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9 Diagnóstico serológico
Precipitación, Aglutinación Pruebas
Inmunoenzimáticas
e Inmunocromatográficas

MSc. Judith Yali Rivera

MICROBIOLOGÍA
DIAGNOSTICO SEROLOGICO
SEROLOGÍA
• Basadas en la reacción antígeno anticuerpo
• Dos grandes categorías:
❖ Pruebas directas: determinan la presencia del
antígeno.
❖Pruebas indirectas: determinan la presencia de
anticuerpos específicos.
Técnicas
Primarias: Miden directamente la unión Ag‐Ac
❖ Inmunoprecipitación
❖Aglutinación
❖Fijación de complemento
❖Neutralización
Secundarias: La unión Ag‐Ac se detecta midiendo la formación de inmunocomplejos
❖ Fluorescencia: inmunofluorescencia
❖Radiactividad: radioinmunoanálisis
❖Enzimas: enzimoinmunoanálisis
❖Metales pesados: Inmunocromatografía
Técnicas de precipitación
• Se usa cuando el Ag es soluble (solución salina) POCO USO.
• Tipos:
Inmunoprecipitación en medio líquido
Detecta: Ag o Ac en una muestra, cuando se mezclan en fase
líquida
Nota: para que exista reacción Ag‐Ac, los dos componentes deben
estar en proporciones óptimas
Lectura: La reacción Ag‐Ac puede evidenciarse gráficamente en la
"curva de precipitación“

Efecto prozona: Ausencia de reacción inmunitaria cuando hay

altas concentraciones de Ac.
Zona de equivalencia: Todo el Ag y Ac se encuentra formando
complejos macromoleculares insolubles (teoría del retículo).
Técnicas de precipitación
Inmunoprecipitación en medio sólido:
Utiliza un soporte sólido gelificado
Dos categorías:
A) Inmunodifusión
Puede ser: Simple en tubo, Doble en placa, Simple en placa
Lectura: La reacción Ag‐Ac puede evidenciarse:
Formación de anillo o lineal: precipitación visible en la agar
B) Inmunoelectroforesis:
Se separa la mezcla de Ags por electroforesis y posteriormente
el antígeno que se desea detectar se hace reaccionar con un
anticuerpo específico colocado en un pocillo lateral
Técnicas de aglutinación
• Se usa cuando el Ag es particulado
• Más sensibles que las técnicas de precipitación
• Fundamento: Ag se encuentran ligados a eritrocitos o partículas látex
• En microbiología puede ser:
‐ Cualitativo
‐ Cuantitativo “titulación del suero”
Técnicas de aglutinación
Cualitativos:
❖Rosa Bengala: Brucelosis
❖ Monotest: Mononucleosis infecciosas (VEB)
❖Ag capsular cryptococcus neofromans: Meningitis criptocócica
❖Meningitis test: Meningitis bacterianas (H. Influenzae tipo b,
S. pnuemoniae, N. Meningitidis A, B, C, Y o W135 y E. coli K1)
❖Staphslide: Identificación de S. aureus
❖Aglutinación Streptococcus: Identificación de especies de
Streptococcus
Técnicas de fijación de complemento
• Fundamento: Inmunocomplejo Ag‐Ac activa el complemento y produce lisis
celular (eritrocitos y otras células).
• Proceso en dos fases:
❖Se incuba el suero problema con el Ag y el complemento
❖Se añade un sistema indicador, como eritrocitos de oveja recubiertos de Ac
específicos (hemolisinas).
Técnicas de fijación de complemento
‐Si se lisan los eritrocitos indica que hay complemento libre que no se fijó en la 1a
reacción y, por tanto, no hay Ac en el suero.
‐ En microbiología: brucelosis, micoplasma, coccidioidomicosis, histoplasmosis…
Técnicas de fijación de complemento
Inmunofluorescencia
• Utiliza Ac marcados (“Conjugados”) con colorantes
fluorescentes o fluorocromos (fluoresceína o
rodamina) como sistema indicador.
• Cuando se aplica luz UV en el microscopio de
fluorescencia, el fluorocromo emite luz visible:
verde, naranja/rojo o azul.
• Tipos:
❖Inmunofluorescencia directa (ID)
❖Inmunofluorescencia indirecta (IFI): más sensible
que la ID y permite hacer titulaciones del suero
mediante diluciones
Inmunofluorescencia
• La IF en microbiología: Virus: respiratorios, herpes, sarampión, parotiditis…
• Bacterias: Bordetella, rickettsia, chlamydia Parásitos: toxoplasma, echinococcus, tripanosoma
Radioinmunoanálisis (RAI)
• Marcadores: Radioisótopos (se cuantifica en contador de centelleo).
• Actualmente poco uso (desplazado por técnicas de enzimoinmunoensayos)
• Tipos:
❖RAI competitivo/directo: Se usa Ag marcado que es desplazado por el Ag no marcado de la
muestra
❖RAI no competitivo/indirecto: Se usa Ac secundario marcado con radiactividad.
Enzimoinmunoanálisis (EIA)
• Fundamento: Participación de una enzima y su
sustrato para desarrollar color visible, luz o
fluorescencia.
• Enzimas más utilizadas: peroxidasa, fosfatasa
alcalina, luciferasa, glucosa‐6‐P deshidrogenasa,
etc.
Técnicas:
❑Enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA)
❑Inmunoblotting (WB)
❑Inmunomigración (Lateral flow)
❑Inmunoanálisis por quimioluminiscencia (CLIA).
ELISA
• Utiliza placas de poliestireno con múltiples pocillos que se “tapizan”
con el Ag o con el Ac. La reacción se revela añadiendo el sustrato que
al actuar sobre la enzima del conjugado da lugar a un color visible que
es cuantificable mediante un colorímetro especial (“Lector de ELIS”).
Tipos ELISA
Inmunomigración
• Sinónimos: inmunocromatografía, lateral flow,
dipstick, “jabonera”
• Kits rápidos de diagnóstico microbiológico: VIH,
Mononucleosis, Chlamydia, antigenurias
legionella/pneumococo, S. pyogenes, C. difficile,
malaria, adenovirus, rotavirus, influenza….
• Utiliza Ac marcados con metales pesados: selenio
(color azul) y oro (color rosa).
• La muestra fluye a través de una tira reaccionando
con el Ac marcado, con el cual forma
inmunocomplejos, y después con un Ac frente al
antígeno inmovilizado, que captura los
inmunocomplejos y reacciona con el sustrato
dando color.
Inmunomigración
Inmunomigración
GRACIAS