TECNICAS DE

DIAGNOSTICO VIRAL

Por:
Rosina Julieta Camargo Hurtado
 Logro de sesión:
Al término de la sesión, el estudiante reconoce e
interpreta las principales técnicas de diagnostico viral
de importancia en Medicina Veterinaria y Salud
Publica.
SECCIÓN DE REFERENCIA

Contenido

• Generalidades el diagnostico viral

• Técnicas de diagnóstico
• ELISA
• Inmunocromatográfica
• Cultivo celular
SECCIÓN DE REFERENCIA

RESULTADO DE APRENDIZAJE DE LA SESIÓN

El estudiante conocerá las diferentes pruebas diagnósticas para

infecciones virales, así como el fundamento de cada una de
ellas.
SECCIÓN DE REFERENCIA

REFLEXIÓN DESDE LA EXPERIENCIA

• Determinar el carácter de
una enfermedad mediante
DIAGNÒSTICO el examen de sus signos
clinicos

¿COMO HACEMOS EL DIAGNÒTICO DE UN

AGENTE INFECCIOSO? Y ¿EN QUE
MOMENTO?
SECCIÓN DE REFERENCIA

CONTENIDO

• Infección aguda y crónica

• ¿Para qué nos sirve el diagnostico
viral?
• Retos del diagnóstico viral
• Métodos de diagnóstico virtual
• Diagnóstico rápido
• ELISA
• Inmunocromatografia
 INFECCION AGUDA Y CRONICA
SECCIÓN DE REFERENCIA

Aguda

Latente

Persistente

Recurrente-latente
SECCIÓN DE REFERENCIA
SECCIÓN DE REFERENCIA
SECCIÓN DE REFERENCIA

¿Para qué nos sirve el diagnostico viral?

• Naturaleza de la infección • Tratamiento

• Pronostico • Epidemiologia
SECCIÓN DE REFERENCIA

¿Para qué nos sirve el diagnostico?

ANTIBIOTICOS TERAPIA DE SOPORTE

Aplicación innecesaria De acuerdo al cuadro
Prevenir infecciones clínico
secundarias Prevenir propagacion
Evitar la deshidratacion

ANALGESICOS PREVENCION Y
Que pueden complicar COMPLICACION
la enfermedad O secuelas
SECCIÓN DE REFERENCIA

¿Para qué nos sirve el diagnostico?

• DISTRIBUCION
GEOGRAFICA
• Contención de la
enfermedad-Prevención de
nuevos casos
• Variabilidad de virus –
Evolución y evaluación de
riesgos.
• Toma de decisiones
SECCIÓN DE REFERENCIA

RETOS EN EL DIAGNOSTOCO VIRAL

• Los virus son muy pequeños y son parásitos obligados por lo

que no se pueden multiplicar en cualquier medio de cultivo.

¿Qué podemos detectar del virus?

• EMBRION DE POLLO
• PROTEINAS estructurales • RESPUESTA INMUNE (Ac) • MODELOS ANIMALES
• MATERIAL GENETICO • VIRUS COMPLETO • CULTIVOS CELULARES
SECCIÓN DE REFERENCIA

VIRUS COMPLETO

VENTAJAS

• La detección es mucho más fácil

porque se puede detectar en
poca muestra.
• Va a detectar solo virus
infectivos.
• Es más precisa.
DESVENTAJA
• Toma tiempo en tener el
resultado.
• Es costosa, requiere mucha
preparación previa.
SECCIÓN DE REFERENCIA

PARTES DEL VIRUS

VENTAJAS

- Es rápida
- Es especifico
- La detección de ACIDOS
NUCLEICOS, se pueden DEVENTAJAS
amplificar (p.e. PCR); por tanto,
con una pequeña muestra se - Puede detectar virus no
puede tener mayores infectivos – Falsos positivos
probabilidades de detectar.
SECCIÓN DE REFERENCIA
RESPUESTA INMUNE
VENTAJAS
- Da mayor información acerca del
momento de la infección que
está teniendo el paciente.
- Puede ayudar a dar información
del tipo de transmisión.
- Disminuye el contacto directo con
el virus.
DESVENTAJA
- En etapas tempranas de la
infección me puede dar etapa en
la se encuentra la infección
falso negativo.
- Si hay memoria inmunológica
(P.e. post infección o
vacunación) puede también dar
falsos positivos.
 ¿QUE METODOLOGIA PODEMOS USAR
SECCIÓN DE REFERENCIA

PARA EL DIAGNOSTICO VIRAL?

METODOLOGIAS USADAS

PROPAGACION VIRAL BIOLOGIA MOLECULAR

Cultivos celulares PCR
Modelos animales Secuenciación
Embrion del huevos Hibridación

INMUNOLOGICAS
ELISA
WB
Inmunocromatografia
Aglutinacion
Inmunoflorecencia
SECCIÓN DE REFERENCIA

DIAGNÒSTICO RÀPIDO

• Se consideran aquellas que nos dan el resultado

en menos de 8 horas, se hace comparación con las
técnicas convencionales de cultivo bacteriano (24
hrs) o viral (48 hrs).
SECCIÓN DE REFERENCIA

TIPOS DE PRUEBAS RAPIDAS

PCR
INMUNOCRO HIBRIDACIÒN
MATOGRAFIA

TECNICAS
RAPIDAS
OTRAS
MOLECULARES

AGLUTINACIÒN

ELISA
SECCIÓN DE REFERENCIA

ELISA Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas

• Nos permite identificar y

cuantificar determinadas
moléculas (sust. como proteínas,
hormonas y factores de
crecimiento)
• Distintos tipos de soluciones
(sangre, orina, exudados, tractos
de tejidos, incluso en cultivos
celulares)
SECCIÓN DE REFERENCIA
ELISA

FUNDAMENTO:
• La solución en la q tenemos la molécula problema vamos a intentar
inmovilizarla en una superficie en una placa.
• En esta placa de polietileno se enfrenta la molécula problema (ag) y con
otra molécula especifica que lo detecta que son los ac.

• Los ac van a reconocer determinadas estructuras dentro del antígeno

• Hay dos tipos fundamentales de ac Los ac monoclonales (q reconocen una
sola estructura o epítopo dentro del ag) y hay ac policlonales (mezcla de acs q
son capaces de reconocer diferentes estructuras o epítopos dentro del
mismo ag)
 ELISA DIRECTO
SECCIÓN DE REFERENCIA

Color

ES RAPIDA Y
SENCILLA, xq la
unión de la Sustrato
enzima va
Antigeno
directamente
unida al ac.
ESPECTROFOTOMETRO
SECCIÓN DE REFERENCIA

ELISA INDIRECTO

Es más SENSIBLE
q el método
directo.
 SECCIÓN DE REFERENCIA

ELISA SANDWICH

Es un método MAS
ESPECIFICA y tb tiene
alta especificidad y
una
AMPLIFICACION de
la señal a detectar
 ELISA COMPETITIVO
SECCIÓN DE REFERENCIA

• Se usa cuando la
estructura del ag es
complicada
• Tenemos
que epitopos (zonas
del ag) q son difíciles
de detectar
• Cuando tenemos muy *ac-ag de problema se elimina, tenemos más color – menos ag
pocas cantidades en la muestra problema
*ac-ag de placa se elimina, tenemos menos color – más ag en
de ag. la muestra problema
 INMUNOCROMATOGRAFÌA
SECCIÓN DE REFERENCIA

• Detección de antígenos o anticuerpos

FUNDAMENTO:

• P.e.
• Influenza A
• Parvovirus

https://www.youtube.com/watch?v=z07CK-4JoFo
SECCIÓN DE REFERENCIA

INMUNOCROMATOGRAFÌA
variante
AC marcado es color
con fluorescencia

Tiene mayor
sensibilidad
SECCIÓN DE REFERENCIA

INMUNOCROMATOGRAFÌA
Procedimento
SECCIÓN DE REFERENCIA

CULTIVO CELULAR

• Diagnostico viral directo

USOS:
- Ver propagación viral
- Detección de cáncer
- Toxicidad de algunos compuestos
- Producción de vacunas
SECCIÓN DE REFERENCIA

CULTIVO CELULAR

• Conjunto de técnicas de aislamiento de células y obtención de

poblaciones celulares in vitro.
• Pueden crecer y mantener sus propiedades morfológicas, fisiológicas,
bioquímicas y genéticas.
• Crecen en suspensión (liquida).
• O crecen en monocapa botella de vidrio o plástico (adherentes) por
mas de 24 h en condiciones controladas.
SECCIÓN DE REFERENCIA

CULTIVO CELULAR

• Diagnostico viral directo

Secundarias Líneas continuas

50-70 pases (divisiones in (n) pases (divisiones in vitro)
vitro) p.e. Cèlulas Vero-riñón de
p.e. Fibroblastos diploides mono (HSV 1 y 2)
humanos (HVS-3)
SECCIÓN DE REFERENCIA

CULTIVO CELULAR

Pasos:
1. Disponer de cultivos celulares en buenas
condiciones

2. Inocular la muestra clínica y seguir la

evolución del cultivo

3. Identificar el virus aislado

SECCIÓN DE REFERENCIA

ACTIVIDAD ASINCRÓNICA

https://www.youtube.com/watch?v=GE8JlP0PB
EM

https://www.youtube.com/watch?v=n3pCR3-
S5uM

https://www.youtube.com/watch?v=QThpXUHjcZ
M&ab_channel=Abnova
SECCIÓN DE REFERENCIA

Referencias bibliográficas
• Gonzales, JM. 2010. Técnicas virológicas y virología clínica. National Library of Medicine.
Center. doi: 10.1016/B978-84-458-2029-2.50036-7
Apliquemos lo aprendido

•¿Qué pruebas podría utilizar para el

diagnóstico de antígenos virales?

•Describa el fundamento de 2
pruebas de diagnóstico.