: •
T. rubrum, • T.
mentagrophytes y variedades, • T. tonsurans
y • T. equinum.
Trichophyton verrucosum puede producir ocasionalmente conidios en algunos medios.
Trichophyton rubrum
•
es un hongo antropofílico que se ha convertido en el dermatofito humano de mayor distribución (Figura 1.5(a) y (b)).
•
Con frecuencia causa infecciones crónicas de la piel, las uñas y, rara vez, el cuero
cabelludo. • A veces pueden ocurrir lesiones granulomatosas.
incluyen: características del
cultivo, morfología microscópica y falla en
la perforación del cabello in vitro.
31
Trichophyton rubrum (cepa granular)
•
una causa frecuente de tinea corporis en muchos países.
• representa la cepa original de T. rubrum (tipo velloso); este último evolucionó estableciendo un nicho
en los pies (tinea pedis). • Los
pelos invadidos muestran ectothrix o endothrix pero no emiten fluorescencia bajo la ecografía de Wood.
luz ultravioleta. •
Las características clave incluyen
• la presencia de macroconidios en forma de cigarro con apéndices terminales (Figura 1.6(a)
y B)).
32
Identificación de T. rubrum
Invasión del cabello: informado como cadenas ectothrix de esporas bastante grandes y como
endothrix típico. no fluorescente. Por lo general, no forma órganos perforantes in vitro y no invade
la lámina ungueal.
Enfermedad clínica: Principalmente una causa de tinea corporis, tinea pedis, tinea manum y
onchomicosis.
Epidemiología: una especie antropófila muy extendida que parece estar aumentando en todas
partes y desplazando a T. mentagrophytes como la principal causa de tinea pedis.
Distribución geográfica: Mundial.
Aspecto del talo: por lo general, un talo blanco velloso a esponjoso que lentamente desarrolla un
color de sangre venosa profunda en la parte inferior a medida que madura el cultivo. T. rubrum
se distingue de otros dermatofitos de pigmentación roja por su superficie generalmente blanca,
esponjosa o borrosa y su pigmento rojo oscuro que no se difunde debajo del talo y por su
morfología microscópica.
Morfología microscópica: El talo habitual de T. rubrum consta de largas hebras de hifas con
microaleuriosporas laterales pequeñas, característicamente en forma de lágrima o de clavija. Las
macroaleuriosporas están ausentes o son raras.
En las cepas esporulantes, las macroaleuriosporas pueden ser abundantes y característicamente
estrechas, largas y con forma de lápiz, a menudo desarrollándose directamente en los extremos
de hifas gruesas o unidas entre sí de una manera parecida a las macroaleuriosporas de E.
floccosum . Las microaleuriosporas tienden a ser más grandes, de clavadas a redondas y en
pequeños racimos abiertos, así como a lo largo de las hifas.
La producción de microaleuriosporas directamente sobre macroaleuriosporas es un rasgo
bastante común y característico de T. rubrum. Tanto las hifas como las macroaleuriosporas
tienden a dividirse en numerosas artrosporas.
variantes Una especie muy variable. Los cultivos típicos de T. rubrum pueden variar en apariencia
macroscópica desde esponjosos a gamuza y doblados (sugestivo de T. tonsurans) a glabros y
amontonados (sugestivo de T. violaceum) y en
33
apariencia microscópica de pocas a numerosas microaleuriosporas en forma de clavija con o sin
macroaleuriosporas a abundantes macroaleuriosporas con microaleuriosporas tienden a tener forma de
huevo y son regordetas. Un común adicional
característica variable es la tendencia a producir artrosporas. Las cepas ocasionales producen poco o
ningún color y pueden ser difíciles de distinguir de las T. mentagrophytes pleomórficas. En algunas
cepas y en condiciones alcalinas o mala aireación, el color inferior del talo puede ser amarillo en lugar
de rojo. Las cepas raras producen un pigmento melanoide difuso de color marrón oscuro.
Medios especiales.
El agar papa dextrosa es útil para separar las cepas de tinea pedis y tinea cruris de T. rubrum y T.
mentagrophytes. La formación de pigmentos suele ser muy intensa en este medio y se reduce el
crecimiento de la superficie esponjosa.
El agar de infusión de carne estimulará la producción de algunas macroaleuriosporas en muchas cepas
esponjosas.
T. rubrum crece bien en ausencia de tiamina, lo que sirve para distinguirlo de T. tonsurans y T.
violaceum y, a diferencia de T. megninii , no requiere lhistidina.
T. rubrum puede distinguirse de T. mentagrophytes por su incapacidad para perforar el cabello in vitro
y por la producción de pigmento rojo en agar harina de maíz dextrosa.
Actividad de ureasa débil excepto en variantes granulares.
Características clínicas. (1) Características y pigmento del talo, (2) Microaleuriosporas en forma de
lágrima, (3) Macroaleuriosporas características, (4) Independientes de tiamina e histidina, (5) Incapacidad
para perforar el cabello in vitro.
34
Trichophyton mentagrophytes var. interdigital
•
es un hongo antropopílico de distribución mundial que es una causa común de tinea pedis (particularmente
del tipo vesicular), tinea corporis y, a veces, invasión superficial de la placa ungueal.
• No se sabe que invada el cabello in vivo.
– Las características clave incluyen características de cultivo, morfología microscópica y perforación
in vitro del cabello humano.
• Trichophyton mentagrophytes var. interdigitale se puede distinguir de T. rubrum y de otras variedades de T.
mentagrophytes por
– sus características de cultivo y morfología microscópica en agar dextrosa de Sabouraud y/o agar
lactritmel, y
– por su crecimiento y morfología de la colonia en agar salado de Sabouraud (Figura 1.7).
35
T. mentagrophytes var. mentagrophytes es • la
forma zoofílica de T. mentagrophytes con
una • distribución mundial y
•
una amplia gama de huéspedes animales, incluidos ratones, cobayas, canguros, gatos, caballos, ovejas y
conejos.
•
Produce lesiones inflamatorias en la piel o el cuero cabelludo en humanos, particularmente en trabajadores rurales.
• Puede ocurrir querión del cuero cabelludo y la barba .
• Los pelos invadidos muestran una infección ectothrix pero no emiten fluorescencia bajo la luz ultravioleta de Wood
luz.
Kerion: Infección por tiña de los folículos pilosos del cuero cabelludo y la barba que generalmente resulta en una
hinchazón cubierta de pústulas que supura líquido.
incluyen: – características del cultivo, morfología microscópica y enfermedad clínica con contactos animales
conocidos (Figura 1.8(a) y (b)).
36
T. tonsurans
•
es un hongo antropofílico de distribución mundial que causa lesiones inflamatorias o crónicas no inflamatorias
finamente descamativas en piel, uñas y cuero cabelludo.
• Los pelos invadidos muestran una infección endothrix y no emiten fluorescencia bajo la luz ultravioleta de Wood
luz. •
Las características clave
incluyen: – morfología microscópica, características de cultivo, invasión de pelos por endotrix y
requerimiento parcial de tiamina (Figura 1.9(a) y (b)).
37
Especies de Microsporum/Trichophyton no esporulantes
• Los cultivos de estas especies suelen ser estériles sin presencia de conidios.
• Clamidoconidios u otras estructuras de hifas pueden estar presentes pero no son diagnósticas. • En la
práctica, la esporulación puede necesitar estimulación, por ejemplo, para decidir entre cepas de M. canis o T. rubrum
que no producen esporas . •
Las especies comunes en este grupo incluyen M. audouinii, T. verrucosum y T. violaceum. • Menos comunes
son T. concentricum, T. schoenleinii, T. soudanense y M.
ferrusineo.
T. verrucoso
•
es un hongo zoofílico que causa la tiña en el ganado (Figura). • Las
infecciones en humanos son el resultado del contacto directo con el ganado o fómites infectados y, por lo general,
son altamente inflamatorias y afectan el cuero cabelludo, la barba o áreas expuestas del cuerpo principalmente
pilosas.
• Los pelos invadidos muestran una infección por ectothrix, y se ha observado fluorescencia bajo la luz ultravioleta
de Wood en el ganado, pero no en los seres humanos.
• La distribución geográfica es mundial.
Las características clave incluyen: características del cultivo y requisitos de tiamina e inositol, gran invasión de
cabello por ectothrix, lesiones clínicas y antecedentes.
38
T. violaceum
•
es un hongo antropofílico que causa lesiones inflamatorias o crónicas no inflamatorias finamente
descamativas en la piel, las uñas, la barba y el cuero cabelludo, produciendo la llamada tinea capitis del
'punto negro'.
• La distribución es mundial, particularmente en el Cercano Oriente, Europa del Este, la antigua URSS
y el norte de África.
incluyen: • características de
cultivo, • invasión de pelo por endothrix y
•
un requerimiento parcial de tiamina, que separa a este organismo de T.
gourvillii, T. rubrum y otras especies que pueden producir colonias pigmentadas de púrpura.
39
T. schoenleinii
•
Es un hongo antropofílico que causa favus en humanos.
• Favus es una forma crónica y cicatricial de tinea capitis caracterizada por lesiones con costras en forma
de platillo o escútula y pérdida permanente del cabello. Favus es común en Eurasia y África.
• Los pelos invadidos permanecen intactos y florecen con un color amarillo verdoso pálido bajo la luz ultravioleta de Wood
luz.
• Las características clave incluyen: historia clínica, características de cultivo y morfología microscópica
mostrando candelabros favic (Figura)
40
Identificación de mohos no dermatofitos
• La identificación de mohos no dermatofitos se basa principalmente en: • Morfología
microscópica.
• Las características del cultivo, aunque menos confiables, también pueden ser útiles. Éstas incluyen:
– textura superficial, –
topografía, y –
pigmentación, –
pigmentación inversa y –
crecimiento a 37 °C. •
Mohos no dermatofitos informados como agentes causantes de infecciones de la piel y/o
onicomicosis incluyen las siguientes: Acremonium, Aspergillus, Chrysosporium, Chrysosporium,
Fusarium, Geotrichum candidum, Nattrassia manaiferae (Nattrassia manaiferae (sinónimo
Hendersonula toruloidea, anamorfo de Scytalidium), Scopulariopsis brevicaulis).
41
42
Experimento 6: Pruebas adicionales utilizadas en la identificación
de dermatofitos.
1. Prueba de ureasa
Urea Agar Base (Difco) se prepara en forma sólida y en tubos.
Medio de prueba de ureasa:
Peptona 1 g
NaCl 5g
KH2PO4 2g
Glucosa 5g
Agar Agar 20 g
Agua destilada 1000ml
Disolver por calor, agregar 5 ml de solución de rojo de fenol (0,2% en etanol al 50%).
Autoclave a 121 C durante 15 minutos. Enfriar y agregar 100 ml de solución acuosa de urea al 20% esterilizada
por filtración. Inclinación en tubos o placas de vertido. Coloque una pequeña cantidad de colonia en el medio e
incube a 2426 C. Lea el resultado en siete días. Un color rojo intenso a través del medio es una reacción
positiva. La actividad de la ureasa provoca un alcalino (amarillo → rojo).
La capacidad de los hongos para atacar la urea y cambiar el color del medio de pajizo a rojo en 7 días distinguirá
las formas flocosas de T. rubrum de T. mentagrophytes y T. megninii, y también de T. erinacei de T.
mentagrophytes.
T. mentagrophytes y T. megninii muestran una reacción positiva, mientras que T. rubrum y T. erinacei son
negativas para la ureasa. (dado que todos los dermatofitos producen un cambio de pH alcalino con el crecimiento,
solo los cambios tempranos de pH en un medio rico en urea son indicativos de la actividad de la ureasa).
2. Penetración del cabello in vitro
La capacidad de producir perforaciones transversales en cabello humano estéril distinguirá a T. mentagrophytes
de T. rubrum.
Se esterilizan mechones cortos de cabello humano y se agregan al agua destilada en una placa de Petri con
2 a 3 gotas de extracto de levadura al 10%.
Inocular las placas con pequeños fragmentos del cultivo del hongo de prueba cultivado en SDA.
Después de la inoculación, los cabellos se incuban durante un máximo de 4 semanas y se examinan a
intervalos (explorándolos bajo el microscopio en una gota de azul de algodón con lactofenol, ligeramente
calentado, bajo un cubreobjetos; el examen con KOH permite la visualización de los órganos perforantes)
para la formación de cuñas
43
perforaciones formadas por T. mentagrophytes. No se forman perforaciones por T. rubrum.
3. Crecimiento en granos de arroz
Grano de arroz medio
Se colocan algunos granos de arroz en un pequeño frasco o botella, se cubren con agua
destilada y se esterilizan. El organismo de prueba se inocula en la superficie del arroz y
se incuba durante 10 a 14 días.
Esta prueba diferencia M. audouinii, que no crecerá en los granos de arroz, de M. canis o
M. gypseum, que producen un crecimiento denso. Este medio también fomenta la
producción de macroconidios característicos en aislamientos atípicos de M. canis.
4. Producción de pigmentos en agar peptona al 1 %
Microsporum persicolor desarrollará un color rosado en la superficie cuando se cultive en
agar que contenga 1 % de peptona después de 7 a 14 días. Trichophyton mentagrophytes
no producirá ningún pigmento superficial.
5. Requerimientos nutricionales (Medios para evaluar los requerimientos de vitaminas,
aminoácidos y nitrógeno):
La serie de Trichophyton Agars No. 1 7 se puede utilizar para diferenciar algunas especies
de Trichophyton demostrando la necesidad de factores de crecimiento.
Los ejemplos son T. equinum que requiere ácido nicotínico, T. violaceum requiere tiamina y
T. megninii requiere histidina.
44
Experimento 7: Aislamiento de dermatofitos del suelo – técnica de cebo para el cabello.
Humedecer las muestras de suelo en cajas de Petri con agua destilada estéril, y con cabello
de caballo o humano prepuberal cortado en autoclave, que sirve como cebo y se coloniza por
dermatofitos y otros hongos queratinofílicos presentes en el suelo. Es recomendable añadir
cicloheximida (500 µg/ml) y antibióticos bacterianos. Un medio de agar peptona dextrosa
denominado SABPSA (contiene 10.000 unidades de penicilina, 1 mg de estreptomicina y 2
mg de cicloheximida/ml).
45
Clave taxonómica de los hongos humanos y veterinarios más comunes
Patógenos
46
47
48
49
50
51
52
26
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
sesenta y cinco
66
Identificación de hongos levaduriformes
Experimento 8. Levaduras.
Las levaduras se consideran flora normal de la orofaringe y el tracto gastrointestinal y, por lo tanto, pueden recuperarse del
esputo, frotis de garganta, lavados bronquiales, lavados gástricos y muestras de heces.
Sin embargo, el aislamiento repetido de levaduras de una serie de muestras clínicas de orina, raspados de uñas y lavados
vaginales del mismo paciente suele indicar infección con el organismo recuperado y es necesaria la identificación de los
aislamientos. Además, la presencia de levadura en fluidos corporales normalmente estériles, como sangre, líquido
cefalorraquídeo (LCR) o fluidos aspirados de la cavidad pleural o del saco pericárdico, también se considera una situación
clínica en la que se justifica la identificación de la especie. Candida albicans es la especie de levadura cultivada con mayor
frecuencia a partir de muestras clínicas.
Las principales pruebas para la identificación de levaduras implican la investigación de aislados por su capacidad para
fermentar azúcares y también para asimilar diversas fuentes de carbohidratos y nitratos.
Sin embargo, se encuentran disponibles kits de identificación comerciales que brindan información suficiente para identificar
la mayoría de los aislamientos que se encuentran en un laboratorio médico.
La prueba de ureasa como se describió anteriormente también es útil en la identificación de levaduras. Las especies de
Cryptococcus pueden confirmarse mediante una reacción positiva a la ureasa, mientras que la mayoría de las especies de
Candida y Saccharomyces son negativas a la ureasa.
1. Recogida de muestras clínicas:
1. Limpie el área infectada con alcohol al 70 % para eliminar los contaminantes bacterianos.
2. Recoja el material infectado (en recipientes estériles, como frotis en portaobjetos o cultivo directamente) de la siguiente
manera: raspado de piel o uña; parches mucosos de la boca, la vagina o el ano; esputo, sangre o líquido cefalorraquídeo.
2. Cultivo de especímenes:
1. Cultivar material infectado en medios (p. ej., SDA) suplementados con penicilina y
estreptomicina o cloranfenicol.
2. Incubar a temperatura ambiente o 37 ºC durante 34 días.
Al final del período de incubación, las colonias de C. albicans aparecen de color crema, suaves y pastosas, y tienen un olor
a levadura.
3. Identificación de Candida albicans:
Microscópicamente, un portaobjetos de C. albicans mostrará células en gemación ovaladas de 2,54 por 6 m de tamaño y
algo de pseudomicelio si se toma de crecimiento sumergido.
67
68
Experimento 9. Prueba del tubo germinativo.
a. Suspender una porción muy pequeña de una colonia aislada de la levadura que se va a analizar en un tubo de ensayo que
contenga 0,5 ml de suero de conejo o humano.
b. Incubar la probeta a 37 ºC por no más de 3 horas.
C. Coloque una gota de la suspensión de suero de levadura en un portaobjetos de microscopio y cubra con una
cubreobjetos
d. Examinar bajo el microscopio para la presencia de tubo de germen (Figura).
Tenga en cuenta que el tubo germinativo de Candida albicans no tiene constricciones en el punto de origen, en contraste con el de C.
tropicalis.
Cifra. (a) Un cultivo de Candida albicans en Sabouraud Dextrose Agar que muestra colonias cerosas típicas de color crema y
superficie lisa. (b) La morfología microscópica de Candida
albicans mostrando blastoconidios esféricos a ovoides en gemación.
69
70
Experimento 10. Producción de clamidosporas en CMATween 80 (1% tween 80 CMA).
a. Inocule una porción de la colonia de levadura en placas de CMA haciendo tres cortes paralelos separados por
aproximadamente 1 cm en el agar, manteniendo el alambre de inoculación en un ángulo de aproximadamente 45 grados.
b. Coloque un cubreobjetos en la superficie del agar que cubre las líneas de inoculación.
C. Incubar a 30 ºC durante 2448 h.
d. Examine bajo el microscopio para detectar la presencia de clamidosporas.
71
72
Experimento 11. Prueba de fermentación de carbohidratos para identificación de levaduras:
Pruebas fisiológicas para la identificación de levaduras
Las principales pruebas para la identificación de levaduras implican la investigación de aislados por su capacidad para fermentar
azúcares y también para asimilar diversas fuentes de carbohidratos y nitratos.
Sin embargo, los kits de identificación comercial que brindan información suficiente para identificar a la mayoría
Los aislamientos encontrados en un laboratorio médico están disponibles.
La prueba de ureasa como se describió anteriormente también es útil en la identificación de levaduras. criptococo
pueden confirmarse por una reacción positiva a la ureasa, mientras que la mayoría de las especies de Candida y Saccharomyces
son negativas a la ureasa.
La fermentación de levadura en medios de cultivo apropiados que contienen una sola fuente de carbohidratos se detecta mediante
la producción de gas y ácido.
a. A cada uno de los tubos de fermentación de levadura (glucosa, maltosa, sacarosa y lactosa) agregue 0,2 ml de una suspensión
de levadura en solución salina equivalente a un estándar McFarland No. 4 (consulte el Apéndice A).
b. Incubar a 37 ºC durante 48 horas.
C. Deje todas las pruebas negativas en la incubadora durante 6 a 10 días antes de desecharlas.
Nótese la presencia de burbujas o descenso del nivel del líquido, en el tubo de Durham invertido, lo que indica la
fermentación. El desarrollo de un color amarillo no es un indicador confiable de la fermentación y debe ignorarse (Tabla
B.1 y B.2 en el Apéndice B)
Estándares del Nefelómetro McFarland:
Determinación del número de microorganismos en un medio líquido mediante el método de la turbidez:
El número de microorganismos en un medio líquido se puede determinar comparando visualmente la turbidez del medio líquido con
un estándar que representa un número conocido de microorganismos.
en suspensión
Los estándares de turbidez se pueden preparar mezclando productos químicos que precipitan para formar una solución de turbidez
reproducible. Tales soluciones, utilizando sulfato de bario, fueron desarrolladas por McFarland para aproximar el número de
bacterias en soluciones de igual turbidez, según lo determinado por el recuento de colonias (Tabla B.2).
Preparación de patrones de Nefelómetro McFarland:
Principio: Se puede utilizar una reacción de precipitación inducida químicamente para aproximar la turbidez de una suspensión
bacteriana.
Método:
1. Preparar 10 tubos de ensayo o ampollas de igual tamaño y de buena calidad. Use tubos nuevos que tengan
limpiado y enjuagado a fondo.
2. Preparar ácido sulfúrico químicamente puro al 1 %.
3. Preparar una solución acuosa al 1,175 % de cloruro de bario (BaCl2 . 2H2O ).
4. Lentamente y con agitación constante, agregue las cantidades designadas de las dos soluciones a los tubos como se muestra
en la Tabla 1 para hacer un total de 10 ml por tubo.
73
5. Selle los tubos o ampollas. El precipitado de sulfato de bario suspendido corresponde aproximadamente
a las densidades de células de E. coli homogéneas por milímetro en todo el rango de estándares,
como se muestra en la Tabla B.2.
6. Guarde los tubos estándar de McFarland en la oscuridad a temperatura ambiente. deben ser estables
durante 6 meses.
74
Malassezia furfur (Pityrosporum)
– Es el agente causal de la pitiriasis versicolor y
– también está implicado como agente causal de la dermatitis seborreica y la caspa.
– También se ha recuperado en hemocultivos de pacientes neonatos y adultos en tratamiento de
reposición de lípidos.
• El diagnóstico requiere
– medios de cultivo especiales, y
– la sangre extraída a través del catéter es la muestra preferida.
– También se recomienda el cultivo de la punta del catéter.
– M. furfur se caracteriza por
• Células de levadura globosas, oblongoelipsoidales a cilíndricas (Figura).
• La reproducción es por gemación en una base amplia y desde el mismo sitio en un polo
(unipolar).
• Es una levadura lipofílica; por lo tanto, el crecimiento in vitro debe ser estimulado por
aceites u otras sustancias grasas.
75
76
Ejercicio 12. Actividad queratinolítica de hongos
Materiales necesitados:
Aislados fúngicos: Arthroderma cuniculi; Chrysosporium queratinófilo; yeso Microsporum; Rhizopus stolonifer;
Trichophyton ajelloi. Todos los aislamientos fúngicos se mantienen en inclinaciones SDA.
Otros materiales: Arena estéril; Cabellos de un niño rubio, de 1 cm de largo; Lactofenol algodón azul.
Procedimiento:
Prueba de queratinólisis. Se utilizará el método pelosuelo para detectar la actividad queratinolítica.
Cultivar los aislamientos en un sustrato de pelo de arena para determinar la actividad queratinolítica de la siguiente
manera:
1. Lavar la arena con agua del grifo, secar y esterilizar en autoclave.
2. Coloque 25 ml de arena en placas de Petri (9 cm de diámetro) y humedezca con 10 ml de agua destilada estéril.
agua.
3. Esparza cabellos de un niño rubio, de 1 cm de largo, sobre la superficie de la arena.
4. Inocular las placas de Petri con suspensión acuosa de esporas preparada raspando la superficie de colonias fúngicas
de 14 días cultivadas en SDA y luego lavar con 10 ml de agua destilada estéril.
5. Incubar los cultivos a temperatura ambiente durante 20 días y humedecer con agua destilada estéril cuando sea
necesario. Emplear dos placas de réplica para cada aislamiento.
6. Montar los pelos inoculados en azul de algodón de lactofenol para examen microscópico (10 X,
40X y 100X).
7. Explique los resultados (basados en el examen de 10 cabellos, 5 de cada placa de réplica para cada aislado) a la luz
del modelo que se muestra en la siguiente figura. El término erosión superficial (SE) se utiliza para indicar la
destrucción progresiva del cabello desde el exterior o hacia el interior; esto puede ocurrir de manera uniforme (U)
a lo largo del cabello, o en áreas localizadas formando bolsas más o menos extensas (P). El ataque aleatorio sobre
el cabello por parte de hifas más o menos especializadas que penetran el cabello en ángulo recto con la superficie
se denomina penetración radial (Rp). Una hifa aburrida se usa para describir una hifa fina de aproximadamente 1
μm de diámetro. que penetra el sustrato en ángulo recto con la capa de células queratinizadas, mientras que un
órgano perforante se usa para describir una sola columna de hasta 10 células hifales cortas, generalmente 34
veces más anchas que las células miceliales normales, que penetra radialmente en la corteza del cabello , pasando
directamente a través de sus células queratinizadas independientemente de sus límites. Las hifas perforantes más
anchas (wbh) indican una estructura de diámetro intermedio entre las hifas perforantes y los órganos perforantes.
Las hifas perforantes hinchadas (sbh) son estructuras que son similares a las hifas perforantes cuando penetran
en la corteza externa, pero se dilatan en una serie de globos al llegar a lo que probablemente sean regiones menos
compactas del cabello.
8. Estime la intensidad de la actividad queratinolítica (IKA) de la siguiente manera. La actividad se basa en una escala
de 0 a 100 y se estima otorgando diferentes pesos a la presencia de diversas características de la queratinolisis
del cabello (es decir, estructuras invasivas, degradación del cabello, etc.) de la siguiente manera: IKA= G + F + U
+ P + bh + sbh + wbh + po. Donde G, crecimiento fúngico 05%; F, fructificación 0
77
5%; U, erosión superficial uniforme 10%; P, erosión superficial en forma de bolsa 20%; bh, hifas
perforantes 10%; sbh, hifas perforantes hinchadas 10%; wbh, hifas perforantes más anchas 20%;
y Po, órgano perforante 20%. En caso de degradación completa del cabello, IKA se considera 100%.
78
Ejercicio 13. Prueba de susceptibilidad antifúngica
En este ejercicio, se comparará la actividad antifúngica de la nistatina (fármaco contra la candidiasis), la griseofulvina y
los extractos de algunas plantas medicinales frente a algunos hongos patógenos humanos seleccionados.
1. Recolección de material vegetal
En este ejercicio se seleccionarán algunas especies de plantas, comúnmente utilizadas en la medicina popular en
Palestina para el tratamiento de infecciones fúngicas de la piel. Las plantas maduras se pueden recolectar, secar a la
sombra y moler en un material en polvo utilizando un molino de semillas apropiado.
2. Preparación de extractos vegetales (extracto etanólico) y discos:
a) Remoje una porción de 20 g del material vegetal en polvo en 100 ml de etanol al 95 % durante 5 días a temperatura
ambiente y remueva la mezcla diariamente para una infusión regular.
b) Después de un período de cinco días filtrar el extracto en muselina o papel de filtro Whatman No.1.
c) Secar los extractos en rotavapor a 60 ºC y almacenar el extracto seco final en
frascos de vidrio estériles etiquetados y conservar a –20 ºC
d) Reconstituir un gramo del extracto seco usando 5 ml del solvente.
e) Esterilizar discos de papel e impregnar cada uno con 50 l del extracto para dar un resultado final.
concentración de 10 mg de extracto seco por disco.
3. preparación de inóculos
a. Inocular parte de una colonia aislada de C. albicans en un tubo de caldo MullerHinton de 5 ml e incubar durante
418 horas a 37 ºC.
b. Ajustar la turbidez de crecimiento en caldo MullerHinton mediante incubación adicional o dilución con solución
salina fisiológica estéril, después de compararla con la de un tubo de nefelómetro McFarland no. 0,5 (108 CFU/ml)
utilizando un espectrofotómetro a 625 nm (densidad óptica 0,08
0.1).
I. Prueba de susceptibilidad anticandida:
A. Método de difusión en disco
a. Con un hisopo de algodón estéril, aplique 108 CFU/ml de cultivo de C. albicans en la superficie del agar SDA
sumergiendo el aplicador de algodón en la suspensión de Candida, gírelo varias veces y presione contra la pared
interior del tubo para eliminar el exceso de inóculo.
b. Raya la placa de agar en tres direcciones diferentes y alrededor del margen de agar para asegurar
distribución uniforme del inóculo.
c. Deje secar las placas durante 35 minutos.
d.Usando pinzas estériles, distribuya los discos de extracto seleccionados uniformemente en la superficie del agar
platos.
e.Utilice un control positivo (nistatina, 10 mg/disco) y un control negativo (disolvente). Use tres placas replicadas para
cada prueba.
F. Incubar las placas boca abajo a 37 ºC durante 48 hrs.
g.Mida la zona de inhibición alrededor de cada disco con una regla transparente.
79
B. Determinación de la concentración inhibitoria mínima (MIC) método de dilución en caldo
1. Preparación de medios
Para cada aislamiento, se prepararon y esterilizaron en autoclave 15 tubos, cada uno con 9,9 ml de caldo Muller Hinton.
2. Preparación de las diluciones de ingrediente activo
1. Reconstituir un gramo del extracto de planta seco usando 5 ml del solvente para dar un resultado final
concentración de 200 mg/ml (solución madre).
2. Prepare varias diluciones de la solución madre como se muestra en la (Tabla B.3).
3. Incorporación de principios activos a los medios y lectura de resultados:
1. En el tubo de caldo 1, agregue 0,1 ml de solución madre. En el tubo de caldo 2, agregue 0,1 ml de la dilución 2 (Tabla
B.3). Repita el procedimiento para las diluciones restantes. Las concentraciones finales de los ingredientes activos
en caldo se muestran en la Tabla B.4.
2. Para el control positivo, agregue 0,1 ml del antibiótico de referencia, mientras que para el control negativo prepare dos
tubos agregando 0,1 ml de solvente al primer tubo y 0,1 ml de agua estéril al segundo.
3. Añadir 10 l de suspensión de Candida albicans de concentración (108 UFC/ml) a cada uno de los
15 tubos de diluciones seriadas de extracto.
4. Incubar los tubos a 37 ºC por 24 hrs.
5. Prepare un control positivo agregando 0,1 ml de nistatina a un tubo de caldo de 9,9 ml.
6. Prepare un control negativo agregando 0,1 ml de agua estéril a un tubo de caldo de 9,9 ml.
7. Examine la turbidez después de la incubación. La concentración más baja del extracto que inhibe el crecimiento del
organismo (visualmente claro) se denomina MIC.
Registre y discuta sus resultados.
80
C. Concentración fungicida mínima (MFC)
Prepare subcultivos de los tubos visualmente claros en placas SDA. El tubo que se ha subcultivado y no muestra
crecimiento en la placa de agar indica el MFC.
II. Detección de actividades antifúngicas contra hongos miceliares método de dilución en agar:
La actividad antimicótica se lleva a cabo mediante el método de la técnica de alimentos envenenados, que implica el
cultivo del organismo de prueba en un medio que contiene el producto químico de prueba y luego medir su crecimiento.
El uso de agar envenenado es el más común, pero el uso de un cultivo batido en un medio líquido brinda resultados más
precisos. El crecimiento de hongos en medio líquido envenenado se mide en peso seco. El siguiente es un resumen del
método del medio de agar envenenado (Dikshit & Husain, 1984; véase también AbuGhdaib, 1998; AliShtayeh et al.,
1998a).
A. Método de técnica de alimentos envenenados:
1. Inocule los aislados de prueba (consulte los aislados fúngicos en Materiales necesarios) en placas SDA e incube a 25
ºC durante 710 días para obtener cultivos jóvenes en crecimiento activo compuestos de micelios y conidios.
2. Disuelva la cantidad requerida de extracto de planta seca o fármaco antimicótico de referencia en 2 ml de alcohol
etílico o dimetilsulfóxido acuoso al 10 % (DMSO), y esterilice por filtración a través de una membrana de 0,45 um),
y luego mezcle la cantidad requerida de Medio SDA para dar una concentración final de 15 g/ml.
3. Cortar un disco de micelio de 5 mm de diámetro, de la periferia de los cultivos de 710 días e inocular asépticamente
en el medio.
4. En los controles, use DMSO estéril o agua destilada en lugar de extracto de plantas.
5. Incubar las placas inoculadas a 25 ºC.
6. Después de 7 días, mida y registre el diámetro de la colonia. El porcentaje de inhibición micelial se calcula como sigue.
% inhibición micelial = [(dcdt)/dc] x 100; dc = diámetro de colonia en control, dt = diámetro de colonia en tratamiento.
Utilice tres placas de réplica para cada tratamiento.
B. La determinación de la concentración inhibitoria mínima se realiza mediante un agar en serie
técnica de la placa de dilución de la siguiente manera:
1. Soluciones de extractos reconstituidos (concentraciones de 0,01 mg 3 mg/ml).
2. Incorporar al medio prevertido esterilizado SDA.
3. Vierta el medio y deje que se asiente el agar en las placas.
4. Inocular las placas con los hongos de prueba e incubar como se mencionó anteriormente. Las placas de control,
que no contienen extractos de plantas, también se fabrican con la prueba.
81
5. Determinar la MIC de cada planta después de 7 días. Esta es la concentración más baja a la que no
se observa crecimiento visible.
C. La determinación de la concentración fungicida mínima (MFC) se realiza de la siguiente manera:
1. Vuelva a inocular los discos inhibidos de cada aislamiento fúngico en medio SDA por separado.
2. Incube como se indicó anteriormente.
3. Examine las placas después de 7 días. La ausencia de crecimiento micelial en el séptimo día indica
naturaleza fungicida. MFC se considera como la concentración más baja del compuesto de prueba
que impidió el crecimiento del hongo, lo que indica > 99,5 % de destrucción del inóculo original.
82
APÉNDICE A
MEDIOS Y REACTIVOS Agar Harina
de Maíz (CMA): (Satisfactorio para el crecimiento y esporulación de muchos hongos)
Granos de maíz molido ………….…………………….60 g
Agar……………………………………………….……15 g Agua
………………… …………………………1000 ml Hervir 60 g de
granos de maíz recién molidos en 1 litro de agua durante 1 hora. Cuele la suspensión a través de dos capas de muselina.
Agregue el agar y caliente hasta que se disuelva. Esterilizar en autoclave a 15 psi durante 15 minutos.
Agar CzapekDox (CzA): (adecuado para el cultivo de Aspergillus, Penicillium y Nocardia spp.)
NaNO3 ……..………………...…………………………2 g K2HPO4
………………………………………………....1g KCl …
…………...………………...…..………….....0,5 g MgSO4 . 7H2O
…………..……..……..………….....0,5 g FeSO4 . 7H2O
……………………………..…….....0,01 g Sacarosa
……………………………..…………...…..30 g Agar
…………………………….………….…….…15 g Agua destilada
…………………………...……...1000 ml Se añade sacarosa
justo antes esterilización para reducir la contaminación.
Medio de Hoyer: Goma
arábiga ………………………………….. …30g Hidrato de
cloral ………………………………….200g Glicerina
………………………… ……….. ……..20 g Agua
………………………………….. ……...50 ml.
Remoje la goma arábiga en el agua y el hidrato de cloral. Deje reposar la mezcla y agítela ocasionalmente durante varios días
hasta que el material se disuelva. Luego agregue glicerina. Humedecer con etanol absoluto durante 1 minuto seguido de un
tratamiento de 1 minuto en KOH al 2 % y lavar en etanol al 70 % puede ser necesario para ciertas muestras antes de montarlas
en este medio.
Agar Extracto de Malta (MEA): Útil
para el crecimiento de hongos destructores de la madera y muchos
otros Hongos Extracto de Malta
………………………..………………...25 g Agar ………..……
…………………………………..15 g Agua
……………………………………………1000 ml Calentar el extracto de malta en agua hasta que se disuelva. Agregar agar y disolver. Llene el líquido c
Ajustar el medio a un pH final de 6,5 por NaOH.
Agar M2:
Extracto de malta …………………………….…………...….5%
Extracto de levadura ………………………………….……0,2%
Agar …… …………………………………….…….1.8%
Agar Patata Dextrosa (PDA): Útil para
el crecimiento de muchos hongos, especialmente fitopatógenos, algunas bacterias
Patata (pelada y cortada en dados) ……………..………….. 200 g
Dextrosa (glucosa) …………… …………..……….. 20 g Agua
………….………………………………..…1000 ml Enjuague la
patata con agua corriente y luego agréguela al agua. Hervir durante 1 hora. Filtre a través de un paño, exprimiendo la mayor
cantidad de pulpa posible. Autoclave a 15 psi durante 30 minutos.
83
Agar dextrosa de Sabouraud (SDA):
Dextrosa …..………………………………..………. 40g
Peptona ………..………………..…………………….. 10 g
Agar ……………………………………………………20 g
Mezclar los ingredientes, hervir para derretir el agar, ajustar el pH a 5,6 y esterilizar. Autoclave durante 10 min.
Extracto de suelo estéril:
Tierra ………………………..……..…………………… 50 g
Agua destilada…………………………..……… 1000 ml
Agregue tierra al agua y agite bien y deje reposar durante 48 horas. Filtrar por Whatman núm. 1 papel filtro y autoclave por 20 min.
Medio 3P: Agar
harina de maíz ………………………………..……17 g
Pimaricina ………………………………………….5 mg PolimixinaB
……………………………………..50 mg Penicilina……..……….
………………………… 50 mg Agua destilada
………………………………… 1000 ml
Interpolación
80: Interpolación 80 ……………………….………………200 ml
Agua destilada …………………..………………800 ml
2P Medio:
Agar harina de maíz …………………….…….………….17 g
PolimixinaB ………………….…….….………50 mg
Penicilina ……………………………..…….….…50 mg
Agua destilada ………………………..……....1000 ml
2
3
APÉNDICE B
Tabla B.1. Características de las especies de Candida aisladas con mayor frecuencia de muestras clínicas.
asimilaciones Fermentaciones Otras reacciones
especies de cándida
tinta
Glucosa Maltosa sacarosa Lactosa galactosa melibiosa celobiosa inositol Xilosa rafinosa trehalosa Dulcitol Glucosa Maltosa sacarosa Lactosa galactosa trehalosa ureasa KNO3 pseudohifas Crecimiento
37
oC
a germinales
tubos India cápsula
C. albicans +* + + + + + AG AG A† AG o A AG + + +

o
A†
+ + + + + + +
C. stellatoidea‡ +† AG AG
+ + + + + + AG AG AG + +
C. parapsilosis
o un o un o
A†
+ + + + +† + + AG AG AG AG AG + +
C. tropicalis
+ + + + +† + AG AG AG AG AG + +
C. pseudotropicalis +
o
A†
C. krusei + AG +† + +
+ + + + + + + + + + AG AG AG AG + +
C. guillermindii
o o
A† A†
C. rugosa + + + +
* += Asimilación, densidad de crecimiento mayor a 1+ turbidez por la tarjeta de Wickerham; AG= ácido y gas; A= ácido producido únicamente en el caldo de fermentación; =
negativo. † Variación de cepa. ‡ Informar como C. albicans cuando se identifique C. stellatoidea .
Tabla B.2. Estándares de nefelómetro McFarland
número de tubo
0.5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Cloruro de bario (ml) 0,05 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1
Ácido sulfúrico (ml) 9,95 9,9 9,8 9,7 9,6 9,5 9.4 9.3 9.2 9.1 9
Densidad celular bacteriana 1,5 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30
8
aproximada (x 10/ml)
Densidad aproximada
6
de células
candidatas (x 10 /ml) 15
Ver estadísticas de publicación

Manual de Micología: Mohamed Saleem Ali Shtayeh

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Manual de Micología: Mohamed Saleem Ali Shtayeh

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Machine Translated by Google

M. canis ectotrix * 23

Características clave Grupo especies comunes

1) Solo macroconidios lisos de paredes delgadas, epidermofiton E. floccosum

2) Macroconidios con paredes rugosas presentes; Microsporum canis

3) Microconidios presentes, macroconidios de tricofiton T. rubrum

C. albicans +* + + + + + AG AG A† AG o A AG + + +

También podría gustarte

Manual de Micología: Mohamed Saleem Ali Shtayeh

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Manual de Micología: Mohamed Saleem Ali Shtayeh

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Machine Translated by Google

M. canis ectotrix * 2­3

Características clave Grupo especies comunes

1) Solo macroconidios lisos de paredes delgadas, epidermofiton E. floccosum

2) Macroconidios con paredes rugosas presentes; Microsporum canis

3) Microconidios presentes, macroconidios de tricofiton T. rubrum

C. albicans +* + + ­ + ­ ­ ­ + ­ + ­ AG AG A† ­ AG o A AG ­ ­ + + + ­

También podría gustarte

M. canis ectotrix * 23

C. albicans +* + + + + + AG AG A† AG o A AG + + +