Replicación de virus

que infectan células

animales.
Descripción de las fases
 Fases de la replicación viral

1. Reconocimiento de la célula blanco

2. Unión
3. Penetración
4. Pérdida de la cápside
5. Síntesis macromolecular
a) Síntesis temprana de RNAm y
proteínas no estructurales, genes
para enzimas y proteínas unidoras
de ácidos nucleicos.
b) Replicación del genoma
c) Síntesis tardía de RNAm
d) Sintesis de proteínas estructurales
6. Modificación postraduccional de
proteínas
7. Ensamblaje viral
8. Liberación viral
Ciclo de replicación viral
 Periodo de eclipse y latencia

Periodo de eclipse: Lapso de tiempo desde la entrada viral hasta la aparición de virus de la progenie intracelularmente.
Periodo de latencia: Lapso de tiempo desde la entrada viral hasta la liberación de virus de la progenie de la célula.
DESCRIPCION DE LAS FASES
 Reconocimiento y unión a la célula
blanco
• Para infectar una célula los virus deben primero
reconocer a una célula.
• Las proteínas virales de unión (viral atachment
proteins, VAP) interactúan con los receptores en la
célula.
• Los receptores celulares pueden ser proteínas o
carbohidratos.
• La interacción VAP-receptor es el principal
determinante de cuales células serán infectadas por
el virus.
Que moléculas son usadas por los virus para
unirse a las células??

La célula tiene barreras

para impedir el paso
viral, pero los virus
usan los procesos
celulares
fundamentales de la
células para ganar
acceso.
Tipos de moléculas celulares utilizadas como
receptores virales • Moléculas de la superfamilia de las
inmunoglobulinas.
• Moleculas de adhesion (ICAMs)
• Integrinas
• Acido Siálico
• CDs y receptres de quimiocinas
• LDLR (receptor de lipoproteínas de baja
densidad)
• Receptores de acetil-colina
• Receptores de Igs
HSPG: Heparán sulfato proteo-glucanos
DC-SIGN (Dendritic Cell-Specific Intercellular adhesion molecule-3-Grabbing Non-integrin) also known as
CD209 (Cluster of Differentiation 209)
Car: coxsackievirus and adenovirus receptor
 Entrada viral mediada por receptores.
La entrada viral es iniciada por interacciones ESPECIFICAS entre los virus y sus
receptores.
A) El Rhinovirus entra por endocitosis mediada por receptor (LDLR)
B) El HIV utiliza CD4 como receptor primario pero requiere un co-receptor
C) EL HCV requeire por lo menos 4 factores del huesped, se une a SR-B1 y
CD81 y requiere de las proteínas claudina y ocludina de las uniones
estrechas.

Grove J , and Marsh M J Cell Biol

doi:10.1083/jcb.201108131

© 2011 Grove and Marsh

Ejemplos de VAPS-receptores y vías de
entrada utilizadas por los virus
 1. Fusión
MECANISMOS DE ENTRADA/PENETRACION 2. Endocitosis
VIRAL 3. Entrada Mediada
por poros
4. Paso célula-célula
(plantas)

http://viralzone.expasy.org/all_by_species/936.html
Fusion at plasma membrane
Virus envuelto
Liberación de la nucleo-
cápside en el citoplasma
celular. La membana
viral forma parte de la
membrana celular.

Unión al receptor
Fusión de la
membrana viral con
la membrana del
huésped
Mecanismo de la fusión (pH-7)
unión
La fusion de las
membranas viral y
celular requiere de
Desenmascaramiento del cambios
péptido de fusion Penetración a la
Eccision de la membrana conformacionales
membrana del huesped
mayores de
proteinas virales y
dependen de pH.
 Glycoproteins F and HN mediate paramyxovirus entry into target cells.

Paramyxoviridae
Ejemplo:
Virus del sarampión y
las paperas.

Bose S et al. PNAS 2012;109:15549-15550

©2012 by National Academy of Sciences

 Schematic model of paramyxovirus F activation based on putative structural rearrangements
in the receptor-binding protein.

Bose S et al. PNAS 2012;109:E2625-E2634

©2012 by National Academy of Sciences

 clathrin mediated endocytosis

La unión del virión al receptor

celular induce la unión de una
proteína adaptadora en la parte
citoplásmica del receptor.

Las proteínas adaptadoras se

unen a clatrina , lo que causa su
multimerización para formar las
invaginaciones conocidas como
Clathrin-Coated Pit (CCP)

Las proteínas Dinaminas (DNM1

y 2, Dynamin), cortan del CCP
desde la membrana nuclear
para liberarlo.
Caveolin mediated endocytosis

Las Caveolinas (CAV1,2 Y 3) son la

columna vertebral de vesículas
endocíticas llamadas caveolas.
La internalización por caviolas no es
un proceso constitutivo , ocurre por
estimulación tras la unión del virus
a su receptor.

Cuando esto sucede, otra proteína

llamada Cavin-1 se integra para
formar la caveola junto con la
caveolina.

Caveola: agregados especializados

de lípidos que forman
invaginaciones de la membrana
plasmática de 50-70 nm.
 Macropinocytosis

Es inducida por factores

de crecimeinto y es
dinamina independiente.

Se forman lamelopodias
dirigidas por actina para
formar vesículas grandes
llamadas
Macropinosomas.
Pore mediated penetration
Péptido viral formador de
poros en la membrana de la Picornavirus
célula huésped

Via membranal

Via endosómica

Papilomaviridae y Polyomaviridae (via

reticulo endoplasmico)
 Sites of virus particle fusion/penetration.

• Los virus envueltos pueden fundirse

con la membrana celular a pH neutro.
• BY C. Los viurs que entraron por
endocitosis pueden escapar de la red
de ensomas dependiendo de la
acidificación.
• A una acidificación media (6.5-6)
algunos virus escapan del endosoma
temprano (B) o a un pH mas bajo (5.5-
4) del endosoma tardío.

• D. El virus SV40 (Poliomavirus) lleva a

cabo un transporte atipico a través de
la vía endosamal hacia el ER, donde se
desensabla parcialmente y luego es
lanzado hacia el citosol por una
maquinaria de retrotranslocación.

Grove J , and Marsh M J Cell Biol 2011;195:1071-1082

© 2011 Grove and Marsh
 Y una vez dentro……que
pasa????
Dependiendo del tipo
viral, una vez que el virus
es endocitado, el
genoma es liberado en el
citoplasma o en el
núcleo.
Esto puede ocurrir
desde el endosoma por :
• Lisis
• Fúsión
• Permeabilización

http://viralzone.expasy.org/all_by_species/936.html
MECANISMOS DE LIBERACION DEL
ENDOSOMA TARDIO.
Fusion with endosome
membrane
Fusion

Virus Influenza
El péptido de fusión
(rojo) es expuesto
cuando las condiciones
de acidez son
apropiadas.
Las proteínas de fusión
toman entonces una
conformación
trimérica.

Virus entry: molecular mechanisms and biomedical applications

Dimiter S. Dimitrov
,
Nat ur e ReviewsMicrobiol o
gy2 109-122 (February200
doi : 10. 10
4)
38/nrm icro81
7
Virus de la hepatitis C
Lisis
Los virus no envueltos
transfieren su material
genético desde el endosoma
al citoplasma celular a través
de:
LISIS O PERMEABILIZACION
La lisis ocurre cuando la
cápside viral induce la
ruptura de la membrana
endosomal por un cambio
conformacional de las
proteinas de la cápside
debido al pH ácido o bien por
unión a un receptor.
Resultado: La nucelocápside
escapa a el citoplasma
(Adenovirus 2 y 5) o se libera
el genoma viral al citoplasma
(Rhinovirus humano)
Permeabilization
Algunos virus no envueltos
inducen permeabilización de la
membrana endosomal a través
de una proteina viral asociada a
la cápside.
Esta proteína requiere ser
primero activada a pH acido
para mostrar su actividad
penetrante de membrana.

En los rotavirus se ha mostrado

que estas proteínas parecen
compartir mecanismos con las
proteínas de fusión que poseen
algunos virus envueltos.
Movilidad citoplásmica VIRAL
 Microtubule-dependentactivetransportof viralmaterial

Virus con grandes cápsides

o genomas utilizan motores
moleculares para moverse a •Microtúbulos
través del citplasma. •Actina

El transporte dependiente de
microtúbulos involucra
proteinas motor como
Dineína y Kinesina y es
principalmente usada por
virus que se dirigen al núcleo.
PENETRACION VIRAL HACIA EL NUCLEO DE LA
CELULA HUESPED

Nuclear pore
complex:
Cellular Importin
 Ejemplo: Adenovirus

http://cronodon.com/BioTech/A
denovirus.html
Ejemplo: virus Varicela-Zoster (VVZ), un herpesvirus

1. El VVZ se une a la superficie celular

por interacción de las glicoproteínas
gB, gH y gI con el Heparan Sulfáto de
los proteoglicanos de la superficie
de la célula huésped.
2. Los residuos Manosa-6-fosfato de
los ecto-dominios de la glicoproteína
viral se unene a los receptores M-6-
P de la célula huésped y
desencadenan la penetración viral
3. La fusion de la membrana viral libera
las proteinas del tegumento viral en
el citoplasma.
4. En la membrana nuclear el virus
libera su genoma DNA en el nuleo y
este se circulariza.
PARO DE LA MAQUINARIA
CELULAR POR EL VIRUS
 Paro de la Maquinaria celular inducida por los virus
•Inhibición de la transcripción
de genes

•Supresión de mRNA celular.

•Inhibición de la traducción.
 Inhibicion de la transcripcion

Interferencia con la
RNA pol II
-ubiquitinación y
degradación en el
proteosoma.

-Inhibiendo la fosforilación
del dominio CTD que activa
a la enzima.

- Interferir con los factores

de iniciación de la
transcripción
Virus que interfieren con las transcripción
celular
 Interferencia con el mRNA

1. Interferencia con el 2
pre-procesamiento
del mRNA
(poliadenilación, 3
splicing).

2. Inducción de la
degradación del RNA

3. Bloqueo de la
1
exportación del
mRNA fuera del
núcleo.
 Mecanismo celular de traducción del mRNA
subunidad pequeña del
ribosoma

mRNA

En organismos eucariontes se
requiere una modificación previa
en el extremo 5', en el cual se
añade lo que se denomina Cap,
(grupo metilo al carbono 7 de la
subunidad mayor del guanina del extremo 5´ del
ribosoma mRNA ), asi como el poli-A del
extremo 3’ para el ensamblaje
de la maquinaria de traducción.
 La traduccion del mRNA comienza
INHIBICION DE LA con el reclutamiento del complejo
de iniciación llamado eIF4E (cap
TRADUCCION binding protein, RNA helicasa y la
proteina adaptadora)

La proteína de unión de eIF4E

funciona como un represor
de la traducción limitando la
disponibilidad de eIF4G y la
formación del complejo de
iniciación.
Internal Ribosome Entry Site
secuencia nucleotídica que
se encuentra en el extremo
5´UTR (untranslated region
o región no traducida) que
permite la iniciación de la
síntesis proteica,

Las secuencias IRES son

reconocidas por el
complejo de pre-iniciación,
de manera que pueden
comenzar la traducción del
RNA mensajero a pesar de
carecer de modificación
Cap en su extremo 5'.
 IRES (internal ribosome entry site) y DLP (Downstream Hairpin Loop)

Los virus que no tienen

CAP

Los virus que no tienen CAP

ni poli A

Los virus que no tienen

poliA

Dependiente de Cap en
ausencia de eIF2

Downstream
hairpin loop
+
+--
+--
+--

+--
+--
Transcripción de los virus DNA
Transcripción de virus RNA
Replicación de un virus DNA
Replicación de virus ss DNA
Adenovirus (dsDNA)
Herpervirus (dsDNA)
Poxvirus (dsDNA)
Hepadnavirus (dsDNA)
Retrovirus (ssRNA +)
Picorna y Flavi
CLASE I

VIRION PROGENITOR

ADSORCION,
PENETRACIÓN Y PERDIDA
DE LA CAPSIDE

ds DNA DEL DNA DE LA PROGENIE RNA m TARDIO

VIRION

RNAm TEMPRANO PROTEINAS ESTRUCTURALES

ENZIMAS

ENZIMAS DE
SÍNTESIS DE DNA VIRUS DE LA
PROGENIE
Non enveloped, icosahedral, non-turreted
virion with a triple capsid structure, about 80
nm in diameter. The intermediate capsid has
a T=13 icosahedral symmetry, the inner capsid
a T=2 icosahedral symmetry.
 Virión Progenitor
CLASE III
Adsorción, Penetración y Pérdida de la cubierta

Eliminación de la cubierta exterior

Partícula subviral (core)

RNA (+) Sintesis de proteínas

Partículas virales inmaduras

Transformación a RNA ds

RNA m Sintesis de proteínas

Partículas virales inmaduras

Virus de la progenie
 Virión parental
CLASE IV

Adsosción,
penetración y pérdida
de la cubierta
2 5 6
RNA (+) Síntesis de RNA (-) Intermediario replicativo
complementario

3 7
4
8
RNA (+)
POLIRRIBOSOMAS

10

INHIBIDORES DE LA
POLIMERASA.
PROTEINAS ESTRUCTURALES
VP0 PROCAPSIDE PROVIRION
9
VP1
VP3 VP0---VP2+VP4
11

VIRUS DE LA PROGENIE
 VIRION PARENTAL

CLASE V
ADSORCION,
PENETRACIÓN

NUCLEOCAPSIDE CON
RNA (-)

SÍNTESIS DE RNA(+)
COMPLEMENTARIO

NUCLEOCAPSIDE CON
PROCESAMIENTO PARA RNA(+) DE LA MISMA
DAR RNAm LONGITUD DEL GENOMA

PROTEINAS NO ESTRUCTURALES, RNA(-) GENOMICO

PROTEINAS DE LA CAPSIDE VIRAL
GLUCOPROTEINAS VIRALES

NUCLEOCAPSIDE
CON RNA (-)
MEMBRANA DE LA CELULA
CON GLICOPROTEINAS
VIRALES

VIRUS DE LA PROGENIE
 VIRION

CLASE VI
PARENTAL

ADSORCION, PENTRACION Y
PERDIDA DE LA CUBIERTA

Transcriptasa
inversa

RNA (+) DEL VIRION HÍBRIDO RNA:DNA DNAds VIRAL

(PROVIRUS)

Transcriptasa
DNA VIRAL INTEGRADO
POLIRRIBOSOMAS RNAm EN EL DNA DE LA
CELULA HUESPED

Polimerasa
PROTEINAS DE
TRANSFORMACIÓN,
PROTEINAS RNA (+) DEL
ESTRUCTURALES VIRION

NUCLEOCAPSIDE

MEMBRANA CELULAR
CON GLUCOPROTEINAS

PROGENIE
Viroplasmas (inclusiones electrodensas)
Esférulas (50-400 nm)
Vesículas de doble membrana (200-300 nm)
Fábricas virales
Tubos
Fábricas virales nucleares
 Ensamblaje viral
Un subgrupo de virus requiere
de ensamblarse dentro del
núcleo.

Las proteínas de la cápisde se

dirigen al núcleo mediante
señales de localización nuclear
(NLS).

Herpesvirus y Adenovirus
utilzian proteinas no
estructurales que actúan como
chaperonas para el ensamblaje
: PROTEINAS ANDAMIO Proteínas andamio
J Struct Biol. 2008 Mar;161(3):419-27. Epub 2007 Nov 17.
Cryo-electron tomography of Kaposi's sarcoma-associated
herpesvirus capsids reveals dynamic scaffolding structures essential
to capsid assembly and maturation.
Deng B, O'Connor CM, Kedes DH, Zhou ZH.
HSV-1 (HERPESVIRUS)
Mas de 30 proteínas
componen al virión de
HSV-1 y se expresan
tardíamente.
Las cápsides se forman
alrededor de proteínas
andamio en el nucleo.

Diferentes proteínas
interaccionan con el
DNA para permitir la
encapsidación.
Poliaminas altamente
básicas parecen facilitar
este proceso.

http://darwin.bio.uci.edu/~faculty/wagner/hsv
4f.html
 Esamblaje viral en la membrana

Diferentes
proteínas virales
se dirigen y unen
a la membrana
celular gracias a la
interacción entre
sus dominios
básicos y los
lípidos de la
membrana
plasmática .
phosphatidylinosi
tol-(4,5)-
bisphosphate
[PI(4,5)P2 juega un
pa pel importante.

http://sitemaker.umich.edu/ono.lab/targeting_
of_virus_assembly_
 Como es empacado el material
genético viral???
El mecanismos de translocación
de dsDNA viral se estudia
utilizando el fago SPP1 como
modelo.
El DNA entra a la cápside
preformada a través de un portal .
Una ATPasa codificada por el virus
utiliza la hidrólisis de ATP para
inducir cambios conformacionales
en el portal, que impulsan el DNA
hacia adentro.

Structural basis for DNA recognition and

loading into a viral packaging motor.
C Büttner, et al., PNAS, 2012, 109, 811-816.
Virus herpes asociado al sarcoma de Kaposi, KSHV

Empty A capsid

Scafold proteín

DNA filled capsid

CryoET del
virus KSHV

Perfiles de
densidad
Radial
Modelo propuesto de
ensamblaje del virus
KSHV
Todos los virus que replican en el
núcleo deben de sacar su
progenie hacia el citoplasma.

Este proceso requiere proteínas

virales específicas ya que no es
natural que el núcleo deje
escapar DNA o RNA no
procesado a través de las
membranas nucleares.

Algunas cápsides virales pueden

escapar del nucleo por ruptura
de la membrana nuclear a través
de proteínas virales tardías
específicas.
 Mecanismos de Salida desde el
núcleo celular
•Exporte nuclear: Proteína
“shuttle” (lanzadera)

• Egreso nuclear:
gemación a través de las
membranas nucleares

•Rompimiento de la
membrana nuclear
 Egreso nuclear por gemación

La cápside viral
migra hacia el
espacio perinuclear
produciendo un
intermediario
vesicular.

Esta vesícula se
funde con la
membrana nuclear
externa y la
partícula desnuda
es liberada al
citoplasma
Ensamblaje Citoplásmico del virus
• El citoplasma es el sitio de ensamblaje para la mayoría de los
virus.
• La mayoría de los virus helicoidales se ensamblan alrededor del
RNA o DNA genómico. Esto depende de interacciones entre las
proteínas y los ácidos nucléicos para ensamblarse. Los virus
RNA de cadena negativa pueden encapsidar su genoma casi
simultáneamente a la replicación.
• Los virus icosaedricos pueden ensamblarse por afinidad
alrededor del genoma viral.
• Los virus grandes núcleo-citoplásmicos contienen una
membrana interna, por lo que tienen un complejo y regulado
mecanismo de ensamblaje.
Movimiento intracitoplásmico para escape
 Gemación
Es usada por virus
envueltos que tienen
que adquirir una
membrana enriquecida
de proteínas virales.

Pueden gemar en cada

etapa de la via ER-
Golgi-membrana
celular.

Las nucelocápisdes o
las estructuras en
formación inducen una
curvatura en la
membrana celular.
 Gemación viral utilizando los complejos celulares
ESCRT
Los complejos ESCRT son
normalmente utilizados ESCRT (Endosomal Sorting Complex Required for Transport)
por las células para
funciones biológicas
como:
Remodelaje de la
membrana ( formación
intraluminal de vesículas,
autofagia o estados
terminales de la
citocinésis).

Los virus usan estos

complejos para gemar de
la célula.

Late assambly domains (L-

domains) reclutan la
maquinaria ESCRT
Virus Influenza, no usa ESCRT sino un canal
iónico protón selectivo.

La proteína M2 tiene una

hélice altamente
conservada, anfipática
localizada en la cola
citoplásmica de la proteína.

M2 media una alteración en

la curvatura de la membrana
que es dependiente de
colesterol.

El virus gema en vesículas

unilamelares.

Una mutación en esta

proteína inhibe la gemación.
 Lisis Celular
Viroporin: Some eukaryotic
lysogenic viruses like the
Adenoviridae, and
Picornaviridae encode
viroporins in the late phase of
infection in order to disrupt
the cell membrane.

Lytic phospholipids:
Phycodnaviridae may induce
the synthesis of lytic
phospholipids .

Lysozymes many prokaryotic Science. 2009 Nov 6;326(5954):861-5.

viruses encode lysozymes Viral glycosphingolipids induce lytic infection
which digest the cell wall, and cell death in marine phytoplankton.
resulting in lysis by osmotic Vardi A, Van Mooy BA, Fredricks HF, Popendorf
shock. KJ, Ossolinski JE, Haramaty L, Bidle KD.
Virology. Author manuscript; available in PMC Sep 24, 2009.
Published in final edited form as:
Virology. Mar 15, 2008; 372(2): 221–232.
Published online Dec 11, 2007. doi: 10.1016/j.virol.2007.11.008
PMCID: PMC2751282
NIHMSID: NIHMS43401
Mechanisms for enveloped virus budding: Can some viruses do without an ESCRT?
Benjamin J. Chena and Robert A. Lamba,b,*
 Hélice anfipática de M2

Dominios hidrofílicos

Dominios hidrofóbicos
 Ebola virus entry.

Grove J , and Marsh M J Cell Biol 2011;195:1071-1082

© 2011 Grove and Marsh

 Unión a través de receptores
Receptor: CD4 de linfocitos y macrófagos
Co-receptores: CCR5 en Macrófagos y CXCR4 en
linfocitos.

VAP: gp120 y gp41

Tras la unión, las gp120 y pg 41 sufren cambios

conformacionales exponiendo nueva regiones de
unión. Los cambios provocan que el virus se
aproxime a la membrana celular permitiendo la
fusión de membranas
Translational control in stress and apoptosis
Martin Holcik & Nahum Sonenberg
Nature Reviews Molecular Cell Biology 6, 318-
327 (April 2005)
Fases de la fusion

SHV