Universidad Regional Amazónica Ikiam

Práctica 2 Aislamiento de DNA genómico

Nombre: Daniel Plazarte

Objetivos

X Comprender la función de los kits de aislamiento genómico dentro del laboratorio

X Detallar los pasos a realizar para poder extraer ADN

X Conocer los pasos que se deben realizar para poder extraer ADN genómico.

Introducción

Si existe una compilación informativa capas de detallar a un organismo vivo está es sin
duda el ADN o ácido desoxirribonucleico, está contiene la información hereditaria de
los seres humanos, está información es almacenada como un código el cual está
compuesto por cuatro bases que son Adenina (A), Guanina (G), Timina (T) y Citosina
(C) que todas en conjunto forman pares de bases, cabe mencionar que la mayor parte
del ADN se encuentra en el núcleo celular, pero también es posible encontrarla en las
mitocondrias, un ejemplo relevante es que actualmente el estudio de la variación
genética tanto de individuos como de poblaciones y especies con la finalidad de
explicar los patrones y procesos ecoógico-evolutivos se realizan mediante marcadores
moleculares, estos marcadores son segmentos de ADN con o sin función conocida
que proporcionan información que ayuda a distinguir a los individuos.

La extracción del ADN genómico consiste en el aislamiento y purificación de moléculas

de ADN basándose en las características fisicoquímicas de esta molécula, la unión de
los nucleótidos se da entre el grupo fosfato y el azúcar, mediante enlaces fosfodiéster
pudiendo dar lugar al esqueleto de la molécula, cabe mencionar que el proceso de
extracción de ADN genómico posee una relevancia notoria dentro de ámbito científico
y más concretamente en la rama de la biología molecular. ( Vélazquez et al., 2014)

Metodología

En la presente práctica se realizó el aislamiento de ADN genómico de una bacteria

Gram negativa, específicamente Escherichia coli, al identificar la bacteria se realizó los
siguientes pasos.

Lisis

Para realizar el proceso de lisis se tranfirio 1ml de cultivo de E.coli a un tubo de 1,5ml
con la ayuda de la micro pipeta la cual como se aprendió en la práctica anterior sirve
para extraer volúmenes pequeños en cantidades exactas, una vez realizado este paso
se llevó el tubo a la centrifuga donde se centrifugó la muestra a 13.000 rpm durante 2
minutos, al terminar la centrifugación podremos obtener el pellet el cual se forma en la
base del tubo, así mismo nuevamente con la micropipeta se separó el sobrenadante
existente, posteriormente se adiciono 600ul de la solución de lisis al tubocon el pellet y
se homogenizó durante 60 segundos en el vortex, luego la muestra se incubo con una
temperatura de 80°C durante 5 minutos en baño maría, al terminar esto se debe hacer
que el tubo llegue a temperatura amiente con más rapidez y se extrajo el
sobrenadante para separarlo del pellet, como paso final dentro del proceso de lisis se
adicionó 3ul de solución RNAsa al tubo.

Precipatación y lavado

Al adicionar la solución RNAsa a la solución se mezcló por imersión de 2 a 5 veces

llevándola a baño maría por 30 minutos a una temperatura 37°C, al terminar la
incubación se separó el sobrenadante dejando intacto el pellet para posteriormente
agregar 200ml de solución de proteínas, el vórtex se utilizó para mezclar y luego poder
incubar en hielo por 5 minutos, transcurrido este periodo se centrifugó el tubo a
13,000-16.000 xg por 3 minutos, teniendo como resultado después de la centrifugación
al pellet blanco, luego en un tubo de 1,5 ml se transfirió 400ul de isopropanol, donde
nuevamente en este tubo se adiciono el sobrenadante que contenia el pellet blanco
donde fue posible observar al ADN, luego se repitió la misma frecuencia de
centrifugación pero con la diferencia de que ahora fue por un periodo de 2 minutos,
luego se decantó el sobrenadante y se adicionó 400ul de etanol al 70% para lavar el
ADN y como paso final se aspiró el etanol con la micropipeta sin tocar el pellet y el
tubo se invirtió sobre un papel absorbente, permitiendo que el pellet se secara.

Resuspensión

Para la resuspensión se adicionó 100ul de solución rehidratadora de ADN incubándola

a 65°C durante 1 hora así mismo la solución se debio mezclar con la ayuda de mover
el tubo con tingasos ligeros, consecuente con esto se rehidrato el ADN mediante la
incubación de la solución durante toda la noche a temperatura ambiente para
finalmente almacenar el ADN con una temperatura de 2-8°C

Resultados
Discusión

En base a los resultados obtenidos se puede mencionar que los métodos realizados
dentro de la práctica permitieron realizar la extracción del ADN, tomando en cuenta
que los resultados se verán afectados si no se tiene cuidado con aspectos como la
cantidad que absorbe la micro pipeta o la temperatura empleada en los procesos que
la requieren, siendo necesario de que esta sea exacta puesto que como se sabe las
enzimas trabajan y pueden actuar bajo cierto rango de temperatura, si se sobre pasa
este rango la enzima no podrá actuar al verse afectadas sus propiedades.

La temperatura cumple en rol fundamental dentro de las reacciones químicas y

enzimáticas ya que si la temperatura aumenta también aumenta la energía cinética de
las moléculas aumentando la velocidad de reacción, sin embargo si la temperatura
aumenta en exceso se alteran los procesos fisiológicos al producirse la
desnaturalización de las enzimas. (Fernández, G & Johnston, M 2006)

Referencias

Velázquez, L. P. A., Martínez, M. D. C. A., & Romero, A. C. (2014). Extracción y

purificación de ADN. Herramientas moleculares aplicadas en ecología:

aspectos teóricos y prácticos, 1.

Fernández, G., & Johnston, M. (2006). Crecimiento y temperatura. Squeo, FA y

Cardemil, L. Fisiología Vegetal. Chile: Ediciones Universidad de La Serena, 28.