G.P. Bases Moleculares y Celulares de La Medicina III 2023-I PDF

Código VRA-FR-031
BASES MOLECULARES Y CELULARES Versión V.3.1

R.D. Nª 022 -2023-FCS-
DE LA MEDICINA III Documento de Aprobación
UPSJB
Fecha de Aprobación 15.03.2023
GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 1 de 79
GUÍA DE PRÁCTICA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
BASES MOLECULARES Y CELULARES DE LA MEDICINA
III
PLAN DE ESTUDIOS: 2020 - I
SEMESTRE ACADÉMICO: 2023 - I
UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA SAC
GUÍA PRÁCTICA
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL MEDICINA HUMANA
PLAN DE ESTUDIOS 2020 - I
SEMESTRE ACADÉMICO 2023 - I
CICLO III
Bases Moleculares y Celulares de la
NOMBRE DE LA ASIGNATURA
Medicina III
PRESENCIAL
Preparando el camino…
1. DATOS GENERALES
1.1. ASIGNATURA
a. Facultad Ciencias de la Salud

b. Escuela Profesional Medicina Humana
c. Semestre académico 2023 - I
d. Nombre Bases Moleculares y Celulares de la Medicina III
e. Ciclo III
f. Código 030401
g. Modalidad Presencial
h. Tipo de curso Obligatorio
Estructura y Función de los Sistemas del Cuerpo
i. Pre requisitos
Humano I.
j. Créditos 04
k. Horas semanales Teóricas 02 Prácticas 04 Total 06
l. Duración del semestre Inicio 27/03/2023 Culminación 15/07/2023
1.2. DOCENTE
Docente responsable por Programa de Pregrado

Nelson Orlando Rivera Fernandez
Sede Lima - Chorrillos
Correo electrónico nelson.rivera@upsjb.edu.pe
institucional
Nelson Orlando Rivera Fernandez
Sede Lima - San Borja
Correo electrónico nelson.rivera@upsjb.edu.pe
institucional
Filial Ica Jack Slim Garcia Calderon
Correo electrónico jack.garcia@upsjb.edu.pe
institucional
Filial Chincha Hilda Victoria Coila de la Cruz
Correo electrónico hildavictoria.coila@upsjb.edu.pe
institucional
1.3. AMBIENTES ACADÉMICOS
Sede/Filial Teoría Práctica
Laboratorio de Ciencia
Sede Lima - Chorrillos Aula - UPSJB
Aula -UPSJB
Sede Lima - San Borja Aula - UPSJB
Aula -UPSJB
Filial Ica Aula - UPSJB
Aula -UPSJB
Filial Chincha Aula - UPSJB
Aula -UPSJB
2. SUMILLA
La asignatura de Bases Moleculares y Celulares de la Medicina III (Bioquímica y
Nutrición) pertenece al área de Formación Básica es de naturaleza teórico-
práctico; siendo su propósito brindar al estudiante los conocimientos sobre los
procesos metabólicos de los glúcidos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos, así
como los mecanismos de control y regulación metabólica celular y tisular, y su
importancia clínico, enfatizando el papel de los nutrientes en el funcionamiento
del organismo en relación con los diferentes estados fisiológicos y grupos etáreos,
sobre todo su importancia para mantener, promover y recuperar el buen estado
de la salud humana y los efectos de las deficiencias y excesos en el aporte de
nutrientes.
Contiene tres Unidades Académicas en dieciséis semanas del Semestre
Académico.
3. INTRODUCCIÓN
La presente Guía de Práctica del Curso de Bases Moleculares y Celulares de la
Medicina III, presenta en cada sesión de Práctica un profesor que desarrollará el marco
teórico explicando el fundamento bioquímico de cada método y las aplicaciones de
estos conocimientos en la Medicina Humana.
El método didáctico será participativo procurando que los alumnos desarrollen sus
capacidades de análisis, interpretación y mejora del pensamiento abstracto.
Durante las horas de práctica los alumnos expondrán en seminarios la investigación

que han realizado en la bibliografía, todos los alumnos matriculados deberán asistir
debidamente preparados en el tema asignado para la sesión.
La evaluación será continua durante el marco teórico, desarrollo del procedimiento y

durante los seminarios.
4. DESARROLLO DE LAS ACTIVIDADES APRENDIZAJE
(LRPD-Resultados que pueden denominarse: logros, productos, desempeños)
4.1. Producto formativo de la asignatura
Documento monográfico de los temas desarrollados donde se evidencie la

LRPD composición química de los seres vivos, su interacción, su transformación
(metabolismo) y la regulación de los procesos bioquímicos.
4.2. Producto formativo de las unidades
Unidad Producto Formativo

LRPD 1: Presentación de un documento acerca de la estructura y
I. funciones de las biomoléculas enfocados en la salud y/o
enfermedad.
LRPD 2: Entregable con evidencia científica de los procesos de
digestión, absorción, transporte y correlación de las diversas vías
II.
metabólicas de la oxidación de los carbohidratos, los mecanismos
regulatorios y su rendimiento energético.
LRPD 3: Entregable completo y sustentación con material
audiovisual, donde se evidencie la composición química de los
III.
seres vivos, su interacción, su transformación (metabolismo) y la
regulación de los procesos bioquímicos.
4.3. Producto formativo de las prácticas de laboratorio

Semana Práctica Producto Formativo
1 1 Establecer criterios y aplicación de la Bioseguridad.
Identificar, describir y explicar técnicas
2 2 espectrofotométricas y su aplicación en Análisis Clínicos
Bioquímicos.
Identificar, describir y explicar el proceso de taponamiento
3 3 (amortiguamiento) y el equilibrio ácido-base en el
organismo.
Evaluar de la masa proteica visceral. Determinación de
4 4
proteínas y albúmina en suero.
Semana Práctica Producto Formativo
Determinar y cuantificar Creatinina y explicar la
5 5 importancia de la evaluación nutricional en el diagnóstico
clínico.
Describir la actividad enzimática: Dosaje de Amilasa
6 6
Sérica y su importancia clínica.
Determinar la Glicemia e Investigación de Glucosuria.
7 7
Test de Tolerancia a la Glucosa y Glucosa Post-Prandial.
8 EXAMEN PARCIAL
Dosar de bicarbonato sérico. Investigar la presencia de
9 8
cuerpos cetónicos en orina en la Cetoacidosis Diabética
Determinar colesterol total y fracciones en suero:
10 9
determinación de HDL, LDL, VLDL
Determinar Triacilgliceroles (TAG) en suero y su relación
11 10
con la Aterogénesis.
Cuantificar bilirrubina sérica. Investigar al Urobilinógeno
12 11
en orina.
13 12 Determinación de transaminasas (TGO y TGP) en suero.
Realizar el Balance Nitrogenado. Explicar la importancia
14 13 de la evaluación nutricional (Balances nitrogenado) en el
diagnóstico clínico.
Realizar el Balance Calórico y explica su importancia para
15 14
el mantenimiento de un peso saludable.
16 EXAMEN FINAL
5. SISTEMA DE EVALUACIÓN
Normada por el Reglamento de Actividades Académicas de la Universidad
Privada San Juan Bautista vigente y la Directiva del Sistema de Gestión de la
Evaluación para Pregrado y Posgrado vigente.
La Nota Promedio por asignatura es igual a:

La evaluación del aprendizaje es integral, continua, acumulativa, obligatoria
pertinente, valorativa y flexible. Se adecua a las condiciones y circunstancias
especificadas de la realidad de los estudiantes y del currículo de la carrera.
La evaluación de las actividades conceptuales, procedimentales y
actitudinales está en relación a las competencias, capacidades, actitudes que
el estudiante debe lograr al concluir la asignatura.
El Promedio Final de la asignatura se calcula de la siguiente forma:

PF = Promedio Final
EP = Examen Parcial
EF = Examen Final
PC= Prácticas Calificadas, estas pueden darse mediante: talleres, tareas
académicas, trabajos aplicativos, etc. (considerar asistencia y
puntualidad)
6. BIBLIOGRAFÍA
6.1 Bibliografía Básica:
• McKee. Trudy, (2020) Bioquímica: Las Bases Moleculares de la Vida, Edit.

McGraw-Hill, Ed. 7.
6.2 Bibliografía Complementaria
• Virginia Melo, Oscar Cuamatzi; (2019) Bioquímica de los Procesos Metabólicos;

Ed. 3 Edit. Reverté. Elibro. https://elibro.net/es/ereader/upsjb/127790?page=1
• Biblioteca Virtual – www.upsjb.edu.pe
6.3 Base de Datos
• Intranet UPSJB.
• Plataforma Blackboard Learn Ultra
• Grabación Asincrónica de Clase
• Plataforma Upto Date https://biblioteca.upsjb.edu.pe/#/biblioteca
• Plataforma Urkund
• EBSCO-Host https://biblioteca.upsjb.edu.pe/#/biblioteca
• Scopus https://biblioteca.upsjb.edu.pe/#/biblioteca
6.4 Publicaciones UPSJB
• Santos-Lazaro D, Gavilan RG, Solari L, Vigo AN, Puyen ZM. Whole genome analysis
of extensively drug resistant Mycobacterium tuberculosis strains in Peru. Sci Rep.
2021 May 4;11(1):9493. doi: 10.1038/s41598-021-88603-y. PMID: 33947918;
PMCID: PMC8097007.
• Torres Ortiz A, Coronel J, Vidal JR, Bonilla C, Moore DAJ, Gilman RH, Balloux F,
Kon OM, Didelot X, Grandjean L. Genomic signatures of pre-resistance in
Mycobacterium tuberculosis. Nat Commun. 2021 Dec 15;12(1):7312. doi:
10.1038/s41467-021-27616-7. PMID: 34911948; PMCID: PMC8674244.
7. GUÍAS PRÁCTICAS
GUIA PRÁCTICA Nº 01 SEMANA 1

CRITERIOS Y APLICACIÓN DE LA BIOSEGURIDAD.
OBJETIVO Conocer los protocolos de bioseguridad en el laboratorio.
LOGRO A Establece y aplica las normas de bioseguridad en el laboratorio.
MEDIR
DIFUSIÓN Y SOCIALIZACIÓN DE LOS PROTOCOLOS DE BIOSEGURIDAD
A) MARCO TEÓRICO
NORMAS DE BIOSEGURIDAD POR EL CORONAVIRUS EN LOS LABORATORIOS,

TALLERES Y CAMPOS CLÍNICOS (Extraído del Protocolo de Seguridad para
Laboratorio, Taller y Campos Clínico V.9.0)
LABORATORIOS MULTIFUNCIONALES DE CIENCIAS
MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL USO DE SUSTANCIAS QUÍMICAS
• Nunca coma, beba dentro del laboratorio.

• No trabaje en el laboratorio si no tiene supervisión del profesor.
• No lleve a cabo experimentos no autorizados.
• Verificar qué sustancia química está utilizando. Para cumplir esta regla deberá leer
la etiqueta o rótulo del envase. NUNCA UTILIZAR SUSTANCIAS DESCONOCIDAS
O SIN ROTULO.
• Cuando caliente líquido en un tubo de ensayo, apunte la boca del tubo lejos de sus
compañeros.
• Nunca pipetee utilizando la boca y no inhale vapores o gases.
• No utilice equipo de vidrio que esté quebrado o agrietado.
• Determinar la naturaleza y grado de peligro. Leer o interpretar cuidadosamente los
riesgos y/o símbolos de peligro existentes en la etiqueta o en el rótulo del envase.
• Utilice el extractor siempre que esté utilizando sustancias que puedan liberar gases
tóxicos o irritantes.
• No caliente líquidos en envases o sistemas cerrados.
• Evite frotarse los ojos mientras esté en el laboratorio, particularmente si ha
manejado agentes químicos irritantes o vidrio quebrado. Lávese las manos antes de
salir del laboratorio y siempre que toquen sustancias irritantes o tóxicas.
• No eche los desperdicios sólidos.
B) MATERIAL DIDÁCTICO
• Protocolo de bioseguridad en laboratorios y talleres en el marco del servicio remoto

de emergencia sanitaria.
• Manual de laboratorio de la UPSJB.
• Proyector Multimedia
• Ecran
• PC o Laptop
• Equipo de protección personal
• Alcohol 70°
• Hipoclorito de Sodio al 1% (lejía).
• Jabón.
C) ACTIVIDADES
La presente práctica se desarrollará con la interacción del estudiante y sus pares.
D) DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Esta práctica se desarrollará de manera grupal, donde los estudiantes deben

interactuar realizando demostraciones de los protocolos a tener en cuenta, y de esta
forma salvaguardar su integridad.
E) INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
La presente práctica será evaluada mediante la rúbrica general de laboratorio.
F) RESULTADOS ESPERADOS
Cada estudiante aplica las normas y/o protocolos de bioseguridad tanto en el

laboratorio como en cualquier espacio de su vida cotidiana.
ESPECTROFOTOMETRÍA
OBJETIVO Construir la curva de calibración.
LOGRO A Identifica la importancia de establecer concentraciones de
MEDIR metabolitos en fluidos corporales.
A) MARCO TEÓRICO
Se denomina Análisis Colorimétrico Instrumental al conjunto de métodos de análisis

cuantitativos que se fundamentan en la medición de la intensidad de la luz
transmitida a través de una disolución coloreada, ya sea que se trate de sustancias
naturalmente coloreadas o que obtenidas mediante reacciones químicas adecuadas
y específicas (obtención de cromó foros).
Cuando una haz de luz (luz incidente, Io) atraviesa una disolución, una parte de la
radiación queda absorbida por las moléculas del soluto coloreado, sufriendo una
reducción de su intensidad (Luz transmitida, I), proporcional a la capacidad de
absorción de dichas moléculas (Absorbancia)
Casi todas las estructuras químicas en disolución tienen la capacidad de absorber

en forma selectiva determinadas radiaciones luminosas unas más que otras
dejándolas pasar. La longitud de onda en la que las moléculas de dicha sustancia
absorben con mayor intensidad la luz, se denomina “longitud de máxima absorción”
o “lambda máxima”.
Si consideramos que cada molécula absorbe una determinada cantidad de luz, la
intensidad de la luz transmitida por una solución disminuirá en relación con el
aumento del número de moléculas que se interpongan entre la fuente luminosa y el
observador. Este número varía de acuerdo con la concentración del soluto y el
espesor del recipiente que contiene la solución, estos factores están considerados
en la “Ley de Lambert y Beer”, que rige los principios de la colorimetría y cuyas
formas de expresión son:
Log (Io/I) = E. I. c = A = D.O.
Donde:
Io = Intensidad de la luz incidente.
It = Intensidad de la luz transmitida.
E = Coeficiente de extinción molar, valor constante dependiendo de la naturaleza
de la sustancia y de la longitud de onda.
I = Espesor del recipiente en cm.
C = Concentración de la solución.
A = D.O.=Absorbancia (A) aumenta conforme disminuye la Trasmitancia (T) y la
relación entre ambas es logarítmica.
CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE UNA SOLUCIÓN PROBLEMA:

Para calcular la concentración de una solución problema con el empleo de un
fotocolorímetro, existen dos formas:
- Método de la curva estándar o curva de calibración.
- Factor de calibración.
I. CURVA STANDARD. - Este método

consiste en utilizar varios estándares
de concentraciones conocidas y
progresivas para luego construir un
gráfico en un sistema de
coordenadas en el que se colocan
las lecturas en las ordenadas (Eje Y)
y las concentraciones en las
abscisas (Eje X). En la recta
obtenida (Función lineal), se puede
extrapolar la absorbancia o densidad
óptica de la muestra problema,
hallando la concentración de la
misma en el eje de las abscisas.
II. FACTOR DE CALIBRACIÓN. - (Fc), El factor de calibración es un término que se

relaciona con la concentración de una sustancia con su absorbancia, es decir la
intensidad que absorbe una sustancia de concentración conocida (Standard o
Patrón).
Así tenemos:
Fc = [ Standard ] / A st
Donde:
Fc = factor de calibración.
A = absorbancia de la disolución estándar.
[Standard] = concentración del estándar.
Con el factor de calibración se puede fácilmente determinar la concentración de una
muestra desconocida o problema (MP), conociendo su absorbancia.
Si la muestra problema y el estándar son procesados de la misma manera
(diluciones) se podrá usar directamente la siguiente fórmula:
[ MP ] = Amp x Fc
Si la muestra problema sufre diluciones previas se encontrará el factor de dilución

(Fd) que es matemáticamente la inversa de la dilución (dil) y esta a su vez es:
Dil = Vol mp / Vol t
Donde:
Vol mp = Volumen de la muestra problema tomada para hacer la dilución.
Vol t = Volumen total.
Para este segundo caso cuando se quiere saber la concentración de una muestra
problema se procederá usando la siguiente fórmula:
[ MP ] = A mp . Fc . Fd
Donde:
A mp = Absorbancia de la muestra problema.
Fc = Factor de calibración.
Fd = Factor de dilución.
[ MP ] = Concentración de la muestra.
• Disolución de Bicromato de Potasio 80 mg%.

• Agua destilada.
• Espectrofotómetro.
• Balanza analítica.
• Tubos de ensayo.
• Tubos o cubetas espectrofotométricas de caras paralelas
• Pipeta de 1mL
• Pipeta de 10 mL
• Pro pipeta
• Gradillas
• Vaso de precipitación de 250 mL
• Bagueta
• Ecran
• PC o Laptop
C) ACTIVIDADES
La práctica se desarrolla de forma grupal y de acuerdo a la metodología de la

asignatura.
1. Preparar la siguiente batería de tubos:
Tubo I Tubo II Tubo III Tubo

IV
Bicromato de potasio 1 ml 2 ml 3 ml 4 ml
Agua destilada 9 ml 8 ml 7 ml 6 ml
Concentración (mg %)
Solución stock: Bicromato de Potasio 80 mg%.

Calcular la concentración en mg% de Bicromato de Potasio (K2Cr2O7) en cada uno
de los tubos.
Leer las absorbancias de los cuatro tubos a 530 nm de longitud de onda (‫ )ג‬en el
espectrofotómetro.
2. Con los datos obtenidos construir en un papel milimetrado la gráfica de absorbancia
vs concentración de Bicromato de Potasio.
3. Una vez obtenida la curva de calibración, medir la absorbancia de la muestra
problema que el profesor le hará entrega.
4. Obtener el factor de calibración (Fc) promedio con las soluciones estándar utilizadas
para construir las curvas de calibración ajustadas.
5. Calcular la concentración de la muestra problema por los siguientes métodos:
- Gráficamente extrapolando su absorbancia en la curva de calibración.
- Analíticamente, multiplicando su absorbancia por el factor de calibración del
estándar.
El estudiante establece la concentración de una solución a partir de la curva de

calibración.
LOS AMINOÁCIDOS Y LAS PROTEINAS COMO ELECTROLITOS: SU
CAPACIDAD AMORTIGUADORA EN EL ORGANISMO HUMANO
OBJETIVO Demostrar la capacidad tampón de un sistema amortiguador
empleando un ácido débil y la sal del ácido débil y estudiar la
curva de titulación o valoración de un ácido débil
LOGRO A Identifica y desarrolla el efecto tampón de los
MEDIR amortiguadores (ácidos débiles).
A) MARCO TEÓRICO
Una propiedad importante de los aminoácidos, consecuencia del hecho de que

todos ellos tienen grupos carboxilo (-COOH) y grupos amino (-NH2) es su conducta
como electrolitos. Es costumbre considerar los grupos COOH como de naturaleza
ácida y los grupos NH2 como de carácter básico.
Hemos estudiado en las clases teóricas el comportamiento de los aminoácidos como
iones dipolares y la conducta de ellos durante su titulación con ácido y álcalis de
modo que se comportan como verdaderas sustancias tampones, amortiguadores ò
buffers, para el sostenimiento del pH del medio interno dentro de estrechos límites
(7.35 a 7.45). Explicamos también el comportamiento amortiguador del ión dipolar
glicina al añadirle iones H+ o al añadirle OH- impidiendo las variaciones bruscas del
pH sanguíneo. La representación de un aminoácido tal como la glicina por la fórmula
NH2CH2COOH sugiere que se trata de una sustancia en la que el grupo amino actúa
como una base conjugada y el grupo COOH como un ácido. Se ha observado, sin
embargo, que esta formulación no es la correcta del estado iónico de un aminoácido
en solución acuosa. La verdadera representación es aquella que dimos del ión
dipolar (A) y que es la siguiente (Estructura A)
Y que es la forma en la cual se encuentran en el torrente circulatorio, es decir, al pH

fisiológico (7,4) los grupos carboxilo existen como la base conjugada, esto es, como
ión carboxilato R-COO-; y al mismo pH, la mayoría de los grupos amínicos están
predominantemente en la forma protónica R-NH3+
La estructura (A) iónica es la prevalente en la sangre y en la mayoría de los tejidos.
La estructura (B) no puede existir a ningún pH. La conveniencia nos enseña sin
embargo que la estructura (B) se use por razones didácticas y para explicar la
mayoría de las ecuaciones que entrañan reacciones distintas a las de los equilibrios
protónicos. La contribución más importante a la conducta de una proteína como
electrolito procede de los grupos ionizables existentes en las cadenas laterales de
los aminoácidos. La curva de titulación de una proteína ò aminoácido con ácido ò
álcali vendrá determinada en gran medida por el número de cada uno de estos
grupos ionizables de las cadenas laterales de sus unidades de aminoácidos. Por
estas razones las soluciones de proteínas tienen una poderosa capacidad tampón.
Esta propiedad amortiguadora es de importancia decisiva en los sistemas biológicos
y ha sido estudiada con especial cuidado con relación a los amortiguadores de la
sangre humana cuyo pH es controlado dentro de estrechos límites, tal como les
expliqué en la clase teórica. Les dije que los valores de pH sanguíneo varían dentro
de lo normal entre 7.35 a 7.45, cuando la sangre alcanza valores por debajo de 7.35
se produce acidosis; y cuando los valores de pH se elevan por encima de 7.45 se
produce alcalosis. La sangre contiene otros dos sistemas tampones que son:
1) El Sistema bicarbonato/Ácido carbónico (pK: 6,1)
2) El sistema fosfato monosódico/disódico (pK: 6,8)
La proteína más importante de la sangre del ser humano es la Hemoglobina que

tiene gran capacidad tampón en la proximidad del pH 7.4, lo cual se debe a su
elevado contenido de histidina (grupo Imidazol) Aproximadamente el 60% de la
capacidad tampón de la sangre total se debe a la Hb, y un 20% es atribuible a las
proteínas del plasma (seroalbúminas y globulinas).
Recordemos que según lo propuesto por Bronsted: un ácido es una sustancia que
al ionizarse genera iones Hidrógeno, H+, una base es toda sustancia capaz de
aceptar estos iones hidrógeno. Como los ácidos ceden protones y las bases los
captan, a cada ácido le corresponde, como es lógico, una base conjugada. Es decir,
si un ácido cede un protón, el ión, así formado, puede captarlo de nuevo
comportándose como base. Por lo tanto, los procesos de cesión ò captura de
protones transcurren de forma reversible:
Cesión de protones
AH A-- + H+
Ácido captación de protones Base
El ácido y la base conjugada forman un par ácido/base.

Las soluciones que contienen ácidos débiles y sus sales se llaman soluciones
tampón, buffer ò amortiguadores. Su finalidad es impedir ò amortiguar las bruscas
variaciones del pH.
El pH de una solución amortiguadora puede calcularse utilizando la ecuación de
Henderson-Hasselbalch:
A partir de esta ecuación se deduce que el pH de una disolución tampón depende

de la naturaleza del ácido que la integra y de la proporción entre la sal y el ácido
(logaritmo de la relación entre ambos) y no de las concentraciones absolutas de
cada uno de estos componentes. La eficacia amortiguadora es máxima cuando el
cociente de la relación sal/ácido es próximo a la unidad.
El objetivo de la presente práctica es demostrar la capacidad tampón de un sistema
amortiguador empleando un ácido débil y la sal del ácido débil y estudiar la curva de
titulación o valoración de un ácido débil HA, como el vinagre blanco al 5% con
concentración (0.1N) y una base fuerte hidróxido de potasio 0.2N y las variaciones
del pH con respecto a diferentes proporciones relativas entre la sal y el ácido de una
solución tampón. (el pKa del ácido acético es 4.76) antes de agregar la base, el pH
se debe solamente a la presencia del ácido. Pero tan pronto como se añade algo de
la base hidróxido de potasio 0.2N, esta reacciona con una cantidad equivalente del
ácido y forma una cantidad equivalente de sal y agua.
El vinagre (ácido débil) más su sal disuelta constituyen una solución tampón (par
amortiguador), cuyo pH puede calcularse mediante el uso de la ecuación de H-H:
pH = pKa + log sal/ácido.
Se determinará el valor de pH con el potenciómetro y se evaluarán los cambios en
el pH con la adición de volúmenes definidos de una base conocida (KOH 0.2N).
Graficaremos en un sistema de coordenadas cartesianas los valores de pH vs los
ml de base agregados y obtendremos así la curva de titulación para el ácido.
Se empleará el equipo potenciómetro para determinar el pH, instrumento que
determina el pH en función de la fuerza electromotriz (p de Nernst) de una celda
formada por un electrodo de referencia, la solución problema y un electrodo de vidrio
muy sensible a los hidrogeniones.
Potenciómetro.
Beakers de 50 ml de vidrio (11 para cada mesa de trabajo).
Baguetas de vidrio (3 por cada mesa).
Pipetas de 10 ml graduadas 1/10 (3 por cada mesa).
Pipetas de 2 ml
Pipetas de 5 ml
Agua destilada.
Vinagre blanco al 5% en peso y densidad 1.05 g/ml
•Hidróxido de Potasio al 100% y densidad 2.04 g/cm3 – Solución de KOH 0.2N
• Papel milimetrado ò cuadriculado.
• Ecran
• PC o Laptop
C) ACTIVIDADES

asignatura.
Mezclar los volúmenes de CH3-COOH 0.1N y de KOH 0.2N con agua destilada
señalados en la tabla siguiente, mezclar bien y luego medir el pH en cada uno de
los 11 beakers con el potenciómetro:
Vinagre 5% KOH Agua

Beaker
destilada pH
Nº 0.1 N (ml) 0.2N (ml) (ml)
1 10 0 10
2 10 1 9
3 10 2 8
4 10 3 7
5 10 4 6
6 10 5 5
7 10 6 4
8 10 7 3
9 10 8 2
10 10 9 1
11 10 10 0
En cada mesa los alumnos construirán su gráfica de valoración colocando en las

ordenadas los valores de pH en orden creciente y en el eje de las abscisas los
volúmenes de KOH 0.2N añadidos en cada beaker.
mL KOH añadidos
Preparación del Vinagre 5% al 0.1N.

Medir 110 ml de agua destilada y agregar 12.58 1ml de Vinagre al 5% en peso y
densidad 1.05 g/ml.
Preparación del hidróxido de Potasio al 0.2N.
Pesar 0.616 g de KOH al 100% en peso y densidad 2.4 g/ml. y disolverlo en 55 ml
de agua destilada.
El estudiante demuestra e interpreta la capacidad tampón de un sistema

amortiguador empleando un ácido débil y la sal del ácido débil a través de la curva
de titulación o valoración de un ácido débil.
EVALUACIÓN NUTRICIONAL, BIOQUÍMICA Y ANTROPOMÉTRICA.
OBJETIVO Determinar el estado nutricional de una persona
LOGRO A Realiza una evaluación nutricional bioquímica y antropométrica
MEDIR completa y sus aplicaciones en el diagnóstico médico clínico.
A) MARCO TEÓRICO
La Evaluación Nutricional es parte de la evaluación integral del estado de salud de

un individuo. Es un requisito indispensable siempre que se desea mejorar, promover
o mantener un buen rendimiento físico, un buen estado de salud y nutrición, además
de dar una idea más exacta del nivel de rendimiento que se tiene y que se puede
alcanzar.
El objetivo general de la práctica es determinar el estado nutricional mediante un
diagnóstico que permita conocer el nivel nutricional actual y anterior, y los posibles
factores socio alimentario, económico y de composición corporal, que puedan
afectar la participación y rendimiento de una persona.
Otros objetivos de realizar esta evaluación son:
▪ Detectar déficit de nutrientes específicos, riesgo de desnutrición o sobrepeso.
▪ Brindar educación nutricional
▪ Seleccionar personas de acuerdo a la composición corporal, orientar el trabajo
físico y/o reubicar al niño en una actividad física determinada
ESTADO NUTRICIONAL: Es la condición de salud resultante en el tiempo, del

balance entre lo consumido y lo requerido. Está determinado por la calidad y
cantidad de los nutrientes consumidos y por la utilización de estos en el organismo.
EVALUACIÓN NUTRICIONAL: Conjunto de datos antropométricos, dietarios,

bioquímicos y clínicos, que correlacionados entre sí, permiten dar un diagnóstico
nutricional y por tanto orientar el tratamiento o manejo nutricional. Una evaluación
completa debe incluir:
1. Evaluación antropométrica: Estudio de la forma y composición corporal.

▪ Determina y compara los diferentes componentes (hueso, músculo, grasa y
residuo)
▪ Analiza según patrones ideales o establecidos (edad, sexo, deporte, nivel de
rendimiento)
▪ Indispensable para intervenir en procesos de crecimiento, actividad física y
estado nutricional.
- Parámetros incluidos:
▪ Talla actual, talla /edad,
▪ Peso actual, peso usual, peso esperado, peso/talla (Ref. NCHS, Metropolitan
life)
▪ Circunferencias (Volumen muscular)
▪ Diámetros (estructura ósea)
▪ Pliegues (% grasa)
2. Evaluación bioquímica: Permite conocer los niveles sanguíneos de los

parámetros bioquímicos, indicadores del estado nutricional.
▪ Confirma datos clínicos y dietarios
▪ Susceptible a variaciones en la interpretación según edad, sexo, factores
hereditarios o consumo inmediato de alimentos.
▪ Cuadro hemático (hemoglobina, hematocrito, leucocitos y linfocitos)
▪ Proteínas totales y diferenciales (albúmina / globulinas)
▪ Transferrina y Ferritina
▪ Glicemia y Perfil de lípidos
3. Evaluación Clínica: Basada en la evaluación médica.

▪ Observa y analiza signos y síntomas clínicos que puedan indicar deficiencias
nutricionales:
▪ Sueño, fatiga, aspecto físico, piel, cabello, uñas, labios.
▪ Apetito / hambre
▪ Cambios de peso
▪ Frecuencia cardiaca
▪ Cicatrización
▪ Lesiones frecuentes
▪ Tiempo de recuperación de las lesiones
▪ Comportamiento del deportista
4. Evaluación dietaria: Analiza cualitativa y cuantitativamente el consumo dietario

actual, comparándolo con la recomendación para la edad, sexo y gasto
energético.
Permite orientar, prescribir, calcular y diseñar un plan alimentario adecuado,
ajustado a las necesidades nutricionales y calóricas, condición socioeconómica
y hábitos del deportista.
▪ Encuesta nutricional:
- Historia socio alimentaria
- Anamnesis alimentaria
- Conductas alimentarias
- Frecuencia de consumo de alimentos
- Antecedentes personales y familiares
▪ Evaluación cualitativa
- Número de porciones diarias por grupos de alimentos
▪ Evaluación cuantitativa
- Cantidad de Kcal. y nutrientes (g promedio) consumidos, promedio / día.
▪ Determinación de la recomendación calórica y de nutrientes
- Comparar con el consumo para determinar excesos o déficit y diseñar fórmula
dietaría prescrita.
• Kit de proteínas totales

• Kit de albúmina sérica
• Destilador de Agua
• Agua destilada
• Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
• Centrífuga
• Micropipetas automática de 1000 uL.
• Micropipetas automática de 100 uL.
• Tubos o cubetas espectrofotométricas.
• Piseta
• Punteras medianas (amarillas)
• Punteras grandes (celeste)
• Baño de agua a 37ºC.
• Reloj o timer.
• Ecran
• PC o Laptop
C) ACTIVIDADES

asignatura.
EXPERIMENTO A. DETERMOINACIÓN DE LAS PROTEÍNAS TOTALES

SIGNIFICACION CLINICA
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente
distribuidos en el organismo, esenciales para la vida. Actúan como elementos
estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas,
anticuerpos, factores de coagulación, etc.
En el plasma, las proteínas contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante,
transportan sustancias relativamente insolubles y actúan en la inactivación de
compuestos tóxicos y en la defensa contra agentes invasores.
La determinación de proteínas totales es útil para el monitoreo de cambios
ocasionados por diversos estados de enfermedad. En condiciones patológicas como
pérdidas renales, desnutrición, infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse
hipoproteinemia, mientras que en otras como mieloma múltiple, endocarditis
bacteriana y hemoconcentración de diversos orígenes, (ej.: deshidratación) se
observan hiperproteinemias.
FUNDAMENTOS DEL METODO

Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico en medio
alcalino, para dar un complejo color azul-violeta con máximo de absorción a 540 nm,
cuya intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en la
muestra.
Colocar en tres tubos:
Blanco Standard Muestra

Agua destilada 30 uL --- ---
Suero Patrón --- 30 uL ---
Muestra --- --- 30 uL
ReactivoEDTA/Cu 3 ml 3 ml 3 ml
Mezclar los tubos.

Incubar durante 15 minutos en baño maría a 37ºC.
Leer en espectrofotómetro a 540 nm.
CALCULO DE LOS RESULTADOS

Emplear el factor de Calibración.
VALORES DE REFERENCIA
Se determinó el contenido de proteínas totales en suero de personas sanas, de
ambos sexos, con alimentación mixta normal y edades entre 17 y 40 años.
Proteínas totales: 6,1 a 7,9 g/dl --- 6,4 a 8,3 g/dL
Relación A/G: 1,2 a 2,2
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
EXPERIMENTO B. DETERMINACIÓN DE LA ALBÚMINA SÉRICA

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente
distribuidos en el organismo. La albúmina es sintetizada en el hígado y es el principal
constituyente de las proteínas plasmáticas.
Entre sus múltiples funciones se pueden mencionar: el transporte de una amplia
variedad de sustancias como hormonas esteroides, ácidos grasos, bilirrubina apolar,
fármacos que en forma libre son insolubles en medio acuoso; mantenimiento de la
presión coloidosmótica (oncótica).
Los aumentos anormales de albúmina son ocasionales y se relacionan casi siempre
con la deshidratación que provoca la reducción en el contenido del agua plasmática.
La hipoalbuminemia ocurre en condiciones patológicas tales como pérdida excesiva
de proteínas en el síndrome nefrótico, desnutrición, infecciones prolongadas,
quemaduras severas.
Otras causas son disminución en la síntesis por una dieta deficiente, enfermedad
hepática o malabsorción.
FUNDAMENTOS DEL MÉTODO

La albúmina reacciona específicamente (sin separación previa) con la forma
aniónica de la 3,3', 5,5’-tetrabromo cresolsulfonftaleína (BCF). El aumento de
absorbancia a 625 nm respecto del Blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad
de albúmina presente en la muestra.

Suero Patrón --- 30 uL ---
Reactivo BCF 3 ml 3 ml 3 ml

Emplear el factor de Calibración.
Se determinó el contenido de albúmina en suero de personas sanas, de ambos
sexos, con alimentación mixta normal y edades entre 17 y 40 años.
Se obtuvieron los siguientes rangos:
Albúmina: 3,5 a 4,8 g/dl
Relación A/G: 1,2 a 2,2
Considerar a la relación Albúmina / Globulina.
Albúmina (g/dl)
Relación A/G = ---------------------------------------
Prot. Tot. (g/dl) - Alb. (g/dl)
Valores de Referencia:
RELACION A/G : 1,2 a 2,2
El estudiante realiza una evaluación nutricional bioquímica mediante un diagnóstico

que permita conocer el nivel nutricional actual y anterior, y los posibles factores socio
alimentario, económico y de composición corporal, que puedan afectar la
participación y rendimiento de una persona.
MASA PROTEICA VISCERAL Y ESQUELÉTICA
OBJETIVO Relacionar los resultados de ambos compartimientos con el
estado nutricional del paciente.
LOGRO A Explica el compartimiento proteico visceral y proteico esquelético.
MEDIR
A) MARCO TEÓRICO
Para evaluar el estado nutricional de una persona utilizamos el metabolismo proteico

(síntesis y degradación).
Las proteínas en el organismo se distribuyen didácticamente en dos
compartimientos:
a) Compartimiento Proteico Visceral.
b) Compartimiento Proteico Somático ò esquelético.
Las proteínas del compartimiento visceral se evalúan mediante los niveles de
Transferrina, Pre-albúmina, Proteínas totales y Albúmina en suero, que por su
relativamente corto tiempo de vida (albúmina es de 20 días) rinde una estimación
razonable del compartimiento proteico visceral. En esta práctica utilizaremos la
Proteína Total y la Albúmina sérica.
Las proteínas del compartimiento somático ò esquelético la evaluaremos mediante
la relación entre la excreción de la creatinina urinaria en 24 horas y la talla de la
persona, relación que es un fiel índice de la masa muscular esquelética. Así mismo
mediante el Peso y la Talla se evaluará la masa corporal total.
• Kit de Proteínas totales en suero.

• Kit de Albúmina sérica.
• Kit de Creatinina urinaria.
• Agua destilada
• Micropipeta automática de 1000 uL
• Tubos de ensayo de 5 ml.
• Gradilla
• Piseta
• Baño María a 37ºC.
• Centrífuga
• Reloj ò timer.
• Ecran
• PC o Laptop
C) ACTIVIDADES

asignatura.
Experimento A: DETERMINACIÓN DE PROTEINAS TOTALES Y ALBÚMINA

EN SUERO
Fundamentos del Método:
Determinación de Proteínas Totales:
Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico, en medio
alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 540 nm, cuya
intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en la muestra.
Determinación de Albúmina:
La albúmina reacciona específicamente (sin separación previa) con la forma
aniónica de la Bromo Cresolsulfon Ftaleína (BCF), en presencia de un exceso de
colorante, en medio tamponado a pH 3,8. El aumento de absorbancia a 625 nm
respecto al blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de albúmina presente
en la muestra.
REACTIVOS:
Reactivo EDTA/Cu: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en NaOH 875 mmol/l y Alquil aril
poliéter (AAP).
Reactivo BCF: solución de Bromo Cresolsulfon Ftaleína (en Polioxietilèn Lauril
éter).
Experimento B: DETERMINACIÓN DE CREATININA URINARIA

La creatinina reacciona con el picrato alcalino en medio tamponado, previa
desproteinización con ácido pícrico, obteniéndose un cromógeno que se mide a
510 nm.
Creatinina + picrato Complejo creatinina-picrato
REACTIVOS:
Reactivo 1: ácido pícrico 41,4 mmol/l.
Reactivo 2: buffer glicina/NaOH 1 mol/l, pH final 12,4.
Standard: solución de creatinina 2 mg%
PROCEDIMIENTO:
Recolectar orina de 24 horas.
Medir la diuresis, tomar una alícuota y efectuar una dilución 1:50 de la misma.
Luego en tres tubos de ensayo preparar lo siguiente:

Standard --- 0,5 ml ---
Orina diluida (1:50) --- --- 0,5 ml
Agua 1 ml 0,5 ml 0,5 ml
Reactivo 1 2 ml 2 ml 2 ml
Reactivo 2 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml
Mezclar por inversión.
Incubar 20 minutos a temperatura ambiente.
CALCULO DE LOS RESULTADOS:
M
Creatinina en orina (mg/24 horas) = ------ x 20 mg/l x 50 x V
S
Siendo:
V = volumen de la diuresis expresado en litros/24 horas.
M = Absorbancia neta del tubo muestra.
S = Absorbancia neta del tubo estándar.
VALORES DE REFERENCIA:
900 a 1 500 mg/24 horas.
VALORACIÓN DEL ESTADO NUTRICIONAL
PROMEDIO POBLACIONAL DESNUTRICIÓN

Relación Cr U 24h / Hombres: 830 Hombres: < 660
Talla Mujeres: 680 Mujeres: < 430
(mg 24h/m)
Relación Peso / Talla Hombres: 37 Hombres: < 30
(Kg/m) Mujeres: 34 Mujeres: < 29
Proteínas totales (g/dl) 7 <6
Albúmina (g/dl) 4 < 3,5
La presente practica será evaluada mediante la rúbrica general de laboratorio
El estudiante debe cuantificar los resultados obtenidos y luego valorarlos e

interpretarlos.
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: DOSAJE DE LA AMILASA SÉRICA Y URINARIA
OBJETIVO Interpretar los resultados del dosaje de amilasa con las
enfermedades relacionadas.
LOGRO A Determina los niveles y las funciones bioquímicas de la Amilasa.
MEDIR
A) MARCO TEÓRICO
La amilasa, enzima del grupo de las hidrolasas, se produce principalmente en la

fracción exocrina del páncreas y en las glándulas salivales.
Su acción se dirige particularmente a escindir los enlaces alfa 1-4 glucosídicos de
los polisacáridos como almidón y glicógeno.
En pacientes con pancreatitis aguda, la amilasa sérica empieza a elevarse en las
primeras 2 a 3 horas de la enfermedad, alcanzando los valores más elevados entre
las 24 y 30 horas posteriores al ataque, declinando luego para volver a los niveles
normales entre el 3º y 6º día. También se ve aumentada en este caso la excreción
urinaria de la enzima, persistiendo la hiperamilasuria 3 a 5 días, luego de que la
actividad sérica ha alcanzado los niveles normales.
También es posible encontrar valores aumentados en pacientes con ulcera gástrica
o duodenal perforada, obstrucción intestinal, obstrucción de conductos biliares,
pancreatitis crónica, hipertiroidismo, carcinoma de cabeza de páncreas,
administración de opiáceos y en general cualquier caso de “abdomen agudo” o
intervención quirúrgica en regiones próximas al páncreas.
Las parotiditis bacterianas y virales, que producen bloqueo de la secreción de
amilasa salival, se asocian también con elevaciones en los niveles de amilasa
sérica.
PANCREATITIS AGUDA:
Definición: Es un desorden inflamatorio del páncreas, en el cual la función

pancreática normal debe ser restaurada una vez que la causa primaria del evento
agudo es superada.
Causas:
- Pancreatitis por cálculos biliares: 60% (en nuestro medio)
- Pancreatitis alcohólica: 80% (en países Anglosajones)
- Pancreatitis de causa idiopática: 30%
- Pancreatitis por tumores ampulares-coledococele-Páncreas Divisum
- Pancreatitis por condiciones metabólicas asociadas
- Hipertrigliceridemia
- Hiperparatiroidismo
- Hipercalcemia
- Hiperlipoproteinemia Tipo V; también tipos I y IV
- Pancreatitis por Toxinas (Insecticidas)
- Pancreatitis por picadura de escorpión en América del Sur y Central
- Pancreatitis por Metanol
- Pancreatitis traumática (Trauma abdominal)
- Pancreatitis Iatrogénica: ERCP, por corte esfínter de Oddi Cirugía
- Pancreatobiliar, Trasplante renal-Vasculitis- SIDA-Parasitosis
PANCREATITIS CRÓNICA:
Definición: Es un estado inflamatorio crónico que determina un daño irreversible de

la estructura y función pancreática. El curso clínico de la pancreatitis crónica puede
consistir en ataques recurrentes agudos o una relativa progresión de síntomas.
En 1988 la clasificación Marseilles - Roma de Pancreatitis reconoció la Pancreatitis
Crónica Obstructiva subsecuente a la pancreatitis crónica. Ésta es causada por la
lesión obstructiva, es la forma más común de pancreatitis, la que se caracteriza por
cambios crónicos irreversibles.
Causas:
- Pancreatitis Alcohólica
- Pancreatitis Idiopática
- Pancreatitis Crónica Tropical
- Pancreatitis Hereditaria
- Pancreatitis por Hiperparatiroidismo
- Pancreatitis por Lesiones Traumáticas del Conducto Ductal
- Kit de amilasa en suero y/o orina

- Agua destilada
- Destilador de Agua
- Tubos de ensayo de 5 ml.
- Gradilla
- Espectrofotómetro.
- Micropipeta automática de 1000 uL.
- Micropipeta automática de 100 uL
- Tubos o cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.
- Piseta
- Punteras medianas (amarillas)
- Punteras grandes (celeste)
- Baño maría.
- Centrífuga
- Cronómetro.
C) ACTIVIDADES

asignatura.
Experimento A: DETERMINACIÓN DE AMILASA EN SUERO
FUNDAMENTOS DEL MÉTODO:

La α-amilasa hidroliza el sustrato definido 2-cloro-p-nitrofenilα-D-maltotriósido
(CNP-G3) para liberar 2-cloro-p-nitrofenol (CNP), formándose 2-cloro-nitrofenil-
α-D-maltósido (CNPG2), maltotriosa (G3) y glucosa. El CNP absorbe a 405 nm y
la velocidad de aparición del color es directamente proporcional a la actividad
enzimática.
El uso de este sustrato definido, sustancia de estructura y peso molecular
conocido, posibilita la expresión de los resultados en U/l y no requiere enzimas
auxiliares hasta 200 mg/l, hemoglobina hasta 0,5 g/dl y triglicéridos
CONDICIONES DE REACCIÓN
- Longitud de onda: 405 nm
- Temperatura de reacción: 25, 30 ó 37oC
- Tiempo de reacción: 2 minutos
PROCEDIMIENTO
A) 25-30ºC
En una cubeta mantenida a la temperatura seleccionada, colocar:
Reactivo A reconstituido 2 ml
Pre incubar 3-4 minutos. Luego agregar:
Muestra 100 uL
Mezclar inmediatamente y leer absorbancia luego de 1 y 2 minutos. Determinar
la diferencia entre la segunda y la primera lectura. Utilizar este valor para los
cálculos.
Se pueden disminuir proporcionalmente los volúmenes usando 1 ml de Reactivo
A reconstituido y 50 uL de muestra.

Amilasa (U/l) = ΔA/min x factor*
Temperatura 25ºC 30º C* 37º C
Suero hasta 84 U/l 100 U/l 125 U/l
Orina ocasional hasta** 455 U/l 540 U/l 680 U/
* Calculados
** Estos valores de referencia se obtuvieron de una población sana (n = 40), de
ambos sexos, con edades comprendidas entre 17 y 40 años, con una dieta mixta
normal, sin síntomas de enfermedad aparente.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de
referencia.
Experimento B: DETERMINACIÓN DE AMILASA EN ORINA

El procedimiento es igual que el caso anterior, solamente que en este caso la
muestra en lugar de suero es orina diluida la cual debe obtenerse de la siguiente
manera: El paciente debe orinar descartando esta micción, dos horas después
vuelve a orinar y recoge toda la orina. Esta muestra, que corresponde a dos horas
de diuresis, se diluye a 200 ml con agua destilada. La determinación se efectúa
con 20 uL de esta dilución, obteniéndose el resultado directamente en U/L.

El estudiante calculara las concentraciones de amilasa e interpretara los resultados.

DETERMINACIÓN DE LA GLICEMIA, INVESTIGACIÓN DE LA GLICOSURIA,
TEST DE TOLERANCIA ORAL A LA GLUCOSA
OBJETIVO Interpretar los resultados de la glicemia con ayuda del algoritmo
para el diagnóstico de diabetes.
LOGRO A Evalúa y establece condiciones bioquímicas ante las variaciones
MEDIR de normoglicemia.
A) MARCO TEÓRICO
El mantenimiento de la glicemia, o concentración plasmática de glucosa, en los

organismos superiores es fundamental para el funcionamiento de todos los órganos,
al ser la glucosa un metabolito energético principal.
La principal función bioquímica de la glucosa es la de proporcionar energía para los
procesos de la vida. El adenosín trifosfato ("ATP") es la fuente de energía universal
para las reacciones biológicas. La oxidación de la glucosa por las vías glucolítica y
del ácido cítrico es la fuente principal de energía para la biosíntesis del ATP.
El sistema para regular los niveles de glucosa sanguínea funciona para lograr
dos fines. El primero es para almacenar glucosa en exceso en relación a las
necesidades corporales inmediatas en un reservorio compacto (glucógeno) y el
segundo es para movilizar la glucosa almacenada de manera que mantenga el nivel
de glucosa sanguínea. La regulación de la glucosa sanguínea es esencial para
mantener al cerebro, cuya fuente energética primaria es la glucosa, abastecido por
una cantidad constante de la misma. La función de la insulina es desviar la glucosa
extracelular a los sitios de almacenamiento intracelular en la forma de
macromoléculas (como el glucógeno, lípidos y proteínas). Es así que la glucosa es
almacenada en tiempos de abundancia para los momentos de necesidad.
En respuesta a la baja glucosa en sangre, como en períodos de ayuno, una serie de
agentes hiperglucemiantes actúa en las vías metabólicas intermediarias para formar
glucosa a partir de las macromoléculas almacenadas. De esta forma las proteínas y
el glucógeno son metabolizados para formar glucosa-6-fosfato (gluconeogénesis), la
cual es hidrolizada a glucosa en el hígado y liberada a la sangre para mantener los
niveles de glucosa sanguínea.
Los agentes hiperglucemiantes más importantes son el glucagón, la epinefrina, el
cortisol, la tiroxina, la hormona de crecimiento y ciertas hormonas intestinales. El
comportamiento de cada uno de estos agentes es diferente en la regulación de la
glucosa sanguínea; mientras que la insulina favorece el metabolismo anabólico
(síntesis de macromoléculas), estas hormonas, en parte, inducen el metabolismo
catabólico para romper grandes moléculas.
Debido a que la glicemia sérica se torna anormal solo cuando hay un grave trastorno
de esta interacción, al verificar la glicemia es útil para evaluar la función e integridad
del sistema.
La hipoglucemia es un trastorno caracterizado por una concentración de glucosa
en ayunas, menor al límite inferior normal para el grupo de edad y esto sucede en:
enfermedad hepática, desnutrición, postgastrectomía, tolerancia deficiente a la
glucosa, administración excesiva de insulina, hipoglucemia funcional o espontánea,
ingestión de alcohol en ayunas.
La determinación de la glicemia en ayunas evalúa de modo aproximado la
capacidad del organismo para regular la glicemia y nos puede informar sobre la clase
de anormalidad, si la hubiera. Para hacerla no se tomarán alimentos ni bebida
excepto agua, cuando menos 8 horas antes de tomar la muestra.
La coordinación de los procesos metabólicos implicados en este cometido se lleva a
cabo por la relación insulina/glucagón. La ingestión de glucosa o sustancias que la
produzcan (almidón, fructosa, galactosa, proteínas, pero no grasas) va seguida, en
las personas sanas, por un aumento de la glucosa en sangre. Este aumento origina
la puesta en marcha del mecanismo regulador: aumento de la utilización de glucosa
(por Glucólisis, entre otras), aceleración de la Glucogenogénesis y disminución de
la Glucogenólisis; todo ello ocurre principalmente mediante la secreción de insulina,
una hormona pancreática de tipo polipeptídica. En el caso de que la producción de
insulina esté disminuida, la glucosa no puede ser utilizada por las células, lo cual
ocasiona niveles elevados de glucosa en sangre (hiperglicemia); así ocurre en las
personas que sufren diabetes del tipo denominado "dependiente de insulina" o "tipo
I".
• Kit de glucosa en suero

• Agua destilada
• Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
• Centrífuga
• Balanza analítica
• Micropipeta automática de 1000 uL.
• Micropipeta automática de 100 uL.
• Gradilla
• Piseta
• Tubos o cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.
• Baño de agua a 37ºC.
• Reloj o timer.
• Ecran
• PC o Laptop
C) ACTIVIDADES

asignatura.
Experimento A: DETERMINACIÓN DIRECTA DE LA GLICEMIA (concentración

de glucosa en suero)
OBJETIVOS
1) Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su relación
con diversas patologías.
2) Determinar la concentración de glucosa en estado basal y postprandial en una
muestra biológica mediante el método enzimático colorimétrico.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO: COLORIMÉTRICO ENZIMÁTICO

La enzima glucoxidasa cataliza la oxidación de glucosa a gluconato y peróxido de
hidrógeno. La concentración de glucosa es proporcional al H2O2, este puede
medirse apareándolo con un indicador de peroxidasa.
La determinación de glucosa se efectúa mediante el método de Trinder según las
siguientes reacciones:
Abreviaturas: GOD. Glucosa oxidasa; POD: Peroxidasa; 4-AF: 4

aminofenzona
PROCEDIMIENTO:
Distribuir en 03 tubos de ensayo:
Tubos: Blanco Standard Muestra

Suero diluido (µl) --- --- 30
Estándar de glucosa (µl) --- 30 ---
Reactivo de glucosa (ml) 3 3 3
CÁLCULO DE LOS RESULTADOS
Adultos: 70 - 110 mg/dl
Niños: 60 - 100 mg/dl
Neonatos: 1 día: 40 - 60 mg/dl
Mayor a 1 día: 50 - 80 mg/dl
Experimento B: INVESTIGACIÓN CUALITATIVA DE GLUCOSA EN ORINA

(Glucosuria)
FUNDAMENTO En estado normal no existen cantidades detectables de glucosa en

orina, por lo menos con los métodos habitualmente utilizados en el laboratorio. La
glucosuria (presencia de glucosa en orina) se presenta en la diabetes mellitus pero
cuando se supera el umbral renal de glucosa que ocurre cuando la glicemia es
mayor de 180 mg/dl (hiperglicemia)
Para la detección cualitativa de glucosa en orina se basa en la acción de la glucosa,

que reduce las sales de cobre en medio alcalino por ebullición. Para ello utilizaremos
el reactivo de Benedict el cual contiene: sulfato de cobre, citrato de sodio y carbonato
de sodio.
MATERIALES Y REACTIVOS
• Pipetas de 5 ml.
• Pro pipeta
• Goteros
• Mechero de Bunsen.
• Reactivo de Benedict.
• Pinzas porta tubos.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Tubos: I II
Orina normal (gotas) VIII ---
Orina DM (gotas) --- VIII
Reactivo de Benedict (ml) 5 5
Calentar directamente a la llama de un mechero durante 2 minutos y se deja enfriar.
Si la orina contiene glucosa, se observa un precipitado color verde, amarillo o rojo
ladrillo dependiendo de la cantidad en que se halle presente; la reducción del Cobre
se observa por la formación del Cu2O (precipitado color anaranjado) De ser negativa
la reacción permanecerá de color azul.
Experimento C: TEST DE TOLERANCIA ORAL A LA GLUCOSA

TEST DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA Y GLUCOSA POST PRANDIAL
Definición de DM:
La diabetes mellitus es un grupo de enfermedades metabólicas caracterizadas por
la presencia de hiperglicemia resultante de un defecto en la secreción de insulina,
en la acción insulínica, o en ambas.
Diagnóstico
Es muy importante el diagnóstico temprano de la enfermedad debido a que niveles
elevados de glucosa, aún cercanos al límite superior normal, producen daños en la
microvasculatura de retina y riñón.
GPA: glucosa plasmática en ayunas
POTG: prueba oral de tolerancia a la glucosa
Existen otras entidades fisiopatológicas relacionadas con hiperglicemia que no

llegan a cumplir los criterios de diabetes pero que son muy importantes ya que deben
ser vigiladas ya que estos pacientes presentan riesgo elevado de evolucionar a
diabetes. Estas son la tolerancia disminuida a la glucosa y la glucosa en ayunas
anormal.
Tolerancia disminuida a la glucosa es aquel caso cuando después de una prueba

de tolerancia con 75 g de glucosa se obtienen a las dos horas valores mayores a
140 y menores a 200 mg/dl.
La glucosa anormal en ayunas es aquel caso en que los valores en ayunas son
mayores a 110 mg /dL pero menores a 126 mg/dL
FUNDAMENTO TEÓRICO
Las pruebas de tolerancia a la glucosa oral fueron utilizadas por mucho tiempo
para diagnóstico de Diabetes Mellitus o intolerancia disminuida, pero ya no se
utilizan de rutina, pero si pueden servir tanto para la Diabetes como para la
intolerancia. Importante es recalcar que los niveles importantes en ambos casos son
los obtenidos a las dos horas, y que la cantidad de glucosa a ingerir debe ser de 75
gramos. El disolver 75 gramos en por lo menos 300 ml de agua hace la solución
más agradable al paladar y por lo tanto tendrán más aceptación por parte del
paciente.
Ayunas 70-110 mg/dl

30 min <200 mg/dl
1 hora <180 mg/dl
2 horas <140 mg/dl
En caso de la prueba de tolerancia de 75 gramos en adultos, en niños se debe utilizar una

cantidad de glucosa correspondiente al peso del niño (1,75 g de glucosa por Kg. de peso).
Es de suma importancia recordar que antes de iniciar cualquier prueba de tolerancia a la
glucosa oral, se debe pedir una muestra de orina al paciente, para hacerle un análisis
cualitativo glucosa.
Esto debido a que, si el paciente presenta glucosuria, no se debe realizar la prueba de

tolerancia, ya que la glucosuria indica en la gran mayoría de los casos, niveles sanguíneos
de glucosa elevados y la ingesta de altas concentraciones de glucosa le podría provocar al
paciente un shock hiperglicémico.
MATERIALES Y REACTIVOS
• Glucosa
• Vaso de precipitación de 500 mL
• Bagueta
• Balanza analítica
• Baño Maria
• Micropipetas automáticas de 10 uL.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Se determinará la glicemia en muestras obtenidas a una persona en forma basal, a los 30

min, 60 min y 120 min. Luego de tomar la muestra sanguínea basal se le da de tomar al
paciente 75 g de glucosa disuelto en 300 mL de agua con unas gotas de limón. Las
muestras de sangre extraídas de la persona serán centrifugadas y se separarán los sueros.
Para la determinación de las glicemias se utilizará el método de la glucosa oxidasa –
peroxidasa (GOD-POD).
Tubos: Blanco Standard Muestra Muestra Muestra Muestra

(0’) (30’) (60’) (120’)
Suero (uL) --- --- 30 30 30 30
Estándar de glucosa --- 30 --- --- --- ---
(uL)
Reactivo de glucosa 3 3 3 3 3 3
(ml)
Incubar los tres tubos en Baño María de 37ºC por 5 minutos. Mezclar bien. Leer las
absorbancias para cada una de los tubos en el espectrofotómetro a 505 nm.
CÁLCULOS
Encontrar la concentración de glucosa en cada una de las muestras utilizando el método
del factor de calibración
ELABORACIÓN DE LA CURVA
Elaborar la curva colocando en la abscisa los tiempos y en la ordenada las concentraciones
en mg/dl en papel milimetrado y luego con la ayuda del profesor interpretarla usando el
siguiente algoritmo:
La presente práctica será evaluada mediante la rúbrica general de laboratorio

El estudiante interpretara los resultados ante las variaciones de normoglicemia con

ayuda del algoritmo para el diagnóstico de diabetes.
DETERMINACIÓN DEL BICARBONATO SÉRICO Y CUERPOS CETÓNICOS EN
ORINA. CETOACIDOSIS DIABÉTICA.
OBJETIVO Interpretar los niveles de bicarbonato sérico y presencia de
cuerpos cetónicos.
LOGRO A Aprende a interpretar los niveles de bicarbonato sérico y
MEDIR presencia de cuerpos cetónicos en la orina en la Cetoacidosis
diabética.
A) MARCO TEÓRICO
La Diabetes Mellitus se caracteriza por hiperglicemia y otros desarreglos que se deben a

una inadecuada acción de la Insulina sobre los tejidos corporales, ya sea porque exista un
reducido nivel circulante de Insulina o una resistencia de los tejidos blanco a sus acciones.
La Diabetes se divide en dos categorías:
a) Diabetes Tipo I o Diabetes Insulino dependiente o Diabetes juvenil (llamada así porque
se inicia en la juventud) y la Diabetes tipo II o no Insulino dependiente (diabetes de inicio
en la edad madura). Puede haber tipos intermedios que se superponen.
(A) LA DIABETES TIPO I afecta al 10 % de los pacientes diabéticos y la dependencia de

la Insulina, significa que es necesaria para el óptimo control de la glucosa sanguínea,
que también podría ser cierto para la forma de diabetes tipo II, asimismo “sin Insulina
exógena” el paciente es más proclive a desarrollar CETOACIDOSIS diabética.
(1) Por lo tanto, en pacientes con Diabetes Tipo I, refleja una completa o casi ausencia
de insulina en ellos, en contraste con la falta parcial o la resistencia a la insulina
característica de los pacientes de diabetes del tipo II.
(2) Otra característica clave de los pacientes con Diabetes tipo I es su presencia en
niños, adultos jóvenes y en las personas delgadas que obesas.
(B) LA DIABETES TIPO II comúnmente afecta a las personas de edad madura, y con
sobrepeso.
(1) En estos pacientes, algo de insulina es producida por lo que no se produce
cetoacidosis.
(2) Sin embargo, puede ser necesario el tratamiento con insulina para prevenir la severa
hiperglicemia.
Debemos saber desde ahora que se puede producir Diabetes secundaria o alterarse la
tolerancia a la glucosa de modo secundario a ciertas enfermedades que afectan la
producción o la acción de la Insulina, tales como la pancreatitis crónica, el Síndrome
de Cushing, la acromegalia, la alteración de los receptores de insulina y otras.
El síntoma más común que produce la hiperglicemia es la poliuria (Aumento del
volumen urinario) y la polidipsia (incremento en la ingesta de agua), lo cual se debe a
la diuresis osmótica inducida por la glucosa. El incremento en la ingesta de agua es
una respuesta a deshidratación y sed. Se produce disminución de peso corporal,
debido a la pérdida de glucosa por la orina y a los efectos catabólicos de la disminución
de la acción de la insulina, a pesar de la mayor ingesta de alimentos (Polifagia). La
debilidad generalizada refleja las alteraciones metabólicas. Las infecciones de la piel,
vulva y tracto urinario son frecuentes sobre todo en los casos no controlados debido a
que la hiperglicemia disminuye la resistencia a las infecciones. Las alteraciones en la
retina son precoces.
CETOACIDOSIS DIABÉTICA:
Se produce en los diabéticos insulinodependientes cuyo nivel de insulina circulante es
insuficiente para permitir una utilización de la glucosa por los tejidos periféricos y para
inhibir la producción de glucosa y el catabolismo tisular. El incremento del Glucagón y
el aumento de las hormonas que aumentan en respuesta al stress (como la adrenalina,
noradrenalina, cortisol y hormona del crecimiento) contribuyen a los desarreglos
metabólicos. La insuficiente cantidad de insulina reduce la utilización periférica de
glucosa y junto con el exceso de glucagón incrementan la producción hepática de
glucosa a través de la estimulación de la gluconeogénesis y la glucogenólisis y la
inhibición del glicólisis. La degradación de las proteínas en los tejidos periféricos
suministra un flujo de aminoácidos hacia el hígado como substrato para la
gluconeogénesis. El resultado es la hiperglicemia. La diuresis osmótica resulta de la
elevación de la glucosa (y cuerpos cetónicos) y genera hipovolemia, deshidratación y
pérdida de sodio, fosfato de potasio y otras substancias por la orina. La depleción del
volumen estimula la liberación de catecolaminas lo cual se opone a la acción de la
insulina en el hígado y contribuye a la LIPÓLISIS.
CETOGÉNESIS:
La lipólisis acentuada que resulta de la falta de insulina y del exceso de catecolaminas
moviliza los ácidos grasos libres desde sus depósitos en el tejido adiposo y en lugar de
reesterificarse con el glicerol para formar triacilgliceroles, el hígado desvía sus rutas
metabólicas hacia la producción de cuerpos cetónicos. El glucagón incrementa el nivel
de la carnitina, que capacita a los ácidos grasos a entrar en la mitocondria, donde ellos
sufren beta oxidación hacia cuerpos cetónicos. Además, el glucagón disminuye el
contenido hepático de malonil CoA, que es un inhibidor de la oxidación de ácidos
grasos.
ACIDOSIS
El incremento de la producción hepática de cuerpos cetónicos (acetoacetato y beta
hidroxibutírico) excede la capacidad corporal de metabolizarlos o excretarlos. Sus H+
son tamponados por el bicarbonato, conduciendo a una caída del bicarbonato sérico y
del pH sanguíneo. Se encontrará entonces: hiperglicemia, hipercetonemia, acidosis
metabólica, disminución del bicarbonato, disminución del pH sanguíneo y presencia en
la orina de glucosa (glucosuria) y cuerpos cetónicos o cetonuria.
Reactivos y materiales:
• Tira reactiva (Urine Strip 10 Wiener Lab).
• Agua destilada
• Gradilla
• Piseta
• Punteras pequeñas (blancas)
• Timer
• Equipo de baño maría
• Centrifuga
• Solución de Estándar de Bicarbonato FS (Diasys). Conc. 30 mMol/L
• Reactivo de Bicarbonato FS (Diasys), que contiene: Solución Amortiguadora pH
= 7,5 Fosfoenolpiruvato (PEP), Fosfoenolpiruvato carboxilasa (PEPC), Malato
deshidrogenasa (MDH)
Equipo
• Ecran
• PC o Laptop
C) ACTIVIDADES

asignatura.
EXPERIMENTO A:
DOSAJE DE BICARBONATO SÉRICO
Método:
Es una prueba espectrofotométrica cinética.
El bicarbonato sódico se determina enzimáticamente mediante la fosfoenol piruvato
carboxilasa (PEPC). En presencia de esta enzima el bicarbonato reacciona con el
fosfoenolpiruvato (PEP) para producir oxalacetato y fosfato. En la reacción siguiente,
catalizada por el malato deshidrogenasa (MDH) se transfiere un protón desde el
análogo del NADH al oxalacetato.
La velocidad a la que se consume el análogo de NADH es proporcional a la
concentración de bicarbonato de la muestra.
Prueba enzimática utilizando fosfoenolpiruvato carboxilasa (PEPC) y un análogo de
NADH estable. Este método ha sido estandarizado frente a un patrón primario
basado en carbonato de sodio.
Principio
Fosfoenolpiruvato + HCO3- PECPC + Mg2+ Oxalacetato + H2PO4-
MDH
Oxalacetato + Cofactor red. Malato + Cofactor
La reacción perturba el siguiente equilibrio:
CO2 + H2O H2CO3 H+ + HCO3-

Esto produce como resultado una conversión de CO2 a bicarbonato (HCO3-) que
luego se incluye en la reacción. Por lo tanto, se mide la concentración total de CO 2.
La disminución de la concentración de cofactor reducido se mide a 405 o 415 nm y
es proporcional a la concentración de dióxido de carbono total en la muestra.
CONDICIONES DE REACCIÓN
- Longitud de onda: 405 – 415 nm
- Temperatura de reacción: 37°C
- Tiempo de reacción: 10 minutos
PROCEDIMIENTO:
Distribuir en 03 tubos de ensayo:
Tubos: Blanco Standard Muestra

Suero (µl) --- --- 10 µL
Estándar (µl) --- 10 µL ---
Reactivo de trabajo (ml) 1 mL 1 mL 1mL
Mezclar, incubar y leer la absorbancia A1 después de exactamente 2 min. y

absorbancia A2 después de exactamente 10 min. frente al blanco de reactivo.
CÁLCULO:
A = (A2 – A1) Muestra/estándar
A Muestra
Bicarbonato [mMol/L] = x Conc. Std [mMol/L]
A Std
Factor de conversión
Bicarbonato [mMol/L] = Bicarbonato [mEq/L]
Valores Referenciales (Normales): 22 a 29 mMol/L
EXPERIMENTO B: INVESTIGACIÓN DE CUERPO CETÓNICOS EN LA ORINA
Determinación de Cuerpos Cetónicos en Orina mediante Tiras Reactivas. -
FUNDAMENTOS DEL MÉTODO:

La muestra reacciona con los reactivos
desecados unidos a una fase sólida que se
encuentra adherida a un soporte plástico. Se
proveen reactivos para la detección de
urobilinógeno, glucosa, cetonas, bilirrubina,
proteínas, nitrito, pH, sangre, densidad,
leucocitos y ácido ascórbico, en esta prueba
usaremos tiras reactivas para determinar
cetonas.
El principio químico de esta prueba se basa en se basa en la reacción de ácido
acetoacético de la orina con nitroprusiato. El color resultante va desde tostado,
cuando no hay reacción, a distintos tonos de púrpura para reacciones positivas.
Reactivos:
Tiras conteniendo reactivos desecados para la determinación de cetonas en orina
(Urine Strip 10 Wiener Lab).
Nitroprusiato de sodio: 20,0 mg
KET Sulfato de magnesio 246,5 mg
Procedimiento:
Este procedimiento DEBE SER SEGUIDO EXACTAMENTE para lograr resultados
confiables. Las tiras sin utilizar deberán conservarse en el envase original. No tocar
el área de lectura de la tira. El área de trabajo debe estar limpia, libre de detergentes
u otros contaminantes.
1) Confirmar que el producto esté dentro de su vida útil y que la temperatura del
mismo y de las muestras sea superior a 20 °C.
2) Retirar la tira del envase y volver a tapar inmediatamente.
3) Observar la tira y verificar que se encuentra en condiciones. (Ver INDICIOS
DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS).
4) Sumergir la tira completamente por no más de 1 segundo en muestra de orina
fresca. Un exceso de orina en la tira puede ocasionar resultados erróneos.
Retirar el exceso de orina escurriendo contra el borde del recipiente, sin
permitir que éste toque las áreas reactivas. Una cantidad excesiva de orina
puede ser removida tocando sobre un papel absorbente con el extremo de la
tira reactiva.
5) Todas las áreas reactivas excepto la correspondiente a leucocitos, deben ser
observadas dentro de los 60 a 90 segundos para la discriminación entre
positivos y negativos. Leucocitos debe leerse entre 90 y 120 segundos.
6) Comparar los resultados cuidadosamente con la carta de colores que se
encuentra en el envase, manteniendo la tira en posición horizontal, utilizando
buena iluminación. Para obtener óptimos resultados debe respetarse el
tiempo de lectura. Los cambios de color observados sólo en las esquinas de
las zonas reactivas o luego de transcurridos los 2 minutos de reacción no
tienen validez diagnóstica.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS:

Los resultados se obtienen directamente por comparación con la carta de colores
impresa en el rótulo del envase.
VALORES ESPERADOS
Cetonas: los cuerpos cetónicos no deben ser detectados en orinas normales,
empleando este reactivo. Pueden aparecer cuerpos cetónicos en orina en la
presencia de vómitos, diarrea, disturbios digestivos, embarazo o ejercicio físico
intenso.
INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN

PERFIL LIPIDICO I: COLESTEROL TOTAL Y FRACCIONADO
OBJETIVO Interpretar los resultados del perfil lipídico de un paciente.
LOGRO A Describe las concentraciones de las fracciones lipídicas en
MEDIR sangre y sus alteraciones
A) MARCO TEÓRICO
El nivel sérico de colesterol ha sido objeto en los últimos años de numerosas

investigaciones tanto en individuos sanos como enfermos.
Desde un punto de vista médico la determinación de colesterol en forma aislada
tiene utilidad diagnóstica limitada. Sin embargo, su concentración varía de
manera más o menos predecible en un gran número de condiciones clínicas. Se
ha visto que el colesterol es uno de los factores contribuyentes a la formación de
ateromas dado que las complicaciones arterioscleróticas prevalecen en
individuos hipercolesterolémicos.
Diversos estudios epidemiológicos han permitido observar además, que el riesgo
de contraer enfermedad cardiaca coronaria (ECC) para los individuos (varones
de más de 40 años) con colesterolemia menor ò igual a 200 mg% es 3 veces
menor que entre individuos con más de 230 mg% y 6 veces menor que entre
individuos con más de 260 mg%.
Sin embargo, actualmente se sabe que es necesario conocer además la
distribución de las lipoproteínas encargadas del transporte: HDL (lipoproteínas
de alta densidad), considerada como el “factor protector” y LDL (lipoproteínas de
baja densidad), consideradas como el verdadero “factor de riesgo”. Las funciones
biológicas inherentes a los distintos grupos de lipoproteínas, las variaciones en
su composición y los resultados de los diversos estudios epidemiológicos, indican
que los valores aislados de colesterol HDL y colesterol LDL no pueden tomarse
como índices predictivos de riesgo, sino que es necesario conformar un perfil
lipídico con los valores de colesterol total, colesterol LDL y colesterol HDL.
• Kit de Colesterol total en suero.

• Kit de reactivo precipitante para Colesterol HDL en suero.
• Kit de reactivo precipitante para Colesterol LDL en suero.
• Centrifuga
• Agitador Magnético
• Gradilla
• Baño Maria
Equipo
• Refrigeradora
• Ecran
• PC o Laptop
RESULTADOS ESPERADOS
Al finalizar la sesión, el estudiante interpreta los niveles de bicarbonato sérico y

presencia de cuerpos cetónicos.
ACTIVIDADES
asignatura.
C) DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Experimento A: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN SUERO

El colesterol es oxidado enzimáticamente por colesterol oxidasa (CHOD), previa
hidrólisis enzimática de los ésteres mediante una lipasa de origen fungal. El agua
oxigenada generada en la oxidación, produce la copulaciòn oxidativa del fenol con
la 4-aminofenazona (4-AF) mediante una reacción catalizada por la peroxidasa. El
producto es una quinonimina roja con absorbancia máxima a 505 nm.
REACTIVOS:
Standard: solución de colesterol 200 mg%
PROCEDIMIENTO:
En tres tubos colocar:
Tubos Blanco Standard Muestra
Standard --- 20 uL ---
Reactivo de trabajo 2 ml 2 ml 2 ml
Incubar 10 minutos en baño de agua a 37ºC.

Leer en el espectrofotómetro a 505 nm.
CALCULO DE RESULTADOS:
Calcular la concentración de colesterol total en suero, aplicando el método del factor
de calibración. Recordar que la concentración del standard de colesterol es de 200
mg%
Los valores de colesterol en sangre fluctúan según edad, sexo y hábitos de dieta y de
ejercicio. Sin embargo, es preferible no hacer referencia a valores “normales”, pues
la norma promedio de una población no necesariamente refleja ausencia de riesgo
patológico en el caso de colesterol.
Menos de 200 mg% valor deseable

200 a 239 mg% valor frontera (moderadamente elevado)
Mayor de 240 mg% valor elevado
Experimento B: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL HDL EN SUERO
Fundamentos del Método

El presente es un método birreactivo homogéneo para la determinación de HDL-
colesterol (HDL-C). En la primera etapa de la reacción se solubiliza y consume el
colesterol libre asociado a proteínas distintas de HDL, en una reacción que involucra
a colesterol oxidasa (CHO) y peroxidasa (POD), dando lugar a un producto no
coloreado. En una segunda etapa, una solución de detergentes solubiliza
específicamente las HDL. El HDL-colesterol es así liberado para reaccionar con
colesterol esterasa (CHE), CHO, 4-AAP (4-amino antipirina) y N-etil-N-(2-hidroxi-3-
sulfopropil)-3- toluidina disódica (TOOS), dando un producto coloreado que se lee a
540-600 nm.
El presente es un método birreactivo homogéneo para la determinación de HDL-

colesterol. En la primera etapa de la reacción se solubiliza y consume el colesterol
libre asociado a proteínas distintas de HDL, en una reacción que involucra a
colesterol oxidasa (CHO) y catalasa (CAT), dando lugar a un producto no coloreado.
En una segunda etapa, un agente específico (azida) bloquea la acción de CAT y un
detergente solubiliza específicamente las HDL. El HDL-colesterol es así liberado
para reaccionar con colesterol esterasa (CHE), CHO, 4-AAP (4-amino antipirina) y
N-etil-N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3-toluidina disódica (TOOS), dando un producto
coloreado que se lee a 540-600 nm.
MUESTRA
Suero o plasma
MATERIAL REQUERIDO (no provisto)

- Material volumétrico para medir los volúmenes indicados
- Analizador automático
PROCEDIMIENTO
- En un tubo medir 0.5 ml de muestra y agregar 0.05 ml de Reactivo
Precipitante.
- Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
- Dejar 15 minutos en refrigeración. No colocar en el congelador.
- Centrifugar a 3000 rpm.
- Usar el sobrenadante como muestra.

Sobrenadante --- --- 100 uL
CALCULOS:
(*) De acuerdo al método del factor de calibración, considerando que la
concentración del standard es de 45.7 mg%.
Los valores esperados de HDL-colesterol son los siguientes:
Varones: 30 - 70 mg/dl
Mujeres: 30 - 85 mg/dl
El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee los
siguientes valores de HDL- colesterol: 40 - 60 mg/dl
Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
No obstante, valores mayores de 40 mg/dl se consideran recomendables y los que
se encuentren por encima de 60 mg/dl se han considerado como protectores. Por el
contrario, valores de HDL-colesterol por debajo de 40 mg/dl se consideran como
índice significativo de riesgo de enfermedad cardíaca coronaria.
Experimento C: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL LDL EN SUERO

Las lipoproteínas de baja densidad (LDL o β-lipoproteínas) se separan del suero
precipitándolas selectivamente mediante el agregado de polímeros de alto peso
molecular. Luego de centrifugar, en el sobrenadante quedan las demás lipoproteínas
(HDL y VLDL); el colesterol ligado a las mismas se determina empleando el sistema
enzimático Colesterol oxidasa/ Peroxidasa con colorimetría según Trinder (Fenol/4-
AF). Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el sobrenadante, se
obtiene el colesterol unido a las LDL.
MUESTRA
Suero o plasma
PROCEDIMIENTO:
En un tubo, colocar 0.2 ml de suero problema y añadir 0,1 ml de Reactivo
Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
Dejar 15 minutos en un baño de agua a 20-25°C.
Centrifugar 15 minutos a 3000 rpm.
Usar el sobrenadante como muestra.

Sobrenadante --- --- 100 uL
Mezclar e incubar 5 minutos en baño de agua a 37 °C si se usa el Reactivo de

Trabajo de Colestat enzimático AA/líquida o 15 minutos a 37 °C si se usa el de
Colestat enzimático.
CALCULOS:
LDLColesterol = Colesterol total - (Abs muestra neta x factor de calibración)
La concentración del standard es de 62.4 mg%.
VALORES REFERENCIALES:
Riesgo bajo o nulo: Menor de 129 mg%
Riesgo moderado: 130 a 189 mg%
Riesgo elevado : ≥190 mg%
No obstante, es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores

de referencia.
D) INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
E) RESULTADOS ESPERADOS
El estudiante calculara las concentraciones de las fracciones lipídicas en sangre e

interpretara las alteraciones de los resultados.
PERFIL LIPÍDICO II: TRIGLICÉRIDOS
OBJETIVO Relacionar los resultados de los triglicéridos con el perfil lipídico.
LOGRO A Explica las rutas metabólicas de los ácidos grasos, triacilgliceroles
MEDIR y sus alteraciones.
A) MARCO TEÓRICO
Los triglicéridos forman la mayor parte del peso seco del tejido adiposo,
constituyendo por lo tanto una potente forma de almacenamiento de energía.
El movimiento de ácidos grasos entre los distintos compartimientos del organismo,
se produce con gran rapidez en respuesta a diversos estímulos (dieta, actividad
física, stress, edad, etc.). Por este motivo es de esperar que los triglicéridos (uno de
los más importantes vehículos para el transporte de ácidos grasos) varíen también
su concentración en respuesta a estos factores fisiológicos.
Sin embargo, el equilibrio de estos mecanismos puede verse alterado, conduciendo
a niveles anormales de triglicéridos circulantes. La persistencia de esta condición, se
asocia con numerosas patologías, tales como enfermedad hepática, renal,
hiperlipidemias esenciales, etc.
Un caso que resulta de particular interés es el aumento de triglicéridos en individuos
obesos, en los cuales tiene importancia pronostica, respecto a la probabilidad de
desarrollar enfermedad cardíaca coronaria. Alrededor del 50% de los lípidos de las
lesiones ateromatosas que ocurren en las arterias coronarias son triglicéridos, por lo
que es posible relacionar a los triglicéridos con la patogénesis de la arteriosclerosis
coronaria. Este punto de vista está sustentado por el hecho de que un gran
porcentaje de pacientes con infarto de miocardio también exhiben
Hipertrigliceridemia.
Para la determinación de triglicéridos en suero se usará la determinación enzimática

de glicerol a partir de glicéridos.
Los métodos enzimáticos se basan en la determinación del glicerol contenido en las
moléculas de los triglicéridos, tras la hidrólisis (química ó enzimática) para remover
los ácidos grasos. La determinación enzimática del glicerol ha sido usada durante
muchos años; sin embargo, en estos métodos se empleaba la hidrólisis alcalina de
los triglicéridos. El reciente desarrollo del uso de enzimas (lipasa, usualmente
combinada con una proteasa) para catalizar la hidrólisis, ha posibilitado el empleo de
métodos directos, rápidos y específicos. Los sistemas totalmente enzimáticos
eliminan el uso de reactivos cáusticos, extracción con solventes, baños de altas
temperaturas y mezclas de absorción para la remoción de Fosfolípidos. Estudios
recientes se han concentrado en desarrollar reactivos con lipasas, que hidrolizan
completamente los triglicéridos.
- Kit de triglicéridos
- Centrífuga
- Tubos de ensayo de 5 ml.
- Gradilla
- Frasco Lavador
- Punteras medianas (amarillas)
- Punteras grandes (celeste)
- Tubos o cubetas espectrofotométricas.
- Baño de maria a 37oC.
- Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
- Reloj o timer.
C) ACTIVIDADES

asignatura
Experimento A: DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS EN SUERO

Se producen reacciones químicas basadas en la determinación química de glicerol
a partir de glicéridos.
La primera etapa consiste en que los triglicéridos son hidrolizados enzimáticamente
por una lipoproteinlipasa específica, produciendo glicerol y ácidos grasos.
Lipoproteín lipasa
Triglicéridos Glicerol + 3 ácidos grasos
En una segunda etapa el glicerol se fosforila a glicerol-1-fosfato en presencia de

glicerolkinasa.
Glicerol kinasa
Glicerol + ATP Glicerol-1-P + ADP
En una tercera etapa el derivado fosforilado se oxida mediante el glicerolfosfato

oxidasa (GPO), con producción de agua oxigenada.
GPO
Glicerol-1-fosfato + O2 H2O2 + dihidroxiacetonafosfato
Finalmente, el agua oxigenada así formada produce la unión oxidativa del fenol y la
4-aminofenazona, en reacción catalizada por la peroxidasa (POD), con formación
de una quinonimina roja.
POD
2 H2O2 + 4-AF + clorofenol quinonimina roja
MUESTRA
Suero o plasma
REACTIVOS PROVISTOS:
- Standard: solución acuosa de glicerol equivalente a 200 mg% de triglicéridos.
- Buffer: solución de buffer conteniendo clorofenol a pH 7,5.
- Enzimas: Viales conteniendo lipoproteín lipasa, glicerol kinasa (GK), glicerol
fosfato oxidasa (GPO), peroxidasa (POD), adenosina trifosfato (ATP) y
4aminofenazona (4-AF).
PROCEDIMIENTO:
Homogenizar la muestra antes de usar, especialmente frente a sueros lechosos.
En tres tubos de ensayo marcados B (Blanco), S (Standard) y M (Muestra),
colocar:

Reactivo de Trabajo 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar.
Enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con agua
destilada.

Corregir las lecturas con el blanco y usar las lecturas corregidas para los cálculos.
Para hallar la concentración de triglicéridos en el suero problema, se debe utilizar
el método del factor de calibración.
Triglicéridos (mg%) = Amp x Fc
El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee
los siguientes valores de Triglicéridos:
Deseable: < 1,50 g/l
Moderadamente elevado a elevado: 1,50 - 1,99 g/l
Elevado: 2,00 - 4,99 g/l
Muy elevado: ≥ 5,00 g/l
No obstante, se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
intervalos o valores de referencia.
El estudiante explicara las rutas metabólicas de los ácidos grasos, triacilgliceroles,

determinara las concentraciones realizando las respectivas interpretaciones.
METABOLISMO DE LA BILIRRUBINA
OBJETIVO Determinar la bilirrubina total y directa y a partir de ella
relacionar con las diferentes patologías.
LOGRO A Conocer el metabolismo de la Bilirrubina y el Ciclo Entero-
MEDIR hepático-Renal del Urobilinógeno. Conocer a las variables que
generan la Ictericia.
A) MARCO TEÓRICO
La bilirrubina es un pigmento amarillo, que se produce en el ser humano a partir del

Núcleo HEM (que es una Protoporfirina Tipo IX ó Tetrapirrol macro cíclico, molécula
que tiene insertado un átomo de Hierro).Sobre este núcleo HEM actúa la enzima
Oxigenasa Heme de los microsomas. Esta Oxigenasa rompe el enlace alfa meteno
del anillo tetrapirrólico y se abre la molécula, convirtiéndose en el pigmento verde
Biliverdina, el cual es subsecuentemente hidrogenado y forma Bilirrubina. Esta
reducción la realiza la enzima citosólica Biliverdina reductasa que es una enzima
NADPH dependiente. Por cada mol de HEME catabolizado por esta ruta se produce
un mol de bilirrubina, de CO2 y de ión férrico.
La producción diaria de bilirrubina a partir de todas sus fuentes en el hombre es de
250 a 350 mg. Aproximadamente el 85% de la bilirrubina total producida se deriva
de la molécula del HEM de la Hb liberada a partir de los eritrocitos senescentes que
son destruidos en el sistema retículo endotelial del hígado, bazo y médula ósea. El
15% remanente se produce a partir de la destrucción de las células precursoras de
los eritrocitos en la médula ósea (llamada “eritropoyesis inefectiva”) y también
proviene del catabolismo de otras proteínas que contienen núcleo Hem como la
mioglobina, citocromos, peroxidasas y que están distribuidas a través de todo el
organismo. Después de su producción en los tejidos periféricos, la bilirrubina es
transportada al hígado asociada a la albúmina. La Bilirrubina es rápidamente
captada por los hepatocitos, se transporta y se conjuga al ácido glucurónico (UDP –
Glucoronil transferasa) para producir mono y diglucuronato de bilirrubina los cuales
se excretan en la bilis, y después de ser excretados hacia el intestino delgado. En
el tracto intestinal los glucorónidos de bilirrubina se hidrolizan a la forma no
conjugada por el pH al alcalino del intestino delgado, y por la acción catalítica de la
betaglucuronidasa del hígado, células epiteliales intestinales y las bacterias. La
bilirrubina no conjugada es posteriormente reducida por la flora bacteriana
anaeróbica intestinal para formar un grupo de tres tetrapirroles incoloros
colectivamente llamados Urobilinógenos que luego se reducen y forman tres
productos: estercobilinógeno, mesobilinógeno y Urobilinógeno. Hasta el 20% de los
Urobilinógenos producidos diariamente son reabsorbidos desde el intestino hacia la
circulación para ir al hígado (Circulación enterohepática). La mayor parte del
Urobilinógeno reabsorbido es captado por el hígado y es re-excretado en la bilis y
solamente un 2 a 5 % entra a la circulación general y aparece en la orina. En la parte
más baja del tracto intestinal, los tres Urobilinógenos se oxidan espontáneamente
y producen los pigmentos Estercobilina, mesobilina y urobilina, y así estos
pigmentos adquieren color marrón y que son los pigmentos que le dan color a las
heces. Existen enfermedades congénitas y enfermedades adquiridas que afectan a
uno ó más de los pasos involucrados en la producción, captación, depósito,
metabolismo y excreción de la bilirrubina y la hiperbilirrubinemia es frecuentemente
el resultado de estos trastornos. Esta bilirrubinemia puede ser a predominio No
conjugado (Indirecta) o Conjugado (Directa) dependiendo del tipo de desorden.
La hiperbilirrubinemia causa Ictericia. Cuando la cifra de bilirrubina en la sangre

excede de 1 mg %, existe hiperbilirrubinemia .La hiperbilirrubinemia puede deberse
a la producción de más bilirrubina de la que el hígado normal puede excretar o a la
insuficiencia de un hígado dañado para excretar la bilirrubina producida en
cantidades normales. Ante la ausencia de daño hepático, la obstrucción de los
conductos excretorios del hígado, previniendo la excreción de la bilirrubina, también
causará hiperbilirrubinemia. En todos estos trastornos, la bilirrubina se acumula en
la sangre y cuando alcanza una cierta concentración (aproximadamente de 2 a 2. 5
mg%) se difunde dentro de los tejidos los cuales adquieren color amarillo, este
trastorno se denomina ictericia. La concentración de bilirrubina en el suero es de
gran valor, por eso en la presente practica la emplearemos.
Estado Urobilinógen Bilirrubin

Bilirrubina Sérica Urobilinógeno fecal
o a
Mg%
Urinario Urinaria
NORMAL Conjugado: 0.1 a 0.a 4 mg/24 Ausente 40 a 280 mg/ 24 h
0.4 mg hs
No Conjugado 0.2 a
Ictericia Ausente Aumentado
0.7
Hemolítica Aumentado
Elevación .No
Conjugada
Hepatitis
Presente Disminuido
Disminuido
Elevaciones de
ambas, con
Ictericia predominio
Obstructiv conjugada Presente Escaso o
a Ausente ausente
Elevación de ambas
a predominio
Conjugada
Dentro de las causas de Ictericia Hemolítica tenemos:

Anemias hemolíticas, ictericia fisiológica neonatal (Inmadurez hepática para captación,
conjugación y secreción de la bilirrubina), Síndrome de Cligeer-Najar (Alteración de la
conjugación de bilirrubina), Enfermedad de Gilbert, Hiperbilirrubinemia tóxica (Agentes
farmacológicos).
• Kit de bilirrubina total sérica

• Kit de bilirrubina directa sérica
• Kit de tiras reactivas para urobilinógeno
• Agua destilada
• Gradilla
• Frasco Lavador
• Espectrofotómetro o fotocolorímetro
• Centrífuga
• Tubos o cubetas espectrofotométricas
• Cronómetro
Equipo
• Ecran
• PC o Laptop
C) ACTIVIDADES

asignatura.
Experimento A: DOSAJE DE BILIRRUBINA TOTAL SÉRICA

La bilirrubina indirecta, unida a la albúmina, es liberada por un Tensioactivo. La bilirrubina
total (conjugada y libre) reacciona con la sal de diclorofenildiazonio (DPD) formando un
azocompuesto de color rojo en solución ácida.
MUESTRA: Suero o plasma
Bilirrubina total en suero o plasma:
- Adultos: hasta 10 mg/l
- Recién nacidos:
Nacidos a término Prematuros
Sangre de cordón < 20 mg/l < 20 mg/l
Hasta las 24 h 14 - 87 mg/l < 80 mg/l
Hasta las 48 h 34 - 115 mg/l < 120 mg/l
Del 3º al 5º día 15 - 120 mg/l < 160 mg/l
Los valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el nivel promedio del
adulto al mes del nacimiento.
En los prematuros, los niveles tardan más en alcanzar la normalidad,
dependiendo del grado de inmadurez hepática. Se recomienda que cada
laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
Experimento B: DOSAJE DE BILIRRUBINA DIRECTA SÉRICA
La bilirrubina, compuesto de degradación de la hemoglobina, es captada por el hígado para
su conjugación y excreción en la bilis. Las alteraciones hepatocelulares u obstrucciones
biliares pueden provocar hiperbilirrubinemia.
La eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recién nacido es una patología provocada
por incompatibilidad materno-fetal en la que se produce una destrucción excesiva de
glóbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la bilirrubina sérica con el consecuente
riesgo de difusión del pigmento al sistema nervioso central, por lo que la determinación de
la bilirrubina en estos niños recién nacidos resulta sumamente importante.
MUESTRA
Suero o plasma
Experimento C: INVESTIGACIÓN DE UROBILINÓGENO EN ORINA

El Urobilinógeno se forma en la fase intestinal del metabolismo de la bilirrubina y se
encuentra en todas las orinas normales en muy pequeñas cantidades, menores de 4 mg /
24 hs. Se forma en el intestino como hemos señalado en las clases teóricas por la acción
de las bacterias sobre los pigmentos biliares excretados por el hígado. También dijimos
que luego que se excreta la bilirrubina conjugada al conductillo biliar llega al duodeno; la
bilirrubina conjugada no es reabsorbida sino que: o bien se excreta como tal en la heces,
o bien se transforma en UROBILINÓGENO (y derivados asociados) por acción de las
bacterias del colon. El urobilinógeno se puede reabsorber en el intestino delgado (íleon) y
en el colon y pasa a la circulación portal, llega al Hígado y allí se re-excreta a la bilis y el
resto llega al riñón y se excreta con la orina.
Cuando existe una alteración en la captación y excreción hepática de Urobilinógeno ( como
en la enfermedad hepatocelulares) ó la síntesis de bilirrubina como en la hemólisis, la
excreción diaria del urobilinógeno aumentará en forma significativa Por el contrario, si no
pasa bilis al intestino, como en la colestasis u obstrucción biliar extrahepática interfieren
en la fase final del catabolismo de la bilirrubina y ocasiona un descenso notable en la
producción y excreción urinaria del urobilinógeno. Entonces, la medida del urobilinógeno en
la orina resulta muy útil para diferenciar las posibles causas de hiperbilirrubinemia como
ocurre en la obstrucción completa de los conductos biliares, la urobilina estará ausente en
la orina.
La excreción se incrementará en todas aquellas condiciones en que exista una excesiva
destrucción de los eritrocitos y en aquellos casos de daño parcial del parénquima hepático.
En las nefritis muy avanzadas puede estar ausente la Urobilina
Tiras Reactivas
En la actualidad usamos para la investigación de Urobilina en orina el método de las tiras
reactivas que se introducen directamente en la muestra de orina. Estas cintas están
impregnadas en el área correspondiente de una sal de metoxibenceno diazonio estable que
produce con el urobilinógeno, casi instantáneamente un complejo de color rojo azoico. Se
considera normal que en la zona reactiva para urobilinógeno no se produzca decoloración
alguna o que los colores que parezcan sean más claros que los observados para l mg %
.Esta prueba es específica para el urobilinógeno.
La prueba está basada en la reacción de unión de una sal de diazonio con el urobilinógeno
urinario en un medio ácido. El color vira del rosa pálido al rosa intenso.
MUESTRA
Orina Recolección: obtener orina de la manera usual. Realizar la prueba tan pronto como
sea posible luego de la recolección. Si no puede ser realizada dentro de la hora posterior a
la recolección, refrigerar inmediatamente. Antes de realizar el ensayo, llevar la muestra a
temperatura ambiente y homogeneizar sin centrifugar.
PROCEDIMIENTO:
Este procedimiento DEBE SER SEGUIDO EXACTAMENTE para lograr resultados
confiables. Las tiras sin utilizar deberán conservarse en el envase original. No tocar el área
de lectura de la tira. El área de trabajo debe estar limpia, libre de detergentes u otros
contaminantes.
1) Confirmar que el producto esté dentro de su vida útil y que la temperatura del
mismo y de las muestras sea superior a 20 °C.
2) Retirar la tira del envase y volver a tapar inmediatamente.
3) Observar la tira y verificar que se encuentra en condiciones. (Ver INDICIOS DE
INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS).
4) Sumergir la tira completamente por no más de 1 segundo en muestra de orina
fresca. Un exceso de orina en la tira puede ocasionar resultados erróneos.
Retirar el exceso de orina escurriendo contra el borde del recipiente, sin permitir
que éste toque las áreas reactivas. Una cantidad excesiva de orina puede ser
removida tocando sobre un papel absorbente con el extremo de la tira reactiva.
5) Todas las áreas reactivas excepto la correspondiente a leucocitos, deben ser
observadas dentro de los 60 a 90 segundos para la discriminación entre
positivos y negativos. Leucocitos debe leerse entre 90 y 120 segundos.
6) Comparar los resultados cuidadosamente con la carta de colores que se
encuentra en el envase, manteniendo la tira en posición horizontal, utilizando
buena iluminación. Para obtener óptimos resultados debe respetarse el tiempo
de lectura. Los cambios de color observados sólo en las esquinas de las zonas
reactivas o luego de transcurridos los 2 minutos de reacción no tienen validez
diagnóstica.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Los resultados se obtienen directamente por comparación con la carta de colores impresa
en el rótulo del envase.
Al término de la presente práctica cada estudiante deberá interpretar los resultados de los
análisis de bilirrubina total, conjugada y no conjugada; relacionándolo con las patologías.
TRANSAMINACIÓN
OBJETIVO Interpretar los valores de transaminasas y relacionarlo con las
diferentes enfermedades.
LOGRO A Explica el proceso de transaminación (actividad normal y
MEDIR alteración del proceso) y donde se realiza en el organismo.
A) MARCO TEÓRICO
Las transaminasas son enzimas ampliamente difundidas en el organismo, que

catalizan la transferencia de un grupo amino de un aminoácido a un cetoácido, en
una de las más importantes reacciones del metabolismo proteico. El interés clínico
está centrado especialmente en dos de ellas: TGO (transaminasa glutámico
oxalacética) y TGP (transaminasa glutámico pirúvica).
Estas enzimas tienen acción eminentemente intracelular, por lo que la actividad
sérica en condiciones normales es baja o nula. Un aumento de la actividad será
evidencia de un deterioro de los tejidos en que se encuentran, de los cuales resultan
particularmente importantes corazón e hígado.
Se ha observado que luego de un infarto de miocardio se produce en suero un
marcado aumento de la actividad de la TGO, debido a la liberación al torrente
sanguíneo de esta enzima, tan abundante en músculo cardíaco. En este caso no
existirá aumento en la actividad sérica de TGP ò será mínimo.
En hepatitis virales y otras formas de enfermedad hepática que involucren necrosis
de tejido, abr un incremento considerable de la actividad sérica de transaminasas,
incluso antes de la aparición de síntomas clínicos como ictericia.
En este caso, la TGP será la enzima predominante debida a su gran concentración
en el tejido hepático.
Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse también en traumas
accidentales o quirúrgicos y en distrofias musculares y miosis.
• Kit de reactivo de ALT o GPT

• Kit de reactivo AST o GOT
• Agua destilada
• Gradilla
• Frasco Lavador
• Centrífuga
• Cronómetro.
Equipo
• Ecran
• PC o Laptop
C) ACTIVIDADES

asignatura.
EXPERIMENTO A: DETERMINACIÓN DE ALANINA AMINO TRANSFERASA
La alanina aminotransferasa (ALT o GPT) es una enzima unilocular (citoplasmática)
cuya mayor actividad se localiza en el tejido hepático. La destrucción o cambio de
permeabilidad de las membranas celulares provoca la liberación de ALT a la
circulación sanguínea.
Los mayores aumentos de actividad ALT en suero, se producen como consecuencia
de alteraciones hepáticas.
En el caso de hepatitis virales, el aumento de ALT precede a la aparición de ictericia,
alcanzando un máximo luego de la observación de dicho síntoma. Si los valores
permanecen elevados luego de 6 semanas, debe pensarse en la posibilidad de una
hepatitis activa o en el comienzo de una hepatitis crónica, por lo que es de utilidad
las determinaciones seriadas de la enzima.
La determinación de ALT adquiere importancia diagnóstica cuando sus valores se
comparan con los de otras enzimas de similar origen tisular, permitiendo así
completar el perfil enzimático de órganos como el hígado.
MUESTRA
Suero o plasma
PROCEDIMIENTO
En una cubeta mantenida a 30-37ºC, colocar:
Reactivo A 0,80 ml
Muestra 100 uL
Pre incubar unos minutos. Luego agregar:
Reactivo B 0,20 ml
Mezclar inmediatamente y disparar simultáneamente el cronómetro. Esperar 90
segundos y leer la absorbancia inicial y luego a los 1, 2 y 3 minutos de la primera
lectura. Determinar la diferencia promedio de absorbancia/min (ΔA/min), restando
cada lectura de la anterior y promediando los valores. Utilizar este promedio para
los cálculos.
CÁLCULO DE LOS RESULTADOS

GPT (U/l) = ΔA/min x factor
Temperatura 25oC 30oC* 37oC*
Hombres hasta 22 U/l hasta 29 U/l hasta 41 U/l
Mujeres hasta 17 U/l hasta 22 U/l hasta 31 U/l
* Calculados
EXPERIMENTO B: DETERMINACIÓN DE LA ASPARTA TO MINOTRANSFERASA
SIGNIFICACIÓN CLINICA
La Aspartato aminotransferasa es una enzima bilocular (citoplasmática y
mitocondrial) ampliamente difundida. Se encuentra en mayor concentración en
hígado y corazón.
Cualquier alteración de estos tejidos produce un aumento en los niveles de AST
circulante.
En el infarto agudo de miocardio, se observa un aumento moderado de la enzima a
las 6 u 8 horas de ocurrido el episodio, alcanza niveles máximos alrededor de las 48
horas y retorna a la normalidad entre el 4º y el 6º día.
En pacientes con afecciones hepáticas se observan las mayores elevaciones de
AST, sobre todo en los casos de hepatitis con necrosis.
MUESTRA
Suero o plasma
PROCEDIMIENTO
En una cubeta mantenida a 30-37ºC, colocar:
Reactivo A 0,80 ml
Muestra 100 ul
Pre incubar unos minutos. Luego agregar:
Reactivo B 0,20 ml
Mezclar inmediatamente y disparar simultáneamente el cronómetro. Esperar 90
segundos y leer la absorbancia inicial y luego a los 1, 2 y 3 minutos de la primera
lectura. Determinar la diferencia promedio de absorbancia/min (ΔA/min), restando
cada lectura de la anterior y promediando los valores. Utilizar este promedio para
los cálculos.

GOT (U/l) = ΔA/min x factor
Temperatura 25ºC* 30ºC* 37ºC
Hombres hasta 18 U/l hasta 25 U/l hasta 38 U/l
Mujeres hasta 15 U/l hasta 21 U/l hasta 32 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia

A partir de los resultados obtenidos en los análisis de las transaminasas, el

estudiante interpreta y explica la actuación de estas enzimas en el organismo de un
paciente.
BALANCE NITROGENADO
OBJETIVO Determinar el balance Nitrogenado de una persona.
LOGRO A Realiza el Balance Nitrogenado. Explicar la importancia de la
MEDIR evaluación nutricional en el diagnóstico clínico.
A) MARCO TEÓRICO
Las regulaciones homeostáticas controlan las concentraciones de los distintos

aminoácidos en el organismo y la velocidad a la que se sintetizan e hidrolizan las
proteínas musculares y plasmáticas. La síntesis y el recambio de las proteínas del
cuerpo están regulados.
En personas sanas la cantidad de proteínas que se ingiere está equilibrada
exactamente con las proteínas que se utilizan para el mantenimiento del cuerpo y
las que se excretan por las heces, la orina y la piel, dando lugar a un equilibrio
proteico cero. Este equilibrio refleja regulaciones homeostáticas dentro de los
tejidos.
Las necesidades energéticas se definen como la ingesta de energía en la dieta

necesaria para el crecimiento o el mantenimiento de una persona de una edad, sexo,
peso, altura y nivel de actividad física definidos. En los niños y las mujeres
embarazadas o en período de lactancia, las necesidades energéticas incluyen las
impuestas por la formación de tejidos o la secreción de leche a una velocidad
compatible con un buen estado de salud. En personas enfermas o lesionadas, los
factores generadores de estrés incrementan o reducen el gasto energético.
En un individuo sano el balance debe ser 0, es decir, la ingesta está en equilibrio

con la excreción.
Equilibrio Nitrogenado.
En el ser humano, la principal fuente de sustancias nitrogenadas son las proteínas
de la dieta. Como estos compuestos, a diferencia de carbohidratos y grasas, no se
almacenan como reserva, los niveles en las células se regulan por el equilibrio entre
anabolismo y catabolismo, es decir un balance entre biosíntesis y degradación de
proteínas, a lo que también se conoce como recambio normal de proteínas. Por
tanto, un adulto sano que ingiere una dieta variada y completa se encuentra
generalmente en situación de “equilibrio nitrogenado”, un estado en el que la
cantidad de nitrógeno ingerida cada día es equilibrada por la cantidad excretada por
heces, orina y sudor, sin que se produzca ningún cambio neto en la cantidad de
nitrógeno del organismo. Sin embargo, en ciertas condiciones, el organismo se halla
en equilibrio nitrogenado negativo o positivo (Cuadro 1).
En la situación de:
Equilibrio nitrogenado negativo se excreta mayor cantidad de nitrógeno del que
se ingiere. Esto tiene lugar en la inanición, la desnutrición proteica y en ciertas
enfermedades que cursan con catabolismo aumentado. Durante la inanición
prolongada las cadenas carbonadas de los aminoácidos son necesarias para la
gluconeogénesis; el amoniaco (nitrógeno) liberado de los aminoácidos es excretado
principalmente en forma de urea y no se reincorpora a las proteínas. También puede
darse un equilibrio negativo durante la vejez, la fiebre severa, proteólisis de la
diabetes no controlada y, de gran importancia médica, en neoplasias, donde el
catabolismo se encuentra exacerbado.
En el otro extremo, puede hallarse:
Equilibrio nitrogenado positivo cuando lo ingerido supera a lo excretado, tal caso
se da en niños en edad de crecimiento, puesto que están aumentando su peso
corporal e incorporando más aminoácidos en las proteínas somáticas. Puede darse
equilibrio nitrogenado positivo durante el embarazo y durante la alimentación post-
inanición.
La determinación del balance de nitrógeno en un paciente es un parámetro bastante
eficaz para establecer catabolismo, deficiencias o excesos de proteínas en su dieta
y conocer, junto a otros indicadores, su estado nutricional.
Reactivos y materiales:
• Kit de Creatinina urinaria.
• Kit de Urea urinaria.
• Agua destilada
• Frasco Lavador
• Gradilla
• Probeta de plástico de 01 litro
• Probeta de vidrio de 50 mL
• Baño María a 37ºC.
• Reloj ò timer.
Equipo
• Ecran
• PC o Laptop
C) ACTIVIDADES

Escoger a un estudiante de la mesa para que, siguiendo las instrucciones de la

práctica, recuerde la dieta que ha consumido y sus actividades en las últimas 24
horas, luego proceder a encontrar su balance nitrogenado, su balance calórico y el
tipo de dieta que usó.
BALANCE NITROGENADO
a) Determinar la úrea y creatinina excretadas en la orina de las últimas 24 horas y en

las heces de 24 horas.
EXPERIMENTO A: DETERMINACIÓN DE UREA URINARIA
El producto final más importante del metabolismo proteico es la UREA. Esta es

excretada en la orina en mayor cantidad que cualquier otra sustancia.
La concentración elevada de Úrea en sangre (hiperuremia) es un indicador de una
inadecuada función excretora y por consiguiente alteración de la filtración renal.
La úrea sanguínea puede aumentar por otras razones además de excreción renal
insuficiente, dichas causas se clasifican en: Pre-renal, son los estados en los cuales
se altera la circulación por el riñón y Post-renal por obstrucción de las vías urinarias.
Por ello la información más exacta con respecto a la habilidad excretora de la urea
por los riñones requiere de una comparación de la concentración de úrea en sangre
(BUN) y en la orina. Fisiológicamente la úrea se eleva debido a una dieta
hiperproteica o con la edad y disminuye durante una dieta de bajo valor proteico.
FUNDAMENTOS DEL METODO:
La úrea presente en la muestra es hidrolizada hasta amoníaco y dióxido de carbono,
mediante una reacción catalizada por la enzima ureasa:
El amoníaco en presencia de una base reacciona con fenol e hipoclorito de sodio

formando azul de indo fenol. La intensidad de color es proporcional a la cantidad de
urea en la muestra.
PROCEDIMIENTO:
Muestra: se diluye la orina a 1:50 con agua destilada.
Preparar los siguientes tubos:

Standard --- Según ---
(µL) Volumen
indicado
Muestra --- --- Según
(µL) Volumen
indicado
Reactivo Según Según Según
de Volumen Volumen Volumen
trabajo indicado indicado indicado
(mL)
Blanco (ml) Standard Muestra (ml)

(ml)
Standard --- 0.01 ---
Orina diluida --- --- 0.01
Enzima 2 gotas 2 gotas 2 gotas
- Mezclar e incubar los tubos en un Baño María a 37°C por 5 minutos. Asegurarse
que los reactivos no se hayan quedado en las paredes de los tubos.
- Luego agregar en cada tubo, 1 ml del Reactivo 1, y posteriormente 1 ml del
Reactivo 2.
- Mezclar el contenido de los tubos e incubarlos en un baño de agua a 37°C por 5
minutos.
- Mezclar los tubos por inversión y proceder a leer la absorbancia en un
espectrofotómetro a 540 nm vs el blanco.
CALCULOS:
Abs muestra – Abs blanco

Urea (g/24 hrs) = -------------------------------------- x 0.6 g/L x Factor de dilución x V
Abs standard
Nitrógeno Ureico = Urea x 0.466
VALORES NORMALES:
Nitrógeno ureico.- 7 a 14 gr/24 hrs.
Urea.- 15 a 30 gr/24 hrs.
EXPERIMENTO B: DETERMINACIÓN DE CREATININA URINARIA

La creatinina reacciona con el picrato alcalino en medio tamponado, previa
desproteinización con ácido pícrico, obteniéndose un cromógeno que se mide a 510
nm.
Creatinina + picrato Complejo creatinina-picrato
REACTIVOS:
Reactivo 1: ácido pícrico 41,4 mmol/l.
Reactivo 2: buffer glicina/NaOH 1 mol/l, pH final 12,4.
Standard: solución de creatinina 2 mg%
PROCEDIMIENTO:
Recolectar orina de 24 horas.
Medir la diuresis, tomar una alícuota y efectuar una dilución 1:50 de la misma.
Luego en tres tubos de ensayo preparar lo siguiente:
Standard --- 0,5 ml ---
Orina diluida --- --- 0,5 ml
(1:50)
Agua 1 ml 0,5 ml 0,5 ml
Reactivo 1 2 ml 2 ml 2 ml
Reactivo 2 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml
Mezclar por inversión.

Incubar 20 minutos a temperatura ambiente.
M
Creatinina en orina (mg/24 horas) = ------ x 20 mg/l x 50 x V
S
900 a 1 500 mg/24 horas.
Siendo:
V = volumen de la diuresis expresado en litros/24 horas.
M = Absorbancia neta del tubo muestra.
S = Absorbancia neta del tubo estándar.
Nitrógeno Creatinínico = Creatinina x 0.37
b) Calcular cuánto nitrógeno se excretó en las últimas 24 horas con los datos de Aa.
c) Determinar por la técnica del recuerdo de 24 horas la ingesta de alimentos.
d) Hacer una tabla para determinar en base a la información anterior la cantidad de
carbohidratos, lípidos y proteínas ingeridos en las últimas 24 horas usando la TABLA
DE ALIMENTOS PERUANOS del MINSA.
e) Calcular en base a lo anterior cuanto Nitrógeno ingirió en las últimas 24 horas.
f) Determinar el balance nitrogenado usando la siguiente expresión:
BN = INGESTA N – (NTE + 2)
NTE = N. UREICO + N. CREATINÍNICO
NTE: Según Ramírez Velazco.

Tomar en cuenta:
Excreción fecal: 2 gr/24 horas.
N Ingerido: gr de proteínas/6.25
g) Responder: balance positivo, neutro y/o negativo.
Nota importante:
• Cuando el estudio de recolección de orina de 24 horas informa solo el contenido

de urea en orina, se recomienda utilizar 4 g como factor de pérdidas insensibles.
• Cuando el estudio informa el nitrógeno total en orina de 24 hrs (es decir, incluye
Creatinina, amonio, ácido úrico, aminoácidos, entre otros), se sugiere emplear
el factor de 2 g como pérdidas insensibles.
• Otra forma de realizar la estimación es considerar como pérdidas insensibles de
Nitrógeno en 7 mg/kg/día para hombres y 8 mg/kg/día en mujeres.
• Pérdidas de nitrógeno en diarrea, vómitos, fístulas, quemaduras o heridas
graves, el balance de nitrógeno pierde su exactitud.
• Recordar que la síntesis de urea se lleva a cabo en el hígado y la eliminación
por vía renal, los sujetos con enfermedades hepáticas o renales pueden
presentar datos anormales de balance de nitrógeno por lo que no se recomienda
aplicarlo.

Mediante la presente práctica el estudiante realiza el Balance Nitrogenado, así como

explica la importancia de la evaluación nutricional en el diagnóstico clínico.
BALANCE CALÓRICO Y TIPO DE DIETA
OBJETIVO Determinar el balance Calórico de una persona.
LOGRO A Realiza el Balance Calórico y explica su importancia para el
MEDIR mantenimiento de un peso saludable.
A) MARCO TEÓRICO
Cuando se trata de mantener un peso saludable ¡las calorías cuentan! El control de

peso es el resultado de balancear el número de calorías que consumimos con el
número de calorías que gastamos. A esto se le llama balance calórico.
La caloría se define como la unidad de energía obtenida de los alimentos. Una caloría
es una caloría sea cual sea su fuente, es decir hidratos de carbono, proteínas y lípidos.
El balance calórico es como una balanza. Para permanecer en equilibrio y mantener el

peso corporal, las calorías ingeridas (de los alimentos) deben ser equilibradas por las
calorías usadas (en las funciones del organismo, actividad diaria y ejercicio.
Tipos de balances energéticos:

• Balance positivo: las calorías ingeridas son superiores a las calorías
consumidas: Consecuencia: aumento de peso y grasa corporal.
• Balance negativo: las calorías ingeridas son inferiores a las calorías
consumidas: Consecuencia: pérdida de peso.
• Balance equilibrado: las calorías ingeridas se igualan a las calorías consumidas:
Consecuencia: Ni se pierde ni se gana peso; estado ideal.
• Material requerido para ejecutar cálculos y equivalencias.

• Tablas de aportes calóricos del MINSA.
• Tablas de actividad para el metabolismo basal y dinámico.
• Tablas peruanas de composición de alimentos.
C) ACTIVIDADES

Escoger a un estudiante de la mesa para que, siguiendo las instrucciones de la

práctica, recuerde la dieta que ha consumido y sus actividades en las últimas 24
horas, luego proceder a encontrar su balance nitrogenado, su balance calórico y el
tipo de dieta que usó.
BALANCE CALÓRICO
A. Calcule el Número de Calorías Consumidas Diariamente.

1) Haga una lista de los alimentos y bebidas que consume durante un período de
24 horas (1 día).
2) Utilizando la tabla de equivalentes calóricos, indique el número de calorías que
contiene cada uno de los alimentos y bebidas de la lista. Es importante hacer
una nota aclaratoria, (Usar las tablas nutricionales de MINSA) .
3) Sume estas calorías y obtendrá el número total de calorías que consume en
dicho día.
4) Repita el procedimiento para cada día subsiguiente, hasta completar la semana
(7 días).
5) Al finalizar la semana, sume todas las calorías consumidas durante dicha
semana; luego, divida entre 7 el total obtenido, a fin de conseguir el promedio
diario de las calorías ingeridas.
B. Calcula el Número de Calorías Quemadas Diariamente

1) Haga una lista de las actividades físicas realizadas durante un período de 24
horas.
2) Indique el número de minutos que utilizó durante cada actividad.
3) Utilizando la tabla que indica el gasto calórico de cada actividad, (veáse Tabla
1) anote el número de calorías quemadas en cada una de estas actividades (por
minuto). Para poder conseguir dichas calorías, debe conocer su peso en kilos.
4) Multiplique el número de minutos utilizados en cada actividad por las calorías
quemadas, por minuto, en cada una de estas actividades.
5) Sume el número de calorías quemadas durante dicho día y obtendrá el total de
calorías quemadas en ese día.
6) Repita el procedimiento anterior para cada día subsiguiente, hasta completar la
semana (7 días).
7) Al terminar la semana, sume el total de calorías quemadas durante la semana;
luego, divida entre 7 el total obtenido, a fin de conseguir el promedio diario de
las calorías quemadas.
C. Cálculo de la Tasa Metabólica Basal (TMB)

I. Para calcular la tasa metabólica basal tener en cuenta los siguientes factores:
1) Edad: conforme vamos envejeciendo el metabolismo se va ralentizando.
2) Sexo: los hombres suelen tener una TMB mayor a las mujeres.
3) Peso: cuanto más pesemos más energía necesitamos para movernos.
4) Composición corporal: las personas de mayor tamaño tienen los órganos
más grandes y cuentan con más masa muscular, lo que haría variar la TMB.
5) Estado de salud: estar enfermo puede afectar a la TMB, ya que, por
ejemplo, la fiebre requiere un gasto de energía no previsto. El estrés, el
embarazo y los medicamentos también pueden afectar a este valor.
II. Hacer uso de la siguiente Tabla:
BC = CI – (CGA + CGMB)
D. Cálculo del Balance Calórico
Usando la siguiente fórmula:
Donde:
BC: Balance calórico
CI: Calorías que ingresaron con los alimentos
CGA: Calorías gastadas en las actividades
CGMB: Calorías gastadas en el metabolismo basal
O también:
Cálculos
• Balance Calórico = Ingesta Calórica – Gasto
Calórico
• Balance Calórico Positivo = Ingesta Calórica > Gasto Calórico
• Balance Calórico Negativo = Ingesta Calórica < Gasto Calórico
Mediante la presente práctica el estudiante realiza el Balance Calórico, así como

explica la importancia de equilibrar nuestra alimentación, teniendo en cuenta
el aporte energético que nos proporcionan los alimentos (calorías), y la actividad
física que realizamos.

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BASES MOLECULARES Y CELULARES Versión V.3.1

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

a. Facultad Ciencias de la Salud

l. Duración del semestre Inicio 27/03/2023 Culminación 15/07/2023

Docente responsable por Programa de Pregrado

Durante las horas de práctica los alumnos expondrán en seminarios la investigación

La evaluación será continua durante el marco teórico, desarrollo del procedimiento y

4.1. Producto formativo de la asignatura

Documento monográfico de los temas desarrollados donde se evidencie la

4.2. Producto formativo de las unidades

Unidad Producto Formativo

4.3. Producto formativo de las prácticas de laboratorio

La Nota Promedio por asignatura es igual a:

El Promedio Final de la asignatura se calcula de la siguiente forma:

6.1 Bibliografía Básica:

• McKee. Trudy, (2020) Bioquímica: Las Bases Moleculares de la Vida, Edit.

6.2 Bibliografía Complementaria

• Virginia Melo, Oscar Cuamatzi; (2019) Bioquímica de los Procesos Metabólicos;

6.3 Base de Datos

6.4 Publicaciones UPSJB

GUIA PRÁCTICA Nº 01 SEMANA 1

NORMAS DE BIOSEGURIDAD POR EL CORONAVIRUS EN LOS LABORATORIOS,

MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL USO DE SUSTANCIAS QUÍMICAS

• Nunca coma, beba dentro del laboratorio.

• Protocolo de bioseguridad en laboratorios y talleres en el marco del servicio remoto

La presente práctica se desarrollará con la interacción del estudiante y sus pares.

Esta práctica se desarrollará de manera grupal, donde los estudiantes deben

La presente práctica será evaluada mediante la rúbrica general de laboratorio.

Cada estudiante aplica las normas y/o protocolos de bioseguridad tanto en el

Se denomina Análisis Colorimétrico Instrumental al conjunto de métodos de análisis

Casi todas las estructuras químicas en disolución tienen la capacidad de absorber

CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE UNA SOLUCIÓN PROBLEMA:

I. CURVA STANDARD. - Este método

II. FACTOR DE CALIBRACIÓN. - (Fc), El factor de calibración es un término que se

Si la muestra problema sufre diluciones previas se encontrará el factor de dilución

Dil = Vol mp / Vol t

• Disolución de Bicromato de Potasio 80 mg%.

La práctica se desarrolla de forma grupal y de acuerdo a la metodología de la

1. Preparar la siguiente batería de tubos:

Tubo I Tubo II Tubo III Tubo

Solución stock: Bicromato de Potasio 80 mg%.

La presente práctica será evaluada mediante la rúbrica general de laboratorio.

El estudiante establece la concentración de una solución a partir de la curva de

Una propiedad importante de los aminoácidos, consecuencia del hecho de que

Y que es la forma en la cual se encuentran en el torrente circulatorio, es decir, al pH

La proteína más importante de la sangre del ser humano es la Hemoglobina que

El ácido y la base conjugada forman un par ácido/base.

A partir de esta ecuación se deduce que el pH de una disolución tampón depende

La práctica se desarrolla de forma grupal y de acuerdo a la metodología de la

Vinagre 5% KOH Agua

En cada mesa los alumnos construirán su gráfica de valoración colocando en las

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