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OBTENCION, TRANSPORTE Y CONSERVACION DE MUESTRAS EN BACTERIOLOGIA

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OBTENCION, TRANSPORTE Y CONSERVACION DE MUESTRAS EN BACTERIOLOGIA

Nombre Elaborado: Revisado: Aprobado: Ana Prada Ana Prada Hermann Rutzke

Cargo Jefe de rea Microbiologa Jefe de rea Microbiologa Gerente General

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Fecha

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INDICE I. INTRODUCCION II. OBJETIVOS III. BIOSEGURIDAD IV. IDENTIFICACIN Y REQUERIMIENTOS DE LA ORDEN V. PREPARACIN DEL PACIENTE VI. OBTENCION DE SANGRE PARA HEMOCULTIVO VII. ORINA PARA UROCULTIVO VIII. TRACTO GASTROINTESTINAL 1. HECES TOTALES 2. HISOPOS RECTALES 3. LAVADO GSTRICO 4. MUESTRA DE BILIS POR CUERDA ENCAPSULADA VII. TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR 1. SECRECION FARINGEO-AMIGDALINO 2. NASOFARINGE 3. FOSAS NASALES 4. SENOS PARANASALES 5. CAVIDAD ORAL VIII. TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR 1. ESPUTO 2. JUGO GASTRICO 3. ASPIRADO TRAQUEOBRONQUIAL SIMPLE 4. PUNCION TRANSTRAQUEAL 5. MUESTRAS OBTENIDAS A TRAVES DE FIBROBRONCOSCOPIA 5.2.1 BRONCOASPIRADO (BAS) 5.2.2 CEPILLADO BRONQUIAL por catter telescpico CBCT 5.2.3 LAVADO BRONCOALVEOLAR 5.2.4 BIOPSIA TRANSBRONQUIAL 6. MUESTRAS OBTENIDAS POR ABORDAJE PERCUTNEO 7. MUESTRAS EXTRAPULMONARES 7.1 LIQUIDO PLEURAL 7.2 BIOPSIA PLEURAL 7.3 SANGRE VENOSA IX. LIQUIDO CEFALO RAQUDEO X. LQUIDOS ORGNICOS NORMALMENTE ESTERILES XI. MUESTRAS DEL TRACTO GENITAL FEMENINO 1. EXUDADOS VAGINALES 2. ENDOCERVICALES 3. EXUDADOS URETRALES 4. SECRECIONES RECTALES 5. ENDOMETRIO 6. CULDOCENTESIS 7. TROMPAS Y OVARIOS 8. VULVA 9. GANGLIOS LINFATICOS INGUINALES 4 4 5 7 8 9 10 13 13 14 14 15 15 15 16 16 17 17 18 18 19 19 19 20 20 20 21 21 21 22 22 22 22 22 23 25 25 26 27 27 28 28 29 29 30

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10. LIQUIDO AMNIOTICO 11. PRODUCTOS DE LA CONCEPCIN XII. TRACTO GENITAL MASCULINO 1. SECRECIONES URETRALES 2. MUESTRAS PARA EL DIAGNSTICO DE PROSTATITIS (TCNICA DE MEARES-STAMEY). XIII. SECRECIONES OCULARES 1. FROTIS CONJUNTIVALES 2. RASPADOS CONJUNTIVALES 3. RASPADOS CORNEALES XIV. SECRECIONES OTICAS 1. OIDO EXTERNO 2. OIDO MEDIO XV. PIEL Y TEJIDOS BLANDOS 1. HERIDAS SUPERFICIALES, ULCERAS Y ABSCESOS ABIERTOS 2. EXANTEMAS 3. ABSCESOS CERRADOS 4. FISTULAS Y TRACTOS SINUSALES 5. HERIDAS QUIRRGICAS 6. QUEMADURAS XVI. MUESTRAS ODONTOLOGICAS XVII. CATTER VENOSO CENTRAL XVIII. BIOPSIAS XIX. NECROPSIAS XX. MEDULA OSEA: ASPIRADOS XXI. MUESTRAS PARA CULTIVO ANAEROBIOS XXII. TRANSPORTE DE MUESTRAS 1. PREPARACIN PARA EL TRANSPORTE AL LABORATORIO 2. CONDICIONES AMBIENTALES DURANTE EL TRANSPORTE XXIII. RECEPCION Y ACEPTACION DE MUESTRAS 1. RECEPCIN DE MUESTRAS 2. CRITERIOS GENERALES DE RECHAZO 3. CRITERIOS DE RECHAZO DE ACUERDO AL TIPO DE MUESTRA 4. MUESTRAS INACEPTABLES PARA CULTIVOS ANAEROBIOS 5. PROCEDIMIENTOS EN CASO DE RECHAZO Y SOLICITUD DE NUEVA MUESTRA XXIV. BIBLIOGRAFIA ANEXO

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I. INTRODUCCION Los mdicos y los pacientes confan en que los laboratorios de microbiologa puedan apoyar el diagnstico clnico, mediante la realizacin de una serie de anlisis que lleven a determinar que microorganismo puede estar causando un cuadro clnico dado. La mayora de las muestras que se reciben son de zonas corporales que normalmente contienen microorganismos y la idea es determinar, entre esos grmenes, cual o cuales estn causando la enfermedad, ejemplo, muestras de faringe, muestras de heces, etc. En otros casos, las muestras recibidas solo deberan contener el agente microbiano causante del cuadro clnico, sin embargo, a travs de los procedimientos de coleccin se ven contaminadas con biota normal de los lugares por donde pasan, por ejemplo, esputo contaminado con saliva, orina contaminada con biota del rea genital, etc. Finalmente, en caso de muestras de sitios corporales estriles, que se obtienen por procedimientos invasivos solo debera aislarse agentes patgenos, ejemplo, lquido pericrdico, lquido cfalo raqudeo, etc. En todos los casos si la muestra no se obtiene con la tcnica adecuada, as fuera de un sitio estril, podra terminar contaminada con muchos microorganismos que harn difcil y en algunos casos imposible identificar al agente etiolgico de la enfermedad. De igual modo si una muestra no es seleccionada apropiadamente, el microoganismo que se encuentre en ella podra nos ser el patgeno que se busca o simplemente se podra dar por negativo un resultado porque no se encuentra el agente causal del cual se sospecha. Finalmente, si el transporte no se realiza en los medios adecuados, a las temperaturas o los tiempos requeridos, las muestras se vern comprometidas en su integridad, debido a sobrecrecimiento bacteriano de la biota acompaante, muerte de los patgenos por efecto de temperaturas bajas, sequedad, etc. En general, a partir de muestras malas solo se pueden obtener malos resultados. II. OBJETIVOS Proveer informacin clara a cerca de los tipos de muestra mas apropiados para el diagnstico microbiolgico, as como las tcnicas de obtencin, el transporte y su conservacin, de tal modo que las muestras, en si, sean representativas del proceso infeccioso y que se evite, en lo posible, la contaminacin con la biota normal de las reas adyacentes a las de la toma. Instruir al personal a cerca del material necesario, el volumen, el nmero y el modo de transporte de cada una de las muestras de a cuerdo al tipo de muestra y microorganismo a investigar.

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III. BIOSEGURIDAD Bioseguridad se refiere a la aplicacin de conductas y procedimientos que lleven a la disminucin del riesgo del trabajador de salud para adquirir infecciones en el medio laboral, as como proteger a los pacientes de cualquier riesgo relacionado a su atencin, adems de proteger a la comunidad. 1. Procedimientos Universales. Se trata de tres conceptos bsicos para lograr los objetivos antes expuestos: 1.1 Universalidad: Proceder como si toda persona atendida estuviera infectada y por lo tanto todas sus muestras biolgicas, as como los materiales empleados en su atencin tambin lo estuvieran. No es posible saber de primera intencin que persona tendr una enfermedad infecto-contagiosa. 1.2 Uso de barreras: Comprende el concepto de evitar la exposicin directa a sangre y otros fluidos orgnicos potencialmente contaminantes, mediante la utilizacin de materiales adecuados que se interpongan al contacto de los mismos. La utilizacin de barreras (Ej. guantes) no evitan los accidentes de exposicin a estos fluidos, pero disminuyen las consecuencias de dicho accidente. De acuerdo al tipo de exposicin es necesario emplear, mandiles, mascarillas, lentes, guantes, uno o todos. 1.3 Eliminacin de material contaminado: Comprende el conjunto de dispositivos y procedimientos adecuados a travs de los cuales los materiales utilizados en la atencin de pacientes, son depositados y eliminados sin riesgo. Ejemplo: Las aguas se descartan luego que quemarse en el equipo correspondiente. Las lancetas, bisturs y otros punzo cortantes, se colocan SIN re enfundar, en un contenedor lo suficientemente resistente, para que nos sean atravesados por estos y todos ellos son descartados de acuerdo a las normas de bioseguridad de la empresa, para ser incinerados o transportados por empresas especializadas en el manejo final de tales materiales biocontaminados. 2. Medidas de Proteccin Personal 2.1 Manejar todo paciente como potencialmente infectado. Las normas universales deben aplicarse con todos los pacientes, independientemente del diagnstico, por lo que se hace innecesaria la clasificacin especfica de sangre y otros lquidos corporales. Por lo que es de vital importancia entrenar al personal nuevo en el uso de estas normas. 2.2 No atender directamente a los pacientes si usted presenta lesiones o dermatitis serosas, hasta tanto stas hayan desaparecido. 2.3 Mantenga actualizado su esquema de vacunacin por lo menos contra Hepatitis B, adems del registro de las pruebas peridicas de PPD. 2.4 Lavarse cuidadosamente las manos antes y despus de cada procedimiento e igualmente si se tiene contacto con material patgeno. La tcnica de lavarse las manos tiene la siguiente secuencia: subirse las mangas hasta el codo

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retirar alhajas y reloj mojarse las manos con agua corriente aplicar 3 a 5 mL de jabn lquido o producir abundante espuma con jabn slido desinfectante. enjabone tambin el grifo del lavadero, para que al cerrarlo no vuelva a llevar en sus manos los mismos microorganismos que dejo al abrirlo (La mejor alternativa son los sistemas a pedal). friccionar las superficies de la palma de la manos y puo durante 10 o 15 segundos enjuagar las manos con agua corriente de arrastre enjuague el grifo y cirrelo (Alternativamente cierre el grifo con papel toalla). secar con toalla de papel 2.5 Utilizar en forma sistemtica guantes plsticos o de ltex en procedimientos que conlleven manipulacin de elementos biolgicos y/o cuando maneje instrumental o equipo contaminado en la atencin de pacientes. 2.6 Usar guantes limpios, no necesariamente estriles, previo al contacto con: sangre, fluidos corporales, secreciones, excreciones, mucosas y materiales contaminados. Para procedimientos invasivos se deben usar guantes de ltex, estriles y luego descartarlos en recipientes destinados para ello. 2.7 Emplear mascarilla y protectores oculares durante procedimientos que puedan generar salpicaduras gotitas -aerosoles- de sangre u otros lquidos corporales. 2.8 Usar batas sobre todo en aquellos procedimientos en que se esperen salpicaduras, aerosoles o derrames importantes de sangre u otros lquidos orgnicos. 2.9 No deambular fuera del laboratorio con los elementos de proteccin personal que se hallan utilizado en procedimientos contaminantes. 2.10 Mantenga sus elementos de proteccin personal en ptimas condiciones de aseo, en un lugar seguro y de fcil acceso. 3. Procedimientos peligrosos 3.1 Maneje con estricta precaucin los elementos corto punzante y dispngalos o deschelos en recipientes a prueba de perforaciones. Los que son para reutilizar, se deben someter a los procesos de desinfeccin y esterilizacin; los que se van a desechar, se les coloca en el recipiente hipoclorito de sodio (leja) a 5.000 ppm (0.5%) durante 30 minutos, o leja comercial al 10%. Para esterilizar o incinerar, se retira el hipoclorito. 3.2 No cambie elementos corto punzantes de un recipiente a otro. 3.3 Abstngase de doblar o partir manualmente las hojas de bistur, cuchillas, agujas o cualquier otro material corto punzante. 3.4 Evite desenfundar manualmente la aguja de la jeringa usada. Si fuera necesario, para ello utilice pinzas adecuadas y solamente gire la jeringa. 3.5 Abstngase de colocar el protector a la aguja y descrtela en recipientes resistentes e irrompibles. 3.6 En caso de derrame o contaminacin accidental de sangre u otros lquidos corporales sobre superficies de trabajo, cubra con papel u otro material absorbente; luego vierta hipoclorito de sodio (leja) a 0.5 1% (= 5.000 ppm 10,000 ppm) sobre el papel y sobre la superficie circundante, dejando actuar durante 30 minutos; despus limpie nuevamente la superficie con desinfectante a la misma concentracin y realice limpieza con agua y jabn. El personal encargado de realizar dicho procedimiento debe utilizar guantes, mascarilla y bata.

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3.7 En caso de ruptura de material de vidrio contaminado con sangre u otro lquido corporal, los vidrios deben recogerse con escoba y recogedor, nunca con las manos. 3.8 Los recipientes para transporte de muestras deben ser de material irrompible y cierre hermtico. Deben tener preferiblemente el tapn de rosca. 3.9 Manipule, transporte y enve las muestras disponindolas en recipientes seguros, con tapa y debidamente rotuladas, empleando gradillas limpias para su transporte. Las gradillas a su vez se transportarn en recipientes hermticos de plsticos o acrlico que retengan fugas o derrames accidentales. Adems deben ser fcilmente lavables. 3.10 En caso de contaminacin externa accidental del recipiente, ste debe lavarse con hipoclorito de sodio (leja) al 0.1% (1.000 ppm) y secarse. 3.11 Restrinja el ingreso a las reas de alto riesgo biolgico al personal no autorizado, al que no utilice los elementos de proteccin personal necesarios y a los nios. 3.12 La ropa contaminada con sangre, lquidos corporales u otro material orgnico debe ser enviada a la lavandera en bolsa plstica, donde pueda ser autoclavaza antes de su lavado. 3.13 Disponga el material patgeno en bolsas marcadas como peligrosos. En caso de accidente de trabajo con material corto punzante proceder como en 2.3 y hacer el reporte inmediato de accidente de trabajo. 3.14 Los trabajadores sometidos a tratamiento con inmunosupresores no deben trabajar en reas de riesgo biolgico. NOTA: Ver anexo para preparacin de Hipoclorito de sodio (Leja) 4. Procedimientos en caso de accidentes del personal 4.1 Pinchazos y heridas: Lavar de inmediato las zonas cutneas lesionadas con abundante agua y jabn. Permitir el sangrado en la herida o puncin accidental. Realizar antisepsia de la herida con alcohol al 70% (3 minutos) o alcohol yodado al 2%. Dependiendo del tamao de la herida cubrir la misma con gasa estril. 4.2 Contacto con Mucosas (ojo, nariz, boca): Lavar con abundante agua o con suero fisiolgico. No utilizar desinfectantes sobre las mucosas. 4.3 Avisar al supervisor o jefe inmediato: quien luego informar al director mdico y a recursos humanos, para que se tomen las medidas mas oportunas, como, si as fuera necesario, derivar a la persona accidentada a su seguro social u otra rea hospitalaria de acuerdo a la poltica de la institucin. 4.4 Registrar las ocurrencias en el registro F - GC 0083, Reporte y Seguimiento de Accidentes de Trabajo. *Mayor informacin en IO Bioseguridad: Quemaduras, shock elctrico, punzo cortantes, sustancias qumicas. 5. Vacunas y controles del personal. Todo el personal potencialmente expuesto a material infeccioso o que manipule muestras clnicas en el laboratorio deber contar al menos con la vacunacin actualizada para Hepatitis B, adems de controles de PPD, y radiografa anual de trax, de acuerdo al plan institucional de control de exposicin a la tuberculosis.

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IV. IDENTIFICACIN Y REQUERIMIENTOS DE LA ORDEN Para la correcta identificacin del paciente se deben registrar los siguientes datos 1) Nombre completo del paciente 2) Edad del paciente 3) Descripcin completa y especifica del tipo (Ejemplo: Secrecin) y fuente u origen (Ejemplo: Faringea) de la muestra, as como el procedimiento de extraccin (Ejemplo: Hisopado, sonda, puncin, etc.) 4) Teraputica seguida: antibiticos, que se han administrado y tiempo desde la ltima toma o inyeccin. El ideal es que todas las muestras se obtengan antes de empezar un tratamiento antibitico, o al menos 3 das despus de haberlo dejado. 5) Nombre del mdico que solicita el procedimiento, s se dispone. 6) Diagnstico o impresin clnica (informacin dependiente del mdico tratante) 7) En caso de urocultivos, adems incluir en la orden informacin sobre embarazo, infeccin crnica o infeccin recurrente, diabetes. 8) Fecha y hora de toma de muestra 9) Fecha y hora de su llegada al laboratorio V. PREPARACIN DEL PACIENTE De acuerdo al tipo de muestras y al anlisis requerido, se deber informar al paciente, a cerca de las condiciones previas a la toma de muestra, para evitar incidencias que puedan afectar los resultados. Todas las muestras deben ser tomadas antes del inicio del tratamiento antibitico, salvo indicacin mdica. 1. Hemocultivo: La muestra se tomar previamente a la ingestin de antibiticos, sin embargo, para pacientes en terapia antibitica se deber solicitar frascos de hemocultivo con removedor de antibiticos (BACTALERT). Se requieren 3 muestras de sangre, mnimo 2. 2. Cultivo de orina: El paciente deber estar sin medicacin antibitica o deber suspender la misma durante 72 hrs. La muestra idnea es la primera miccin de la maana. Nunca colectar orina de chatas o bacines. No forzar al paciente hacindole ingerir lquidos, ya que el exceso de lquido diluir la orina y puede disminuir la cuenta de colonias. Se recomienda la obtencin de 2 muestras en 2 das consecutivos para pacientes asintomticos, pacientes diabticos y mujeres embarazadas. 3. Heces: Colectar las heces directamente en el frasco, de lo contrario emplear recipientes limpios y si rastros de detergente, o bolsas nuevas, para luego transvasar al frasco apropiado y de ser posible una porcin en un medio de transporte. En el caso de infantes se recomienda no usar paales absorbentes, si no de tela, para obtener la muestra o colocar el paal descartable al revs. 4. Secrecin Vaginal: Estas muestras son tomadas por el mdico especialista. Las recomendaciones son: No deben utilizarse en los das previos (48 hrs) a la recogida de la muestra, soluciones antispticas vaginales, vulos, ni pomadas. Las pacientes deben realizar su aseo diario con agua y jabn de tocador como de rutina. No realizar duchas vaginales antes de la toma de muestra. Se recomienda abstencin de relaciones de 48 hrs.

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5. Secrecin uretral Varones: El paciente debe concurrir al laboratorio habindose realizado higiene en la zona balano (glande) prepucial. Se recomienda abstencin de relaciones de 48 hrs. La muestra ha de recogerse preferentemente antes de la primera miccin de la maana, si no es posible, se deber esperar al menos una hora tras la ltima miccin para recogerla. 6. Exudados uretrales: La muestra ha de recogerse preferentemente antes de la primera miccin de la maana, si no es posible, se deber esperar al menos una hora tras la ltima miccin para recogerla. 7. Lquido Prosttico: Indicar al paciente que deber abstenerse de orinar al levantarse y que podr hacerlo en el momento previo al estudio, en el Laboratorio. 8. Secrecin faringea: Llegar al laboratorio temprano en la maana, sin lavarse los dientes, solo enjuagarse con agua hervida fra. La muestra puede tomarse en otro momento del da pero el rendimiento puede ser menor. 9. Esputo: Colectar el primer esputo de la maana al levantarse, solo enjuagarse con agua hervida fra. VI. OBTENCION DE SANGRE PARA HEMOCULTIVO

1. Materiales 1.1 Frascos de hemocultivo aerobios (monofsicos bifsicos) 1.2 Ligaduras. 1.3 Jeringas y agujas 1.4 Gasas estriles. 1.5 Guantes de ltex 1.6 Alcohol etlico o isoproplico al 70%. 1.7 Solucin yodada. 2 Obtencin de la muestra. 2.1 El tapn de jebe esta cubierto por un precinto metlico. Retirar con cuidado la parte central del precinto. En caso de frascos Bact Alert retirar la tapa plstica que cubre el tapn. 2.2 Desinfectar los tapones de goma con alcohol iodado, dejndolo secar al menos un minuto. 2.3 Localizar por palpacin la vena que se va a puncionar. Debe utilizarse una vena distinta para cada extraccin. 2.4 Desinfectar con alcohol una zona de piel de unos 10 cm. de dimetro. Se comenzar por el centro y se irn haciendo crculos concntricos hacia el exterior. 2.5 Repetir el paso anterior pero con el alcohol yodado (ver anexo), o Yodo Povidona, dejndolo secar durante un minuto. 2.6 Siempre empleando guantes de ltex, extraer la sangre sin tocar en ningn momento el campo desinfectado. Si fuera necesario palpar nuevamente la vena se desinfectar el dedo del guante de la misma manera que la piel del paciente. 2.7 Introducir la sangre en los frascos evitando que entre aire en el frasco para cultivo en anaerobiosis. Mover los frascos para que la sangre y el medio de cultivo se mezclen, de modo que el anticoagulante acte mejor. 2.8 Colocar en la etiqueta del Frasco el nombre del paciente, cdigos, fecha y hora de la toma.

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Nota: Las jeringas, agujas y dems material contaminado, debern ser tratados como material peligroso y descartados segn las normas de bioseguridad de cada institucin. Se recomienda la incineracin. 3. Volumen de la muestra De 6 a 10 mL por toma en adultos y 0.5-3 mL en infantes y nios. 4. Nmero de muestras Tres hemocultivos por paciente (mnimo dos) previos al tratamiento antimicrobiano. El intervalo entre las extracciones debe ser superior a una hora cuando sea posible, pero cuando exista una gran urgencia en iniciar el tratamiento, este intervalo puede acortarse hasta 15 minutos. En caso de sepsis y endocarditis sub aguda las extracciones se reparten en 24 horas y en caso de que sean los hemocultivos negativos, obtener tres muestras ms al da siguiente. 5. Transporte Hasta su envo al laboratorio las muestras deben incubarse de 35 a 37C; cuando esto no sea posible, mantener a temperatura ambiente. Los frascos inoculados nunca debe refrigerarse, ni congelarse. 6. Observaciones Cuando no haya venas accesibles puede realizarse la extraccin de catter venoso central. No son adecuadas las muestras procedentes de otros tipos de catter, solamente en caso de que se sospeche infeccin del propio catter y se complica su retirada; se recomienda tomas del brazo opuesto y otras del brazo del catter, para saber si es intra o extraluminal. VII. ORINA PARA UROCULTIVO 1. Consideraciones Generales
(1)

a) Colectar la muestra antes de la administracin de antibiticos, excepto en los casos en que el mdico lo considere conveniente. b) Emplear frascos estriles de boca ancha con tapa de rosca c) Nunca colectar orina de chatas o bacines d) Limpiar el orificio de la uretra (y vestbulo vaginal en las mujeres) antes de los procedimientos de la coleccin, para asegurar que la muestra obtenida no se contamine con microorganismos que colonizan estas reas e) Se recomienda usar jabn y no desinfectante para limpiar el rea de la uretra. Si el desinfectante se introduce en la orina durante la coleccin, ello podra ser inhibitorio para el crecimiento de los agentes patgenos. f) Transportar la muestra dentro de las 2 horas de coleccin Si esto no puede ser la orina deber ser refrigerada (Las cuentas bacterianas resultan estables por al menos 24 hrs. a 4C). No congelar. g) Usar Frascos o tubos estriles con tapa hermtica para transportar la orina h) Transportar las muestras de aspirado suprapbico para cultivos anaerobios en sistema de transporte anaerobio, (que deber ser solicitado con anticipacin al laboratorio de Microbiologa)

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i) Cualquier procedimiento de coleccin de orina por cateterizacin debe ser hecho con tcnicas aspticas escrupulosas para evitar introducir microorganismos (procedimiento realizados por los mdicos, no en BL) j) Colectar, en lo posible, la primera orina de la maana. No enviar orina de 24 hrs. de coleccin para urocultivo. k) No forzar al paciente hacindole ingerir lquidos, ya que el exceso de lquido diluir la orina y puede disminuir la cuenta de colonias. l) Se recomienda colectar dos muestras consecutivas para pacientes asintomticos, especialmente en caso de Embarazo y diabetes. 2. Criterios de Rechazo
(2)

a) Muestras colectadas en contenedores no estriles b) Orina de 24 hrs. de coleccin c) Las puntas de catter de Foley son inaceptables para cultivo d) Muestras de pacientes con terapia antibitica, salvo indicacin expresa del mdico tratante. e) Muestras con mas de 2 hrs. de obtenidas y sin evidencia de haber sido refrigeradas f) Muestras de orina contaminadas con heces 3. Coleccin de la Muestra de Orina. 3.1 Orina de Chorro medio 3.1.2 Materiales a) Papel toalla b) Jabn sin desinfectante c) Frasco de boca ancha, con tapa de rosca, hermtico y estril. d) Bolsas de plstico o colectores estriles para nios. 3.1.3 Tcnicas para mujeres. a) La paciente debe quitarse la ropa interior. b) Se lavar las manos cuidadosamente con agua y jabn, las enjuagar con agua y las secar con una toalla limpia. c) Se separarn los labios mayores y menores, con los dedos y los mantendr separados en todo momento hasta que se haya recogido la orina. d) Con una gasa o papel toalla enjabonados se lava bien la vulva pasndola de delante hacia atrs, se repetir el proceso un total de 2 a 3 veces. f) Enjuagar cuidadosamente con agua para eliminar los restos de jabn. g) Elimine el primer chorro de orina (no pare el flujo de orina), colecte una porcin de orina en el frasco estril de boca ancha (chorro medio) y elimine el chorro final. Cierre firmemente la tapa del frasco. h) El frasco debe sujetarse para que no tome contacto con pierna, vulva o ropa del paciente. Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie interior. i) Cerrar firmemente la tapa del frasco.

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3.1.4 Tcnica para hombres. a) La persona que obtiene la muestra de orina deber lavarse las manos con agua y jabn, enjuagarse y secarse. Si es paciente esta colectando la muestra, deber drsele instrucciones detalladas. b) Limpiar el pene, retracte el prepucio (si no es circuncidado) y lavar con agua y jabn c) Enjugara bien el rea con agua d) Mantener el prepucio retractado (para minimizar la contaminacin con la flora de la piel) e) Elimine el primer chorro de orina (no pare el flujo de orina) f) Colecte una porcin de orina en el frasco estril de boca ancha (chorro medio) y elimine el chorro final. Cierre firmemente la tapa del frasco. 3.1.5 Volumen mnimo de la muestra. Es suficiente un volumen de orina de 0.5-1 ml. para estudio de sedimento y otros se recomienda mnimo 10 mL. 3.2 Bolsas colectoras. El uso de bolsas colectoras no es un mtodo de toma de muestra fiable, se prefiere puncin suprapbica o cateterizacin directa, sin embargo, por ser procedimientos invasivos estos no son aceptados por los padres, en cuyo caso seguir las recomendaciones abajo citadas para reducir el nivel de contaminacin. a) En nios y nias mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos. b) En nios y nias ms pequeos, la orina se recoger en colectores o bolsas estriles especialmente diseadas para ellos de la siguiente forma: * Lavado cuidadoso de los genitales y rea perineal igual que en los adultos. * Colocar la bolsa de plstico o el colector. * Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nio haya orinado, deben retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento. * Si la miccin no se ha realizado en una hora, se repite la operacin colocando una nueva bolsa. 3.2.1 Volumen mnimo de la muestra. Es suficiente un volumen de orina de 0.5-1 ml. para estudio de sedimento y otros se recomienda mnimo 10 Ml. 3.3 Orina Vesical (Puncin suprapbica o por citoscopa). 3.3.1 Indicaciones Evidencia clnica del cuadro urinario con recuentos bajos o nulos, neonatos y lactantes, cateterizacin contraindicada o dificultosa, bsqueda de anaerobios y urocultivos repetidos con dos o ms bacterias.

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3.3.2 Procedimiento

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Procedimiento realizado por el mdico especialista. Es la orina obtenida por puncin suprapbica o por citoscopa. La puncin suprapbica requiere un buen conocimiento de la tcnica y de las precauciones que hay que adoptar, con rigurosa asepsia, descartando problemas de hemostasia y con la vejiga palpable y previa desinfeccin y anestesia local; se punciona sta a 1,5 cm. de la snfisis pubiana, en la lnea media, estando el paciente en decbito supino, con una jeringa de 10 ml. y con aguja larga (calibre 19) se aspira el contenido vesical. 3.3.3 Transporte: En caso de orina obtenida por puncin suprapbica se enviar al laboratorio lo antes posible en la misma jeringa de la extraccin, tras expulsar el aire de su interior y con la aguja pinchada en un tapn de goma estril, indicando en volante adjunto, procedencia de la muestra o tcnica empleada para su recogida (dato importante a la hora de valorar el recuento de colonias). La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una a dos horas. Cuando esto no sea posible debe refrigerarse a 4C durante un tiempo mximo de 24 horas. El laboratorio debe controlar el transporte, garantizndose el que las muestras han sido refrigeradas 3.4 Orina de Pacientes con Catter Permanente. 3.4.1 Materiales a) Gasas. b) Alcohol 70 o solucin yodada. c) Jeringa o aguja estril. d) Recipiente estril. 3.4.2 Obtencin de la muestra a) Se limpiar el catter con una gasa humedecida en alcohol o solucin yodada. Dejamos secar unos minutos. b) Pinchar directamente con la aguja el catter, por la zona desinfectada, aspirando entre 3-5 mL. 3.4.3 Transporte Puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente estril. Si no puede llevarse al laboratorio, se debe refrigerar a 4C. 3.4.4 Observaciones. Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una muestra adecuada y que est justificado rechazar su procesamiento. 4. Transporte de las muestras de orina en general y conservacin La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una a dos horas de haber sido tomada. Cuando esto no sea posible deber refrigerarse. Las muestras deben permanecer refrigeradas en el laboratorio mnimo por 24 hrs.

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VIII. TRACTO GASTROINTESTINAL 1. HECES TOTALES 1.2 Materiales a) Frasco estril de boca ancha y cierre hermtico. b) Medios de transporte Cary-Blair c) Hisopos estriles 1.3 Obtencin de la muestra. Colectar las heces, en lo posible, directamente en el frasco, de lo contrario emplear bolsas nuevas o recipientes limpios y si rastros de detergente, posteriormente se toma una porcin del recipiente donde hayan sido emitidas y se transfieren al frasco estril de boca ancha y cierre hermtico, para el envo al laboratorio. Es altamente deseable que se seleccionen zonas donde haya sangre, moco o pus y con ayuda de un hisopo estril se coloquen en una medio de transporte Cary Blair. No son vlidas las muestras contaminadas con orina. No debe utilizarse para la recogida papel higinico, porque suelen tener sales de bario que inhiben algunas bacterias enteropatgenas. En el caso de infantes se recomienda usar paales de tela y no absorbentes, para obtener la muestra, de lo contrario invertir el paal absorbente y colocar por el lado plstico. Nota: Los paales absorbentes, absorben totalmente las muestras lquidas y pueden ser txicos para los microorganismos. 1.4 Volumen mnimo y nmero de muestras a) Heces formadas o pastosas: al menos 1 2 gr. Muestras del tamao de una nuez son muy adecuadas pues permiten realizar la mayora de las investigaciones posibles. b) Heces lquidas: entre 5 y 10 ml. c) No son aceptables las muestras fecales de pacientes despus del tercer da de hospitalizacin, sin antes consultar si est bajo terapia antimicrobiana. d) Para Coprocultivos se recomienda mximo 2 muestras de heces, no aceptar un numero mayor sin antes consultar con un apersona que pueda explicar los limitados beneficios que proveen muestras adicionales. 1.5 Transporte. Frasco estril de boca ancha, si se va a procesar en el plazo de 1 2 horas despus de su emisin. En caso contrario se remite, adems, en un sistema de transporte para bacterias, a temperatura ambiente, como Cary Blair. 1.6 Observaciones. a) Las muestras para coprocultivo, debern tomarse antes de la administracin de antimicrobianos o agentes antidiarricos. b) Solicitar las investigaciones especiales explcitamente en el caso de S. aureus. d) Si con la primera muestra no se detecta la presencia de enteropatgenos, es aconsejable, enviar en los das siguientes, una toma adicional.

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2. HISOPOS RECTALES. 2.1 Materiales a) Hisopos estriles b) Medio de transporte Cary Blair. c) Guantes. 2.2 Obtencin de la muestra En general debe desaconsejarse su uso, aunque hay que recurrir a l si no se puede disponer de heces, como en neonatos o adultos debilitados. Se ha demostrado eficaz en el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae (gonococo), Campylobacter spp., Shigella spp. (Protege de la desecacin) y en portadores anales de Streptococcus pyogenes. a) Retirar el papel que cubre el hisopo b) El paciente deber estar inclinado. c) La persona que toma la muestra, usando guantes, deber expandir los glteos del paciente con la mano izquierda para mostrar el ano. d) Con la mano derecha, deber introducir la parte algodonosa del hisopo aproximadamente 1 cm en el recto. e) Haciendo girar el hisopo suavemente para recoger la muestra de las criptas anales, dejar 10 a 30 segundos para que se absorban los microorganismos y retirar el hisopo. f) Una vez realizado se introduce en un medio de transporte. 2.3 Transporte. Se introducen inmediatamente en medio de transporte adecuado (Stuart, Cary-Blair, etc.) pues as se protege a las bacterias de la desecacin y se enva rpidamente al laboratorio. 3. LAVADO GSTRICO: (ver toma de muestra para estudio de micobacterias). Procedimiento realizado por el mdico a cargo, empleado generalmente para la deteccin de Mycobacterium tuberculosis cuando el paciente no puede producir un esputo de calidad. Deber ser realizado cuando el paciente se despierte en la maana, ya que el esputo tragado durante el sueo estar an en el estomago. Se investiga adems S. aureus. 3.1 Materiales a) Tubo de lavado gstrico. b) Recipientes estriles de boca ancha, tubo de tapn de rosca. c) Solucin salina. 3.2 Toma de muestras y transporte. a) Emplear un frasco estril de boca ancha con tapa hermtica. b) Transporte: Enviar al laboratorio a temperatura ambiente, de inmediato (menos de 15 minutos). Si no es posible, neutralizar cada 25 a 50 mL con 1.5 mL de una solucin al 40% de Na2PO4 anhidro estril y enviar a temperatura ambiente.

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4. MUESTRA DE BILIS POR CUERDA ENCAPSULADA Empleada principalmente en la deteccin de Salmonella typhi. El paciente deber encontrase en ayunas. 4.1 Materiales a) Cuerda encapsulada estril b) Cinta maskintape 4.2 Toma de muestra y transporte a) Pegar el extremo de la cuerda en la mejilla del paciente con ayuda de cinta maskintape o esparadrapo antialrgico b) Instruir al paciente para que trague la capsula con ayuda en un vaso con agua. c) Esperar durante 4 horas sin comer, ni beber lquidos coloreados. d) Para retirar la muestra, el paciente deber sentarse con la cabeza hacia atrs. e) El tcnico provisto de guantes, tomara el extremo de la cuerda y jalara con ayuda de las dos manos, firme y continuamente hasta retirar la cuerda. f) El extremo distal de la cuerda deber haber quedado manchada de amarillo (bilis). De lo contrario medir el pH. g) Cortar el extremo de la cuerda (que contiene la bilis) aproximadamente 20 cm de cuerda, e introducirla en un tubo contendiendo 10 mL de Caldo Selenito. h) Incubar el tubo a 35-37C por 24 a 48 hrs. VII. TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR. 1. SECRECION FARINGEO-AMIGDALINA. Se emplea para el diagnstico de faringitis estreptocccica. En ocasiones se puede solicitar la bsqueda de otros patgenos, como por ejemplo Neisseria gonorrhoeae, previa consulta con el laboratorio 1.1 Materiales 1.1.1 Bajalenguas. 1.1.2 Hisopo de algodn y/o Dracn (con o sin medio de transporte para S. pyogenes) 1.1.3 Medio de Transporte 1.2 Obtencin de la Muestra. No obtener muestras de faringe si la epiglotis se encuentra inflamada. Bajo visin directa, baje la lengua con ayuda de un baja lengua. Introduzca un hisopo estril entre las amgdalas y detrs de la campanilla. En lo posible no tocar la mucosa oral, lengua o vula. Pase el hisopo de un lado a otro a travs de la faringe posterior, amgdalas y cualquier sitio inflamado, con membranas o ulcerado para obtener la muestra. 1.3 Nmero de muestras y/o volumen. Suficiente con un hisopado.

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1.4 Transporte y conservacin. En caso de S. pyogenes, no requiere medidas especiales para su transporte y conservacin, la muestra puede ser enviada en tubo vaci, estril, con tapa rosca o en medio de transporte Cary Blair. Si se requiere bsqueda de N. gonorrhoeae, sembrar la muestra en Agar Thayer Martin o en Agar Chocolate y colocar las placas en una jarra con vela o ambiente comercial apropiado (3 a 10% de CO2) y transportar as al laboratorio. Bajo estas condiciones, los especimenes pueden ser transportados a temperatura ambiente sin perdida de viabilidad apreciable, aun despus de 12 hrs. Si se cuenta con hisopos de dracn y medio de transporte con carbn activado puede enviarse la muestra en menos de 12 hrs al laboratorio. El gonococo se autolisa en ausencia de CO2 y por lo tanto los hisopos solo se deben usar cuando el intervalo entre la coleccin y la siembra sea menor de 12 horas. 1.5 Observaciones. Rutinariamente se investiga Streptococcus beta-hemoltico del grupo A (S. pyogenes), pero tambin la presencia de los grupos C y G, estos ltimos solo si se cuenta con los antisueros apropiados. La literatura menciona tambin a Arcanobacterium haemolyticus como un posible patgeno y la coloracin de Gram puede apoyar en la bsqueda de Angina de Vincent. 2. NASOFARINGE. 2.1 Material 2.1.1 Hisopos flexibles de alginato clcico o en su defecto hisopos de algodn 2.1.2 Para aspirados: jeringa y catter. 2.2 Obtencin de la muestra. 2.2.1 Hisopado: pasar el hisopo a travs de la nariz suavemente, hasta llegar a la nasofaringe. Hay que mantener la torunda cerca del septum y suelo de la fosa. Rotar la torunda y extraerla. Es la muestra indicada para la investigacin de Bordetella pertussis (No realizada en BLC) y portadores de N. meningitidis. 2.2.2 Aspirado: Aspirar el moco, pasando un catter conectado a una jeringa por va pernasal, de igual forma que la torunda. Empleada para la deteccin de portadores de Neisseria meningitidis y S. pyogenes, adems de Bordetella pertussis y (este ultimo no realizado en BLC). 2.3 Transporte y conservacin. Transportar en medio Cary Blair o Stuart, enviar de inmediato al laboratorio. Los aspirados se envan al laboratorio en frascos estriles, con medio de transporte para virus (no realizados en BLC). 3. FOSAS NASALES Ante la sospecha de Bordetella pertussis, Mycoplasma pneumoniae y Corynebacterium diphteriae (no realizados en BLC), o para la deteccin de portadores de Slaphylococcus aureus o Neisseria meningitidis.

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3.1 Materiales Hisopos de alginato clcico flexibles. Medio de transporte Cary Blair y/o Stuart 3.2 Obtencin de la muestra Introducir la torunda unos 2 cm en la nariz, girar suavemente contra la mucosa de la superficie nasal y extraer. 3.3 Transporte Enviar en medio de transporte Stuart en el caso de N. meningitidis y este mismo medio o Cary Blair para S. aureus. Temperatura ambiente antes de 2 horas. 3.4 Observaciones Los microorganimos encontrados en fosa nasal no tienen por que ser los mismos que se aslan en el seno en caso de sinusitis, por lo que los cultivos de exudados nasales no sirven para el diagnstico etiolgicos de la sinusitis y no pueden sustituir nunca a la puncin del seno. 4. SENOS PARANASALES Muestra obtenida por el mdico especialista. Se realiza la puncin-aspiracin de los mismos, 4.1 Materiales 4.1.1 Povidona Yodada al 10%. 4.1.2 Contenedor estril. 4.1.3 Medio de transporte para anaerobios. 4.1.4 Jeringa 4.2 Obtencin de la Muestra 4.2.1 Desinfectar el lugar de la puncin con Povidona. 4.2.2 Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior, o en el seno frontal por debajo del marco supra orbital del ojo. 4.2.3 Aspirar el lquido del seno. Cuando no se obtenga lquido, instalar 1 ml de suero salino estril y aspirarlo nuevamente. 4.2.4 Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios, si se solicita su estudio y enviar el resto en un contenedor estril o en la propia jeringa. 4.3 Nmero de muestras y/o volumen. Se intentar obtener al menos 1 ml de muestra. 4.4 Transporte y conservacin. Anaerobios: Colocar el contenido de la jeringa en un medio de transporte anaerbico Aerobios: Enviar la muestra en la jeringa protegida o en contenedor estril. Transportar al laboratorio en el menor tiempo posible a temperatura ambiente. 5. CAVIDAD ORAL. Esta muestra se emplea habitualmente para el diagnstico de candidiasis o de la "Angina de Vincent".

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5.1 Materiales 5.1.1 Torundas de algodn sin medio de transporte. 5.1.2 Portas limpios. 5.2 Obtencin de la Muestra 5.2.1 Se pedir al paciente que se enjuague la boca con agua. 5.2.2 Tras enjuagar la boca, frotar las lesiones con un hisopo estril y hacer una extensin sobre un porta. 5.2.3 Se repetir la toma con un segundo hisopo para cultivo (slo para la investigacin de Candida albicans). 5.3 Nmero de muestras y/o volumen. 1 extensin en lamina portaobjetos + 1 hisopo. 5.4 Transporte y conservacin. No requiere medidas especiales para su transporte y conservacin. VIII. TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR 1. ESPUTO En las condiciones habituales de la clnica diaria, no es una muestra representativa de la situacin existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con secrecionesprocedentes de todo el rbol traqueo-bronquial y con la micro biota saprofita de la oro faringe. No obstante es un mtodo fcil y rpido cuya utilidad o relacin entre resultado obtenido y verdadera etiologa depende en gran medida de su correcta obtencin, control de calidad antes de iniciar su procesamiento, tipo de agente que se pretenda detectar y valoracin adecuada del resultado. 1.1 Materiales 1.1.1 Frasco estril de boca ancha y tapa hermtica. 1.1.2 Suero fisiolgico estril y nebulizador. 1.2 Obtencin de la muestra 1.2.1 ESPUTO EXPECTORADO a) Se recomienda que el paciente tome su muestra al levantarse en la maana, antes del desayuno b) El paciente deber enjuagarse la boca y hacer grgaras con agua antes de colectar el esputo. c) Instruir al paciente para no expectorar saliva o descarga nasal en el envase. Deber producir esputo respirando profundamente, reteniendo aire y lanzndolo violentamente sobre el frasco de boca ancha estril, con tapa rosca, que le fue proporcionado. Repetir el procedimiento hasta obtener la cantidad adecuada. 1.2.1 ESPUTO INDUCIDO a) Este procedimiento deber ser realizado por el especialista. b) De no producirse expectoracin espontnea, puede inducirse el esputo con nebulizaciones de suero fisiolgico estril (15 ml durante 10 minutos),

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1.3 Volumen mnimo De 2 a 10 ml, si es posible. 1.4 Transporte y conservacin Envo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas). Si no es posible, conservar en Refrigeracin 4C. Remarcar en la orden y el frasco cuando se trata de esputo inducido. 1.5 Observaciones 1.5.1 Es preferible realizar la toma antes de iniciar el tratamiento antibitico. 1.5.2 No es til para anaerobios. 1.5.3 No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia. 1.5.4 La expectoracin debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25 leucocitos polimorfonucleares por campo 100x, y de 10 clulas epiteliales por campo 100x). No confundir el esputo inducido con saliva. 2. JUGO GASTRICO. Procedimiento realizado por el mdico especialista. En nios pequeos o en pacientes que no expectoran y tragan sus esputos, puede realizarse una aspiracin gstrica tras un periodo de ayuno de 8 horas. Vlido no slo para un nmero muy pequeo de microorganismos especialmente resistentes al pH gstrico, como micobacterias. a) Emplear un frasco estril de boca ancha con tapa hermtica. b) Transporte: Enviar al laboratorio a temperatura ambiente, de inmediato (menos de 15 minutos). Si no es posible, neutralizar cada 25 a 50 mL con 1.5 mL de una solucin al 40% de Na2PO4 anhidro estril y enviar a temperatura ambiente. 3. ASPIRADO TRAQUEOBRONQUIAL SIMPLE. Procedimiento realizado por el mdico 3.1 Obtencin con sonda de aspiracin. 3.2 De valor anlogo al esputo por su contaminacin con la flora oro farngea 3.3 No emplear anestsicos en su obtencin por su poder bactericida. Envo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) en frascos de boca ancha estriles, con tapa rosca. Si no es posible, conservar en Refrigeracin 4C. 4. PUNCION TRANSTRAQUEAL. Procedimiento realizado por el medico especialista 4.1 Materiales 4.1.1 Guantes, paos y gasa estriles. 4.1.2 Alcohol etlico o isoproplico al 70%. 4.1.3 Alcohol yodado al 1 2% o un yodforo al 10% como Povidona yodada. 4.1.4 Solucin salina. 4.1.5 Jeringas estriles. 4.1.6 Aguja y catter n 14-16 (de subclavia). 4.1.7 Anestsico local / lidocana al 1-2% con adrenalina.

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4.1.8 Frasco estril de boca ancha y tapa hermtica. 4.2 Obtencin de la muestra 4.2.1 De infeccin de la piel con alcohol yodado o Povidona yodada. 4.2.2 Introduccin del catter por puncin a travs de la membrana cricotiroidea, inyectar solucin salina y aspirar. 4.3 Volumen de la muestra. La mxima cantidad de aspirado posible. 4.4 Transporte y conservacin. Si se solicita estudio de anaerobios, expulsar el aire de la jeringa, pinchar la aguja en un tapn de goma estril y enviar inmediatamente al laboratorio, si esto no es posible depositar la muestra en un medio de transporte para anaerobios y mantener a temperatura ambiente hasta su procesamiento. En caso de aerobios enviar la muestra en la jeringa o en frasco estril de boca ancha, con tapa hermtica. 4.5 Observaciones 4.5.1 til en el diagnstico de anaerobios. 4.5.2 til en enfermos graves que no expectoran o lo hacen con esputos de calidad insuficiente. 4.5.3 Indicado ante neumonas que responden mal al tratamiento emprico y neumona nosocomial. 4.5.4 No aconsejable en enfermedad obstructiva crnica ni en enfermos hospitalizados durante largo tiempo ya que pueden encontrarse muy colonizados. Contraindicado en hipoxia severa y trastornos de coagulacin. Posibles complicaciones como enfisema subcutneo o hemoptisis. 5. MUESTRAS OBTENIDAS A TRAVES DE FIBROBRONCOSCOPIA Procedimiento realizado por el medico especialista. En trminos generales las muestras obtenidas por fibrobroncoscopa salvo el cepillado bronquial por catter telescpico (CBCT), son muestras contaminadas en mayor o menor grado con flora oro farngea. 5.1 Materiales 5.1.2 Material especfico para broncoscopa. 5.1.3 Recipiente estril hermtico. 5.1.4 Tubo estril con 1 ml de solucin Ringer. 5.1.5 Material de corte estril. 5.2 Obtencin de la muestra Pueden emplearse las siguientes: 5.2.1 BRONCOASPIRADO (BAS). Recogida de secreciones respiratorias a travs de fibrobroncoscopo, pudiendo introducirse de 3 a 5 ml de suero fisiolgico previo a la aspiracin. Con menor grado de contaminacin que el esputo.

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5.2.2 CEPILLADO BRONQUIAL por catter telescopico CBCT. Cepillado de la mucosa bronquial del lbulo afectado a travs de un fibrobroncoscopo mediante un cepillo telescopado protegido por un doble catter ocluido distalmente para evitar la contaminacin de vas altas. 5.2.3 LAVADO BRONCOALVEOLAR a) Lavado de un segmento pulmonar (lbulo medio o lngula) previo anclado del broncoscopio, introduciendo de 20 a 50 ml de suero fisiolgico. b) Indicado especialmente en procesos pulmonares intersticiales. c) De escasas complicaciones, pero no obvia la contaminacin oro farngea cuyo problema puede disminuirse si se inserta un tubo endotraqueal para pasar el broncoscopio. 5.2.4 BIOPSIA TRANSBRONQUIAL a) Obtencin de tejido pulmonar mediante tcnica broncoscpica. b) Posible contaminacin de la pinza de biopsia. c) Complicaciones: neumotorax, hemorragia. 5.4 Transporte y conservacin Enviar inmediatamente al laboratorio en frasco estril hermtico. Cuando no sea posible, conservar en refrigeracin a 4C. 6. MUESTRAS OBTENIDAS POR ABORDAJE PERCUTNEO Solo realizado por el mdico especialista. Dentro de las tcnicas invasivas son las que permiten la obtencin de muestras ms representativas del parnquima pulmonar, no obstante, slo deben emplearse cuando fracasen otros mtodos menos invasivos o cuando la situacin del enfermo haga imprescindible conocer el diagnstico etiolgico. 6.1 Materiales 6.1.1 Material quirrgico especfico para puncin. 6.1.2 Recipiente estril y hermtico. 6.1.4 Suero fisiolgico. 6.2 Obtencin de la muestra Se obtiene por puncin pulmonar aspirativa (ppa) transtorxico. Procedimiento realizado por el mdico especialista a) Obtencin del exudado de las lesiones pulmonares a travs de una puncin transtorxico con aguja ultra fina con control radioscpico o ecogrfico. b) Debe aplicarse ante infiltraciones densas (no intersticiales) y sobre todo si son perifricas. c) Contraindicado en pacientes con bullas, trastornos de coagulacin y sospecha de hidatiadosis. Posibles complicaciones, como neumotrax y hemoptisis. d) Es una muestra ideal para estudio en infeccin anaerobia grave en nios, especialmente en edades tempranas. 6.3 Volumen mnimo. Si es un producto de aspiracin, la mayor cantidad posible. Si es una pieza de biopsia, una cua de 3ml., cuando sea posible.

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6.4 Transporte y conservacin. Si es un producto de aspiracin, depositar en tubo o frasco estril hermtico. Si es una pieza de biopsia se divide en dos fragmentos: uno se coloca en suero fisiolgico o formol al 10% y se enva para estudio anatomo-patolgico, y el otro, destinado a ser cultivado en Microbiologa, se introduce en un tubo estril con suero fisiolgico. Debe enviarse inmediatamente al laboratorio. 7. MUESTRAS EXTRAPULMONARES. 7.1 LIQUIDO PLEURAL. Obtencin por toracocentesis. 7.2 7.3 BIOPSIA PLEURAL. SANGRE VENOSA.

Cerrada o por pleuroscopa. Procedimiento realizado por el medico especialista. Hemocultivo. Segn tcnica sealada. IX. LIQUIDO CEFALO RAQUDEO Procedimiento realizado por el medico especialista. 1. Materiales 1.1 Paos estriles. 1.2 Guantes estriles. 1.3 Gasas estriles. 1.4 Alcohol etlico o isoproplico al 70%. 1.5 Povidona yodada. 1.6 Anestsico local. 1.7 Jeringuillas de 5-10 ml. 1.8 Agujas de puncin IM. 1.9 Trcares de puncin lumbar de varios tamaos. 1.10 Tubos limpios y estriles con tapn de rosca. Es necesario que estn totalmente limpios pues la presencia de bacterias muertas por la esterilizacin puede inducir a errores por tinciones falsamente positivas. 1.11 Sistemas de presin de LCR de un solo uso. 2. Obtencin de la muestra. Se obtendr antes de instaurar cualquier teraputica antibitica. 2.1 LCR obtenido por puncin lumbar: 2.1.1 Se localiza la zona elegida para la puncin lumbar mediante palpacin de los espacios intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicin adecuada. 2.1.2 Se desinfecta con alcohol al 70% una zona de uso 10 cm de dimetro en el rea elegida, la aplicacin del desinfectante se hace de forma concntrica del centro a la

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periferia. Se repite la operacin con povidona yodada que se deja secar durante un minuto. 2.1.3 Realizar la puncin entre los espacios Inter-vertebrales L3-L4, LA-L5 o L5-S1, siguiendo las normas de la ms estricta asepsia. 2.1.4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el lquido cefalorraqudeo que se recoger en tres tubos sin conservantes con tapn de rosca. 2.1.5 Generalmente el primero para el estudio bioqumico, el segundo para el estudio microbiolgico y el tercero para investigacin de clulas (este suele ser el ms transparente aunque la puncin haya sido traumtica). No obstante, el tubo ms turbio se enviar a Microbiologa. 2.2 LCR obtenido de reservorio Ommaya: Hacer la toma de lugar de coleccin del reservorio previa desinfeccin. 3. Volumen mnimo. 3.1 Para el estudio bacteriolgico rutinario es suficiente 1 ml, aunque es preferible disponer de volmenes superiores. 3.2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 ml adicionales ms por cada uno de los estudios, siendo deseable llegar a los 10 ml 3.3. Para estudio de virus se necesita al menos 1 2 ml ms (no realizado en BLC). 4. Transporte. El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio, pues alguno de los agentes etiolgicos como S. pneumoniae, pueden lisarse rpidamente a partir de una hora tras su recogida. Si no es posible se mantendr en estufa a 35-37C y una parte se incubar en un frasco de hemocultivo que se mantendr en idnticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio. Si no se dispone de estufas se mantendr a temperatura ambiente. Nunca deber refrigerarse pues se puede afectar la viabilidad de N. meningitidis y H. influenzae. En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios. En caso de solicitar una investigacin se enviar en un frasco para hemocultivo anaerobio. Las muestras para el estudio de virus se enviarn en hielo, si el envo se retrasa ms de 24 horas, se deber de conservar a -70C (Procedimiento no realizado en BLC). 5. Observaciones Como la meningitis suele surgir por un proceso bacterimico se solicitarn simultneamente hemocultivos, si el mdico as lo considera necesario. Es necesario que el mdico seale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias habituales, micobacterias, anaerobios. Virus y hongos son procedimientos que no se realizan en BLC, excepto Candida spp). X. LQUIDOS ORGNICOS NORMALMENTE ESTERILES Lquidos orgnicos, habitualmente estriles, salvo LCR, como: Peritoneal, de dilisis peritoneal, pleural, articular y pericrdico. Procedimientos realizados por el mdico especialista.

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1. Materiales 1.1 Paos estriles. 1.2 Gasas estriles. 1.3 Guantes estriles. 1.4 Jeringuillas y agujas estriles. No se deben utilizar jeringuillas heparinizadas, pues heparina lleva conservantes que pueden interferir la viabilidad de los microorganismos. 1.5 Alcohol etlico o isoproplico al 70%. 1.6 Povidona yodada. 1.7 Recipientes estriles con tapn de rosca. 1.8 Recipientes estriles de boca ancha (Ej. urocultivo). 1.9 Sistemas de transporte de lquidos para estudio de anaerobios. 1.10 Frascos de hemocultivos. 1.11 Hisopos. 1.12 Heparina 2. Obtencin de la muestra. 2.1 Vara dependiendo del lquido corporal que se trate, pero siempre deber seguirse una tcnica rigurosamente estril al 70%. 2.2 Desinfectar la piel con alcohol, haciendo crculos concntricos desde el centro hacia la pe feria en una zona de unos 10 cm de dimetro. 2.3 Repetir el paso anterior con povidona yodada, dejando secar durante un minuto. 2.4 En pacientes con hipersensibilidad al iodo, realizar la desinfeccin con alcohol dos veces consecutivas. 2.5 La toma se hace por puncin percutnea (toracocentesis, paracentesis, puncin pericrdica o puncin articular) de forma asptica para evitar la contaminacin por la flora cutnea o ambiental. La puncin pericrdica se realiza con control electrocardiogrfico. 2.6 Una vez realizada la toma percutnea se retira la povidona yodada de la piel con un apsito impregnado en etanol al 70%. 2.7 Ms raramente se pueden realizar tomas de estas localizaciones en el transcurso de intervenciones quirrgicas. En esta circunstancia debe desaconsejarse el uso de hisopos, siendo preferible tambin la aspiracin; se utilizarn si el contenido no puede ser aspirado. 2.8 La muestra del lquido de dilisis peritoneal ambulatoria crnica puede ser la propia bolsa que lo contiene. 3. Volumen mnimo. Para el estudio bacteriano rutinario es suficiente de 1 a 10 ml. Cuando se requiera la investigacin de Mycobacterium spp. u hongos se enviar un volumen superior a 10 ml. Esta es la mnima cantidad necesaria para el estudio bacteriolgico del lquido empleado en la dilisis peritoneal. 4. Transporte 4.1 Si es necesario evitar la coagulacin de algunos de estos lquidos se usar heparina sin conservantes; otros anticoagulantes pueden tener accin bacteriana. 4.2 No usar la jeringa utilizada para la recogida. Si se emplea es imprescindible sustituir la aguja por una estril tapada con su correspondiente protector.

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4.3 Los recipientes idneos son tubos estriles de tapn de rosca sin conservantes. Se llenarn hasta cerca del tapn, de esta forma pueden ser tiles para el estudio de anaerobios, especialmente si la muestra es purulenta. 4.4 Viales o tubos pre reducidos para el transporte de muestras para el estudio de anaerobios. Se emplearn especialmente en aquellos productos en los que habitualmente se encuentran estas bacterias, como es caso de los empiemas pleurales. 4.5 Hemocultivos, se inocularn 10 ml. Este es un sistema adicional a los anteriores. Est particularmente indicado cuando el envo se puede retrasar o en los lquidos que pueden coagularse. Si se sospecha anaerobios emplear uno adecuado para estas bacterias. Con su uso se ha incrementado el aislamiento bacteriano en peritonitis espontneas o en las asociadas a dilisis peritoneal ambulatoria crnica. Tambin se recomienda como transporte de lquidos articulares. 4.6 El lquido de dilisis peritoneal se transporta en frascos estriles de boca ancha o en la bolsa contenedora. Debe desaconsejarse el uso de hisopos, y si se emplean se har junto a sistemas de transporte para anaerobios. 4.7 Las muestras deben ser enviadas inmediatamente al laboratorio y hasta su procesamiento se mantendrn a temperatura ambiente. 4.8 Cuando las muestras se destinen a la investigacin de micobacterias y hongos (este ultimo no realizado en BLC, excepto Candida spp), debern mantenerse en refrigeracin. 4.9 Los hemocultivos se mantendrn entre 35C y 37C, o en su defecto a temperatura ambiente. 5. Observaciones Cuando se utilice una anestesia local, hay que cambiar de jeringa y aguja para hacer la extraccin de la muestra, ya que los anestsicos pueden inhibir el crecimiento bacteriano. XI. MUESTRAS DEL TRACTO GENITAL FEMENINO 1. EXUDADOS VAGINALES Procedimientos realizados por el mdico especialista 1.1 Materiales 1.1.1 Camilla ginecolgica. 1.1.2 Especulo estril. 1.1.3 Hisopos esteriles 1.1.4 Medio de transporte. 1.2 Obtencin de la muestra 1.2.1 Con la paciente en posicin ginecolgica se introducir un especulo "sin lubricante" (si es necesario para lubricar utilizar agua templada). 1.2.2 Recoger la muestra, bajo visin directa, con un hisopo, de la zona con mayor exudado, o en su defecto, del fondo del saco vaginal posterior. 1.2.3 Repetir la operacin con la segunda torunda.

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1.3 Nmero de muestras y/o volumen. Se obtendrn dos torundas, una destinada al estudio microscpico y otra al cultivo. 1.4 Transporte y conservacin El envo de la muestra debe ser inmediato siempre que sea posible. Cuando la muestra pueda procesarse antes de 15 minutos debern emplearse torundas con medio de transporte, que se mantendrn a temperatura ambiente, o preferentemente, en estufa 35-37C hasta su procesamiento, que deber ser antes de 3-6 horas. 1.5 Observaciones Aunque ocasionalmente puede aislarse Neisseria gonorrhoeae de muestras vaginales, esta no es la localizacin habitual de la infeccin, por lo que no debe descartarse esta posibilidad con un cultivo normal cuando se sospeche la infeccin por Neisseria gonorrhoeae. No se realiza en BLC Cultivos para: Chlamydia trachomatis Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum, pero en este caso debera emplearse muestra endocervical. Para completar el diagnstico de vaginosis en el momento de la toma, el personal mdico encargado debera realizar la determinacin pH vaginal colocando el dato en la orden. No deben utilizarse en los das previos a la recogida de la muestra, soluciones antispticas vaginales, vulos ni pomadas. 2. ENDOCERVICALES. Procedimientos realizados por el mdico especialista. 2.1 Material necesario. 2.1.1 Camilla ginecolgica. 2.1.2 Especulo estril. 2.1.3 Hisopos secos sin medio de transporte (para limpieza de exocrvix). 2.1.4 Hisopos estriles 2.1.5 Medio de transporte 2.2 Obtencin de la muestra 2.2.1 Con la paciente en posicin ginecolgica introducir suavemente el espculo sin lubricar (o lubricado con agua templada). 2.2.3 Se limpiar el exocrvix de secreciones vaginales, con una torunda seca. 2.2.4 Bajo visin directa se comprimir cuidadosamente el crvix con palas del espculo y se introducir una torunda en el canal endocervical con un suave movimiento de rotacin. 2.2.5 Se repetir la operacin con la segunda torunda. 2.3 Nmero de muestras y/o volumen. 2.3.1 Debern recogerse dos torundas, una destinada al examen microscpico y otra al cultivo. 2.3.2 Para investigacin de Mycoplasma y Chlamydia se recoger una tercer hisopo con medio de transporte especfico (Procedimiento no realizado en BLC).

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2.4 Transporte y conservacin. El envo de la muestra debe ser inmediato siempre que sea posible. Cuando la muestra no pueda procesarse antes de 15 minutos, debern emplearse torundas con medio de transporte, que se mantendrn a temperatura ambiente o, preferentemente, en estufa a 35-37C hasta su procesamiento, que ser siempre que sea posible antes de 3 horas. No puede garantizarse la viabilidad de Neisseria gonorrhoeae transcurridas 6-8 horas. 2.5 Observaciones. Debe evitarse el uso de torundas de algodn cuando se espera demora ya que contienen cidos grasos instaurados que pueden inhibir el crecimiento de Neisseria gonorrhoeae. 3. EXUDADOS URETRALES. Procedimientos realizados por el mdico especialista 3.1 Materiales 3.1.1 Hisopos uretrales finos, con varilla de alambre no excesivamente flexible, de alginato clcico o Dacrn con medio de transporte tipo Stuart-Amies. 3.1.2 Gasas estriles. 3.2 Obtencin de la muestra 3.2.1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas estriles. 3.2.2 Introducir el hisopo suavemente con un movimiento de rotacin hasta penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacin de Chlamydia trachomatis: Cultivo no realizado en BLC) 3.2.3 Repetir operacin con un segundo hisopo. 3.3 Nmero de muestras y/o volumen. Debern obtenerse dos hisopos, con uno realizar dos extendidos en lmina y el otro uno destinado al examen microscpico y otro al cultivo. 3.4 Transporte y conservacin. Debe ser inmediato. Cuando no puedan procesarse las muestras antes de 15 minutos, se utilizarn hisopos con medio que se mantendrn a temperatura ambiente o, preferentemente, en estufa a 35-37C. Las muestras se procesarn siempre que se pueda antes de 3 horas, y como mximo en un plazo de 6-12 horas. 3.5 Observaciones. La muestra ha de recogerse preferentemente antes de la primera miccin de la maana, si no es posible, se deber esperar al menos una hora tras la ltima miccin para recogerla. 4. SECRECIONES RECTALES 4.1 Materiales 4.1.1 Guantes de goma. 4.1.2 Hisopos con un medio de transporte.

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4.2 Obtencin de la muestra 4.2.1 Introducir una torunda suavemente a travs del esfnter anal. 4.2.2 Rotar contra las criptas rectales, dejar 10-30 segundos para que se absorban los microorganismos y extraer. 4.2.3 Se intentar evitar el contacto con materia fecal. 4.2.4 Cuando la torunda salga manchada de heces, deber tomarse una nueva muestra 4.3 Nmero de muestras y/o volumen. Basta con una torunda, dado que la visin microscpica no es representativa. 4.4 Transporte y conservacin. El envo de la muestra debe ser inmediato siempre que sea posible. Cuando la muestra no pueda procesarse antes de 15 minutos, debern emplearse torundas con medio de transporte, que se mantendrn en estufa a 35-37C hasta su procesamiento. 4.5 Observaciones. Cuando se sospeche proctitis por Chlamydia trachomatis, las muestras debern tomarse mediante visin directa por anoscopa, buscando las lesiones ulcerosas o hipertrficas (Procedimientos no realizados en BLC). 5. ENDOMETRIO. Se ha cuestionado ampliamente la utilidad de estas muestras para el diagnstico endometritis. Los mtodos no invasivos como las torundas pasadas a travs del crvix se contaminan sistemticamente, obtenindose resultados similares en mujeres con endometritis y en mujeres sanas. Se han descrito varios mtodos intentando eliminar la contaminacin cervical, como son la aspiracin uterina a travs de un catter de doble luz o de torundas protegidas, o el mtodo descrito por Martens et al. con el que se obtienen bajos ndices de contaminacin tomando las muestras con una torunda o aspirando un catter, previa dilatacin y descontaminacin del crvix con Povidona yodada. En cualquiera de los casos, los resultados del cultivo de estas muestras deben interpretarse con cautela, teniendo siempre en cuenta la posibilidad de una contaminacin cervical. Es recomendable tomar hemocultivos, ya que se obtienen resultados positivos en un 30% de los casos de endometritis. 6. CULDOCENTESIS. 6.1 Materiales Se precisa el material quirrgico que requiera la tcnica, contenedores estriles y si se desea la investigacin de anaerobios, un medio de transporte especfico.

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6.2 Obtencin de la muestra Aspiracin a travs del fondo de saco vaginal posterior con jeringa y aguja. 6.3 Nmero de muestras y/o volumen. Se intentar obtener 1-5 ml de muestra. 6.4 Transporte y conservacin. La muestra se remitir en un contenedor estril o en la misma jeringa. Cuando se busquen anaerobios deber inyectarse una parte de la muestra en un medio de transporte especfico. 6.5 Observaciones. El material obtenido por culdocentesis es representativo de los microorganismos existentes en las trompas. 7. TROMPAS Y OVARIOS. 7.1 Materiales 7.1 El material quirrgico que requiera la tcnica. 7.2 Agujas y jeringas estriles. 7.3 Contenedores estriles. 7.4 Medios de transporte para anaerobios. 7.5 Torundas de alginato clcico o cepillos de broncoscopa. 7.2 Obtencin de la muestra 7.2.1 Deben obtenerse por laparotomia o laparoscopia. 7.2.2 La muestra se recoger directamente a la luz de la trompa mediante una torunda o con un cepillo de broncoscopa. 7.2.3 Cuando la trompa est obstruida se podr recoger la muestra por puncinaspiracin, introduciendo una parte en un medio de transporte para anaerobios y enviando el resto en un contenedor estril o en la jeringa de la extraccin. 7.3 Nmero de muestras y/o volumen. Se recoger la mxima cantidad de muestra posible. En el caso de muestras liquidas se intentaran obtener de 1-5 ml. 7.4 Transporte y conservacin. Debe ser inmediato. Cuando no sea posible debern emplearse medios de transporte tipo Stuart-Amies o medios de transponte especficos para anaerobios, que se mantendrn a temperatura ambiente o, preferentemente, a 35-37C. 8. VULVA 8.1 Materiales 8.1.1 Hisopos. 8.1.2 Alcohol etlico o isoproplico al 70%. 8.1.3 Povidona iodada al 5%. 8.1.4 Jeringas y agujas estriles.

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8.2 Obtencin de la muestra 8.2.1 Las superficies mucosas se limpiar con agua estril, nunca con alcohol ni Povidona. 8.2.2 Frotar con una torunda entre las lesiones y si hay abscesos aspirarlos con jeringa y aguja. 8.3 Nmero de muestras y/o volumen. Deber obtenerse la mayor cantidad de exudado posible. Cuando se trate de abscesos se intentar obtener al menos 1 ml. 8.4 Transporte y conservacin. Si la muestra no puede enviarse de inmediato se usarn medios de transporte, en el caso de torundas sirve el medio de Stuart-Amies y para punciones de abscesos una parte se introducir en un medio de transporte para anaerobios. 9. GANGLIOS LINFATICOS INGUINALES 9.1 Materiales 9.1.1 Gasas estriles. 9.1.2 Alcohol etlico o isoproplico al 70%. 9.1.3 Povidona iodada al 10%. 9.1.4 Jeringa y aguja o material quirrgico. 9.1.5 Contenedor estril. 9.2 Obtencin de la muestra 9.2.1 Desinfectar la piel con alcohol y posterior-mente con Povidona, dejndola secar durante 1 minuto. 9.2.2 Realizar una puncin-aspiracin con jeringa y aguja o una escisin quirrgica del ganglio. Enviar en la jeringa de la puncin, o si se trata de una pieza quirrgica, en un contenedor estril "sin formol". 9.3 Nmero de muestras y/o volumen La mxima cantidad de muestra que se pueda obtener. 9.4 Transporte y conservacin La muestra ha de llegar al laboratorio dentro de la hora siguiente a la extraccin. En el caso de punciones-aspiraciones debe realizarse de inmediato. 9.5 Observaciones Es preferible obtener la muestra por puncin-aspiracin de la adenopata a travs de piel sana, que a partir de los puntos de drenaje. Debe avisarse al laboratorio la sospecha de infeccin por Haemophilus ducreyi para que las muestras sean procesadas adecuadamente (No realizado en BLC). 10. LIQUIDO AMNIOTICO. 10.1 Materiales 10.1.1 Gasas estriles. 10.1.2 Alcohol etlico o isoproplico al 70%. 10.1.3 Povidona Yodada al 10%.

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10.1.4 Aguja y jeringa. 10.1.5 Contenedor estril. 10.1.6 Se requiere la monitorizacin del feto. 10.2 Obtencin de la muestra Puncin aspiracin con jeringa y aguja tras desinfeccin de la piel dos veces consecutivas, la primera con alcohol y la segunda con Povidona. 10.3 Nmero de muestras y/o volumen. Se intentar obtener una muestra de 1-5 ml. 10.4 Transporte y conservacin. Deber enviarse al laboratorio lo antes posible para su procesamiento. 11. PRODUCTOS DE LA CONCEPCIN. 11.1 Materiales 11.1.1 Material quirrgico. 12.1.2Contenedores estriles. 11.2 Obtencin de la muestra Procedimientos quirrgicos. Se enviarn tejidos o aspirados 11.3 Nmero de muestras y/o volumen. Se enviar un bloque de tejido de las zonas sospechosas. En zonas en que se sospeche contaminacin enviar un cubo de 6cm, que incluya una superficie serosa o capsular intacta. 11.4 Transporte y conservacin. No debe pasar ms de una hora desde su recogida a su procesamiento por el laboratorio de Microbiologa. 11.5 Observaciones. Son muestras habitualmente muy contaminadas y difciles de evaluar. Suelen ser muestras inadecuadas para cultivo salvo en casos concretos en que se sospeche infeccin por Listeria monocytogenes (no realizado en BLC) o Streptococcus beta hemoltico del grupo B (S. agalactiae). Es recomendable tomar hemocultivos, ya que son positivos en 2/3 de los casos de aborto sptico. XII. TRACTO GENITAL MASCULINO. 1. SECRECIONES URETRALES 1.1 Materiales 1.1.1 Hisopos uretrales finos, de alginato clcico o Dracn con medios de transporte tipo Stuart. 1.1.2 Gasas estriles. 1.1.3 Asa de siembra de platino.

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1.2 Obtencin de la muestra Colecte la muestra al menos 1 hora despus que el paciente ha orinado. Cuando exista exudado franco puede recogerse con una torunda o con un asa de siembra e Platino-Iridio. El exudado puede estimularse exprimiendo la uretra. Cuando no se obtenga exudado se introducir una torunda suavemente con un movimiento de rotacin hasta penetrar unos 2-4 cm. dentro de la uretra (3-5 cm para investigacin de Chlamydia trachomatis: No realizado en BLC). Rote el hisopo. Repetir la operacin con una segunda torunda para el frotis directo. Preferiblemente inocule directamente en un medio de Thayer-Martin, de no ser asi enviar en medio de transporte Stuart. 1.3 Nmero de muestras y/o volumen. Debern enviarse dos torundas, una destinada al examen microscpico y otra al cultivo. 1.4 Transporte y conservacin. Debe ser inmediato. Cuando no puedan procesarse las muestras antes de 15 minutos, se utilizarn torundas con medio de transporte Stuart-Amies que se mantendrn a temperatura ambiente o preferentemente se estufa a 35-37C. Las muestras se procesarn siempre que se pueda antes de 3 horas, y como mximo en un plazo de 612 horas. 1.5 Observaciones. La muestra ha de recogerse preferentemente antes de la primera miccin de la maana. Si es imposible, esperar al menos una hora tras la ltima miccin para recogerla. 2. MUESTRAS PARA EL DIAGNSTICO DE PROSTATITIS (TCNICA DE MEARESSTAMEY). La prueba de los cuatro vasos, descrita por Meares y Stamey desde 1.968, a pesar de ser costosa y difcil de tomar, es la nica que nos puede indicar de una manera confiable, la posible localizacin de procesos inflamatorios de origen infeccioso en el tracto urinario bajo. En el estudio bacteriolgico de la Prostatitis Bacteriana Crnica, es fundamental el conocimiento de la existencia de patologa infecciosa a nivel uretral o vesical. El solo estudio de la secrecin prosttica nos llevara a diagnsticos errados, si no sabemos del estado de colonizacin bacteriana de la uretra y la vejiga. 2.1 Materiales Se preparar el mismo material que para un urocultivo y cuatro contenedores estriles que debern ir identificados de la siguiente forma: 2.1.1 "F-l" o "Frasco-1" (primera orina). 2.1.2 "F-2" o "Frasco-2" (miccin media pre masaje). 2.1.3 "F-3" o "Frasco-3" (masaje prosttico). 2.1.4 "F-4" o "Frasco-4" (orina post-masaje).

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2.2 Obtencin de muestras Procedimiento realizado por el mdico (Masaje prosttico). 2.2.1 Retraer el prepucio y limpiar el meato y el glande igual que para un urocultivo. 2.2.2 Pedir al paciente que orine, recogiendo los primeros 10 mL en el primer contenedor "F-1". Recoger los siguientes 10 mL. en el segundo contenedor "F-2". Esta porcin corresponde a la "miccin media". 2.2.3 Interrumpir la miccin antes de que se haya vaciado totalmente la vejiga. 2.2.4 Hacer un masaje prosttico y recoger el fluido en el tercer contenedor ("F-3" masaje prosttico): a) Indicar al paciente colocarse en posicin de pie, piernas abiertas, el tronco flexionado hacia delante y los codos apoyados en una camilla. b) Colocarse guantes descartables y estriles. Introducir el dedo ndice o el dedo medio por el canal rectal y localizar al tacto la prstata, suave y cuidadosamente. c) Realizar el masaje prosttico, frotando la prstata con presin uniforme desde la periferia hasta el centro de la misma. d) Colectar la secrecin prosttica que aparecer por la uretra, en el frasco 3. e) Si no se produce fluido, presionar la uretra en su totalidad 30 segundos. Tras el masaje, acabar saliendo fluido prosttico por el meato, colectarlo en el F-3 2.2.5 Finalmente se pedir al paciente que orine y se recogern los primeros 10 mL de orina en un cuarto recipiente ("F-4" orina post-masaje). 2.3 Nmero de muestras y/o volumen. Frasco 1: 10 ml. Frasco 2: 10 ml. Frasco 3: Toda la muestra que se obtenga. Frasco 4: 10 ml. 2.4 Transporte y conservacin. Las muestras debern procesarse antes de 1 hora. Para perodos ms prolongados se debern mantener en nevera a 4C hasta un mximo de 24 horas. 2.5 Observaciones. Se realizar cultivos cuantitativos. Cuando el nmero de bacterias del frasco-1 es mayor al del frasco-2 y frasco-4, se considera que las bacterias son de origen uretral. Cuando el nmero de bacterias de los frascos 3 y 4 es, por lo menos, 10 veces superior al de los frascos 1 y 2, se atribuye a colonizacin prosttica. Deber informarse al mdico que las muestras de semen no son adecuadas para cultivo, al estar sistemticamente contaminadas, y los resultados obtenidos no son representativos de los microorganismos aislados en prstata. Si el mdico insistiera en este tipo de muestra. Obtener los primeros 10 mL de orina, en un frasco y el semen en otro. En este caso el nmero de colonias deber ser 10 veces superior a la muestra de orina.

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XIII. SECRECIONES OCULARES. Muestras obtenidas por el mdico especialista, quien en lo posible deber inocular la muestra directamente en placas de agar sangre. 1. FROTIS CONJUNTIVALES. 1.1 Material necesario. 1.1.1 Hisopos de alginato clcico o Dracn con medio de transporte Stuart. 1.1.2 Suero salino estril. 1.2 Obtencin de la muestra 1.2.1 Debe obtenerse la muestra antes de la instalacin de los analgsicos locales, colirios o antibiticos. 1.2.2 Con una torunda mojada en un suero fisiolgico frotar sobre la conjuntiva tarsal inferior y el frnix. 1.3 Nmero de muestras y/o volumen. Deber utilizarse un hisopo para cada ojo. 1.4 Transporte y conservacin. El transporte deber ser inmediato. Cuando no sea posible, se utilizarn hisopos con medio de transporte tipo Stuart-Amies, que se mantendr a temperatura ambiente. Para Chlamydia se utilizar un medio de transporte especfico ("2-SP"). 1.5 Observaciones. Los cultivos conjuntivos preoperatorios no son tiles. El nmero y tipo de microorganismos de la conjuntiva normal vara diariamente, por lo que estas muestras no son vlidas, excepto en el caso de signos inflamatorios a nivel ocular. 2. RASPADOS CONJUNTIVALES. Procedimiento realizado por el mdico especialista. 2.1 Material necesario. 2.1.1 Esptula de platino flexible de Kimura (propiedad del mdico) 2.1.2 Anestsico local (clorhidrato de propacana al 0,5%) (Aportado por el mdico). 2.1.3 Porta objetos limpios 2.2 Obtencin de la muestra Instilar uno o dos gotas de anestsico. Preferentemente se utilizar clorhidrato de propacana, ya que es el anestsico local que inhibe menos el crecimiento bacteriano. Raspar suavemente con la esptula de Kimura la conjuntiva tarsal inferior, sin inducir sangrado. El material obtenido se colocar en el crculo de un porta limpio. Fijar el porta en Metanol durante 5-10 minutos. 2.3 Nmero de muestras y/o volumen. Mnimo 1 portaobjetos con varias improntas cornales.

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2.4 Transporte y conservacin. Una vez fijados los portas no requieren medidas especiales para su transporte y conservacin. 3. RASPADOS CORNEALES. 3.1 Materiales Igual que para los raspados conjuntivales. 3.2 Obtencin de la muestra Igual que para los raspados conjuntivales. Realizar el raspado de mltiples reas de ulceracin. Es importante que cada raspado se inocule directamente en el medio de cultivo, por lo que se avisar previamente al Servicio de Microbiologa que desplazar al personal y/o material necesario para ello. XIV. SECRECIONES OTICAS. 1. OIDO EXTERNO. 1.1 Materiales 1.1.1 Torundas de algodn o esptulas. 1.1.2 Un antisptico suave 1.2 Obtencin de muestras Limpieza del odo externo con un antisptico suave. Se tomar la muestra mediante frotis con torunda, raspado o aspiracin del fluido en caso de abscesos. Se obtendr la muestra del borde activo y el exudado o las secreciones de las zonas profundas. 1.3 Nmero de muestras y/o volumen. Una torunda para cada odo. 1.4 Transporte y conservacin. Si las muestras no pueden enviarse inmediatamente se emplearn medios de transporte para bacterias tipo Stuart-Amies, que se mantendrn a temperatura ambiente. 1.5 Observaciones. Suele tratarse de muestras de mala calidad y en ningn caso resultan representativas de los microorganismos existentes en odo medio. 2. OIDO MEDIO. Debe obtener las muestras un MEDICO especialista 2.1 Materiales 2.1.1 El de una miringocentesis (Timpanocentesis). 2.1.2 Torundas estriles.

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2.1.3 Contenedor estril. 2.1.4 Medio de transporte para anaerobios. 2.1.5 Povidona iodada al 10%. 2.2 Obtencin de la muestra 2.2.1 Timpanocentesis: Debe obtener la muestra un MEDICO especialista a) Se limpiar el canal auditivo externo con una torunda impregnada en Povidona iodada. b) Se puncionar el tmpano a travs de un otoscopio estril. La muestra se enviar en un contenedor estril. Cuando no sea suficiente se tomar con torunda. c) Si se desea la investigacin de anaerobios, se enviar el fluido en un medio de transporte especfico. Las muestras en torunda no sirven para cultivo de anaerobios. 2.2.2 Muestras con tmpano roto: Tras la limpieza del canal externo se tomar la muestra con torunda a travs de un otoscopio estril. Estas muestras no son vlidas para anaerobios, y adems el fluido suele colonizarse con flora de CAE, con lo que la interpretacin de los resultados es siempre complicada. 2.3 Nmero de muestras y/o volumen Se intentar obtener la mayor cantidad de exudado posible. 2.4 Transporte y conservacin El transporte deber ser inmediato. Cuando exista demora se utilizar un medio de transporte. XV. PIEL Y TEJIDOS BLANDOS. En general para las lesiones abiertas, se debe remover la flora y detritus superficiales antes de recolectar la muestra de los mrgenes de avance de la lesin. En caso de lesiones secas o costrosas los cultivos no estn recomendados salvo que presenten exudado. En los abscesos cerrados la recoleccin se realizar con aguja y jeringa de la pared del mismo, previa antisepsia de piel. Para abscesos abiertos se debe decontaminar primero como en el caso de heridas abiertas. Las quemaduras se cultivan luego de una extensa limpieza y debridamiento. Se recomiendan cultivos de biopsia ya que los cultivos superficiales pueden ser poco representativos de lo que sucede en la profundidad del tejido. Observaciones: En caso de curetaje, este procedimiento es realizado por el medico, el laboratorio se limitar a facilitar un frasco estril con 0.5 mL de suero fisiolgico para mantener la humedad de la muestra hasta su transporte al laboratorio.

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1. HERIDAS SUPERFICIALES, ULCERAS Y ABSCESOS ABIERTOS 1.1 Materiales 1.1.1 Suero fisiolgico. 1.1.2 Jeringa y aguja estriles. 1.1.3 Torundas con medio de transporte. 1.2 Obtencin de la muestra 1.2.1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida. 1.2.2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas profundas. 1.2.3 Cuando la muestra sea insuficiente, instilar solucin salina estril y aspirarlo nuevamente en la jeringa. 1.2.4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podr efectuarse un frotis de las partes profundas de la herida con una torunda. 1.3 Nmero de muestras y/o volumen. Para muestras lquidas se intentara obtener 1-10 cc. En el resto de las ocasiones se enviar la mxima cantidad posible. 1.4 Transporte y conservacin. El envo al laboratorio debe ser inmediato. Se utilizar para el envo la misma jeringa de la extraccin 2, debidamente identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte. 1.5 Observaciones. Las muestras recibidas en torunda son de escasa rentabilidad y deben obtenerse slo en circunstancias muy excepcionales, cuando no se pueda recoger la muestra por otros mtodos. 2. EXANTEMAS. 2.1 Materiales 2.1.1 Gasas estriles. 2.1.2 Alcohol etlico o isoproplico al 70%. 2.1.3 Povidona iodada al 10%. 2.1.4 Jeringa estril. 2.1.5 Aguja IM. 2.1.6 Medio de transporte para anaerobios. 2.2 Obtencin de la muestra Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones. Cuando no sea suficiente, instilar una pequea cantidad de suero salino estril y aspirarlo. 2.3 Nmero de muestras y/o volumen. Se obtendr el mximo volumen de muestra. 2.4 Transporte y conservacin. Igual que para lceras y abscesos.

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3. ABSCESOS CERRADOS. 3.1 Materiales 3.1.1 Gasas estriles. 3.1.2 Alcohol etlico o isoproplico al 70%. 3.1.3 Povidona iodada al 10%. 3.1.4 Jeringa estril. 3.1.5 Aguja IM. 3.1.6 Medio de transporte para anaerobios. 3.2 Obtencin de la muestra 3.2.1 Desinfectar la piel. Limpiar la zona con alcohol, de forma concntrica comenzando por el centro. Abarcar una zona de unos 10 cm. 3.2.2 Repetir la operacin con Povidona. En pacientes con hipersensibilidad al iodo, en lugar de Povidona se utilizar alcohol dos veces consecutivas. 3.2.3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la Povidona ejerza su accin antisptica. 3.2.4 Realizar una puncin-aspiracin del absceso con jeringa y aguja. 3.2.5 Introducir una pequea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios. Desinfectar la superficie de goma del tapn con Povidona e inyectar con la misma jeringa, parte de la muestra. No debern utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una coloracin azul. 3.2.6 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla as, o bien, traspasarla a un contenedor estril. 3.3 Nmero de muestras y/o volumen. Deber enviarse un volumen de muestra entre 1-5 ml. 3.4 Transporte y conservacin. Las muestras deben enviarse al laboratorio tan pronto como sea posible. Hasta que esto suceda, mantener las muestras y el medio de transporte a temperatura ambiente. 3.5 Observaciones. Es muy importante especificar en el volante de peticin la localizacin del absceso con vistas a la interpretacin de los resultados. 4. FISTULAS Y TRACTOS SINUSALES. 4.1 Materiales. 4.1.1 Gasas estriles. 4.1.2 Alcohol etlico a isoproplico al 70%. 4.1.3 Povidona iodada al 10%. 4.1.4 Jeringa y aguja. 4.2 Obtencin de la muestra Limpiar cuidadosamente la superficie cutnea con alcohol y luego con Povidona. Aspirar el exudado de la parte profunda de la fstula con jeringa y aguja.

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4.3 Nmero de muestras y/o volumen. El volumen ptimo para el cultivo es de 1-5 ml. 4.4 Transporte y conservacin. Enviar las muestras al laboratorio antes de 2 horas. 4.5 Observaciones. Este tipo de muestras son inadecuadas para la investigacin de anaerobios. Los trayectos fistulosos y sinusales suelen estar colonizados habitualmente por distintos microorganismos que no estn implicados en la patogenia de proceso, por lo que estas muestras habitualmente son poco rentables y hay que evaluar los resultados con precaucin. 5. Heridas quirrgicas La toma de muestra se realiza luego de la limpieza de la zona con suero fisiolgico para eliminar la contaminacin superficial. Realizar una puncin y se colocar la muestra en un recipiente estril con tapa rosca. Si se sospecha presencia de anaerobios solicitar medio de transporte apropiado en el laboratorio. S la muestra es obtenida con hisopo realizar primero la limpieza de la zona y luego embeberlo de pus. 6. Quemaduras Los mejores resultados se han logran con punch de tejido de 3 o 4 mm (obtenidos por el medico especialista) para realizar cultivos cuantitativos. Se transportan en tubos con tapa rosca estriles conteniendo 0.5 mL de suero fisiolgico estril. Pueden hacerse tomas de exudado con hisopo haciendo las siguientes salvedades: solo se cultivaran para bsqueda de aerobios, no se har cuantificacin y adems el resultado obtenido puede no ser representativo de la infeccin XVI. MUESTRAS ODONTOLOGICAS. Procedimientos realizados por el mdico especialista 1. Materiales 1.1 Algodn - Hisopos. 1.2 Puntas de papel. 1.3 Anestsico local. 1.4 Cureta. 1.5 Sistema para el transporte de anaerobios. 2. Obtencin de la muestra. 2.1 Placa subgingival y supragingival: Tras aislar la zona de donde se obtendr la muestra con rollos de algodn. Se obtiene la muestra con curetas y se seca con algodn estril.

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2.2 Canal dental: Se desinfecta y se introducen en el canal 1 2 puntas de papel hasta el fondo del canal. 2.3 Bolsa periodontal: Tras limpiar la placa supragingival se toma la muestra con cureta estril introducindola lo ms vertical posible hasta el fondo de la bolsa periodontal. 2.4 Abscesos: Tras desinfeccin, puncionar el contenido del mismo. 3. Volumen de la muestra. El mximo que se pueda disponer. 4. Transporte. Las muestras se remiten rpidamente, evitando el contacto con el oxgeno y la desecacin. Es utilizado algn medio de transporte de los indicados en el apartado de anaerobios. XVII. CATTER VENOSO CENTRAL 1. Contaminacin Extraluminal del catter Su estudio se realiza por tcnica semicuantitativa de Maki. Esta tcnica permite valorar la contaminacin extraluminal del catter, mecanismo por el que generalmente se contaminan los catteres de corta permanencia y pueden llegar a ser el origen de una bacteriemia. 1.1 Materiales 1.1.1 Guantes de goma estriles. 1.1.2 Gasas estriles. 1.1.3 Pinzas y tijeras estriles. 1.1.4 Recipiente estril con tapa de rosca. 1.1.5 Alcohol etlico a isoproplico al 70%. 1.1.6 Alcohol iodado al 1-2 por 100 o un iodforo al 10%. 1.2 Obtencin de la muestra 1.2.1 Desinfectar con alcohol una zona de piel de unos 10 cm correspondientes a la zona de entrada del catter. Hacerlo en forma de crculos comenzando par el centro. 1.2.2 Repetir la misma operacin, pero con el alcohol iodado o yodo povidona, dejando que se seque durante un minuto. 1.2.4 Ayudndonos de las pinzas y las tijeras estriles, cortar los 5 cm distales del catter que corresponden a la porcin intravascular. 1.2.5 Introducir el segmento de catter en un recipiente estril correctamente identificado. 1.2.6 Retire el yodo de la piel con alcohol al 70%. 1.3 Tamao de la muestra. 3 cm de la porcin ms distal.

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1.4 Transporte. La muestra deber enviarse al laboratorio en un periodo inferior a 30 minutos. Cuando esto no sea posible deber conservarse en refrigeracin a 4C. XVIII. BIOPSIAS 1. Materiales 1.1 El material quirrgico estril que precise la tcnica empleada para la obtencin de las biopsias de distintas localizaciones. 1.2 Recipientes estriles con tapa de rosca. 1.3 Suero salino estril. 1.4 Jeringas y agujas estriles. 1.5 Sistemas de transporte para anaerobios (vales, placas con sistemas de generacin de atmsfera anaerbica, jarras de transporte, etc.). 2. Obtencin de la muestra 2.1 Muestras slidas: Se obtendr un bloque de tejido por escisin quirrgica procurando incluir las zonas ms afectadas, y cuando las lesiones estn bien delimitadas se intentar incluir tambin el borde activo de la lesin. 2.2 Muestras lquidas: Se obtendrn por aspiracin con jeringa y aguja siguiendo tcnicas estrictamente aspticas 3. Nmero de muestras y/o volumen. 3.1 Muestras slidas: Se recomienda obtener una pieza de al menos 5-10 cm. 3.2 Muestras lquidas: 5-10 ml. 4. Transporte y conservacin. 4.1 Las muestras slidas se introducirn en un recipiente estril con tapa de rosca, al que pueden aadirse unas gotas de suero salino estril para prevenir la desecacin de las muestras de pequeo tamao. 4.2 Cuando se disponga de ellos, las muestras se enviarn en bolsas, campanas o recipientes preparados para mantener un ambiente de anaerobiosis. 4.3 Las muestras lquidas se introducirn en un vial con medio de transporte especfico para anaerobios, que se mantendr a temperatura ambiente hasta su envo. 4.4 El envo y procesamiento de estas muestras debe ser inmediato. 5. Observaciones. Es muy importante no introducir las muestras en formol ni en otras sustancias que puedan inhibir el crecimiento de microorganismos, ni utilizar recipientes de dudosa esterilidad. Dado que estas muestras suelen ser de extremada importancia, difcil obtencin, con riesgos y molestias para el paciente, y en muchas ocasiones son insustituibles, es recomendable que antes de iniciar el procedimiento se establezca contacto con los Servicios de Microbiologa para evitar posibles errores y orientar las investigaciones posteriores en relacin a las distintas sospechas clnicas.

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XIX. NECROPSIAS Muestras obtenidas por el mdico especialista 1. Materiales 1.1 Material quirrgico estril. 1.2 Recipientes estriles con tapa de rosca. 1.3 Suero salino estril 1.4 Jeringas y agujas estriles. 1.5 Frascos de hemocultivo anaerobios para muestras de sangre. 2. Obtencin de la muestra Las muestras se recogern preferentemente antes de que el cadver se manipule demasiado o se abra. La piel o las superficies serosas de los rganos deben desinfectarse antes de realizar punciones o extraer bloques de tejidos. Para esto pueden seguirse los procedimientos generales de desinfeccin, utilizando consecutivamente alcohol de 70 y Povidona iodada al 10%, o bien, cauterizar mediante una esptula al rojo. 2.1 Muestras slidas: Se enviar una cua de unos 6 cm, que incluya una superficie serosa o capsular intacta. 2.2 Muestras lquidas: Se obtendrn por aspiracin con jeringa y aguja siguiendo tcnicas estrictamente aspticas. 2.3 Muestras de sangre: Se obtendrn por puncin-aspiracin de cavidades cardacas derechas. La sangre as obtenida se inocular en un frasco de hemocultivo anaerobio siguiendo los procedimientos generales descritos en el apartado de "hemocultivos". 3. Nmero de muestras y/o volumen. 3.1 Muestras slidas: Se recomienda obtener una pieza de al menos 5-10 cm 3.2 Muestras lquidas: 5-10 ml. 3.3 Muestras de sangre: 5-10 ml. 4. Transporte y conservacin. Las muestras debern transportarse en recipientes estriles con cierre hermtico, que no contengan formol ni otras sustancias inhibidoras. Cuando el envo no pueda realizarse rpidamente las muestras pueden conservarse en nevera. 5. Observaciones. Los cultivos de muestras de autopsias se contaminan con frecuencia con bacterias del agua o entricas, lo que debe tenerse en cuenta en la interpretacin de los resultados. Para la investigacin de virus, hongos, micobacterias, etc, debern seguirse los procedimientos especficos descritos en sus respectivos apartados. XX. MEDULA OSEA: ASPIRADOS. Procedimientos realizados por el medico especialista 1. Indicaciones. Tuberculosis, brucelosis, Fiebre tifoidea.

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2. Materiales 2.1 Guantes estriles. 2.2 Gasas estriles. 2.3 Material para anestesia local. 2.4 Material para puncin sea. 2.5 Povidona iodada. 2.6 Alcohol etlico o isoproplico al 70%. 2.7 Tubos de presin negativa con heparina, sin conservantes. 2.8 Frasco de hemocultivo 3. Obtencin de las muestras. 3.1 Localizacin. La puncin se realiza fundamentalmente en el esternn (alternativas vlidas: cresta ilaca, apfisis vertebrales y en nios meseta tibial). 3.2 Descontaminar la piel segn el mtodo ya descrito. 3.3 Previa anestesia local, fundamentalmente en adultos, se realiza la aspiracin estril de la mdula sea. 3.4 El volumen obtenido no debe ser inferior a 1ml. 4. Transporte. Mantener a temperatura ambiente para favorecer la coagulacin. Enviar rpidamente al laboratorio, puede conservarse varias horas a temperatura ambiente, siempre que la toma haya sido realizada de forma absolutamente estril. XXI. MUESTRAS PARA CULTIVO ANAEROBIO A. MUESTRAS NO ACEPTABLES Las siguientes muestras por lo general estn contaminadas con Biota normal y ordinariamente no debern ser cultivadas para anaerobios. 1. Hisopado faringeo 2. Hisopado naso faringeo 3. Hisopado gingival 4. Esputo expectorado 5. Esputo inducido 6. Aspirado endotraqueal 7. Aspirado traqueostmico 8. Lavado bronquioalveolar no protegido 09. Contenido gstrico (excepto en Blind Loop" o sndromes similares) 10. Contenido del Intestino delgado (excepto en Blind Loop" o sndromes similares) 11. Contenido del intestino grueso ( Excepto para Clostridium difficile y C. botulinum) 12. Secrecion de Ileostoma y Colostoma 13. Heces (Excepto para Clostridiun dtfcile y C. botulinum) 14. Orina de chorro 15. Orina obtenida con catter 16. Hisopado vaginal o vulvar 17. Hisopado cervical

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18. Hisopado endocervical contaminado 19. Hisopado uretral 20. Hisopado perineal (regin limitada en el hombre por el ano y el escroto, y en la mujer por el ano y la vulva). 21. Loquios (Despus del parto suelen producirse prdidas vaginales que se conocen con el nombre de loquios. Se trata de una mezcla de sangre y restos del revestimiento del tero que se han formado durante el embarazo, as como de las secreciones que se producen al cicatrizar la herida que deja la placenta tras su expulsin) 22. Lquido seminal o prosttico B. MUESTRAS ACEPTABLES 1.Aspirados con jeringa y aguja (ver mas adelante) 2.Orina: Aspirado suprapbico 3.Glndula de Bartholin 4.Bilis 5.Sangre venosa 6.Utero: aspirado endometrial 7.Mdula sea 8.Broncoscopa con brochas protegidas 9. Especimenes de Culdocentesis. Es un procedimiento para verificar la existencia de lquido anormal en el espacio justo detrs de la vagina (fondo de saco). 10.Tubo de Falopio 11. Dispositivo intrauterino (para Actinomyces) 12. Ovario 13. Placenta va cesrea 14. Aspirado de sinus 15. Heces: Slo para Clostridium spp 16. Hisopado de ciruga 17. Tejido de ciruga 18. Aspirado transtraqueal XXII. TRANSPORTE DE MUESTRAS 1. PREPARACIN PARA EL TRANSPORTE AL LABORATORIO a) Cerrar firmemente la tapa de los envases o tubos. b) Asegurar que la informacin en el frasco y la ordene sea la misma c) Colocar cada frasco en bolsas plsticas, la orden debe ir a parte (para evitar contaminacin). d) No usar placas Petri para transportar muestras. e) Colocar las muestras ordenadamente en el contenedor para transporte, el cual debe ser limpio y seguro. f) Si se transportan tubos o placas Petri cultivadas, colocar las placas invertidas en un contenedor metlico o plstico, y asegurarlos en posicin vertical. Las placas

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inoculadas para aislamiento de Neisseria spp, deben ser transportadas en jarras con vela u otro proveedor de atmsfera adecuado. g) Los tubos debern quedar en posicin vertical en una gradilla acondicionada para el transporte h) Las ordenes que acompaen las muestras no debern estar en contacto con estas, pudiendo ser colocados en una bolsa distinta y por ejemplo sujetadas a la bolsa del Frasco con cinta adhesiva. i) Muestras de secrecin vaginal: El envo de la muestra debe ser inmediato, siempre que sea posible, de lo contrario deber emplearse medio de transporte tipo StuartAmies, o en ultimo caso Cary&Blair, y se mantendrn a temperatura ambiente o en estufa a 35-37C hasta su procesamiento, que deber ser en lo posible antes de a 3 a 6 hrs. 2. CONDICIONES AMBIENTALES DURANTE EL TRANSPORTE Todas las muestras deben ser remitidas de inmediato al laboratorio o en menos de 2 hrs. En algunos casos las muestras pueden ser refrigeradas, pero remitidas al laboratorio en un corto periodo de tiempo. 2.1 Las siguientes muestras NO deben ser refrigeradas 2.1.1 Si la sangre es cultivada en caldo, transportar a temperatura ambiente lo ms rpido posible e incubar de inmediato a 35 a 37C en el laboratorio. En ningn caso refrigerar. 2.1.2 Las muestras que pueden contener microorganismos sensibles a los cambios de temperatura, tales como las especies de Neisseria, debern mantenerse a temperatura ambiente. 2.1.3 Mantener las muestras de Liquido Cfalo Raqudeo a temperatura ambiente, a menos que fuese a ser cultivada para virus. Alternativamente, incubar entre 35 a 37C. 2.1.4 Para anaerobios, usar sistemas de transporte anaerbicos y mantener a temperatura ambiente. 2.1.5 Otras muestras: Lquido sinovial, abdominal y amnitico, bilis, aspirado de pulmn, lesin, placenta, nasal, aspirado transtraqueal, orina suprapbica, raspado corneal, humor vtreo, mdula sea, cuello uterino, conjuntiva, genitales, nasofarngeo, tracto respiratorio superior, heridas, ocular, genital, odo interno. 2.2 Muestras que pueden ser refrigeradas. Orina, muestras de odo externo, tejido de autopsia, lavado bronquial, catter intra venoso, biopsia de pulmn, lquido pericrdico, esputo, quemaduras, etc. XXIII. RECEPCION Y ACEPTACION DE MUESTRAS Pasos necesarios para asegurar que la muestra sea apropiada y adecuada antes de su evaluacin para patgenos bacterianos en el laboratorio. 1. Recepcin de muestras 1.1 Documentar la hora de recepcin de la muestra

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1.2 Documentar la hora de coleccin de la muestra 1.3 Verificar que los datos del paciente en la orden sean iguales que los de la muestra. 1.4 Asignar un nmero de acceso a ser usado como identificacin de la muestra en el laboratorio. 1.5 Examinar la muestra visualmente. 1.6 Cuidadosamente revisar y evaluar que la muestra sea la apropiada para la orden. 2. Criterios generales de rechazo 2.1 Muestras mal etiquetada, sin etiqueta o que no concuerde con la orden. 2.2 Si la parte externa del frasco esta groseramente contaminada con la muestra. 2.3 Si el frasco esta roto. 2.4 La mayora de muestras duplicadas, recibidas el mismo da no debern ser procesadas; excepciones incluyen cultivos de sangre, liquido cefalo raqudeo, tejido y lquidos corporales estriles, excluyendo orina. 2.5 Muestras en frascos que no sean estriles. 2.6 La mayora de muestras colectadas con hisopos y transportadas secas son inaceptables. Excepcin: Hisopados faringeos remitidos para el aislamiento de estreptococos del grupo A. 3. Criterios de rechazo de acuerdo al tipo de muestra. 3.1 Orina 3.1.1 Puntas de sonda Foley. 3.1.2 Muestras de orina de 24 hrs para cultivos bacterianos. 3.1.3 Muestras de orina contaminadas con heces. 3.1.4 Orina de ms de 2 horas de coleccin sin evidencia de refrigeracin para urocultivos. Solicitar nueva y apropiada muestra. 3.2 Esputo 3.2.1 No aceptar saliva en vez de esputo. Asegurarse de no confundir esputo expectorado con esputo inducido. Este ltimo puede contener pequeas cantidades de solucin salina, y aunque puede parecer saliva, es una buena muestra. 3.3.2 No aceptar esputo de 24 hrs de coleccin para cultivos. 3.3.3 Si se sospecha de N. gonorrhoeae o Bordetella pertusi (no realizado en BLC), el medico deber contactarse con el laboratorio, ya que se requieren tcnicas o medios especiales. 3.2.4 Como otras muestras respiratorias, el esputo debe ser transportado hasta en 2 horas desde su coleccin, a menos que estn refrigeradas. 3.3 Muestras genitales Placas de agar Thayer Martn u otros medios selectivos inoculados para Neisseria gonorrhoeae no debern ser de mas de 2 horas o debern ser transportadas en medio de transporte Stuart o similar o sembrados en el sitio. 3.4 Muestras fecales 3.4.1 Rechazar muestras fecales de mas de 2 hora de coleccin, excepto si estn en un medio de transporte como Cary Blair, por ejemplo. 3.4.2 Las muestras de heces no debern contener orina

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3.4.3 No aceptar mas de 2 muestras, sin antes consultar con un apersona que pueda explicar los limitados beneficios que proveen muestras adicionales. 3.4.4 No aceptar muestras fecales de pacientes despus del tercer da de hospitalizacin, sin antes consultar si esta bajo terapia antimicrobiana. 3.4.5 Los hisopados rectales secos son inaceptables. 3.5 Sangre Debern enviarse al laboratorio tres muestras de sangre colectadas durante un periodo de 24 hrs para cultivo. Si solo se enva una muestra de sangre, aceptar pero insistir con el mdico o enfermera en que la sensibilidad y la calidad del diagnstico para bacteremias se incrementa con mas de una muestra de sangre y que los frascos debern ser transportados a temperatura ambiente en el mas corto plazo. 3.6 Muestras de piel y tejido subcutneo 3.6.1 Muestras de Herida y lquidos corporales deben ser recibidas hasta en dos horas de su coleccin a temperatura ambiente. 3.6.2 Los hisopos, cuando son remitidos, deben ser recibidos en medio de transporte. Hisopos secos son inaceptables. 4. Muestras inaceptables para cultivos anaerobios. a) Hisopado faringeo b) Hisopado nasal y nasofaringeo c) Hisopado gingival d) Esputo expectorado o inducido e) Aspirado endotraqueal f) Aspirado traqueostmico g) Lavado bronquioalveolar no protegido h) Contenido gstrico, excepto en blind loop i) Contenido de intestino delgado o grueso j) Orina evacuada k) Orina cateterizada l) Hisopado vaginal o vulvar. m) Hisopado cervical n) Hisopado uretral o) Fluido seminal o prosttico. Muestras no transportadas en frascos con ambiente anaerbico a temperatura ambiente. Con excepcin de lquidos en jeringa protegidas que lleguen al laboratorio mximo en 15 minutos de haber sido tomadas. 5. Procedimientos en caso de rechazo y solicitud de nueva muestra. 5.1 Si una muestra inaceptable puede ser reemplazada, notificar el problema y el rechazo. Solicitar nueva muestra. 5.2 No descarte la muestra hasta que el medico del paciente o enfermera haya confirmado que puede colectarse una nueva muestra. 5.3 Documente las razones para el rechazo de la muestra y la necesidad de repetir la muestra.

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5.4 Documente el nombre del individuo a quien se le da el reporte, la fecha, la hora y su firma. 5.5 Si el paciente ya ha iniciado una terapia antibitica o si no se puede obtener nueva muestra, ello tambin debe ser documentado. XXI. BIBLIOGRAFIA 1. Balows A., Ilausler Jr., W.3., Renrmann K.L., Isenberg H.D., Shadomy H.J. (eds). 1991. Manual of clinical microbiology 5th ed. American Society for Microbiology. Washington, D.C. 2. Bannatyne R.M., Claussen C., McCarhty L.R. 1979 Cumitech 10, Laboratory diagnosis of Upper Respiratory Tract Infections. Coordinating Ed: Duncan I.B.R. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Clarridge J.E., Pezzlo M.T. and Vosti K.L. 1987. Cumitech 2A, Laboratory Diagnosis of Urinary Tract Infections. Coordinating Ed.: A. S. Weissfeld American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4. Clyde W.A., Kenny G.E., Schachter 3. 1984. Cumitech 17, Laboratory Diagnosis of Female Genital Tract Infections. Coordinating Ed.: Robin 5.3. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. Collignon P.S. and Munro R. 1989. Laboratory diagnosis of intravascular catheter associated sepsis, Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 8:807-814. Departamento de Microbiologa y Parasitologa. Facultad de Medicina. Hospital Clnico 6. Isenberg H.D. (eds). 1992. Clinical microbiology procedures handbook. American Society for Microbiology. Washington, D.C. 7. Jones D.B., Liesegang T.J., Robinson N.M. 1981. Cumitech 13, Laboratory Diagnosis of Ocular Infections. Coordinating Ed.: Washington J.A. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Kellogg D.S., Holmes K.K., Hill G.A. 1976. Cumitech 4, Laboratory Diagnosis of Gonorrhea. Coordinating Ed.: Marcus S., Sherris J.J. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Lauer B.A., Masters B. 1988. Toxic effect of calcium alginate swabs on Neisseria gonorrhoeae. J Clin Microbiol 26:54-56. 11. Mc Lowry 3.9., Murray P.R. and Reller L.B. 1982. Cumitech 1A, Blood Cultures II. Coordinating Ed.: J.A. Washington American Society for Microbiology, Washington, D.C. 12. Nahass R.G. and Weinstein M.P. 1990. Qualitative intravascular catheter cultures do not predict catheter-related bacteriemia. Diag Microbiol Infect Dis 13:223-226. 13. Newman M.G., Grawford A. 1976. Studies of microbiology of periodontitis. J Periodontol 47:375-379. 14. Pidrola G.1987. Diagnstico de las infecciones. En Microbiologa y Parasitologa Mdica de Pumarola A., Rodriguez-Torres A., Garca-Rodriguez J.A. y Piedrota G. Salvat Eds. Barcelona:311-319. 15. Pidrola G., Garca J., Gmez M., Rodrguez F., Torreblanca A. 1993. Recogida, transporte y conservacin de las muestras. En Procedimientos en Microbiologa Clnica. Recomendaciones de la Sociedad Espaola de Enfermedades Infecciosas y Microbiologa Clnica. http://www.seimc.org/protocolos/microbiologia/cap1.htm

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BLUFSTEIN LABORATORIO CLNICO S.A.

OBTENCION, TRANSPORTE Y CONSERVACION DE MUESTRAS EN BACTERIOLOGIA

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ANEXO
I. Hipoclorito de Sodio (Leja) 1. Concentracin comercial 5% (50,000 ppm) 1.1 Leja al 1% (10,000 ppm) Leja comercial Agua 1.2 Leja al 0.5% (5000 ppm) Leja comercial Agua 1.3 Leja al 0.1% (1000 ppm) Leja comercial Agua 20 mL 980 mL 100 mL 900 mL 200 mL 800 mL

2. Concentracin comercial 10% (100,000 ppm) 2.1 Leja al 1% (10,000 ppm) Leja comercial Agua 2.2 Leja al 0.5% (5000 ppm) Leja comercial Agua 2.3 Leja al 0.1% (1000 ppm) Leja comercial Agua 10 mL 990 mL 50 mL 950 mL 100 mL 900 mL

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