Extracción de ácidos nucleicos de células vegetales

Sofia Parra-Gutiérrez (1), Katterin L. Rodríguez-Garzón (1), Luisa F. Sánchez-Santos (2)

(1) Facultad de Ciencias, Programa Microbiología industrial, Pontificia Universidad, Bogotá,
Colombia. (e-mail: parrags@javeriana.edu.co; ro.katterin@javeriana.edu.co)
(2) Facultad de Ciencias, Programa Bacteriología, Pontificia Universidad, Bogotá, Colombia.
(e-mail: Lf_sanchezs@javeriana.edu.co)

Elaborado oct. 02, 2023; Versión final oct. 09, 2023

Resumen

En este laboratorio se realizó la extracción de ácidos nucleicos de células vegetales, el cual fue realizado
para conocer como funcionan ciertos componentes para la extracción y permite visualizar dos fases, donde
la superior corresponde al ADN de las células vegetales de un pimentón. La metodología inició cortando
en pequeños pedazos para facilitar el macerado debido a que debe quedar en la medida de lo posible,
totalmente líquido, al cabo de unos minutos se agregó el buffer y se macero nuevamente, se repitió la
agregación del buffer y después de macerar, con ayuda de un embudo y una gasa, se filtró el macerado para
extraer el líquido del pimentón un Erlenmeyer, este se pasó a un beaker, en donde se le agregaron 1g de
papaína al tubo de ensayo, se dejó reposar en plena quietud por 10 minutos, pasado este tiempo se le agrego
etanol al 95%, el cual permitio la formación de las dos fases, en la primera fase se comienza a ver el ADN
del pimenton, sin embargo, al no notarse mucho, con la ayuda de la profesora se mezclaron las dos fases y
esto permitio ver de una manera mas amplia y de mayor cantidad el ADN del pimenton.

Palabra clave: Extracción, macerado, ADN, fases, células

Abstract

In this laboratory, nucleic acids were extracted from plant cells and allows the observation of the DNA of
these plant cells, paprika was used for the elaboration of this experiment, It began cortanto in small pieces
to facilitate the maceration because it must be as far as possible, Totally liquid, after a few minutes the
buffer was added and macero again, the aggregation of the buffer was repeated and after macerating, with
the help of a funnel and gauze, the macerate is filtered to extract the liquid with which we were going to
work in an Erlenmeyer, This was passed to a beaker, from this, 1g of papain was added to a tube and the
previously extracted liquid was added, It was left to rest in full stillness for 10 minutes, after this time 95%
ethanol was added, which allowed the formation of the two phases, in the first phase begins to see the DNA
of paprika, However, not noticing much, with the help of the teacher the two phases were mixed and this
allowed to see in a broader way and in greater quantity the DNA of paprika.

Keyword: Extraction, macerate, DNA, phases, cells

Introducción

La extracción del ADN en células vegetales permite analizar y obtener el material genético de las
plantas para realizar investigaciones, estudios genéticos de las mismas. La extracción de ADN
puede hacerse con diversos métodos, pero siguen un enfoque que implica romper las paredes
celulares de las plantas y aislar el ADN de otras moléculas y componentes celulares. En este caso
la papaína fue utilizada para la extracción de ADN, ya que esta encima contiene glúcidos, ácidos
orgánicos y una mezcla de enzimas, las cuales una de ellas son las proteasas que actúan
rompiendo los enlaces peptídicos en la cadena peptídica, dentro de estas enzimas proteolíticas, la
que más abunda es la papaína la cual es una proteína constituida por 212 aa, que se encuentran
enrollados en dos partes separadas por un puente, es una enzima de baja especificidad que
hidroliza tanto las proteínas como los péptidos de pequeño tamaño. (ARIEL AMARU
CALZADA et al., 2004)

Desarrollo experimental

Para la extracción de ácidos nucleicos (ADN) en células vegetales (en este caso de pimentón) se
realizó un paso a paso propuesto para el laboratorio. En primera instancia se tomó un papel
aluminio en el cual se pesaron 30 g de pimentón cortado y posteriormente se maceraron en un
mortero. Se adicionaron 3mL de solución Buffer de extracción y se macero la muestra por 5
minutos. Nuevamente se adiciono 3mL de Buffer de extracción macerando la muestra por 5
minutos más. En un embudo y con una gasa se filtro el macerado recuperando todo el líquido
extraído en un vaso de precipitado. Se pesó 1g de papaína y se adicionó al líquido obtenido
mezclándolo con una varilla de vidrio lentamente.

Se dejo reposar la muestra por 10 minutos a temperatura ambiente sin moverla. Pasado los 10
minutos se adiciono cuidadosamente etanol al 95% por las paredes del vaso (con pipeta Pasteur)
hasta completar un volumen equivalente al de la muestra. Se observó la formación de 2 fases, la
fase superior mostró formación de filamentos blancos, los cuales corresponden al ADN aislado de
las células vegetales del pimentón.

Resultados

Se obtuvo la formación de dos fases en la muestra, de las cuales se puede observar los filamentos
extraídos del pimentón.

Tabla 1. Procedimientos
 Imagen 1. Resultados

Debido a que en las dos fases no podia verse muy bien el ADN, se decidio mezclarlas y asi verlo de forma
mas amplia

Imagen 2. Resultados

Análisis y Discusión

Los ácidos nucleicos son polímeros de nucleótidos unidos por enlaces fosfodiéster, se clasifican por ácido
desoxirribonucleico (DNA) y ácido ribonucleico (RNA), los nucleótidos del DNA forman una hélice por
dos hebras antiparalelas que están unidas por puentes de hidrogeno, mientras que el DNA, está unido a
nucleoproteínas, cuando se desean separar estos componentes, se aplica ácidos o concentraciones altas en
sales .En este caso de acuerdo al tipo de célula vegetal en estudio, para aislar los ácidos nucleicos toca
romper la membrana y la pared celular a través de métodos físicos, químicos o enzimáticos, que en este
caso fue con el buffer de extracción, y luego la purificación de los acidos nucleicos mediante la extracción
de lípidos y proteínas, en lo cual con el etanol al 95% se realizó a recuperación. (Enriquez et al., 2014)Click
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El buffer de extracción suele ser una solución que contiene componentes químicos diseñados para romper
la pared celular de las células vegetales. La pared celular es una característica distintiva de las células
vegetales y está compuesta principalmente de celulosa, una sustancia resistente. El buffer de extracción
suele contener detergentes o enzimas que ayudan a descomponer la pared celular y liberar el contenido
celular, permitiendo así el acceso a las biomoléculas que se desean extraer. (Universidad Nacional de
Colombia. Departamento de Biología & RESTREPO SÁNCHEZ, 2011). El buffer de extracción que
contiene detergentes se compone de una solución acuosa que generalmente contiene detergentes iónicos o
no iónicos. Estos detergentes tienen la propiedad de disolver las membranas celulares al romper los enlaces
hidrofóbicos que mantienen unidas las moléculas lipídicas en la membrana. Esto permite que el contenido
celular se libere en el medio de extracción. Además de los detergentes, este buffer a menudo contiene sales
y otros componentes para mantener la estabilidad de las proteínas y ácidos nucleicos liberados de la célula
(Cristina et al., 2013). La adición de sales puede ayudar a neutralizar cargas eléctricas y prevenir la
agregación de proteína.

En cuanto al etanol, se utiliza comúnmente en la extracción de ácidos nucleicos, como el ADN y el ARN,
para precipitar y purificar estos ácidos nucleicos. Su función principal es separar los ácidos nucleicos de
otros componentes celulares, como proteínas, lípidos y carbohidratos. Despues de hacer lisis celular con el
buffer. El etanol hace que los ácidos nucleicos precipiten fuera de la solución debido a su insolubilidad en
el alcohol. La sal ayuda a condensar el ADN o el ARN en estructuras más compactas (Ácidos Nucleicos |
Bioquímica. Las Bases Moleculares de La Vida, 7e | AccessMedicina | McGraw Hill Medical, n.d.)

Conclusiones

En base a esto, podemos definir que el buffer cumple con la parte mas importante del la
extracción, debido a su proceso de lisis, mientras que el etanol nos aporta la precipitación de los
acidos nucleicos, el proceso de extracción de ADN fue exitoso al observar la presencia de una cantidad
adecuada de ADN en la muestra.

Bibliografia
Ácidos nucleicos | Bioquímica. Las bases moleculares de la vida, 7e | AccessMedicina | McGraw Hill
Medical. (n.d.). Retrieved October 8, 2023, from
https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=2971&sectionid=251484543#251484568
ARIEL AMARU CALZADA, JAVIER FABRICIO ARENÉ HOCHKOFLER, DAVID BALLÓN COSSÍO, HUGO
CALLISAYA MAMANI, & ASESOR: DR. HERIBERTO CUEVAS. (2004). EXTRACCION DE DNA CON
PAPAINA. UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES.
Cristina, I., Sánchez, C., Amanda, D., García, R., Inés, S., Soto, U., & Agrónoma, I. (2013). ARTÍCULO
CORTO. Rev. Colomb. Biotecnol, Diciembre, 186–192.
Enriquez, S. S., Alvarado Flores, L. javier, Gurrola Diaz, C. M., & Chavez Heredia, P. (2014). Laboratorio
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Universidad Nacional de Colombia. Departamento de Biología, J. M., & RESTREPO SÁNCHEZ, L. P. (2011).
Acta biológica colombiana. In Acta Biológica Colombiana (Vol. 16, Issue 2). Universidad Nacional de
Colombia. http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-
548X2011000200015&lng=en&nrm=iso&tlng=es