UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Escuela Profesional de Microbiología y Parasitología

Helmintología Parasitaria

INVESTIGACIÓN

Mudarra Sare, Josué

Suárez Cancino, Amanda
Valdivieso Zavaleta, Jeefer
Varas Chun, María
Veneros Torres, Alejandra
Villagaray Sánchez, Anderson

TRUJILLO- PERU
2018
Comparación de las técnicas de Willis y Sheather en el diagnóstico de
helmintiasis gastrointestinal de Ovis aries
¿Qué técnica de flotación empleada para el diagnóstico de helmintiasis
gastrointestinal de Ovis aries es más sensible ?
INTRODUCCION:
Las infecciones por protozoarios y helmintos intestinales constituyen las dolencias
crónicas más frecuentes en muchos países del mundo, en especial en zonas rurales
donde causan disminución de la capacidad productiva de individuos adultos parasitados
y la falta de crecimiento, aprehensión y desarrollo cognoscitivo en niños y adolescentes.
Siendo tan frecuentes, el diagnóstico de rutina de tales infecciones intestinales se
ejecuta mayormente por la técnica denominada en fresco, que por su simpleza y bajo
costo se ha convertido en una técnica universal; sin embargo, es poco sensible lo que ha
conducido ha tener en cuenta la importancia de someter una muestra fecal
adicionalmente a una o más técnicas de concentración para aumentar la sensibilidad y
confiabilidad en el hallazgo de las formas parasitarias, sobre todo cuando la carga
parasitaria es baja . Tales técnicas de concentración, que permiten el análisis de mayor
cantidad de muestra en comparación a la técnica en fresco, se dividen en dos grupos: las
de flotación, que emplean soluciones densas de modo que las formas parasitarias floten
en el depósito de análisis, y las de sedimentación, que por el contrario utilizan
soluciones menos densas y las formas parasitarias deberán buscarse en sedimento luego
de ejecutada la técnica. Las técnicas de concentración, por usar equipos y reactivos
diferentes, poseen distinto grado de sensibilidad y de uso existiendo preferencias por
parte del laboratorista por el uso de unas u otras. En nuestra práctica siendo así, ha
resultado importante someterlas a evaluaciones que, en definitiva, es parte del proceso
de validación que conduce a acreditar el uso de ellas o realizar comparaciones bajo
ciertos parámetros a fin de determinar las bondades de cada una y posterior uso . Por la
sencillez de su ejecución y por utilizar reactivos de uso común, dos son las técnicas de
flotación más frecuentemente usadas: la de Willis, que utiliza solución saturada de
NaCl2 y la de Sheather , que usa solución saturada de azúcar y centrifugación; sin
embargo, resulta necesario determinar si la primera, que es más ventajosa por prescindir
del uso de equipos distintos al microscopio compuesto, tiene la misma eficacia en la
detección de protozoarios y helmintos intestinales de Ovis aries que la segunda que ha
demostrado alta eficacia. Teniendo en cuenta que el diagnóstico coproparasitoscópico
debe ser realizado de manera apropiada, con mayor sensibilidad y especificidad para la
detección de protozoarios y helmintos intestinales en lo posible con técnicas sencillas en
su procedimiento y baratas de aplicación masiva, toda vez que de ellos dependerá el
tratamiento específico, es que se propuso una investigación que estuvo dirigida a
determinar si la técnica de Willis cuando se usa para la detección de protozoarios y
helmintos intestinales de Ovis aries resulta tan eficaz como la técnica de Sheather para
tales fines.

MATERIALES
Técnica de Willis
1. Vaso de precipitados
2. Frascos de penicilina
3. Cubreobjetos
 4. Laminas
5. Palitos de chupete
6. Reactivos:
 Solución saturada de cloruro de sodio (NaCl2)
 Solución de lugol parasitológico
7. Reactivos biológicos de Ovis aries:
Muestra de heces fecales

Técnica de Sheather
1. Vasitos de precipitación
2. Tubos de ensayo de 13 X 100 mm
3. Cubre-objetos
4. Porta-objetos
5. Asa bacteriológica, 5-7 mm de diámetro
6. Gasa quirúrgica
7. Solución fenolada de azúcar
8. Mechero de gas o lámpara de alcohol
9. Formol al 10%
10. Embudo de 5 cm de diámetro
11. Agua destilada
12. Lugol parasitológico
13. Parafilm o tapón de hule para tubos de ensayo

PROCEDIMIENTO
Técnica de Willis
1. Tomar aproximadamente 1gr. De heces con un abate lenguas.
2. Colocar la muestra en un vaso de precipitados y mezclar con 10ml de solución
saturada de cloruro de sodio.
3. Coloque un cubreobjetos sobre el tubo, de tal manera que el líquido haga
contacto con el cubreobjetos.
4. Esperar de 30 a 45 minutos.
5. Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del cubreobjetos
que está en contacto con la mezcla de heces y cloruro de sodio saturado.
6. Colocar una gota de yodo parasitológico sobre un portaobjeto, retirar el
cubreobjetos con cuidado para evitar perdida del material y ponerlo sobre el
portaobjetos.
7. Examinar la muestra al microscopio con el objetivo de 40X, buscando quistes o
huevecillos.

Técnica de Sheater
1. Identificar los tubos de ensayo con la muestra a examinar.
2. Hacer una suspensión de una pequeña porción de las heces de 2 gramos en 4 ml
de formol al 10% en el vaso de precipitación
 3. Colocar gasa en 2 dobleces dentro del embudo introduciendo éste en otro tubo
de ensayo rotulado y filtrar la suspensión de heces para remover fibras y
partículas grandes. Tapar con parafilm o tapón de hule.
4. Centrifugar a 1,500 rpm por 2 minutos. Destapar. Decantar el sobrenadante.
5. Añadir un poco de solución fenolada azucarada al sedimento y agitar
vigorosamente con un aplicador. Completar con más solución hasta 2 cm bajo el
borde del tubo sin dejar de agitar. Tapar con parafilm o tapón de hule.
6. Centrifugara 1000 rpm durante 10 minutos.
7. Remover el tapón con sumo cuidado para no agitar. Tomar 2-3 asadas de la
superficie del menisco y colocar sobre un porta-objetos. Flamear el asa en el
mechero.
8. Cubrir la preparación con un cubre-objetos y examinar en el microscopio óptico
toda la preparación.
9. Buscar los ooquistes con objetivo 10X a diferentes profundidades; a menudo
flotan y se colocan justo debajo del cubre-objetos.
10. Para confirmar, utilizar mayor magnificación. Puede usar esta preparación para
colorear; basta remover el cubre-objetos, dejar secar y colorear.

RESULTADOS

Técnica de Willis Técnica de Sheader

MUESTRA 1 2
MUESTRA 2 0
MUESTRA 3 3

 Técnica de Willis

IMAGEN 1: Ooquiste de Eimeria IMAGEN 2:

perteneciente a la muestra 1
IMAGEN 3: Huevo de Ancylostoma IMAGEN 4: Oocito maduro de Eimeria
perteneciente a la muestra 3 perteneciente a la muestra 3

IMAGEN 5:

IMAGEN 5:
  Técnica de Sheader

IMAGEN 6: IMAGEN 7:

COMENTARIO:
La aplicación de diferentes métodos de examen de heces se torna necesaria teniendo en
cuenta la gran variabilidad morfológica y biológica que presentan los protozoarios y
helmintos intestinales. Los dos métodos elegidos para efectuar la presente investigación
son de fácil proceso, fácil obtención de materiales y reactivos y de relativa eficacia. De
ambos, la técnica de Sheather ha sido usada como patrón, toda vez que utiliza en su
procedimiento la centrífuga lo que asegura que los detrituts presentes en la muestra
fecal serán separados con mayor eficacia de las formas parasitarias que cuando se usa la
técnica de Willis en la cual no se usa tal equipo y la separación se hace manualmente,
con el uso de una bagueta de vidrio o material parecido. Al mismo tiempo, la solución
saturada de azúcar utilizada en la técnica de Shetaher presenta un mayor peso específico
que la solución saturada de sal utilizada en la técnica de Willis dándole una mayor
eficacia en el diagnóstico. Sin embargo, como se ha mencionado, la última de las
técnicas nombradas no utiliza equipos diferentes al microscopio compuesto, el NaCl2
usado es mucho más disponible que el azúcar, las medidas recomendadas (28g para
100mL) para la preparación de la solución saturada usada en el procedimiento son más
precisas que las medidas de azúcar, respectivamente, de la cual no se tiene una medida
exacta.
Tomando como apoyo a trabajos publicados se refieren que en la técnica de Sheather se
ha detectado mayor número de especies de parásitos intestinales y en mayor frecuencia,
mientras que en la técnica de Willis por ser, como se ha manifestado, más sencilla y
barata, presenta una menor se han encontrado menos muestras de parásitos.
Si se tiene en cuenta que las técnicas usadas para la búsqueda de protozoarios y
helmintos intestinales en esta investigación son cualitativas, de flotación y, por lo tanto,
con los mismos principios básicos, se entenderá que en general se espera que deban
tener baja especificidad, entendida ésta como la capacidad para detectar una
determinada especie entre otras. Se espera, asimismo, que cuando la sensibilidad es alta,
la especificidad debe ser baja. las técnicas de Willis comparada con la de Sheather debe
preferentemente utilizarse para la búsqueda de huevos de helmintos, porque las
soluciones que utiliza en el proceso son de textura gruesa comparadas con otras
soluciones saturadas, como la de sulfato de Zinc que utiliza la técnica de Faust, y que
detecta con mayor prestancia a protozoarios.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
 E:\Parasitología latinoamericana - Estudio comparativo de recuperación de
formas parasitarias por tres diferentes métodos de enriquecimiento
coproparasitológico.htm
 E:\MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN WILLIS
«Parasitología General.mht
 Diagnóstico microbiológico – koneman/allen/Dowell/Janda/Sommers/Winn.