UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL”

“AISLAMIENTO DE BACTERIAS CELULOLÍTICAS

PRESENTES EN DIVERSOS AMBIENTES TERRESTRES”

CURSO:
BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL

DOCENTE:
Dr. GUEVARA GONZALES, JUAN JOSE
INTEGRANTES:
Arteaga Rios, Paul Lenin
Caipo Zavala, Jerry Alexander
Cruz León, Jean Paul
Herrera Benites, Carlos
Jiménez Fabián, Jazmín Valeska Johanna

PRÁCTICA: N°1

CICLO: VII SECCIÓN: A

Trujillo - Perú
2020
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AISLAMIENTO DE BACTERIAS CELULOLÍTICAS PRESENTES EN DIVERSOS

AMBIENTES TERRESTRES

I. INTRODUCCIÓN
La celulosa es el carbohidrato más abundante en la naturaleza, y una
fuente importante de carbono utilizada como materia prima en biotecnología
para la obtención de productos de interés 2. La celulosa es un polímero de
origen vegetal constituido por 15 000 moléculas de D-glucosa; forma una
estructura rígida de cadenas paralelas unidas por puentes de hidrógeno 1.

Los microorganismos encargados de la degradación de la celulosa,

principales componentes de la pared celular de las plantas incluyen
bacterias, hongos y actinomicetes, aerobios, anaerobios, mesofílicos y
termofílicos 2, de los géneros Bacillus sp., Clostridium sp., Streptomyces y
hongos como Sclerotium sp., Aspergillus sp., Achlya sp., Rhizopus sp. y
Penicillum sp.1

A estos microorganismos los podemos encontrar en suelos agrícolas donde

las plantas en descomposición, principalmente hojas, constituyen la fuente
carbonada a partir de la cual pueden obtener energía para sus procesos
metabólicos5.

Para que los hongos y bacterias degraden la celulosa, sintetizan unas

enzimas llamadas celulasas las cuales desempeñan un papel importante en
el ciclo del carbono en el suelo, degradando desechos vegetales que están
compuestos en su mayoría de este polímero. Esta actividad cobra gran
importancia en agroindustrias debido a que la degradación de este polímero
se relaciona directamente con la fertilidad y calidad del suelo. El pH óptimo
para la actividad de las celulasas producidas por bacterias abarca un
amplio rango, el cual incluye condiciones ácidas y alcalinas. Por otro lado,
las celulasas producidas por hongos requieren generalmente un pH ácido 4.
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II. OBJETIVO
 Hacer un análisis sobre el aislamiento de microorganismos
celulolíticas en un suelo agrícola.

III. MATERIALES
 Material biológico
- Suelo agrícola con rastrojo
 Medios de cultivo
- Caldo DUBOS
- AGAR DUBOS CELULOSA
 Otros materiales
- Tiras de papel de celulosa
- Agua destilada
- Mortero
- Láminas porta y cubre objetos
- Set de GRAM
- Microscopio
- Vaso de precipitación de 50mL
- Asa bacteriológica
- Pinzas estériles.

IV. PROCEDIMIENTO
a) Obtención y transporte de la muestra
Recolectar 250g de suelo con rastrojo, a 10cm de profundidad, de los
alrededores de la facultad de Ciencias Biológicas, una hora antes de
realizar la práctica.
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b) Aislamiento primario
1. Pesar 10g. de suelo y realizar una dilución de 10 -1 de la muestra.
2. Tomar 5ml de la dilución, luego verter en un frasco vaso de
precipitación.
3. Agregar 30 ml de caldo DUBOS. Colocar una tira de papel celulosa
en el interior sumergiéndolo hasta dejar una pequeña parte intacta.
Rotular como sistema problema (Sistema A).
4. Preparar un sistema control. No agregar suspensión de la muestra
(Sistema B).
5. Incubar ambos sistemas a temperatura ambiente por 7 días.
6. Pasado el tiempo de incubación, retirar las tiras de papel celulosa
con pinzas estériles y colocar en un mortero para posteriormente
triturar.
7. Con un asa bacteriológica tomar una muestra del mortero y realizar
una coloración GRAM.
8. Luego de comprobar la presencia de bacterias celulolíticas, sembrar
en AGAR DUBOS CELULOSA por estriado y llevar a incubar a 37°C
por 3 días.
9. Realizar los pasos 6,7 y 8, para ambos sistemas (A y B).

c) Aislamiento secundario
- Realizar resiembras en AGAR DUBOS CELULOSA, hasta la
obtención de cultivos axénicos.

V. RESULTADOS
- En el aislamiento primario se observó, en el sistema problema, la
presencia de zonas moteadas en la superficie del papel de
celulosa sumergido en caldo DUBOS. esto indicó la presencia de
posibles bacterias celulolíticas.
- Al realizar la tinción de GRAM se pudo observar las
características de las bacterias celulolíticas: cocobacilos GRAM
(-), pequeños (Figura 1).
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- Las características de las colonias en el AGAR DUBOS

CELULOSA fueron las siguientes:
o Colonias cremosas, de bordes regulares, de color
blanquecino y de lento crecimiento. (Figura 2)

Fig. 1: Observación microscópica de bacterias celulolíticas GRAM negativas

aisladas a partir de muestras de suelo agrícola con rastrojo. Aumento:1000 A.

Fig. 2: Observación macroscópicas, en placa Petri con agar Dubos Celulosa, de

colonias bacterianas celulolíticas GRAM negativas aisladas a partir de muestras
de suelo agrícola con rastrojo.

VI. COMENTARIO
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En el estudio de "Toscazo y Burgos, 2006 " 7. Al hacer la descripción

microscópica de los aislamientos bacterianos obtenidos, en sus resultados
observaron que la mayoría de morfotipos predominantes fueron cocobacilos
GRAM (-), al igual que también obtuvieron morfotipos correspondiente a
cocobacilos GRAM (+). Al efectuar el análisis microscópico observaron que
los cocobacilos Gram negativos estuvieron presentes en todas las etapas
de descomposición de la hoja de Bromelia, las cuales estuvieron presentes
en todas las edades de descomposición menores a seis meses, mientras
que los cocos y diplococos solo se presentaron en la muestra de hoja que
tenían entre cinco y seis meses de descomposición. Entonces a partir de
estos resultados se podría suponer que las etapas de descomposición
están asociadas a determinados morfotipos bacterianos, es decir presencia
de distintas bacterias en cada etapa de descomposición. Entonces ¿Qué se
podría rescatar de esto? Que los cocobacilos GRAM (-) no solo aparecen
en etapas de descomposición de la planta, sino que también están
presentes en muchos medios, y en este informe va enfocado a su presencia
en suelos agrícolas (muestra de suelo de la facultad de Ciencias
Biológicas). Mientras que en el trabajo de Ibáñez (2019), la diversidad de
microorganismos celulolíticos en los suelos de cultivo se debió
principalmente a la menor disponibilidad de carbono, de nitrógeno y fósforo,
que entre los elementos que componen los sustratos son los
macronutrientes fundamentales para el desarrollo microbiano, además el
contenido de celulosa en los bosques y tierras de cultivo depende de la
clase de vegetación o cultivo, de la periodicidad del mismo y época del año,
y en los suelos agrícolas; por consiguiente los miembros de cocobacilos
GRAM (-) mayormente habitan en el agua y el suelo, y también forman
parte de la flora normal humana de la piel.
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¿Cómo se determinó que la bacteria tenía actividad celulolítica? En el

aislamiento primario se utilizó el caldo Dubos, se esterilizó en autoclave, el
cual va a seleccionar a las bacterias celulolíticas, y se observaron
actividades celulolíticas, es decir presencia de zonas moteadas, lo que se
entiende como manifestaciones de algunas bacterias celulolíticas;
posteriormente para la identificación bacteriana en el presente informe se
determinó las características tintoriales y morfológicas.

La identificación por coloración permite conocer los detalles morfológicos de

las bacterias, existen varias técnicas empleadas, pero la coloración de
GRAM permite distinguir entre bacterias GRAM (+) y GRAM (-), debido a la
diferente estructura química que se presenta en la pared celular de las
bacterias. La prueba de tinción GRAM revela la morfología de las bacterias,
en este caso celulolíticas, pudiendo ser micrococos y bacilos. El resultado
obtenido fue una tinción color rosado, lo que indica la presencia de
bacterias GRAM negativas, y contrastando con la información de la
práctica, se encontró cocobacilos GRAM negativos, pudiendo encontrarse
otras bacterias GRAM negativas.

El agar Dubos celulosa es un importante medio de cultivo para la

demostración de presencia de bacterias celulolíticas, debido a que sirve
como una fuente de carbohidratos para esas bacterias, lo que hace que se
alimenten y crezcan, para posteriormente desarrollar su actividad
degradadora. Luego de realizar el cultivo en este medio, se espera obtener
un cultivo axénico, en el cual se cultiva un organismo en específico, para
así establecer la capacidad celulolítica de una sola clase de
microorganismo.
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Descripción de las características morfológicas y tintoriales de cepas

aisladas en el trabajo de (Guerrero, 2011).

Fuente: Ana Carolina Guerrero Calle.

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VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Buitrago S, Sánchez E, Guerrero H. Aislamiento de microorganismos
amilolíticos, celulolíticos y lignolíticos a partir del suelo de humedales de
Bogotá. Rev Sennova. 2014;1(1).
2. Gaitan, D. y Lara, C. (2007). Aislamiento y evaluación de microorganismos
celulolíticos a partir de residuos vegetales frescos y compost generados en
un cultivo de crisantemo (Dendranthema grandiflora) (Tesis de maestría.
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Pontificia Universidad Javeriana. Colombia. Recuperado de :

https://revistas.unitru.edu.pe/index.php/facccbiol/article/view/2732/2819.
3. Guerrero, A. C. (2011). Aislamiento de Bacterias Ruminales degradadoras de
Celulosa (Tesis Postgrado). Universidad Nacional de Trujillo, La Libertad-
Perú.
4. Gutiérrez R. V, Pinzón E. Á, Casas J, Martínez MM. Determinación de la
actividad celulolítica del suelo proveniente de cultivos de Stevia rebaudiana
Bertoni. Agron Colomb. 2008;26(3):497–504.
5. Hatami. S. Alikhani. H.A. Besharati. H. Salehrastin. N. Afrousheh. M. &
Jahromi. Z. Y. Investigation on aerobic cellulolytic bacteria in some of north
forest and farming soils. Am-Euras J Agric & Environ Sci. (2008) ;3
(5):713-716.
6. Ibañez, J., Estela, R., Lopez, Y, Santamaria, N., Mori, R. y Gutierrez, M. (2019).
Aislamiento y evaluación de la actividad celulolítica de bacterias
rizosféricas del distrito de bagua, amazonas. Universidad Nacional de
Trujillo. Vol. 39, (2). DOI: http://dx.doi.org/10.17268/rebiol.2019.39.02.04
7. Toscazo, F. Y & Burgos, E. (2006). CARACTERIZACIÓN DE
MICROORGANISMOS ASOCIADOS A LA DESCOMPOSICIÓN DE
HOJAS CONSUMIDAS POR Tremarctos ornatus (URCIDAE) Y
POSIBLE RELACIÓN EN SU DATACIÓN. Acta Biológica Colombiana.
Vol. (12 S),109 -114. Recuperado de:
http://www.scielo.org.co/pdf/abc/v12s1/v12s1a9.pdf