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CURSO:
BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL
DOCENTE:
Dr. GUEVARA GONZALES, JUAN JOSE
INTEGRANTES:
Arteaga Rios, Paul Lenin
Caipo Zavala, Jerry Alexander
Cruz León, Jean Paul
Herrera Benites, Carlos
Jiménez Fabián, Jazmín Valeska Johanna
PRÁCTICA: N°1
Trujillo - Perú
2020
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
I. INTRODUCCIÓN
La celulosa es el carbohidrato más abundante en la naturaleza, y una fuente
importante de carbono utilizada como materia prima en biotecnología para la
obtención de productos de interés 2. La celulosa es un polímero de origen
vegetal constituido por 15 000 moléculas de D-glucosa; forma una estructura
rígida de cadenas paralelas unidas por puentes de hidrógeno1.
II. OBJETIVO
Hacer un análisis sobre el aislamiento de microorganismos
celulolíticas en un suelo agrícola.
III. MATERIALES
Material biológico
- Suelo agrícola con rastrojo
Medios de cultivo
- Caldo DUBOS
- AGAR DUBOS CELULOSA
Otros materiales
- Tiras de papel de celulosa
- Agua destilada
- Mortero
- Láminas porta y cubre objetos
- Set de GRAM
- Microscopio
- Vaso de precipitación de 50mL
- Asa bacteriológica
- Pinzas estériles.
IV. PROCEDIMIENTO
a) Obtención y transporte de la muestra
Recolectar 250g de suelo con rastrojo, a 10cm de profundidad, de los
alrededores de la facultad de Ciencias Biológicas, una hora antes de
realizar la práctica.
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b) Aislamiento primario
1. Pesar 10g. de suelo y realizar una dilución de 10-1 de la muestra.
2. Tomar 5ml de la dilución, luego verter en un frasco vaso de
precipitación.
3. Agregar 30 ml de caldo DUBOS. Colocar una tira de papel celulosa
en el interior sumergiéndolo hasta dejar una pequeña parte intacta.
Rotular como sistema problema (Sistema A).
4. Preparar un sistema control. No agregar suspensión de la muestra
(Sistema B).
5. Incubar ambos sistemas a temperatura ambiente por 7 días.
6. Pasado el tiempo de incubación, retirar las tiras de papel celulosa con
pinzas estériles y colocar en un mortero para posteriormente triturar.
7. Con un asa bacteriológica tomar una muestra del mortero y realizar
una coloración GRAM.
8. Luego de comprobar la presencia de bacterias celulolíticas, sembrar
en AGAR DUBOS CELULOSA por estriado y llevar a incubar a 37°C
por 3 días.
9. Realizar los pasos 6,7 y 8, para ambos sistemas (A y B).
c) Aislamiento secundario
- Realizar resiembras en AGAR DUBOS CELULOSA, hasta la
obtención de cultivos axénicos.
V. RESULTADOS
- En el aislamiento primario se observó, en el sistema problema, la
presencia de zonas moteadas en la superficie del papel de
celulosa sumergido en caldo DUBOS. esto indicó la presencia de
posibles bacterias celulolíticas.
- Al realizar la tinción de GRAM se pudo observar las características
de las bacterias celulolíticas: cocobacilos GRAM (-), pequeños
(Figura 1).
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VI. COMENTARIO
En el estudio de "Toscazo y Burgos, 2006 " 7. Al hacer la descripción
microscópica de los aislamientos bacterianos obtenidos, en sus resultados
observaron que la mayoría de morfotipos predominantes fueron cocobacilos
GRAM (-), al igual que también obtuvieron morfotipos correspondiente a
cocobacilos GRAM (+). Al efectuar el análisis microscópico observaron que
los cocobacilos Gram negativos estuvieron presentes en todas las etapas de
descomposición de la hoja de Bromelia, las cuales estuvieron presentes en
todas las edades de descomposición menores a seis meses, mientras que
los cocos y diplococos solo se presentaron en la muestra de hoja que tenían
entre cinco y seis meses de descomposición. Entonces a partir de estos
resultados se podría suponer que las etapas de descomposición están
asociadas a determinados morfotipos bacterianos, es decir presencia de
distintas bacterias en cada etapa de descomposición. Entonces ¿Qué se
podría rescatar de esto? Que los cocobacilos GRAM (-) no solo aparecen en
etapas de descomposición de la planta, sino que también están presentes en
muchos medios, y en este informe va enfocado a su presencia en suelos
agrícolas (muestra de suelo de la facultad de Ciencias Biológicas). Mientras
que en el trabajo de Ibáñez (2019), la diversidad de microorganismos
celulolíticos en los suelos de cultivo se debió principalmente a la menor
disponibilidad de carbono, de nitrógeno y fósforo, que entre los elementos
que componen los sustratos son los macronutrientes fundamentales para el
desarrollo microbiano, además el contenido de celulosa en los bosques y
tierras de cultivo depende de la clase de vegetación o cultivo, de la
periodicidad del mismo y época del año, y en los suelos agrícolas; por
consiguiente los miembros de cocobacilos GRAM (-) mayormente habitan en
el agua y el suelo, y también forman parte de la flora normal humana de la
piel.
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